Name: standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan
Uploaded: 2019-08-27T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

Vi tackar Tien-Cheng Li, Yi-Tang lin, Chia-Jung Tsai, och ya-LAN Li för deras hjälp under denna studie. Denna studie stöddes av Grant No. 107AS-8.7.1-BQ-B2 (1) från presidiet för djur-och växtskydds inspektion och karantän, jordbruksrådet, Executive Yuan, Taiwan.

1. säkerhetsföreskrifter vid hantering av lyssaviruses
<ol><li>Se till att alla laboratoriearbetare som hanterar bat-prover får pre-exponering för rabies profylax17. Kontrollera nivåerna av rabiesantikroppar hos arbetarna i förväg och ompröva dem var 6: de månad17. Uppföljning av rabiesvaccination krävs för dem vars antikroppsnivåer är lägre än 0,5 IE/mL17.</li>
	<li>Beroende på biosäkerhets föreskrifterna i det land där laborat...

<ol>
	<li>Kuzmin, I. V., Rupprecht, C. E., Nagarajan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+facts+about+lyssavirus.">Basic facts about lyssavirus.</a> Current laboratory techniques in rabies diagnosis, research, and prevention, volume 1. , 3-21 (2014).</li><li>Ar&#233;chiga Ceballos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+lyssavirus+in+bat,+Spain.">Novel lyssavirus in bat, Spain.</a> Emerging Infectious Diseases. 19 (5), 793-795 (2013).</li><li>Gunawardena, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Indian+Flying+Foxes,+Sri+Lanka.">Lyssavirus in Indian Flying Foxes, Sri Lanka.</a> Emerging Infectious Diseases. 22 (8), 1456-1459 (2016).</li><li>Hu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+in+Japanese+Pipistrelle,+Taiwan.">Lyssavirus in Japanese Pipistrelle, Taiwan.</a> Emerging Infectious Diseases. 24 (4), 782-785 (2018).</li><li>Nokireki, T., Tammiranta, N., Kokkonen, U. -. M., Kantala, T., Gadd, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tentative+novel+lyssavirus+in+a+bat+in+Finland.">Tentative novel lyssavirus in a bat in Finland.</a> Transboundary Emerging Diseases. 65 (3), 593-596 (2018).</li><li>Banyard, A. C., Evans, J. S., Luo, T. R., Fooks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+bats:+emergence+and+zoonotic+threat.">Lyssaviruses and bats: emergence and zoonotic threat.</a> Viruses. 6 (8), 2974-2990 (2014).</li><li>Pal, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+infection+of+a+flying+fox+bat,+Pteropus+policephalus+in+Chandigarh,+Northern+India.">Rabies virus infection of a flying fox bat, Pteropus policephalus in Chandigarh, Northern India.</a> Tropical and Geographical Medicine. 32 (3), 265-267 (1980).</li><li>Smith, P. C., Lawhaswasdi, K., Vick, W. E., Stanton, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+rabies+virus+from+fruit+bats+in+Thailand.">Isolation of rabies virus from fruit bats in Thailand.</a> Nature. 216 (5113), 384 (1967).</li><li>Tang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pivotal+role+of+dogs+in+rabies+transmission,+China.">Pivotal role of dogs in rabies transmission, China.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (12), 1970-1972 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses+(Aravan+and+Khujand)+from+Central+Asia:+phylogenetic+relationships+according+to+N,+P+and+G+gene+sequences.">Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences.</a> Virus Research. 97 (2), 65-79 (2003).</li><li>Arguin, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+Lyssavirus+infections+among+bats,+the+Philippines.">Serologic evidence of Lyssavirus infections among bats, the Philippines.</a> Emerging Infectious Diseases. 8 (3), 258-262 (2002).</li><li>Lumlertdacha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+for+bat+lyssaviruses,+Thailand.">Survey for bat lyssaviruses, Thailand.</a> Emerging Infectious Diseases. 11 (2), 232-236 (2005).</li><li>Kuzmin, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssavirus+surveillance+in+bats,+Bangladesh.">Lyssavirus surveillance in bats, Bangladesh.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (3), 486-488 (2006).</li><li>Reynes, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serologic+evidence+of+lyssavirus+infection+in+bats,+Cambodia.">Serologic evidence of lyssavirus infection in bats, Cambodia.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (12), 2231-2234 (2004).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+lyssaviruses,+northern+Vietnam.">Bat lyssaviruses, northern Vietnam.</a> Emerging Infectious Diseases. 20 (1), 161-163 (2014).</li><li>Liu, Y., Zhang, S., Zhao, J., Zhang, F., Hu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Irkut+virus+from+a+Murina+leucogaster+bat+in+China.">Isolation of Irkut virus from a Murina leucogaster bat in China.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (3), 2097 (2013).</li><li>Kaplan, M. M., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Kiprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+precautions+in+handling+rabies+virus.">Safety precautions in handling rabies virus.</a> Laboratory Techniques in Rabies, 4th Ed. , 3-8 (1996).</li><li>Smith, I., Wang, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bats+and+their+virome:+an+important+source+of+emerging+viruses+capable+of+infecting+humans.">Bats and their virome: an important source of emerging viruses capable of infecting humans.</a> Current Opinion in Virology. 3 (1), 84-91 (2013).</li><li>Corbet, G. B., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mammals of the Indomalayan region: a systematic review. , (1992).</li><li>Mayer, F., von Helversen, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryptic+diversity+in+European+bats.">Cryptic diversity in European bats.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 268 (1478), 1825-1832 (2001).</li><li>Epstein, J. H., Field, H. E., Wang, L. F., Cowled, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropogenic+epidemics:+the+ecology+of+bat-borne+viruses+and+our+role+in+their+emergence.">Anthropogenic epidemics: the ecology of bat-borne viruses and our role in their emergence.</a> Bats and viruses: a new frontier of emerging infectious diseases. , 249-280 (2016).</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Hayman, D. T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+real-time+assay+for+the+detection+of+Lyssaviruses.">A universal real-time assay for the detection of Lyssaviruses.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 87-93 (2011).</li><li>Franka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+phylogenetic+lineage+of+rabies+virus+associated+with+western+pipistrelle+bats+(Pipistrellus+hesperus).">A new phylogenetic lineage of rabies virus associated with western pipistrelle bats (Pipistrellus hesperus).</a> Journal of General Virology. 87 (8), 2309-2321 (2006).</li><li>Trimarchi, C. V., Smith, J. S., Press, A., Jackson, A. C., Wunner, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+evaluation.">Diagnostic evaluation.</a> Rabies, 1st ed. , 307-349 (2002).</li><li>Moldal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+detection+of+European+bat+lyssavirus+type+2+(EBLV-2)+in+Norway.">First detection of European bat lyssavirus type 2 (EBLV-2) in Norway.</a> BMC Veterinary Research. 13, 216 (2017).</li><li>Robardet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assay+of+fluorescent+antibody+test+results+among+twelve+European+National+Reference+Laboratories+using+various+anti-rabies+conjugates.">Comparative assay of fluorescent antibody test results among twelve European National Reference Laboratories using various anti-rabies conjugates.</a> Journal of Virological Methods. 191 (1), 88-94 (2013).</li><li>Hanlon, C. A., Nadin-Davis, S. A., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+rabies.">Laboratory diagnosis of rabies.</a> Rabies, 3rd ed. , 409-459 (2013).</li><li>Fischer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+step+forward+in+molecular+diagnostics+of+lyssaviruses--results+of+a+ring+trial+among+European+laboratories.">A step forward in molecular diagnostics of lyssaviruses--results of a ring trial among European laboratories.</a> PLoS ONE. 8 (3), 58372 (2013).</li><li>David, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+virus+detection+by+RT-PCR+in+decomposed+naturally+infected+brains.">Rabies virus detection by RT-PCR in decomposed naturally infected brains.</a> Veterinary Microbiology. 87 (2), 111-118 (2002).</li><li>Robardet, E., Picard-Meyer, E., Andrieu, S., Servat, A., Cliquet, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+interlaboratory+trials+on+rabies+diagnosis:+an+overview+of+results+and+variation+in+reference+diagnosis+techniques+(fluorescent+antibody+test,+rabies+tissue+culture+infection+test,+mouse+inoculation+test)+and+molecular+biology+techniques.">International interlaboratory trials on rabies diagnosis: an overview of results and variation in reference diagnosis techniques (fluorescent antibody test, rabies tissue culture infection test, mouse inoculation test) and molecular biology techniques.</a> Journal of Virological Methods. 177 (1), 15-25 (2011).</li></ol>

Detta laboratorium standard arbetsförfarande (SOP) ger en seriell process för att testa bat prover för förekomst av lyssavirus antigener i Taiwan. De viktigaste stegen är anställning av FAT och RT-PCR. Urvalet av lämpliga prover och en lyckad isolering av viruset är också viktigt. Dessutom genomfördes en del felsökning under övervakning av BAT lyssaviruses. Den största skillnaden var måldjuren. Inledningsvis (2008 – 2009) var måldjur av BAT lyssavirus övervakning Live fladdermöss, som fångades i Kinme...

Virus inom släktet lyssavirus är zoonotiska patogener. Det finns minst sju lyssavirus arter i samband med Human fall1. Förutom de 16 arterna i släktet1,2,3, har Taiwan bat lyssavirus (twblv)4 och kotalahti bat lyssavirus5 nyligen identifierats i fladdermöss, men deras taxonomiska status har ännu inte bestämmas.
Fladdermöss är de flesta lyssaviruses naturliga värdar, med undantag av Mokola lyssavirus och ikoma lyssavirus, som ännu inte har identifierats i någon fladdermus1,2,3,6. Informationen på lyssaviruses i asiatiska fladdermöss är fortfarande begränsad. Två okarakteriserade lyssaviruses i asiatiska fladdermöss (en i Indien och den andra i Thailand)7,8 har rapporterats. En mänsklig rabies fall förbundet med en fladdermus bita i Porslinet var rapportera i 2002, utom diagnosen var gjord bara vid klinisk observation9. I Central Asien identifierades Aravan lyssavirus i den mindre mus-eared bat (Myotis sångare) i Kirgizistan 1991, och khujand lyssavirus identifierades i den med morrhår bat (Myotis mystacinus) i Tadzjikistan i 200110. I Sydasien identifierades Gannoruwa bat lyssavirus i den indiska flygande räven (Pteropus Medius) i sri Lanka 20153. I Sydostasien, flera serologiska studier på fladdermöss i Filippinerna, Thailand, Bangladesh, Kambodja och Vietnam visade variabel seroprevalens11,12,13,14, 15. Även om Irkut lyssavirus identifierades i det större röret-nosed bat (murina leucogaster) i Jilin-provinsen, kina i 201216, förblir den exakta arten och platserna för Lyssaviruses i östasiatiska fladdermuspopulationer okända.
För att bedöma närvaron av lyssavirus i taiwanesiska fladdermuspopulationer initierades ett övervakningsprogram som sysselsätter både direkt fett och RT-PCR. Taiwan bat lyssavirus identifierades i två fall av den japanska pipistrelle (Pipistrellus abramus)4 under 2016 – 2017. I denna artikel införs ett operativt laboratorieförfarande för lyssavirus övervakning av BAT-populationen i Taiwan. Flödesschema för BAT lyssavirus diagnos i vårt laboratorium presenteras i figur 1.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.5% Trypsin (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090046</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 cm2 flask</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>690160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>32201-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose I</td>
			<td>VWR Life Science</td>
			<td>97062-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>NIHON SHIYAKU REAGENT</td>
			<td>NS-32294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMV Reverse Transcriptase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>M5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic(100X)&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BA215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemilumineance system</td>
			<td>TOP BIO CO.</td>
			<td>MGIS-21-C2-1M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>990381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collection tube</td>
			<td>SSI</td>
			<td>2341-SO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Muto Pure chemical Co., LTD.</td>
			<td>24505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA analyzer</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>3700XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10437028</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Anti-Rabies Monoclonal Globulin</td>
			<td>Fujirebio Diagnostic Inc.</td>
			<td>800-092</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-well Teflon-coating glass slide</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>30-86H-WHITE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Electrophoresis System</td>
			<td>Major Science</td>
			<td>MJ-105-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (1x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175095</td>
			<td>Trppsin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ASTEC</td>
			<td>SCA-165DS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A2916801</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIGHT DIAGNOSTICS Rabies FAT reagent</td>
			<td>EMD Millipore Corporation</td>
			<td>5100</td>
			<td>FITC-conjugated anti-rabies antibodies: reagent A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact Instrument</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03731146001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure Compact NA Isolation Kit 1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>03730964001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM (10x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11430030</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM NEAA (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140050</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM vitamin solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11120052</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06329.0500</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*2332R9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Medicago</td>
			<td>09-8912-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer synthesis</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNasin ribonuclease inhibitor</td>
			<td>Promega</td>
			<td>N2111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sequencing service</td>
			<td>Mission Biotech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>AA00008032E00MNT10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360070</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile absorbent pad</td>
			<td>3M</td>
			<td>1604T-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>171-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq polymerase</td>
			<td>JMR Holdings</td>
			<td>JMR-801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>2720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TissueLyser II</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tongue depressor</td>
			<td>HONJER CO., LTD.</td>
			<td>122246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezer</td>
			<td>Tennyson medical Instrument developing CO., LTD.</td>
			<td>A0601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tylosin Tartrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6271-10G</td>
			<td>MEM-10</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standard operating procedure for lyssavirus surveillance of the bat population in taiwan

Virus inom släktet lyssavirus är zoonotiska patogener, och minst sju lyssavirus arter är förknippade med mänskliga fall. Eftersom fladdermöss är naturliga reservoarer av de flesta lyssaviruses, har ett lyssavirus övervakningsprogram för fladdermöss bedrivits i Taiwan sedan 2008 för att förstå ekologin hos dessa virus i fladdermöss. I detta program, icke-statliga bat bevarande organisationer och lokala djur centra sjukdom kontroll samarbetade för att samla in döda fladdermöss eller fladdermöss dör av svaghet eller sjukdom. Hjärnvävnader av fladdermöss erhölls genom obduktion och utsätts för direkt fluorescerande antikroppstest (fett) och omvänd Transkription polymeras kedjereaktion (RT-PCR) för detektion av lyssavirus antigener och nukleinsyror. För FETTET rekommenderas minst två olika konjugat av rabies diagnos. För RT-PCR används två uppsättningar primrar (JW12/N165-146, N113F/N304R) för att förstärka en partiell sekvens av lyssavirus-nukleoproteingenen. Detta övervakningsprogram övervakar lyssaviruses och andra zoonotiska smittämnen i fladdermöss. Taiwan bat lyssavirus finns i två fall av den japanska pipistrelle (Pipistrellus abramus) i 2016 – 2017. Dessa fynd bör informera allmänheten, hälso-och sjukvårdspersonal och forskare om de potentiella riskerna med att kontakta fladdermöss och andra vilda djur.

Från 2014 till maj 2017 samlades 332 bat-slaktkroppar från 13 arter in för övervakning. Två testade positiva. I det första bat-fallet testade hjärnan intrycket negativt med hjälp av FETTET med en av de kommersiella FITC-konjugerade anti-rabiesantikropparna (figur 2), medan de RT-PCRS som använder var och en av de två PRIMERUPPSÄTTNINGARNA (JW12/N165-146, N113F/N304R) gav positiva resultat (figur 3). En 428 BP sekvens av amplikon (Amplified med N113F/N...

Watch this Scientific Journal Video about Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan at JoVE.com

Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Genom detta protokoll införs ett standardförfarande för laboratorie drift för diagnostisk testning av lyssavirus antigener i fladdermöss i Taiwan.

Standard förfarande för lyssavirus övervakning av BAT-populationen i Taiwan

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...

Lyssavirus är en djurpark-ingen-tic patogener. För att bedöma förekomsten av Lyssavirus i taiwanesiska fladdermuspopulationer initierade vi ett övervakningsprogram. Och det identifierade framgångsrikt fyra Lyssavirus från 2016 till 2018.Detta protokoll är en stegvis introduktion till vi-al Lyssavirus-övervakning i Taiwan. Vi hoppas att det kommer att vara användbart för forskning som är intresserade av vi-al Lyssavirus övervakning. Det är viktigt att ansluta rätt tac-keg symbol.En död eller döende fladdermus är mer lämplig än en levande fladdermus för Lyssavirus övervakning. Beroende på biosäkerhetsbestämmelser i det land där laboratoriet är beläget;utföra följande procedurer i ett lämpligt laboratorium på biosäkerhetsnivå. Och se till att forskarna för närvarande är kvalificerade och bära ordentlig personlig skyddsutrustning.Vid insamling av svaga eller sjuka fladdermöss eller slaktkroppar, har en fladdermus ekolog identifiera fladdermus arter av exemplaret morfologiska egenskaper. Lämna in ett informationsblad till laboratoriet, inklusive insamlingsplatsen, arterna, de kliniska tecknen och andra relevanta data med varje fladdermusexemplar. Innan du börjar necroscopy, undersöka alla yttre öppningar och fotografera fladdermössen yttre funktioner, särskilt huvudet, öron och vingar för arter differentiering.För att samla en muntlig svabbprov placera bat i ventrala recumbency på en steril dissekering ombord och fixera huvudet med pincett. Använd en skalpell för att skära huden längs mittlinjen av kalvområdet;och dra huden till de laterala sidorna, för att göra ett snitt i skallen längs mittlinjen av kalvområdet. Öppna skallen med pincett för att exponera hjärnvävnaden och använd pincetterna för att försiktigt separera hjärnvävnaden från den anslutna nervvävnaden.Skär tvärsnittet av hjärnan, inklusive hjärnstammen och lillhjärnan, och lätt röra den skurna ytan av hjärnvävnaden med glasglas för att göra smeta intryck. Tryck på bilden på linsvävnad för att avlägsna överflödig vävnad och fixera utstryket avtrycksglas i minus 20 grader celsius aceton i 30 minuter. Fixa sedan en liten bit av färsk hjärnvävnad, i formalin, för histopatologisk undersökning.Och placera resten av vävnaden i emi-em 10 för nukleinsyra extraktion. Därefter incise huden från grenröret till anus längs mittlinjen av kroppen, och använda pincett för att lyfta och separera huden och understryka muskelvävnad;att tillåta insamling av spottkörtlarna, som ligger nära mandibular ben. Något lyft bröstbenet med pincett, använd skalpell för att skära bröstbenet och bukväggen längs mittlinjen och skär nyckelbenen.Använd nålar för att fixera vänster och höger revbensburar till dissektionskortet, för att öppna brösthålan. Och registrera bruttolegionerna och graden av post mortem förändring. Använd sedan pincett och skalpell för att ta bort viscerala vävnader som är lämpliga för den planerade nedströms analys.För att utföra ett direkt fluorescerande antikroppstest i slutet av fixeringen, torka utstrykets intrycksglas och välj minst två fluorescenskonjugerade anti-rabiesantikroppar för analysen. Filtrera en antikropp på varje bild genom en 0,45 mikrometer sil. Och inkubera rutschkanorna i 30 minuter vid 37 grader celsius i en fuktig kammare.Vid slutet av inkubationen, dränera bort överskottet konjugat och tvätta objektglasen med PBS. Använd sedan en liten volym på 10% glycerol för att montera cover-glider på bilderna och bild bilderna av diabilder genom fluorescens mikroskopi. När antingen fluorescerande antikroppstest eller RT-PCR-analysen indikerar positivitet, homogenisera hjärnans exemplar i 10%suspensionen i emi-en 10 och sediment vävnaderna fleu- rry genom centrifugeringen.Inokulera 200 mikroliter av super-nat-en med tre gånger 10 till 6: e musen neuroblastom celler och en milliliter emi-en 10 för en timme vid 37 grader celsius och 1%koldioxid. Och överföra hjärnan homogen-cell suspension till en 25 centimeter kvadratkolv, som innehåller sex milliliter färsk emi-en 10. Vid en milliliter av hjärnan homogen-cell suspension i en fyra-väl Teflon-belagda glas bild, med en sex millimeter diameter och placera bilden på 37 grader celsius och 1%koldioxid i tre till fyra dagar.Efter fixering med 100%aceton, fläcka objektglasen med samma två fluorescens konjugerade anti-rabies antikroppar som används för fluorescens antikroppstest. Och visualisera bilderna genom fluorescerande mikroskopi för att bestämma antalet intracida-plas-mic inneslutningar. Efter trypsinizing och sub-culturing den inokulerade cellkulturen enligt standardprotokoll, återgå den kalla-kulturen till cellkulturen inkubatorn i ytterligare tre till fyra dagar med upprepa räkning av antalet infekterade celler som just visat tills en 100%smittsamhet nås.Från januari 2014 till maj 2017 samlades 332 fladdermuskroppar från 13 arter in för övervakning. I denna representativa analys av två positiva bat fall testade hjärnan intryck negativt med hjälp av fluorescerande antikroppar test med en av de kommersiella, fit-sy konjugerade anti-rabies antikroppar, medan RT-PCR anställa var och en av de två olika primer uppsättningar, gav positiva resultat. Subjection av den erhållna ampli-con sekvensen att spränga frågor i Gen bankdatabas visade att sekvensen liknade Lyssaviruses med identiteter på mindre än 79%stödja identiteter av de upptäckta Lyssaviruses.Två Lyssaviruses var därefter framgångsrikt isolerade från de två hjärnorna som bekräftas av fluorescens antikroppar test och sekvensering. Det viktigaste steget för att bestämma Lyssavirus positivitet är fluorescens antikroppstest och RT-HLR analys. Användning av två eller flera anti-rabies antikroppar i primer uppsättningar rekommenderas starkt.Förutom Lyssavirus andra zoo-inte-ical bat patogener kan övervakas med hjälp av slutna diagnostiska metoder. Uppgifterna kan sedan användas för att informera allmänheten om att undvika kontakt med fladdermöss. Ju mer vi kan studera bat Lyssavirus, desto mer kommer vi att kunna förstå dess utveckling och inverkan på folkhälsan.

Research

JoVE Journal

Environment

A Small Volume Procedure for Viral Concentration from Water

En liten volym Förfarande för Viral Koncentration från Water

Small-scale concentration of viruses (sample volumes 1-10 L, here simulated with spiked 100 ml water samples) is an efficient, cost-effective way to ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Ren Provtagning och analys av floden och flodmynningar för spårmetall Studies

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

An Ultra-clean Multilayer Apparatus for Collecting Size Fractionated Marine Plankton and Suspended Particles

En ultraren Multilayer apparat för att samla storlek Fractionated Marina Plankton och suspenderade partiklar

The distributions of many trace elements in the ocean are strongly associated with the growth, death, and re-mineralization of marine plankton and those ...

A Novel Method for the Pentosan Analysis Present in Jute Biomass and Its Conversion into Sugar Monomers Using Acidic Ionic Liquid

En ny metod för Pentosan analys i Jute biomassa och dess omvandling till socker monomerer med sura jonisk vätska

Recently, ionic liquids (ILs) are used for biomass valorization into valuable chemicals because of their remarkable properties such as thermal stability, ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Optimerad förfarandet för bestämning av Adsorption av fosfonater på granulat järnklorid hydroxid metoden en miniatyriserade fosfor bestämning

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns (Sterna Hirundo)

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns Sterna Hirundo

En videoövervakningssystem för att övervaka häckningskolonier av gemensamma tärnor (Sterna Hirundo)

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread ...

Use of Autometallography to Localize and Semi-Quantify Silver in Cetacean Tissues

Användning av Autometallography att lokalisera och semi kvantifiera Silver i valarnas vävnader

Silver nanoparticles (AgNPs) have been extensively used in commercial products, including textiles, cosmetics, and health care items, due to their strong ...

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of Plant&ndash;Environment Interactions

A Telemetric, Gravimetric Platform for Real-Time Physiological Phenotyping of PlantÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Environment Interactions

En telemetrisk, gravimetrisk plattform för real-time physiological phenotyping of Plant–Environment Interactions

Food security for the growing global population is a major concern. The data provided by genomic tools far exceeds the supply of phenotypic data, creating ...

A Standardized Procedure for Monitoring Harmful Algal Blooms in Chile by Metabarcoding Analysis

Ett standardiserat förfarande för övervakning av skadliga algblomningar i Chile genom metabarkodningsanalys

Harmful algae blooms (HABs) monitoring has been implemented worldwide, and Chile, a country famous for its fisheries and aquaculture, has intensively used ...

An Application for Pairing with Wearable Devices to Monitor Personal Health Status

En applikation för parning med bärbara enheter för att övervaka personlig hälsostatus

The current protocol aims to showcase the technology integration, providing a detailed description of adopting the HealthCloud app, developed by the ...