Name: standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan
Uploaded: 2019-08-27T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

Vi takker Tien-Cheng Li, Yi-tang Lin, Chia-Jung Tsai, og ya-LAN Li for deres assistanse i løpet av denne studien. Denne studien ble støttet av Grant no. 107AS-8.7.1-BQ-B2 (1) fra Bureau of Animal and Plant Health inspeksjon og karantene, Council of Agriculture, Executive yuan, Taiwan.

1. sikkerhetsforanstaltninger ved håndtering av lyssaviruses
<ol><li>Sikre det alle laboratorium arbeidere handling bat prøver få pre-avsøring rabiat forebygging17. Dataskjerm det rabiat antistoff høyder av arbeiderne på forhånd og re-eksamen seg enhver 6 måneder17. Oppfølging rabies vaksinasjon er nødvendig for dem som antistoffnivåer er lavere enn 0,5 IU/mL17.</li>
	<li>Avhengig av biosafety forskrifter i landet der laboratoriet er pla...

<ol>
	<li>Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+facts+about+lyssavirus.">Basic facts about lyssavirus.</a> Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).</li><li>Ar&#233;chiga Ceballos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lyssavirus+in+bat,+Spain.">Novel lyssavirus in bat, Spain.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).</li><li>Gunawardena, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Indian+Flying+Foxes,+Sri+Lanka.">Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka.</a> Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).</li><li>Hu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Japanese+Pipistrelle,+Taiwan.">Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.</a> Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).</li><li>Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+novel+lyssavirus+in+a+bat+in+Finland.">Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland.</a> Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).</li><li>Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+bats:+emergence+and+zoonotic+threat.">Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat.</a> Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).</li><li>Pal, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+infection+of+a+flying+fox+bat,+Pteropus+policephalus+in+Chandigarh,+Northern+India.">Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India.</a> Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).</li><li>Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rabies+virus+from+fruit+bats+in+Thailand.">Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand.</a> Nature. 216 (5113), 384 (1967).</li><li>Tang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+dogs+in+rabies+transmission,+China.">Pivotal role of dogs in rabies transmission, China.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses+(Aravan+and+Khujand)+from+Central+Asia:+phylogenetic+relationships+according+to+N,+P+and+G+gene+sequences.">Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences.</a> Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).</li><li>Arguin, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+Lyssavirus+infections+among+bats,+the+Philippines.">Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).</li><li>Lumlertdacha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+for+bat+lyssaviruses,+Thailand.">Survey for bat lyssaviruses, Thailand.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+surveillance+in+bats,+Bangladesh.">Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).</li><li>Reynes, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+lyssavirus+infection+in+bats,+Cambodia.">Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses,+northern+Vietnam.">Bat lyssaviruses, northern Vietnam.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).</li><li>Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Irkut+virus+from+a+Murina+leucogaster+bat+in+China.">Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).</li><li>Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+precautions+in+handling+rabies+virus.">Safety precautions in handling rabies virus.</a> Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).</li><li>Smith, I., Wang, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bats+and+their+virome:+an+important+source+of+emerging+viruses+capable+of+infecting+humans.">Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans.</a> Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).</li><li>Corbet, G. B., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).</li><li>Mayer, F., von Helversen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+diversity+in+European+bats.">Cryptic diversity in European bats.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).</li><li>Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+epidemics:+the+ecology+of+bat-borne+viruses+and+our+role+in+their+emergence.">Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence.</a> Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Hayman, D. T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+real-time+assay+for+the+detection+of+Lyssaviruses.">A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).</li><li>Franka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+phylogenetic+lineage+of+rabies+virus+associated+with+western+pipistrelle+bats+(Pipistrellus+hesperus).">A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus).</a> Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).</li><li>Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+evaluation.">Diagnostic evaluation.</a> Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).</li><li>Moldal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+detection+of+European+bat+lyssavirus+type+2+(EBLV-2)+in+Norway.">First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway.</a> BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).</li><li>Robardet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assay+of+fluorescent+antibody+test+results+among+twelve+European+National+Reference+Laboratories+using+various+anti-rabies+conjugates.">Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates.</a> Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).</li><li>Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+rabies.">Laboratory diagnosis of rabies.</a> Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).</li><li>Fischer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+step+forward+in+molecular+diagnostics+of+lyssaviruses--results+of+a+ring+trial+among+European+laboratories.">A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses--results of a ring trial among European laboratories.</a> PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).</li><li>David, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+detection+by+RT-PCR+in+decomposed+naturally+infected+brains.">Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains.</a> Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).</li><li>Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+interlaboratory+trials+on+rabies+diagnosis:+an+overview+of+results+and+variation+in+reference+diagnosis+techniques+(fluorescent+antibody+test,+rabies+tissue+culture+infection+test,+mouse+inoculation+test)+and+molecular+biology+techniques.">International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).</li></ol>

Dette laboratoriet standard driftsprosedyre (SOP) gir en seriell prosess for å teste bat prøver for tilstedeværelsen av lyssavirus antigener i Taiwan. De viktigste trinnene inkluderer ansettelse av FAT og RT-PCR. Utvalget av egnede prøver og vellykket isolering av viruset er også viktig. I tillegg ble noen feilsøking utført under overvåkingen av bat lyssaviruses. Den største forskjellen var målet dyrene. Opprinnelig (2008-2009), målet dyrene i bat lyssavirus overvåking var live ball, som var fanget i Kinmen I...

Virus i slekten Lyssavirus er zoonotiske patogener. Det er minst syv lyssavirus arter forbundet med menneskelige tilfeller1. I tillegg til de 16 artene i denne slekten1,2,3, Taiwan bat lyssavirus (TWBLV)4 og Kotalahti bat lyssavirus5 har nylig blitt identifisert i ball, men deres taksonomisk statuser har ennå å bestemmes.
Ball er de naturlige vertene av de fleste lyssaviruses, med unntak av Mokola lyssavirus og Ikoma lyssavirus, som ennå ikke er identifisert i noen ball1,2,3,6. Informasjonen på lyssaviruses i asiatiske ball er fortsatt begrenset. To uncharacterized lyssaviruses i asiatiske balltre (ett i India og den andre i Thailand)7,8 har blitt rapportert. Ettall Human rabiat rettssak forbundet med en bat bit inne Porselen var rapportere inne 2002, bortsett fra diagnosen var fremstilt bare av klinisk observasjon9. I Sentral-Asia ble Aravan lyssavirus identifisert i mindre mus-eared bat (Myotis blythi) i kirgisistan i 1991, og Khujand lyssavirus ble identifisert i denne bat (Myotis Mystacinus) i Tadsjikistan i 200110. I Sør-Asia, Gannoruwa bat lyssavirus ble identifisert i den indiske flygende reven (Pteropus Medius) i Sri Lanka i 20153. I Sørøst-Asia, flere serologisk studier på ball i Filippinene, Thailand, Bangladesh, Kambodsja og Vietnam vistevariable seroprevalensdata11,12,13,14, 15av dem. Selv om Irkut lyssavirus ble identifisert i den større rør-nese bat (Murina leucogaster) i Jilin provinsen, kina i 2012 til16, forblir den eksakte arten og plasseringene av Lyssaviruses i øst-asiatiske bat populasjoner ukjent.
For å vurdere tilstedeværelsen av lyssavirus i taiwanske bat populasjoner, et overvåkningsprogram ansette både direkte FAT og RT-PCR ble igangsatt. Taiwan bat lyssavirus ble identifisert i to tilfeller av den japanske pipistrelle (Pipistrellus abramus)4 i 2016 – 2017. I denne artikkelen er et laboratorium standard driftsprosedyre innført for lyssavirus overvåking av bat befolkningen i Taiwan. Flyten diagram av bat lyssavirus diagnose i vårt laboratorium er presentert i figur 1.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5% Trypsin (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090046</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>32201-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose I</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>97062-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>NIHON SHIYAKU REAGENT</td>
			<td>NS-32294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMV Reverse Transcriptase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic(100X)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemilumineance system</td>
			<td>TOP BIO CO.</td>
			<td>MGIS-21-C2-1M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>990381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Muto Pure chemical Co., LTD.</td>
			<td>24505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA analyzer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>3700XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin</td>
			<td>Fujirebio Diagnostic Inc.</td>
			<td>800-092</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-well Teflon-coating glass slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>30-86H-WHITE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Electrophoresis System</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MJ-105-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175095</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ASTEC</td>
			<td>SCA-165DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent</td>
			<td>EMD Millipore Corporation</td>
			<td>5100</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact Instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03731146001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03730964001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11430030</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM vitamin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11120052</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06329.0500</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*2332R9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Medicago</td>
			<td>09-8912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer synthesis</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing service</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AA00008032E00MNT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile absorbent pad</td>
			<td>3M</td>
			<td>1604T-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>171-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>JMR Holdings</td>
			<td>JMR-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>2720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tongue depressor</td>
			<td>HONJER CO., LTD.</td>
			<td>122246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Tennyson medical Instrument developing CO., LTD.</td>
			<td>A0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tylosin Tartrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6271-10G</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan

Virus i slekten Lyssavirus er zoonotiske patogener, og minst syv Lyssavirus arter er forbundet med menneskelige saker. Fordi ball er naturlige reservoarer av de fleste lyssaviruses, en lyssavirus overvåking program av ball har vært gjennomført i Taiwan siden 2008 for å forstå økologi av disse virusene i ball. I dette programmet, ikke-statlige bat bevaring organisasjoner og lokale dyr sykdom kontroll sentre samarbeidet for å samle døde ball eller ball døende av svakhet eller sykdom. Hjernevev av ball ble innhentet gjennom obduksjon og utsatt for direkte fluorescerende antistoff test (FAT) og omvendt transkripsjon polymerase kjedere reaksjon (RT-PCR) for påvisning av lyssavirus antigener og nukleinsyre syrer. For det Basin, det vil si to annerledes rabiat diagnosis konjugater er anbefalt. For RT-PCR brukes to sett med primere (JW12/N165-146, N113F/N304R) til å forsterke en delvis sekvens av det lyssavirus nucleoprotein genet. Dette Overvåkningsprogrammet overvåker lyssaviruses og andre zoonotiske midler i ball. Taiwan bat lyssavirus finnes i to tilfeller av den japanske pipistrelle (Pipistrellus abramus) i 2016 – 2017. Disse funnene bør informere offentligheten, helsepersonell, og forskere av den potensielle risikoen ved å kontakte ball og annet dyreliv.

Fra 2014 til mai 2017, ble 332 bat skrotter fra 13 arter samlet for overvåking. To testet positivt. I den første bat tilfelle, hjernen inntrykk testet negativt ved hjelp av FAT med en av de kommersielle FITC-bøyd anti-rabies antistoffer (figur 2), mens RT-PCRene ansette hver av de to primer sett (JW12/N165-146, N113F/N304R) gitt positive resultater (Figur 3). En 428 BP sekvens av amplicon (forsterket med N113F/N304R og inneholder delvis nucleoprotein genet) b...

Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Denne protokollen introduserer en standard laboratorium driftsprosedyre for diagnostisk testing av lyssavirus antigener i ball i Taiwan.

Standard driftsprosedyre for Lyssavirus overvåkning av bat befolkningen i Taiwan

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...

Lyssavirus er en zoo-ingen-tic patogener. For å vurdere tilstedeværelsen av Lyssavirus i taiwanske flaggermuspopulasjoner, initierte vi et overvåkingsprogram. Og det identifiserte fire Lyssavirus fra 2016 til 2018.Denne protokollen er en trinnvis introduksjon til vi-al Lyssavirus overvåking i Taiwan. Vi håper det vil være nyttig for forsket som er interessert i vi-al Lyssavirus overvåking. Det er viktig å koble til riktig tac-keg symbol.En død eller døende er mer egnet enn en levende for Lyssavirus overvåking. Avhengig av bio-sikkerhetsforskriftene i landet der laboratoriet ligger;utfør følgende prosedyrer i et egnet biosikkerhetsnivålaboratorium. Og sørg for at forskerne er kvalifisert og bruker riktig personlig verneutstyr.Ved innsamling av svake eller syke eller skrotter, har en økolog identifisere arten ved prøvens morfologiske egenskaper. Send et informasjonsark til laboratoriet, inkludert innsamlingsstedet, arter, kliniske tegn og andre relevante data med hver flaggermusprøve. Før du begynner nekroskopi, undersøke alle de eksterne åpningene og fotografer eksterne funksjoner, spesielt hodet, ørene og vingene for artsdilatering.For å samle en oral vattpinne prøve plassere i ventral recumbency på en steril disseksjon bord og fikse hodet med pinsett. Bruk en skalpell til å kutte huden langs midtlinjen av kalveområdet;og trekk huden til sidesidene, for å gjøre et snitt i skallen langs midtlinjen av kalveområdet. Åpne skallen med pinsett for å eksponere hjernevevet og bruk pinsettene til å forsiktig skille hjernevevet fra det tilkoblede nervevevet.Klipp tverrsnittet av hjernen, inkludert hjernestammen og lillehjernen, og berør lett den kuttede overflaten av hjernevevet med glasssklier for å gjøre smøreinntrykk. Trykk lysbildet på linsevevet for å fjerne overflødig vev og fikse smøreinntrykket glir i minus 20 grader celsius aceton i 30 minutter. Deretter fikser du et lite stykke friskt hjernevev, i formalin, for histopatologisk undersøkelse.Og legg resten av vevet i emi-em 10 for nukleinsyreekstraksjon. Deretter incise huden fra manifolden til anus langs midtlinjen av kroppen, og bruk pinsett til å løfte og skille huden og understreke muskelvev;for å tillate samling av spyttkjertlene, som ligger i nærheten av mandibulærbenet. Løft brystbenet litt med pinsettene, bruk skalpellen til å kutte brystbenet og bukveggen langs midtlinjen og kutte clavicles.Bruk nåler til å feste venstre og høyre ribbebur til disseksjonsbrettet, for å åpne thoraxhulen. Og registrere de grove legionene og graden av post mortem endring. Bruk deretter pinsett og skalpell for å fjerne visceral vev som passer for den planlagte nedstrøms analysen.For å utføre en direkte fluorescerende antistofftest på slutten av fikseringen, tørk smøreinntrykket og velg minst to fluorescenskonjugert anti-rabies antistoffer for analysen. Filtrer ett antistoff på hvert lysbilde gjennom en 0,45 mikrometersil. Og inkuber lysbildene i 30 minutter ved 37 grader celsius i et fuktig kammer.På slutten av inkubasjonen, tøm av overflødig konjugat og vask lysbildene med PBS. Bruk deretter et lite volum på 10% glyserol til å montere cover-slips på lysbildene og bilde lysbildene ved fluorescensmikroskopi. Når enten fluorescerende antistofftest eller RT-PCR-analysen indikerer positivitet, homogenisere hjerneprøven i 10% suspensjon i emi-en 10 og sediment vevet fleu-rry ved sentrifugering.Inokuler 200 mikroliter av super-nat-en med tre ganger 10 til 6th mus neuroblastom celler og en milliliter emi-en 10 for en time ved 37 grader celsius og 1% karbondioksid. Og overfør hjernen homogen celle suspensjon til en 25 centimeter kvadrert kolbe, som inneholder seks milliliter frisk emi-en 10. På en milliliter hjerne homogen celle suspensjon i en fire-brønn teflon-belagt glass lysbilde, med en seks millimeter diameter og plassere lysbildet på 37 grader celsius og 1% karbondioksid i tre til fire dager.Etter fiksering med 100% aceton, flekk lysbildene med de samme to fluorescens konjugert anti-rabies antistoffer som brukes til fluorescens antistoff test. Og visualiser lysbildene ved fluorescerende mikroskopi for å bestemme antall intracida-plas-mic inneslutninger. Etter å ha prøvd å bruke og under-kultivere den inokulerte cellekulturen i henhold til standardprotokoller, returnerer du den kalde kulturen til cellekulturinkubatoren i ytterligere tre til fire dager med gjentatt telling av antall infiserte celler som nettopp demonstrert til en 100% infeksitivitet er nådd.Fra januar 2014 til mai 2017 ble 332 flaggermusskrotter fra 13 arter samlet inn til overvåking. I denne representative analysen av to positive flaggermustilfeller testet hjerneinntrykket negativt ved hjelp av fluorescerende antistofftest med en av de kommersielle, fit-sy konjugerte anti-rabies antistoffene, mens RT-PCR som bruker hvert av de to forskjellige primersettene, ga positive resultater. Subjektiv av den oppnådde ampli-con-sekvensen for å sprenge spørring i Gen bankdatabasen viste at sekvensen var lik Lyssavirus med identiteter på mindre enn 79% som støtter identiteten til de oppdagede Lyssavirusene.To Lyssavirus ble senere vellykket isolert fra de to hjernene som bekreftet av fluorescens antistofftest og sekvensering. Hovedtrinnet for å bestemme Lyssaviruspositivitet er fluorescensantistofftesten og RT-HLR-analysen. Bruken av to eller flere anti-rabies antistoffer i primer settene anbefales sterkt.I tillegg til Lyssavirus kan andre zoo-ikke-ical bat patogener overvåkes ved hjelp av lukkede diagnostiske metoder. Dataene kan deretter brukes til å informere publikum om å unngå kontakt med. Jo mer vi er i stand til å studere bat Lyssavirus, jo mer vil vi være i stand til å forstå dens utvikling og innvirkning på folkehelsen.

Research

JoVE Journal

Environment

A Small Volume Procedure for Viral Concentration from Water

Et lite volum Prosedyre for Viral Konsentrasjon fra Water

Small-scale concentration of viruses (sample volumes 1-10 L, here simulated with spiked 100 ml water samples) is an efficient, cost-effective way to ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Rent Prøvetaking og analyse av elven og elvemunninger Waters for spormetall Studies

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

An Ultra-clean Multilayer Apparatus for Collecting Size Fractionated Marine Plankton and Suspended Particles

En ultra-rene flerlags apparater for å samle størrelse fraksjonert akvatisk Plankton og suspenderte partiklene

The distributions of many trace elements in the ocean are strongly associated with the growth, death, and re-mineralization of marine plankton and those ...

A Novel Method for the Pentosan Analysis Present in Jute Biomass and Its Conversion into Sugar Monomers Using Acidic Ionic Liquid

En ny metode for Pentosan analyse i Jute biomasse og konvertering sin inn sukker monomerer med surt ioniske flytende

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Optimalisert prosedyre for å bestemme adsorpsjon av Phosphonates på detaljert Ferric hydroksid bruker miniatyriserte fosfor vilje metode

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns (Sterna Hirundo)

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns Sterna Hirundo

Et videoovervåkningssystem overvåke avl kolonier av felles terner (veien Hirundo)

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread ...

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Bruk av Autometallography å lokalisere og semi kvantifisere sølv Cetacean vev

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of PlantÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Environment Interactions

En telemetrisk, gravimetrisk plattform for fysiologisk fenotyping i sanntid av plantemiljøinteraksjoner

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...

A Standardized Procedure for Monitoring Harmful Algal Blooms in Chile by Metabarcoding Analysis

En standardisert prosedyre for overvåking av skadelige algeoppblomstringer i Chile ved metabarkodingsanalyse

Harmful algae blooms (HABs) monitoring has been implemented worldwide, and Chile, a country famous for its fisheries and aquaculture, has intensively used ...

An Application for Pairing with Wearable Devices to Monitor Personal Health Status

En applikasjon for sammenkobling med bærbare enheter for å overvåke personlig helsestatus

The current protocol aims to showcase the technology integration, providing a detailed description of adopting the HealthCloud app, developed by the ...