Name: standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan
Uploaded: 2019-08-27T13:30:00
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Agradecemos a Tien-Cheng Li, Yi-Tang Lin, Chia-jung Tsai e Ya-LAN li por sua assistência durante este estudo. Este estudo foi apoiado por Grant no. 107AS-8.7.1-BQ-B2 (1) do Bureau de inspeção e quarentena de saúde animal e vegetal, Conselho de agricultura, executivo Yuan, Taiwan.

1. precauções de segurança ao manusear lissavírus
<ol><li>Assegure-se de que todos os trabalhadores laboratoriais que manuseiam espécimes de morcego recebam profilaxia antirrábica17. Monitore os níveis de anticorpos da raiva dos trabalhadores de antemão e reexamine-os a cada 6 meses17. A vacinação antirrábica de seguimento é necessária para aqueles cujos níveis de anticorpos são inferiores a 0,5 UI/mL17.</li>
	<li>Dependendo dos regu...

<ol>
	<li>Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+facts+about+lyssavirus.">Basic facts about lyssavirus.</a> Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).</li><li>Ar&#233;chiga Ceballos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lyssavirus+in+bat,+Spain.">Novel lyssavirus in bat, Spain.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).</li><li>Gunawardena, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Indian+Flying+Foxes,+Sri+Lanka.">Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka.</a> Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).</li><li>Hu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Japanese+Pipistrelle,+Taiwan.">Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.</a> Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).</li><li>Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+novel+lyssavirus+in+a+bat+in+Finland.">Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland.</a> Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).</li><li>Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+bats:+emergence+and+zoonotic+threat.">Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat.</a> Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).</li><li>Pal, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+infection+of+a+flying+fox+bat,+Pteropus+policephalus+in+Chandigarh,+Northern+India.">Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India.</a> Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).</li><li>Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rabies+virus+from+fruit+bats+in+Thailand.">Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand.</a> Nature. 216 (5113), 384 (1967).</li><li>Tang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+dogs+in+rabies+transmission,+China.">Pivotal role of dogs in rabies transmission, China.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses+(Aravan+and+Khujand)+from+Central+Asia:+phylogenetic+relationships+according+to+N,+P+and+G+gene+sequences.">Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences.</a> Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).</li><li>Arguin, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+Lyssavirus+infections+among+bats,+the+Philippines.">Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).</li><li>Lumlertdacha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+for+bat+lyssaviruses,+Thailand.">Survey for bat lyssaviruses, Thailand.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+surveillance+in+bats,+Bangladesh.">Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).</li><li>Reynes, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+lyssavirus+infection+in+bats,+Cambodia.">Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses,+northern+Vietnam.">Bat lyssaviruses, northern Vietnam.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).</li><li>Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Irkut+virus+from+a+Murina+leucogaster+bat+in+China.">Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).</li><li>Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+precautions+in+handling+rabies+virus.">Safety precautions in handling rabies virus.</a> Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).</li><li>Smith, I., Wang, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bats+and+their+virome:+an+important+source+of+emerging+viruses+capable+of+infecting+humans.">Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans.</a> Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).</li><li>Corbet, G. B., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).</li><li>Mayer, F., von Helversen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+diversity+in+European+bats.">Cryptic diversity in European bats.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).</li><li>Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+epidemics:+the+ecology+of+bat-borne+viruses+and+our+role+in+their+emergence.">Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence.</a> Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Hayman, D. T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+real-time+assay+for+the+detection+of+Lyssaviruses.">A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).</li><li>Franka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+phylogenetic+lineage+of+rabies+virus+associated+with+western+pipistrelle+bats+(Pipistrellus+hesperus).">A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus).</a> Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).</li><li>Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+evaluation.">Diagnostic evaluation.</a> Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).</li><li>Moldal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+detection+of+European+bat+lyssavirus+type+2+(EBLV-2)+in+Norway.">First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway.</a> BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).</li><li>Robardet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assay+of+fluorescent+antibody+test+results+among+twelve+European+National+Reference+Laboratories+using+various+anti-rabies+conjugates.">Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates.</a> Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).</li><li>Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+rabies.">Laboratory diagnosis of rabies.</a> Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).</li><li>Fischer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+step+forward+in+molecular+diagnostics+of+lyssaviruses--results+of+a+ring+trial+among+European+laboratories.">A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses--results of a ring trial among European laboratories.</a> PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).</li><li>David, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+detection+by+RT-PCR+in+decomposed+naturally+infected+brains.">Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains.</a> Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).</li><li>Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+interlaboratory+trials+on+rabies+diagnosis:+an+overview+of+results+and+variation+in+reference+diagnosis+techniques+(fluorescent+antibody+test,+rabies+tissue+culture+infection+test,+mouse+inoculation+test)+and+molecular+biology+techniques.">International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).</li></ol>

Este procedimento de funcionamento padrão do laboratório (SOP) fornece um processo de série para testar amostras do bastão para a presença de antígenos do lyssavirus em Formosa. Os passos principais incluem o emprego de FAT e RT-PCR. A seleção de amostras apropriadas e o isolamento bem-sucedido do vírus também são importantes. Adicionalmente, alguma solução de problemas foi conduzida durante a monitoração de lyssavirus do bastão. A diferença principal era os animais do alvo. Inicialmente (2008 – 2009),...

Vírus dentro do gênero lyssavirus são patógenos zoonóticos. Há pelo menos sete espécies de lyssavirus associadas a casos humanos1. Além das 16 espécies deste gênero1,2,3, Taiwan bat lyssavirus (twblv)4 e Kotalahti bat lyssavirus5 foram recentemente identificados em morcegos, mas seus status taxonômicos ainda não ser determinado.
Os morcegos são os hospedeiros naturais da maioria dos lissavírus, com exceção de Mokola lyssavirus e Ikoma lyssavirus, que ainda não foram identificados em nenhum morcego1,2,3,6. A informação sobre os lyssavirus em morcegos asiáticos ainda é limitada. Dois lyssavirus não caracterizados em morcegos asiáticos (um na Índia e outro na Tailândia)7,8foram relatados . Um caso humano da raiva associou com uma mordida de bastão em China foi relatado em 2002, mas o diagnóstico foi feito somente pela observação clínica9. Em Ásia Central, o lyssavirus de Aravan foi identificado no morcego rato-eared menor (Myotis blythi) em quirguistão em 1991, e o lyssavirus de Khujand foi identificado no morcego whiskered (Myotis mystacinus) em tajikistan em 200110. Em Ásia Sul, o lyssavirus do bastão de Gomes foi identificado na raposa Indian do vôo (medius de Pteropus) em Sri Lanka em 20153. No sudeste asiático, vários estudos sorológicos sobre morcegos nas Filipinas, Tailândia, Bangladesh, Camboja e Vietnã mostraram soroprevalência variável11,12,13,14, quinze anos. Embora o lyssavirus de Irkut fosse identificado no bastão tubo-cheirado maior (leucogaster de Murina) na província de Jilin, China em 201216, as espécies exatas e as posições de lyssavirus em populações asiáticas orientais do bastão permanecem desconhecidas.
Para avaliar a presença de lyssavirus em populações de morcegos taiwaneses, iniciou-se um programa de vigilância empregando tanto a FAT direta como a RT-PCR. O lyssavirus do bastão de Formosa foi identificado em dois casos do pipistrelle japonês (ABRAMUS de Pipistrellus)4 em 2016 – 2017. No artigo atual, um procedimento de funcionamento padrão do laboratório é introduzido para a fiscalização do Lyssavirus da população do bastão em Formosa. O fluxograma do diagnóstico do lyssavirus do bastão em nosso laboratório é apresentado em Figura 1.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5% Trypsin (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090046</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>32201-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose I</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>97062-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>NIHON SHIYAKU REAGENT</td>
			<td>NS-32294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMV Reverse Transcriptase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic(100X)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemilumineance system</td>
			<td>TOP BIO CO.</td>
			<td>MGIS-21-C2-1M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>990381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Muto Pure chemical Co., LTD.</td>
			<td>24505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA analyzer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>3700XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin</td>
			<td>Fujirebio Diagnostic Inc.</td>
			<td>800-092</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-well Teflon-coating glass slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>30-86H-WHITE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Electrophoresis System</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MJ-105-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175095</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ASTEC</td>
			<td>SCA-165DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent</td>
			<td>EMD Millipore Corporation</td>
			<td>5100</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact Instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03731146001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03730964001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11430030</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM vitamin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11120052</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06329.0500</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*2332R9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Medicago</td>
			<td>09-8912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer synthesis</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing service</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AA00008032E00MNT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile absorbent pad</td>
			<td>3M</td>
			<td>1604T-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>171-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>JMR Holdings</td>
			<td>JMR-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>2720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tongue depressor</td>
			<td>HONJER CO., LTD.</td>
			<td>122246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Tennyson medical Instrument developing CO., LTD.</td>
			<td>A0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tylosin Tartrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6271-10G</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan

Vírus dentro do gênero lyssavirus são patógenos zoonóticos, e pelo menos sete espécies de lyssavirus estão associadas a casos humanos. Porque os morcegos são reservatórios naturais da maioria dos lissavírus, um programa de vigilância de lyssavirus de morcegos tem sido conduzido em Taiwan desde 2008 para entender a ecologia desses vírus em morcegos. Neste programa, organizações não-governamentais de conservação de morcegos e centros de controle de doenças animais locais cooperaram para coletar morcegos mortos ou morcegos morrendo de fraqueza ou doença. Os tecidos cerebrais dos morcegos foram obtidos por necropsia e submetidos ao teste de anticorpo fluorescente direto (FAT) e reação em cadeia da polimerase reversa (RT-PCR) para detecção de antígenos de lyssavirus e ácidos nucleicos. Para a FAT, recomenda-se pelo menos dois conjugados de diagnóstico de raiva diferentes. Para o RT-PCR, dois conjuntos de primers (JW12/N165-146, N113F/N304R) são usados para amplificar uma sequência parcial do gene da nucleoproteína do lyssavirus. Este programa de vigilância monitora os lissavírus e outros agentes zoonóticos em morcegos. O lyssavirus do bastão de Formosa é encontrado em dois casos do pipistrelle japonês (ABRAMUS de Pipistrellus) em 2016 – 2017. Esses achados devem informar o público, os profissionais de saúde e os cientistas sobre os potenciais riscos de contato com morcegos e outros animais selvagens.

De 2014 a maio de 2017, foram coletadas 332 carcaças de morcegos de 13 espécies para vigilância. Dois positivos testados. No primeiro caso de morcego, a impressão cerebral testou negativamente usando a FAT com um dos anticorpos antirrábico FITC-conjugados comerciais (Figura 2), enquanto o RT-PCRs empregando cada um dos dois conjuntos de primer (JW12/N165-146, N113F/N304R) rendeu resultados positivos (Figura 3). Uma seqüência de 428 BP do amplicon (amplifi...

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Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Este protocolo introduz um procedimento de funcionamento padrão do laboratório para o teste diagnóstico de antígenos do lyssavirus nos bastões em Formosa.

Procedimento de funcionamento padrão para a vigilância do Lyssavirus da população do bastão em Formosa

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...

Lyssavirus é um zoológico-não-tic patógenos. Para avaliar a presença de Lyssavirus em populações de morcegos taiwaneses, iniciamos um programa de vigilância. E identificou com sucesso quatro Lyssaviruses de 2016 a 2018.Este protocolo é uma introdução passo-a-passo para a vigilância vi-al Lyssavirus em Taiwan. Esperamos que seja útil para pesquisas interessadas na vigilância vi-al Lyssavirus. É importante conectar o símbolo tac-barril correto.Um morcego morto ou moribundo é mais adequado do que um morcego vivo para vigilância do Lyssavirus. Dependendo das normas de biosegurança do país onde está localizado o laboratório; realize os seguintes procedimentos em um laboratório adequado de nível de bio-segurança. E garantir que os pesquisadores estejam qualificados e usem equipamentos de proteção individual adequados.Após a coleta de morcegos ou carcaças fracas ou doentes, um ecologista de morcegos identificou a espécie morcego pelas características morfológicas do espécime. Envie uma folha de informações ao laboratório, incluindo o local de coleta, espécies, sinais clínicos e outros dados relevantes com cada amostra de morcego. Antes de iniciar a necroscopia, examine todos os orifícios externos e fotografe as características externas dos morcegos, especialmente a cabeça, orelhas e asas para diferenciação de espécies.Para coletar uma amostra de cotonete oral coloque o morcego em recumbência ventral em uma placa de dissecção estéril e fixar a cabeça com pinças. Use um bisturi para cortar a pele ao longo da linha média da região da panturrilha; e puxe a pele para os lados laterais, para fazer uma incisão no crânio ao longo da linha média da área da panturrilha. Abra o crânio com pinças para expor o tecido cerebral e use a pinça para separar suavemente o tecido cerebral do tecido nervoso conectado.Corte a seção transversal do cérebro, incluindo o tronco cerebral e o cerebelo, e toque levemente a superfície cortada do tecido cerebral com lâminas de vidro para causar impressões de difamação. Pressione o slide no tecido da lente para remover o excesso de tecido e fixar as lâminas de impressão de difamação em menos 20 graus celsius acetona por 30 minutos. Então conserte um pequeno pedaço de tecido cerebral fresco, em formalina, para exame histopatológico.E coloque o resto do tecido em emi-em 10 para extração de ácido nucleico. Em seguida, incisar a pele do coletor ao ânus ao longo da linha média do corpo, e usar a pinça para levantar e separar a pele e sublinhar tecidos musculares; para permitir a coleta das glândulas salivares, localizadas perto do osso mandibular. Levantar ligeiramente o esterno com a pinça, use o bisturi para cortar o esterno e a parede abdominal ao longo da linha média e cortar as clavículas.Use agulhas para fixar as caixas torácicas esquerda e direita na placa de dissecção, para abrir a cavidade torácica. E gravar as legiões brutas e o grau de mudança pós-morte. Em seguida, use a pinça e o bisturi para remover os tecidos viscerais conforme apropriado para a análise planejada a jusante.Para realizar um teste de anticorpos fluorescentes diretos no final da fixação, seque os slides de impressão de difamação e selecione pelo menos dois anticorpos antirrábicas conjugados para a análise. Filtre um anticorpo em cada slide através de um filtro de 0,45 micrômetro. E incubar os slides por 30 minutos a 37 graus celsius em uma câmara úmida.No final da incubação, drene o excesso de conjugado e lave os slides com PBS. Em seguida, use um pequeno volume de 10% de glicerol para montar deslizamentos de cobertura nos slides e imagem dos slides por microscopia de fluorescência. Quando o teste de anticorpos fluorescentes ou a análise RT-PCR indicar positividade, homogeneize a amostra cerebral na suspensão de 10% em emi-en 10 e sedimente os tecidos fleu-rry por centrifugação.Inocular 200 microlitadores do super-nat-en com três vezes 10 a 6 células neuroblastomas do rato e um mililitro de emi-en 10 por uma hora a 37 graus celsius e 1% de dióxido de carbono. E transfira a suspensão de células homogêneas cerebrais para um frasco quadrado de 25 centímetros, contendo seis mililitros de emi-en 10 frescos. Em um mililitro de suspensão de células homogêneas cerebrais em um deslizamento de vidro revestido de Teflon de quatro poços, com um diâmetro de seis milímetros e colocar o slide a 37 graus celsius e 1% de dióxido de carbono por três a quatro dias.Após fixação com 100% de acetona, colorir os slides com os mesmos anticorpos antirraiva conjugados de fluorescência, como usado para o teste de anticorpos de fluorescência. E visualize os slides por microscopia fluorescente para determinar o número de inclusões intracida-plas-mic. Depois de tentarpsinizar e subculturar a cultura celular inoculada de acordo com os protocolos padrão, devolva a cultura fria à incubadora de cultura celular por mais três a quatro dias com a repetição da contagem do número de células infectadas como apenas demonstrado até que uma infectividade de 100% seja alcançada.De janeiro de 2014 a maio de 2017, foram coletadas 332 carcaças de morcegos de 13 espécies para vigilância. Nesta análise representativa de dois casos positivos de morcegos, a impressão cerebral testada negativamente usando o teste de anticorpos fluorescentes com um dos anticorpos antirraiva conjugados comerciais, fit-sy, enquanto o RT-PCR empregando cada um dos dois conjuntos de primer diferentes, produziu resultados positivos. A sujeição da sequência ampli-con obtida para a consulta de explosão no banco de dados do banco Gen revelou que a sequência era semelhante aos Lyssaviruses com identidades inferiores a 79% que suportam as identidades dos Lyssaviruses detectados.Dois Lyssaviruses foram posteriormente isolados com sucesso dos dois cérebros, confirmados pelo teste de anticorpos de fluorescência e sequenciamento. O passo chave para determinar a positividade do Lyssavirus são o teste de anticorpos de fluorescência e a análise de RCP. O uso de dois ou mais anticorpos antirrábica nos conjuntos de primer é altamente recomendado.Além do Lyssavirus, outros patógenos de morcego não-ical do zoológico podem ser monitorados usando métodos diagnósticos fechados. Os dados podem então ser usados para informar o público sobre evitar contato com morcegos. Quanto mais pudermos estudar o Lyssavirus morcego, mais seremos capazes de entender sua evolução e impacto na saúde pública.

Research

JoVE Journal

Environment

A Small Volume Procedure for Viral Concentration from Water

Um Procedimento volume pequeno para Concentração Viral da Água

Small-scale concentration of viruses (sample volumes 1-10 L, here simulated with spiked 100 ml water samples) is an efficient, cost-effective way to ...

Ambiente

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Limpo Amostragem e Análise do Rio e Estuarina Waters de Estudos de metal de rastreamento

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

An Ultra-clean Multilayer Apparatus for Collecting Size Fractionated Marine Plankton and Suspended Particles

Um aparelho ultra limpo Multicamado para coleta de plâncton marinho tamanho fracionado e partículas em suspensão

The distributions of many trace elements in the ocean are strongly associated with the growth, death, and re-mineralization of marine plankton and those ...

A Novel Method for the Pentosan Analysis Present in Jute Biomass and Its Conversion into Sugar Monomers Using Acidic Ionic Liquid

Um novo método para a análise de Pentosan presentes na biomassa de juta e sua conversão em monômeros de açúcar usando ácido líquido iônico

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Procedimento otimizado para determinar a adsorção de fosfonatos para Granular hidróxido férrico, usando um método de determinação de fósforo miniaturizado

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns (Sterna Hirundo)

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns Sterna Hirundo

Um sistema de vigilância por vídeo para monitorar a criação de colônias de andorinhas comuns (Sterna Hirundo)

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread ...

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Uso de Autometallography para localizar e quantificar semi prata em tecidos de cetáceos

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of PlantÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Environment Interactions

Uma plataforma telemétrica e gravimétrica para fenotipagem fisiológica em tempo real de interações vegetais-ambientais

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...

A Standardized Procedure for Monitoring Harmful Algal Blooms in Chile by Metabarcoding Analysis

Um procedimento padronizado para monitorar flores algas nocivas no Chile por análise de metabarco

Harmful algae blooms (HABs) monitoring has been implemented worldwide, and Chile, a country famous for its fisheries and aquaculture, has intensively used ...

An Application for Pairing with Wearable Devices to Monitor Personal Health Status

Um aplicativo para emparelhamento com dispositivos vestíveis para monitorar o status de saúde pessoal

The current protocol aims to showcase the technology integration, providing a detailed description of adopting the HealthCloud app, developed by the ...