Name: standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan
Uploaded: 2019-08-27T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

Мы благодарим Тянь-Чэн Ли, И-Тан Глин, Чиа-Чжун Цай и Я-Лан Ли за помощь в этом исследовании. Это исследование было поддержано грантом No 107AS-8.7.1-B'B2 (1) от Бюро инспекции здоровья животных и растений и карантина, Совета по сельскому хозяйству, Исполнительный юань, Тайвань.

1. Меры предосторожности при обращении с лиссавирусами
<ol><li>Убедитесь, что все работники лаборатории обработки летучих мышей получают предэкспозиционную профилактику бешенства17. Мониторинг уровня антител бешенства работников заранее и повторно изучить их каждые 6 месяц...

<ol>
	<li>Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+facts+about+lyssavirus.">Basic facts about lyssavirus.</a> Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).</li><li>Ar&#233;chiga Ceballos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lyssavirus+in+bat,+Spain.">Novel lyssavirus in bat, Spain.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).</li><li>Gunawardena, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Indian+Flying+Foxes,+Sri+Lanka.">Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka.</a> Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).</li><li>Hu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Japanese+Pipistrelle,+Taiwan.">Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.</a> Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).</li><li>Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+novel+lyssavirus+in+a+bat+in+Finland.">Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland.</a> Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).</li><li>Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+bats:+emergence+and+zoonotic+threat.">Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat.</a> Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).</li><li>Pal, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+infection+of+a+flying+fox+bat,+Pteropus+policephalus+in+Chandigarh,+Northern+India.">Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India.</a> Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).</li><li>Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rabies+virus+from+fruit+bats+in+Thailand.">Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand.</a> Nature. 216 (5113), 384 (1967).</li><li>Tang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+dogs+in+rabies+transmission,+China.">Pivotal role of dogs in rabies transmission, China.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses+(Aravan+and+Khujand)+from+Central+Asia:+phylogenetic+relationships+according+to+N,+P+and+G+gene+sequences.">Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences.</a> Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).</li><li>Arguin, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+Lyssavirus+infections+among+bats,+the+Philippines.">Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).</li><li>Lumlertdacha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+for+bat+lyssaviruses,+Thailand.">Survey for bat lyssaviruses, Thailand.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+surveillance+in+bats,+Bangladesh.">Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).</li><li>Reynes, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+lyssavirus+infection+in+bats,+Cambodia.">Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses,+northern+Vietnam.">Bat lyssaviruses, northern Vietnam.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).</li><li>Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Irkut+virus+from+a+Murina+leucogaster+bat+in+China.">Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).</li><li>Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+precautions+in+handling+rabies+virus.">Safety precautions in handling rabies virus.</a> Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).</li><li>Smith, I., Wang, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bats+and+their+virome:+an+important+source+of+emerging+viruses+capable+of+infecting+humans.">Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans.</a> Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).</li><li>Corbet, G. B., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).</li><li>Mayer, F., von Helversen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+diversity+in+European+bats.">Cryptic diversity in European bats.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).</li><li>Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+epidemics:+the+ecology+of+bat-borne+viruses+and+our+role+in+their+emergence.">Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence.</a> Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Hayman, D. T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+real-time+assay+for+the+detection+of+Lyssaviruses.">A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).</li><li>Franka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+phylogenetic+lineage+of+rabies+virus+associated+with+western+pipistrelle+bats+(Pipistrellus+hesperus).">A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus).</a> Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).</li><li>Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+evaluation.">Diagnostic evaluation.</a> Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).</li><li>Moldal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+detection+of+European+bat+lyssavirus+type+2+(EBLV-2)+in+Norway.">First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway.</a> BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).</li><li>Robardet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assay+of+fluorescent+antibody+test+results+among+twelve+European+National+Reference+Laboratories+using+various+anti-rabies+conjugates.">Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates.</a> Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).</li><li>Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+rabies.">Laboratory diagnosis of rabies.</a> Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).</li><li>Fischer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+step+forward+in+molecular+diagnostics+of+lyssaviruses--results+of+a+ring+trial+among+European+laboratories.">A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses--results of a ring trial among European laboratories.</a> PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).</li><li>David, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+detection+by+RT-PCR+in+decomposed+naturally+infected+brains.">Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains.</a> Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).</li><li>Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+interlaboratory+trials+on+rabies+diagnosis:+an+overview+of+results+and+variation+in+reference+diagnosis+techniques+(fluorescent+antibody+test,+rabies+tissue+culture+infection+test,+mouse+inoculation+test)+and+molecular+biology+techniques.">International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).</li></ol>

Эта лабораторная стандартная операционная процедура (SOP) обеспечивает серийный процесс для тестирования образцов летучих мышей на наличие лиссавирусных антигенов на Тайване. Ключевыми шагами являются занятость FAT и RT-PCR. Важное значение имеет также выбор подходящих образцов и успешна?...

Вирусы в пределах рода Lyssavirus являются зоонозными патогенами. Есть по крайней мере семь видов лиссавирусов, связанных с человеческими случаями1. В дополнение к 16 видов в этом роду1,2,3, Тайвань летучая мышь lyssavirus (TWBLV)4 и Kotalahti летучая мышь lyssavirus5 были недавно определены в летучих мышей, но их таксономические статусы до сих пор быть определены.
Летучие мыши являются естественными хозяевами большинства лиссавирусов, за исключением лиссавируса Mokola и лиссавируса Икома,которые до сих пор не выявлены ни у одной летучей мыши 1,2,3,6. Информация о лиссавирусах у азиатских летучих мышей по-прежнему ограничена. Два нехарактерных лиссавирусов у азиатских летучих мышей (один в Индии, а другой в Таиланде)7,8 были зарегистрированы. Один случай бешенства человека, связанный с укусом летучей мыши в Китае, был зарегистрирован в 2002 году, но диагноз был поставлен только путем клинического наблюдения9. В Центральной Азии, Араван лиссавирус был выявлен в меньшей мыши ушастый летучая мышь (Myotis blythi) в Кыргызстане в 1991 году, и Худжанд лиссавирус был выявлен в усатые летучая мышь (Myotis mystacinus) в Таджикистане в 2001году 10. В южной Азии, Gannoruwa летучая мышь лиссавирус был выявлен в индийской летучей лисы(Pteropus medius) в Шри-Ланке в 20153. В юго-восточной Азии, несколько серологических исследований на летучих мышей на Филиппинах, Таиланде, Бангладеш, Камбодже и Вьетнаме показали переменную серораспространенность11,12,13,14, 15. Хотя иркутский лизсавирус был выявлен в большей трубчатой летучей мыши(Murina leucogaster) в провинции Цзилинь, Китай в 2012 году16, точные виды и места лизавирусов в восточноазиатских популяциях летучих мышей остаются неизвестными.
Для оценки присутствия лиссавируса в популяциях тайваньских летучих мышей была начата программа эпиднадзора, в рамках которой использовались как прямые FAT, так и RT-PCR. Тайваньский лиссавирус летучей мыши был выявлен в двух случаях японского pipistrelle(Pipistrellus abramus)4 в 2016-2017 годах. В настоящей статье вводится лабораторная стандартная процедура эксплуатации для лиссавирусного наблюдения за популяцией летучих мышей на Тайване. Диаграмма потока лиссавирусной диагностики летучих мышей в нашей лаборатории представлена на рисунке 1.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5% Trypsin (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090046</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>32201-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose I</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>97062-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>NIHON SHIYAKU REAGENT</td>
			<td>NS-32294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMV Reverse Transcriptase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic(100X)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemilumineance system</td>
			<td>TOP BIO CO.</td>
			<td>MGIS-21-C2-1M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>990381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Muto Pure chemical Co., LTD.</td>
			<td>24505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA analyzer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>3700XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin</td>
			<td>Fujirebio Diagnostic Inc.</td>
			<td>800-092</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-well Teflon-coating glass slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>30-86H-WHITE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Electrophoresis System</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MJ-105-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175095</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ASTEC</td>
			<td>SCA-165DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent</td>
			<td>EMD Millipore Corporation</td>
			<td>5100</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact Instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03731146001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03730964001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11430030</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM vitamin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11120052</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06329.0500</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*2332R9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Medicago</td>
			<td>09-8912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer synthesis</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing service</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AA00008032E00MNT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile absorbent pad</td>
			<td>3M</td>
			<td>1604T-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>171-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>JMR Holdings</td>
			<td>JMR-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>2720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tongue depressor</td>
			<td>HONJER CO., LTD.</td>
			<td>122246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Tennyson medical Instrument developing CO., LTD.</td>
			<td>A0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tylosin Tartrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6271-10G</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan

Вирусы в пределах рода Lyssavirus являются зоонозными патогенами, и по крайней мере семь видов лиссавирусов связаны с случаями заболевания человека. Поскольку летучие мыши являются естественными резервуарами большинства лиссавирусов, программа наблюдения за лиссавирусами летучих мышей проводится на Тайване с 2008 года, чтобы понять экологию этих вирусов у летучих мышей. В рамках этой программы неправительственные организации по сохранению летучих мышей и местные центры по борьбе с болезнями животных сотрудничали в сборе мертвых летучих мышей или летучих мышей, умирающих от слабости или болезни. Мозг ткани летучих мышей были получены через некропсию и подвергаются прямому флуоресцентному тесту на антитела (FAT) и обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (RT-PCR) для обнаружения лиссавирусных антигенов и нуклеиновых кислот. Для FAT, по крайней мере два различных диагноза бешенства conjugates рекомендуется. Для RT-PCR для усиления частичной последовательности гена нуклеопротеина (JW12/N165-146, N113F/N304R) используются два набора грунтовок. Эта программа наблюдения отслеживает лиссавирусы и другие зоонозные агенты у летучих мышей. Тайваньский лиссавирус летучей мыши обнаружен в двух случаях японского пипитштила(Pipistrellus abramus)в 2016-2017 годах. Эти выводы должны информировать общественность, специалистов в области здравоохранения и ученых о потенциальных рисках контакта с летучими мышами и другими дикими животными.

С 2014 года по май 2017 года для наблюдения было собрано 332 туши летучих мышей из 13 видов. Два положительных результатов. В первом случае летучая мышь, впечатление мозга испытания отрицательным с помощью FAT с одним из коммерческих FITC-конъюгированных антител против бешенства (Рису?...

Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Этот протокол вводит стандартную лабораторную процедуру для диагностического тестирования лиссавирусных антигенов у летучих мышей на Тайване.

Стандартная операционная процедура для lyssavirus наблюдение за популяцией летучих мышей на Тайване

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...

Лиссавирус является зоо-нет-тик патогенов. Чтобы оценить наличие лиссавируса в популяциях тайваньских летучих мышей, мы инициировали программу эпиднадзора. С 2016 по 2018 год она успешно выявила четыре лиссавируса.Этот протокол является пошаговое введение в vi-al Lyssavirus эпиднадзора на Тайване. Мы надеемся, что это будет полезно для исследователей, которые заинтересованы в vi-al Lyssavirus эпиднадзора. Важно подключить правильный символ так-кега.Мертвая или умирающая летучая мышь больше подходит, чем живая летучая мышь для наблюдения за лиссавирусом. В зависимости от правил биобезопасности страны, где находится лаборатория; выполняем следующие процедуры в подходящей лаборатории уровня биобезопасности. И убедитесь, что исследователи в настоящее время квалифицированы и носить надлежащее личное защитное оборудование.После сбора слабых или больных летучих мышей или туш, есть летучая мышь эколог определить вид летучих мышей по морфологическим характеристикам образца. Отправьте в лабораторию информационный бюллетень, включающий место сбора, виды, клинические признаки и другие соответствующие данные с каждым образцом летучей мыши. Перед началом некроскопии, изучить все внешние отверстия и сфотографировать летучих мышей внешних особенностей, особенно головы, ушей и крыльев для дифференциации видов.Для сбора устного образца тампона поместите летучую мышь в брюшной лежачий на стерильную доску для вскрытия и зафиксировать голову пинцетом. Используйте скальпель, чтобы сократить кожу вдоль средней линии области теленка; и потяните кожу к боковым бокам, чтобы сделать разрез в черепе вдоль средней линии области теленка. Откройте череп пинцетом, чтобы разоблачить ткани мозга и использовать пинцет, чтобы мягко отделить ткани мозга от подключенной нервной ткани.Вырезать поперечное сечение мозга, в том числе ствола мозга и мозжечка, и слегка коснуться разреза поверхности ткани мозга со стеклянными слайдами, чтобы сделать мазок впечатления. Нажмите слайд на ткани объектива, чтобы удалить избыток ткани и исправить мазок впечатление слайды в минус 20 градусов по Цельсию ацетон в течение 30 минут. Затем исправить небольшой кусочек свежей ткани мозга, в формалин, для гистопатологического обследования.И поместите остальную часть ткани в emi-em 10 для извлечения нуклеиновой кислоты. Далее, наклонять кожу от многообразия к анусу вдоль средней линии тела, и использовать пинцет, чтобы поднять и отделить кожу и подчеркнуть мышечные ткани; чтобы позволить сбор слюнных желез, расположенных рядом с миндибулярной кости. Слегка подняв грудину пинцетом, используйте скальпель, чтобы разрезать грудину и брюшную стенку вдоль средней линии и вырезать ключицы.Используйте иглы, чтобы исправить левые и правые грудные клетки на доске для вскрытия, чтобы открыть грудную полость. И записывают грубые легионы и степень посмертного изменения. Затем используйте пинцет и скальпель, чтобы удалить висцеральные ткани, как это уместно для запланированного анализа вниз по течению.Для выполнения прямого теста флуоресцентных антител в конце фиксации, высушить мазок впечатление слайды и выбрать по крайней мере два флуоресценции конъюгированных антител против бешенства для анализа. Фильтр одного антитела на каждом слайде через 0,45 микрометра ситечко. И инкубировать горки в течение 30 минут при 37 градусах по Цельсию во влажной камере.В конце инкубации слейте излишки спряжения и вымойте горки с помощью PBS. Затем используйте небольшой объем 10%глицерол для установки крышки скользит на слайды и изображение слайдов с помощью микроскопии флуоресценции. Когда либо флуоресцентные антитела тест или анализ RT-PCR указывает на положительность, гомогенизировать образец мозга в 10%подвески в emi-en 10 и осадок тканей fleu-rry центрифугации.Привить 200 микролитров супер-нат-эн с 3 раза от 10 до 6-й мыши нейробластомы клеток и один миллилитр эми-ан 10 в течение одного часа при 37 градусов по Цельсию и 1%углекислого газа. И перенести подвеску однородных клеток мозга на 25-сантиметровую колбу в квадрате, содержащую шесть миллилитров свежего эми-ан 10. На один миллилитр мозга однородно-клеточной подвески в четыре хорошо тефлон покрытием стеклянной горки, с диаметром шесть миллиметров и место слайд на 37 градусов по Цельсию и 1%углекислого газа в течение трех-четырех дней.После фиксации 100%ацетоном, пятно слайды с теми же двумя флуоресценции конъюгированных антител против бешенства, как используется для теста на флуоресценцию антител. И визуализировать слайды с помощью флуоресцентной микроскопии, чтобы определить количество intracida-plas-mic включений. После трипсинизации и суб-культивирования привитой клеточной культуры в соответствии со стандартными протоколами, верните холодную культуру в инкубатор клеточной культуры еще на три-четыре дня с повторным подсчетом количества инфицированных клеток, как это было продемонстрировано до тех пор, пока не будет достигнута 100%-ная инфекционность.С января 2014 года по май 2017 года для наблюдения было собрано 332 туши летучих мышей 13 видов. В этом репрезентативном анализе двух положительных случаев летучих мышей, впечатление мозга испытания отрицательных с помощью флуоресцентных антител тест с одним из коммерческих, подходят си спряженных антител против бешенства, в то время как RT-PCR с использованием каждого из двух различных наборов грунтовки, дали положительные результаты. Тема полученной последовательности ампли-кон к взрыву запроса в базе данных Ген банка показала, что последовательность была похожа на лиссавирусы с идентичностями менее 79%, поддерживающими личности обнаруженных лиссавирусов.Два лиссавируса были впоследствии успешно изолированы от двух мозгов, что подтверждается тестом на флуоресценцию антител и секвенированием. Ключевым шагом для определения положительности лиссавируса являются тест на флуоресценцию антител и анализ RT-CPR. Использование двух или более антител против бешенства в грунтовки наборы настоятельно рекомендуется.В дополнение к Lyssavirus другие зоо-не-ical летучих мышей патогенов можно контролировать с помощью закрытых диагностических методов. Эти данные могут быть использованы для информирования общественности об избежании контакта с летучими мышами. Чем больше мы сможем изучать лиссавирус летучих мышей, тем больше мы сможем понять его эволюцию и влияние на общественное здравоохранение.

Research

JoVE Journal

Environment

A Small Volume Procedure for Viral Concentration from Water

Малый Порядок громкости для концентрации вируса из воды

Small-scale concentration of viruses (sample volumes 1-10 L, here simulated with spiked 100 ml water samples) is an efficient, cost-effective way to ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Чистый отбор проб и анализ реки и эстуарии для изучения следов металлов

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

An Ultra-clean Multilayer Apparatus for Collecting Size Fractionated Marine Plankton and Suspended Particles

Ультра-чистой многослойных аппарат для сбора размер фракционированный морской планктон и взвешенных частиц

The distributions of many trace elements in the ocean are strongly associated with the growth, death, and re-mineralization of marine plankton and those ...

A Novel Method for the Pentosan Analysis Present in Jute Biomass and Its Conversion into Sugar Monomers Using Acidic Ionic Liquid

Новый метод для анализа Пентозанполисульфат в джута биомассы и превращения его в сахар мономеров, с использованием кислой ионные жидкости

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Оптимизированная процедура определения адсорбции фосфонаты на гранулированный гидроокисью железа с помощью миниатюрных метод определения фосфора

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns (Sterna Hirundo)

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns Sterna Hirundo

Система видео наблюдения для мониторинга, разведение колоний общего крачек (Sterna Hirundo)

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread ...

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Использование Autometallography для локализации и полу количественно серебра в тканях китообразных

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of PlantÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Environment Interactions

Телеметрическая, гравиметрическая платформа для физиологического фенотипирования взаимодействия растений и окружающей среды в режиме реального времени

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...

A Standardized Procedure for Monitoring Harmful Algal Blooms in Chile by Metabarcoding Analysis

Стандартизированная процедура мониторинга вредного цветения водорослей в Чили с помощью анализа метабаркодирования

Harmful algae blooms (HABs) monitoring has been implemented worldwide, and Chile, a country famous for its fisheries and aquaculture, has intensively used ...

An Application for Pairing with Wearable Devices to Monitor Personal Health Status

Приложение для сопряжения с носимыми устройствами для мониторинга состояния личного здоровья

The current protocol aims to showcase the technology integration, providing a detailed description of adopting the HealthCloud app, developed by the ...