Name: lipidomics and transcriptomics in neurological diseases
Uploaded: 2022-03-18T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lipidomics and Transcriptomics in Neurological Diseases at JoVE.com

نهدي هذه المقالة إلى الدكتورة إرميليندا لومازو. أثناء الانتهاء من هذه المخطوطة، توفيت الدكتورة إرميليندا لومازو. إنها تجسيد للشغف بالعلوم والمشاركة غير الأنانية في العمل الجماعي لتحقيق غرض بحثي ذي مغزى. كانت تحلم دائما بالمساهمة بشكل هادف في تحقيق رفاهية أكبر للبشر. لم تتعرض طبيعتها الطيبة للخطر أبدا بسبب الطرق الشاقة للعلم والحياة. ستبقى لا تقدر بثمن ، وإلى الأبد ، في قلوبنا.
تم تمويل جوليا م. بوست من قبل برنامج التركيز لعلم الأعصاب الانتقالي (FTN) في المركز الطبي الجامعي التابع لجامعة يوهانس غوتنبرغ ماينز ويتم تمويله حاليا من قبل مشروع SPP-2225 EXIT إلى LB. تم تمويل ريسا ليرنر جزئيا من قبل مشروع DZHK 81X2600250 إلى LB و Lipidomics Core Facility. تم توفير تمويل جزئي لهذه الدراسات من قبل المرفق الأساسي Lipidomics ، ومعهد الكيمياء الفسيولوجية ، والأموال الداخلية (إلى LB) من المركز الطبي الجامعي بجامعة يوهانس غوتنبرغ ماينز.

جميع الإجراءات التجريبية الموصوفة هنا تتوافق مع توجيه مجلس الجماعة الأوروبية المؤرخ 22 سبتمبر 2010 (2010/63EU) وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة الحيوانات المحلية في ولاية راينلاند بالاتينات ، ألمانيا (مرجع الملف: 23 177-07 / G16-1-075).
1. نموذج حيواني للصرع الحاد والمعالج وقائيا الناجم عن KA...

<ol>
	<li>Aronica, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroinflammatory+targets+and+treatments+for+epilepsy+validated+in+experimental+models.">Neuroinflammatory targets and treatments for epilepsy validated in experimental models.</a> Epilepsia. 58, 27-38 (2017).</li><li>Lerner, R., Post, J., Loch, S., Lutz, B., Bindila, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+brain+and+peripheral+plasticity+of+the+lipidome+in+acute+kainic+acid-induced+epileptic+seizures+in+mice+via+quantitative+mass+spectrometry.">Targeting brain and peripheral plasticity of the lipidome in acute kainic acid-induced epileptic seizures in mice via quantitative mass spectrometry.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipids. 1862 (2), 255-267 (2017).</li><li>Schuhmann, K., Almeida, R., Baumert, M., Herzog, R., Bornstein, S. R., Shevchenko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shotgun+lipidomics+on+a+LTQ+Orbitrap+mass+spectrometer+by+successive+switching+between+acquisition+polarity+modes.">Shotgun lipidomics on a LTQ Orbitrap mass spectrometer by successive switching between acquisition polarity modes.</a> Journal of Mass Spectrometry. 47 (1), 96-104 (2012).</li><li>Puppolo, M., Varma, D., Jansen, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+analytical+methods+for+eicosanoids+in+brain+tissue.">A review of analytical methods for eicosanoids in brain tissue.</a> Journal of Chromatography B: Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 964, 50-64 (2014).</li><li>Blewett, A. J., Varma, D., Gilles, T., Libonati, J. R., Jansen, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+high-performance+liquid+chromatography-electrospray+mass+spectrometry+method+for+the+simultaneous+determination+of+23+eicosanoids.">Development and validation of a high-performance liquid chromatography-electrospray mass spectrometry method for the simultaneous determination of 23 eicosanoids.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 46 (4), 653-662 (2008).</li><li>Lerner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+lipidomic+and+transcriptomic+profiling+in+mouse+brain+punches+of+acute+epileptic+seizure+model+compared+to+controls.">Simultaneous lipidomic and transcriptomic profiling in mouse brain punches of acute epileptic seizure model compared to controls.</a> Journal of Lipid Research. 59, 283-297 (2017).</li><li>Lerner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+lipidomic+and+transcriptomic+profiling+in+mouse+brain+punches+of+acute+epileptic+seizure+model+compared+to+controls.">Simultaneous lipidomic and transcriptomic profiling in mouse brain punches of acute epileptic seizure model compared to controls.</a> Journal of Lipid Research. , 1-48 (2018).</li><li>L&#233;vesque, M., Avoli, M., Bernard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+temporal+lobe+epilepsy+following+systemic+chemoconvulsant+administration.">Animal models of temporal lobe epilepsy following systemic chemoconvulsant administration.</a> Journal of Neuroscience Methods. 260, (2016).</li><li>Eyo, U. B., Murugan, M., Wu, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia-Neuron+Communication+in+Epilepsy.">Microglia-Neuron Communication in Epilepsy.</a> Glia. 65 (1), 5-18 (2017).</li><li>Zhu, J., Zheng, X. Y., Zhang, H. L., Luo, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kainic+acid-induced+neurodegenerative+model:+Potentials+and+limitations.">Kainic acid-induced neurodegenerative model: Potentials and limitations.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 457079 (2011).</li><li>Park, S. H., Sim, Y. B., Kim, C. H., Lee, J. K., Lee, J. H., Suh, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+&#945;-CGRP+in+the+regulation+of+neurotoxic+responses+induced+by+kainic+acid+in+mice.">Role of &#945;-CGRP in the regulation of neurotoxic responses induced by kainic acid in mice.</a> Peptides. 44, 158-162 (2013).</li><li>Lerner, R., Cuadrado, D. P., Post, J. M., Lutz, B., Bindila, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad+lipidomic+and+transcriptional+changes+of+prophylactic+PEA+administration+in+control+mice.">Broad lipidomic and transcriptional changes of prophylactic PEA administration in control mice.</a> Frontiers in Neuroscience. 13, 527 (2019).</li><li>Post, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiepileptogenic+Effect+of+Subchronic+Palmitoylethanolamide+Treatment+in+a+Mouse+Model+of+Acute+Epilepsy.">Antiepileptogenic Effect of Subchronic Palmitoylethanolamide Treatment in a Mouse Model of Acute Epilepsy.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 11, (2018).</li><li>Schauwecker, P. E., Steward, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+determinants+of+susceptibility+to+excitotoxic+cell+death:+Implications+for+gene+targeting+approaches.">Genetic determinants of susceptibility to excitotoxic cell death: Implications for gene targeting approaches.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (8), 4103-4108 (2002).</li><li>Monory, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Endocannabinoid+System+Controls+Key+Epileptogenic+Circuits+in+the+Hippocampus.">The Endocannabinoid System Controls Key Epileptogenic Circuits in the Hippocampus.</a> Neuron. 51 (4), 455-466 (2006).</li><li>Konsman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates.">The mouse Brain in Stereotaxic Coordinates.</a> Psychoneuroendocrinology. 28 (6), (2003).</li><li>Spijker, S., Li, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Rondent+Brain+Regions.">Dissection of Rondent Brain Regions.</a> Neuroproteomics. 57, 13-27 (2011).</li><li>Gross, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+lipidomics+through+space+and+time.">The evolution of lipidomics through space and time.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipids. 1862 (8), 731-739 (2017).</li><li>Wang, M., Wang, C., Han, R. H., Han, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+advances+in+shotgun+lipidomics+for+biology+and+medicine.">Novel advances in shotgun lipidomics for biology and medicine.</a> Progress in Lipid Research. 61, 83-108 (2016).</li><li>Abbott, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+high-throughput+lipid+extraction+method+for+the+analysis+of+human+brain+lipids.">An improved high-throughput lipid extraction method for the analysis of human brain lipids.</a> Lipids. 48 (3), 307-318 (2013).</li><li>Matyash, V., Liebisch, G., Kurzchalia, T. V., Shevchenko, A., Schwudke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+extraction+by+methyl-tert-butyl+ether+for+high-throughput+lipidomics.">Lipid extraction by methyl-tert-butyl ether for high-throughput lipidomics.</a> Journal of Lipid Research. 49 (5), 1137-1146 (2008).</li></ol>

تعد منهجية الخلايا العصبية الشحمية والنسخ الموصوفة هنا وسيلة قابلة للتطبيق للتحقيق في أي مرض أو تطور صحي بدقة مكانية عالية ومنخفضة في الدماغ والأعضاء الطرفية. نظرا لإجراءات أخذ عينات البلازما ومعالجتها المحسنة ، يمكن أيضا إجراء تحليل الدهون في البلازما من نفس الحيوانات التي تم التضحية ب...

التطورات الحديثة في وظيفة الدهون ودورها في ظهور الأمراض العصبية وتطورها تفتح أماكن جديدة للبحث والتطوير لأهداف علاجية جديدة وتوضيح آلية المرض1. الاختلافات الموثقة في تكوين الدهون في مناطق الدماغ المختلفة ، والتي تؤكدها تقنيات التصوير الجزيئي الحديثة مثل التصوير الطيفي الكتلي والتنميط المتقدم لقياس الطيف الكتلي ، تحول نموذج التحقيق في الدهون من الدماغ كله إلى مناطق الدماغ المتميزة وظيفيا والمنفصلة. حقيقة أن تكوين الدهون يختلف في مناطق الدماغ المختلفة يدفع إلى تصور جديد لكل من حساسية الدهون الغشائية وإشارات الدهون في اتجاه المصب استجابة لإهانة الدماغ أو المحفزات عبر مناطق الدماغ المتميزة وظيفيا. وبالتالي ، تتطلب بروتوكولات الدهون تطورات جديدة لمواجهة التحدي المتمثل في انخفاض كميات الأنسجة للكشف عن الدقة المكانية الأعلى وتحديدها كميا ، وفي الوقت نفسه ، تحليل المكونات الدهنية المتعددة لأغشية الخلايا ومسارات الإشارات. أيضا ، يعد تحديد الإنزيمات وروابط الدهون والمستقبلات المشاركة في تنظيم مستوياتها ووظيفتها أمرا بالغ الأهمية لتوضيح مسارات الإشارات المتأثرة بمرض عصبي وتوجيه التحقيقات الميكانيكية الجديدة في سياق فسيولوجي مرضي.
بالإضافة إلى زيادة الدقة المكانية للدماغ ، هناك صعوبتان رئيسيتان تتحديان تطوير مناهج جديدة للدهون العصبية. أولا ، عادة ما تكون جزيئات إشارات الدهون ذات وفرة منخفضة للغاية مقارنة بالدهون المكونة للغشاء. ثانيا ، تظهر القبة الشحمية عدم تجانس هيكلي عال ، يصعب تشريحها باستخدام نهج تحليلي واحد. وبالتالي ، يتم تصميم طرق الاستخراج والتحليل لفئات الدهون المختلفة ويتم إجراؤها عادة في عينات الأنسجة المتميزة.2. طرق البندقية الدهنية3 هي أدوات ممتازة للكشف بسرعة عن ملف تعريف واسع من الدهون الغشائية ، في حين يتم الاستفادة من زيادة الحساسية والانتقائية التي توفرها طرق الاكتشاف المستهدفة والقياس الكمي للطيف الكتلي للتحقيق في الدهون ذات الإشارات المنخفضة بما في ذلك: i) الدهون الالتهابية و ii) الدهون المشاركة في تعديل النشاط العصبي ، مثل endocannabinoids (eCBs) ، والدهون المرتبطة بالأحماض الأمينية ، الخ.4,5. لتشمل تغيرات الدهون على كل من غشاء الخلية ومستوى الإشارات التي تحدث في مناطق الدماغ من نماذج الأمراض العصبية ، عادة ما يتم استخراج الدهون وتحليلها في عينات أنسجة متميزة ، يتم الحصول عليها من دفعات حيوانية متميزة أو من نصفي الكرة الأرضية مختلفين ، أو عن طريق تشريح منطقة نسيج أكبر إلى قطع متعددة. عندما تكون مستويات الحمض النووي الريبوزي المرسال من مستقبلات الإنزيم ذات أهمية أيضا ، فإن تحقيقها يتطلب عادة شراء عينة أنسجة متميزة. على سبيل المثال ، سيتطلب التحقيق في الدهون الغشائية ، والقنب الداخلي ، والحمض النووي الريبي المرسال ثلاث عينات مختلفة من الأنسجة ، (على سبيل المثال ، عينتان لطريقتي استخراج الدهون - دهون الغشاء والدهون المشيرة - وطريقتان لاحقتان لتحليل الدهون - وعينة واحدة لتحليل الحمض النووي الريبي المرسال). يتطلب التحقيق في الدهون الالتهابية والقنب الداخلي عينتين متميزتين من الأنسجة ، طرق الاستخراج ، وطرق التحليل ، على التوالي. مثال آخر هو التحقيق في الحمض النووي الريبوزي المرسال وأي فئة من الدهون في عينة التشريح المجهري للدماغ أو الليزر والتي تتطلب بالتالي حيوانين متميزين لشراء عينتين لكل منطقة دماغية (فرعية). وكثيرا ما يحدث في مثل هذه الحالات قدر كبير من التباين و/أو ضعف تكرار النتائج، وينشأ عن التباين البيولوجي و/أو عدم تجانس الأنسجة. واسترشادا بهذه القيود العملية للتحليل متعدد الجزيئات، الذي يحدث بشكل خاص عند الدقة المكانية العالية في الدماغ، تم تصميم بروتوكول للدهون العصبية المكون من ثلاث وحدات يشمل: 1) الاستخراج المشترك والتحليل المشترك بواسطة LC/MRM للدهون الالتهابية (على سبيل المثال، eicosanoids (eiCs)) والدهون المشاركة في تعديل النشاط العصبي، مثل eCBs2; 2) الاستخراج المشترك للدهون الفوسفاتية (PLs) و eCBs مع LC / MRM متعدد المسح اللاحق وتحليل مسح فقدان السلائف / محايدة2; و 3) الاستخراج المزدوج للدهون الغشائية (الفوسفو) و eCBs وكذلك mRNA ، مع تحليل تسلسل LC / MRM و qPCR أو RNA اللاحق6. اعتمادا على السؤال البيولوجي الذي يجب معالجته في مرض عصبي ومنطقة الدماغ ذات الأهمية ، يمكن تطبيق مزيج من البروتوكول الأول والثاني ، أو البروتوكول الأول والثالث ، على نفس عينة الأنسجة للأنسجة التي تزن حوالي 4 ملغ. يمكن تطبيق البروتوكولين الأول والثالث بشكل مستقل على الأنسجة حوالي 2 ملغ. يمكن تطبيق البروتوكول الثاني على الأنسجة التي تزن أقل من 0.5 ملغ. بغض النظر عن وحدة البروتوكول العصبي الدهني المختارة ، فإن أخذ عينات الأنسجة والمعالجة قبل التحليلية ، وعزل الدماغ وتشريح المنطقة ، بالإضافة إلى إجراء التضحية بالنموذج الحيواني موحدة ومتطابقة لجميع الوحدات الثلاث للبروتوكول. في تحقيقنا في الأمراض العصبية ، يتم دائما جمع وتحليل الأعضاء الطرفية ذات الصلة بالعواقب المرضية للمرض باستخدام هذه البروتوكولات المعيارية. بالإضافة إلى ذلك ، يتم أخذ عينات من الدم بانتظام لدهون البلازما لتكون بمثابة أداة قراءة للأمراض العصبية مع عرض التطبيقات الانتقالية المحتملة. بروتوكول الدهون المعياري المعروض هنا متعدد الاستخدامات للغاية: قابل للقياس إلى كميات أكبر من الأنسجة وقابل للتطبيق بسهولة على أي نوع من الأنسجة والأمراض تقريبا. لتطبيق البروتوكول المعياري (الشكل 1) في الأمراض العصبية ، فإن أي نموذج قياسي للقوارض لظهور وتطور الاضطرابات العصبية ، مثل إصابات الدماغ الرضحية أو مرض باركنسون أو مرض الزهايمر أو الصرع يمكن علاجه.
تم تطبيق هذه البروتوكولات على نطاق واسع لدراسة التغيرات في الأنسجة الدهنية و / أو النسخ في المرحلة الحادة من الصرع في نموذج الفأر الناجم عن حمض الكانيك (KA) من الصرع 2,7 ، وهو نموذج يستخدم على نطاق واسع في الدراسات قبل السريرية بسبب التشابه مع صرع الفص الصدغي البشري (TLE) 8,9,10,11. باستخدام هذه البروتوكولات ، تم تقييم الإمكانات العلاجية للعقاقير مثل Palmitoylethanolamide (PEA) 12,13 في نفس نموذج الفأر من الصرع. حددت الدراسة تغيرات الدهون والحمض النووي الريبوزي المرسال بدقة مكانية عالية ومنخفضة في الدماغ والمحيط، في نقطة زمنية من أقصى شدة النوبات الحادة (في 60 دقيقة بعد تحريض النوبة)، وعند العلاج شبه المزمن والحاد مع PEA في أربع نقاط زمنية مختلفة (20 و 60 و 120 و 180 دقيقة) بعد تحريض نوبة KA، وهي نافذة زمنية تغطي المرحلة الحادة من الصرع. تم جمع البلازما والأدمغة والأعضاء الطرفية للفئران غير المعالجة بحقن KA ، والفئران الحادة والمعالجة بشكل مزمن ب PEA ، وكذلك فئران التحكم في المركبات ومركبات PEA ، في كل نقطة زمنية 12,13 ، وتم التحقيق فيها باستخدام هذا التحليل الجزيئي. ارتبطت البيانات الجزيئية بالأنماط الظاهرية السلوكية التي تم الحصول عليها عن طريق تسجيل النوبات ، وكذلك مع البيانات المشتقة من الكيمياء النسيجية المناعية حول العمليات التنكسية العصبية ، من أجل كشف تطور مرحلة الصرع الحاد وإمكانات PEA للتخفيف من حدتها.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12(S)-HETE</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay10007248-25</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12(S)-HETE-d8</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay334570-25</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1200 series LC System</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2100 Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5(S)-HETE-d8</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay 334230</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABI 7300 Real-Time PCR cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile LC-MS Chroma Solv</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>9814920</td>
			<td>Solvent/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>amber eppendorf tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analyst 1.6.2 Software</td>
			<td>AB SCIEX, Darmstadt</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arachidonic Acid-d8 MS Standard</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay-10007277</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bessmann Tissue Pulverizer</td>
			<td>Spectrum Laboratories, Inc. (Breda, Netherlands)</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bino</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cleaved Caspase 3 antibody</td>
			<td>Cellsignaling</td>
			<td>9661S</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat, Leica CM3050 S</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTC HTC PAL autosampler</td>
			<td>CTC Analytics AG</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Curved Forceps Dumoxel #7</td>
			<td>FST</td>
			<td>11271-30</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forceps Super fine tip #5SF (x2)</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA 1000 A R&#246;hrchen</td>
			<td>Kabe Labortechnik</td>
			<td>078001</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP-1 EconoPump</td>
			<td>BioRAD</td>
			<td>700BR07757</td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps Mirror Finish</td>
			<td>FST</td>
			<td>11412-11</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Iris Scissors straight sharp</td>
			<td>FST</td>
			<td>14094-11</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissor Tungsten Carbide straight</td>
			<td>FST</td>
			<td>14568-09</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Spatulae</td>
			<td>FST</td>
			<td>10094-13</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kainic acid</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab120100</td>
			<td>Epileptic drug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipid View software</td>
			<td>AB SCIEX, Darmstadt</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPC 17:0</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>855676P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPC 18:0</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>855775P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna 2,5&#181;m C18(2)- HAST 100A LC column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00D-4446-B0</td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnifying lamp</td>
			<td>Maul GmbH</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol LC-MS Chroma Solv 99.9%</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>9814920</td>
			<td>Solvent/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motic Camara</td>
			<td>Motic</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTBE</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>34875-1L</td>
			<td>Solvent/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiQuant 3.0 quantitation software package</td>
			<td>AB SCIEX, Darmstadt</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000c Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PA 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>840857P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PA 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1404</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoyl Ethanolamide</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay90350-100</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoyl Ethanolamide-d5</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay9000573-5</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>850457P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>850457P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1004</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>850757P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1104</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PG 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>840457P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PG 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1204</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1504</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys 24</td>
			<td>Peqlab</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precellys Keramik-K&#252;gelchen</td>
			<td>Peqlab</td>
			<td>91-pcs-ck14p</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precellys Stahlkugeln 2,8mm</td>
			<td>Peqlab</td>
			<td>91-PCS-MK28P</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precellys-keramik-kit 1,4 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>91-PCS-CK14</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin D2</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay 12010</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin D2-d4</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay 312010</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin E2</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay10007211-1</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin E2-d9</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay10581-50</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PS 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1304</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q Trap 5500 triple-quadrupole linear ion trap MS</td>
			<td>AB SCIEX</td>
			<td>AU111609004</td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Real Time PCR System</td>
			<td>Appliert Biosystem</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resolvin D1</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay10012554-11</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rneasy Mini Kit - RNAase-Free DNase Set (50)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79254</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Security Guard precolumn</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon coverplates</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>72110017</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon slide rack and lid</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>73310017</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SM 18:0</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>860586P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SM d18:1/12:0</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-2312</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Forceps straight Smooth</td>
			<td>FST</td>
			<td>11016-17</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissor ToughCut Standard Pattern</td>
			<td>FST</td>
			<td>14130-17</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T3000 Thermocycler</td>
			<td>Biometra</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thromboxane B2</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay19030-5</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thromboxane B2-d4</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay319030-25</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Lyser II</td>
			<td>Qiagen/ Retsch</td>
			<td>12120240804</td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidinblau</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0300.2</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vapotherm</td>
			<td>Barkey</td>
			<td>4004734</td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wasser LC-MS Chroma Solv</td>
			<td>VWR</td>
			<td>9814920</td>
			<td>Solvent/LCMS</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lipidomics and transcriptomics in neurological diseases

تعمل الدهون كواجهة أساسية لإهانات الدماغ أو المحفزات المفضية إلى الأمراض العصبية وهي خزان لتخليق الدهون مع مختلف الإشارات أو وظيفة الرباط التي يمكن أن تؤكد على ظهور الأمراض وتطورها. غالبا ما تتغير الدهون على مستوى الأعراض السابقة ، وهي مصدر ناشئ لأهداف الأدوية والمؤشرات الحيوية. تظهر العديد من الأمراض العصبية التهابا عصبيا وتنكسا عصبيا واستثارة عصبية كسمات مميزة مشتركة ، يتم تعديلها جزئيا بواسطة أنظمة إشارات دهون محددة. إن الاعتماد المتبادل والترابط بين توليف الدهون المختلفة يدفع إلى تحليل متعدد الدهون ومتعدد الإنزيمات والمستقبلات المتعددة من أجل اشتقاق القواسم المشتركة والخصائص للسياقات العصبية والإسراع في كشف الجوانب الميكانيكية لظهور المرض وتطوره. إن إسناد أدوار الدهون إلى مناطق الدماغ المتميزة يعزز تحديد النمط الظاهري الجزيئي الدهني والمورفولوجيا المرتبطة بمرض عصبي.
يظهر هنا بروتوكول معياري مناسب لتحليل الدهون الغشائية وإشارات الدهون في اتجاه المصب جنبا إلى جنب مع mRNA للإنزيمات والوسطاء الكامنة وراء وظائفها ، المستخرجة من مناطق الدماغ المنفصلة ذات الصلة بمرض عصبي معين و / أو حالة عصبية. لضمان التنميط الدهني المقارن الدقيق ، تم تحسين سير العمل ومعايير التشغيل وتوحيدها من أجل: i) أخذ عينات الدماغ وتشريح المناطق ذات الاهتمام ، ii) الاستخراج المشترك لإشارات الدهون المتعددة والدهون الغشائية ، iii) استخراج الدهون المزدوجة / mRNA ، iv) القياس الكمي عن طريق مراقبة التفاعلات المتعددة للكروماتوغرافيا السائلة (LC / MRM) ، و v) التنميط القياسي mRNA. سير العمل هذا قابل للتعاريف لكميات الأنسجة المنخفضة التي يتم الحصول عليها عن طريق أخذ عينات من المناطق الفرعية المنفصلة وظيفيا في الدماغ (أي عن طريق لكم الدماغ) ، وبالتالي منع التحيز في التحليل متعدد الجزيئات بسبب عدم تجانس الأنسجة و / أو التباين الحيواني. للكشف عن العواقب الطرفية للأمراض العصبية وإنشاء قراءات جزيئية انتقالية لحالات الأمراض العصبية ، يتم أيضا متابعة ووصف عينات الأعضاء الطرفية ومعالجتها وتحليلها الدهني اللاحق ، وكذلك الدهون في البلازما. يتم عرض البروتوكول على نموذج فأر الصرع الحاد.

ويمكن الجمع بين مجموعة البروتوكولات الموصوفة على مستويات مختلفة بطريقة محددة الهدف، مثل اختيار النموذج الحيواني، وطريق أخذ العينات، وطريقة الاستخراج، والتنميط (الشكل 1).
من أجل تحديد التغيرات في مستوى الدهون في الدماغ و?...

Watch this Scientific Journal Video about Lipidomics and Transcriptomics in Neurological Diseases at JoVE.com

Lipidomics and Transcriptomics in Neurological Diseases

تقدم هذه المقالة بروتوكولا معياريا لعلم الدهون في الأنسجة وعلم النسخ ، والدهون في البلازما في نماذج فئران الأمراض العصبية التي تستهدف الدهون الكامنة وراء الالتهاب والنشاط العصبي ، والدهون الغشائية ، والرسل في اتجاه المصب ، والإنزيمات / المستقبلات المشفرة للحمض النووي الريبوزي المرسال الكامنة وراء وظيفة الدهون. يتم تحديد إجراءات أخذ العينات ومعالجة العينات واستخراجها وقياسها كميا.

علم الشحوم وعلم النسخ في الأمراض العصبية

Lipids serve as the primary interface to brain insults or stimuli conducive to neurological diseases and are a reservoir for the synthesis of lipids with ...

يتيح هذا البروتوكول المعياري استكشاف أحداث جزيئية متعددة ناتجة عن الدهون الهيكلية والإشارات و / أو الحمض النووي الريبي ، في مناطق الأنسجة السرية وفي الدم مع تحسين إنتاج البيانات الكمية والنوعية لكل عينة عينة. تنطبق هذه الطريقة على أي نموذج تجريبي ، ويمكن أيضا تطبيقها على عينات الأنسجة البشرية والدم. ستظهر الإجراء كلوديا شويتر ، وهي فنية ، وجوليا بوست ، طالبة دراسات عليا ، وريسا ليرنر ، وهي باحثة ما بعد الدكتوراه في مجموعتي.للبدء ، خذ أدمغة الفئران المعزولة سابقا والكاملة والمجمدة مع الصرع الحاد والمعالج وقائيا الناجم عن حمض الكاينيك. قم بتركيب الأدمغة على نظام تركيب الكريوستات. اضبط السماكة على 50 ميكرومتر وقم بتقطيع الدماغ في وضع القطع بالقرب من المنطقة محل الاهتمام.عند الاقتراب من المنطقة ذات الاهتمام ، اضبط السمك على 18 إلى 20 ميكرومتر. لتوطين المنطقة الفرعية ذات الأهمية ، قم بتلطيخ شرائح الدماغ باستخدام التولويدين الأزرق. استخدم المجهر لفحص الشرائح الملطخة لتحديد المناطق ذات الأهمية المراد لكمها ، واستخدم أطلس الماوس كمرجع للعثور على المناطق التشريحية المناسبة للدماغ.استخدم نماذج من اللكمات لأخذ لكمات قطرها 0.8 إلى 1.0 ملم. انقل اللكمات الخاصة ب endocannabinoids و eicosanoids coextractions إلى أنابيب كهرمان 2 ملليلتر مبردة مسبقا مع سبع كرات فولاذية مبردة مسبقا لكل أنبوب. بالنسبة للدهون الفوسفاتية و endocannabinoids ، والاستخراج المشترك للدهون المزدوجة والحمض النووي الريبي ، قم بنقل اللكمات إلى أنابيب استخراج خالية من RNZE 2 ملليلتر مع حبات السيراميك.وزن اللكمات المجمدة في الغرفة الباردة والمضي قدما على الفور في استخراج أو تجميد عند 80 درجة مئوية. لإجراء استخراج الدهون السائلة السائلة من endocannabinoids و eicosanoids من قطع الدماغ أو اللكمات أو عينات مسحوق الأنسجة ، ضع أنابيب الاستخراج التي تحتوي على عينات الأنسجة وسبع كرات فولاذية على الجليد. أضف 600 ميكرولتر من MTBE المثلج البارد و 50 ميكرولتر من ماء الأسيتونيتريل الذي يحتوي على المعايير الداخلية.بعد إضافة 400 ميكرولتر من 0.1 حمض الفورميك المولي ، استخدم محلل الأنسجة للتجانس لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة. جهاز طرد مركزي هذا التجانس لمدة 15 دقيقة في 5،000 مرات غرام عند 4 درجات مئوية. ضعه في الفريزر لمدة 10 دقائق عند 80 درجة مئوية لتجميد المرحلة السفلية المائية ، مما سيسهل نقل المرحلة العضوية العليا.انقل المرحلة العضوية العليا إلى أنابيب كهرمان جديدة سعة 1.5 ملليلتر ، وتبخر تحت تيار لطيف من النيتروجين عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق ، ثم أعد تشكيلها في 50 ميكرولتر من ماء الأسيتونيتريل لمزيد من التحليل. قم بتخزين المرحلة المائية عند 20 أو 80 درجة مئوية لمزيد من تحليل محتوى البروتين. للمشاركة في استخراج endocannabinoids و eicosanoids من عينات البلازما ، ضع عينات البلازما المجمدة على الجليد واتركها تذوب تماما.أضف 800 ميكرولتر من MTBE و 50 ميكرولتر من ماء الأسيتونيتريل الذي يحتوي على المعايير الداخلية المحسنة للارتفاع باستخدام عينات البلازما المرجعية. أضف 600 ميكرولتر من 0.1 حمض الفورميك المولي والدوامة عند 4 درجات مئوية لمدة دقيقتين. الطرد المركزي للعينات في 4،000 مرات ز لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية.نقل المرحلة العضوية إلى أنابيب جديدة. تبخره تحت تيار لطيف من النيتروجين عند 37 درجة مئوية ، ثم أعد تشكيله ب 50 ميكرولتر من ماء الأسيتونيتريل لتحليل مراقبة التفاعلات المتعددة للكروماتوغرافيا السائلة. لإجراء الاستخراج المشترك للفوسفوليبيد و endocannabinoids من مناطق الدماغ ، واللكمات ، أو غيرها من عينات مسحوق الأنسجة ، ضع أنابيب الاستخراج التي تحتوي على عينات الأنسجة والخرز الخزفي على الجليد.أضف 800 ميكرولتر من ميثيل تيرت بوتيل الأثير وخليط الميثانول و 10 ميكرولترات من الميثانول تحتوي على المعايير الداخلية. ثم ، أضف 200 ميكرولتر من حمض الفورميك بنسبة 0.1٪ يحتوي على 25 ميكرومولار رباعي هيدروليبستاتين / URB597 و 50 ميكروغرام لكل ملليلتر من BHT. بعد التجانس باستخدام مجانس الأنسجة ، يتم إجراء جهاز طرد مركزي عند 5000 مرة جم و 4 درجات مئوية لمدة 15 دقيقة.انقل المرحلة العضوية العليا إلى أنابيب جديدة ، وتبخر تحت تيار لطيف من النيتروجين عند 37 درجة مئوية ، ثم أعد تكوين مستخلص الدهون هذا مع 90 ميكرولتر من الميثانول. إذا استمر على الفور ، أضف 10٪ من الماء إلى أليكوت من مستخلص الدهون وحقن 10 ميكرولترات في LC / MS لتحليل الدهون الفوسفاتية. لمزيد من تحليل endocannabinoid ، تابع الخطوة التالية.خذ أليكوت من مستخلص الدهون ، وتبخر إلى الجفاف ، وأعد تشكيله في ماء الأسيتونيتريل. لإجراء استخراج مزدوج من الحمض النووي الريبي والدهون والاستخراج المشترك للفوسفوليبيد و endocannabinoids من عينات الأنسجة ، قم بإذابة مسحوق الأنسجة aliquots أو عناقيد الدماغ عند 4 درجات مئوية. أضف الأنسجة إلى أنابيب الاستخراج مع حبات السيراميك.ثم أضف 600 ميكرولتر من المخزن المؤقت RLT مع 200 ميكرولتر من الكلوروفورم. بالنسبة للفوسفوليبيد والاستخراج المشترك لل endocannabinoid ، قم بتعبئة العينات التي تحتوي على 10 ميكرولترات من الخليط القياسي الداخلي وتجانس بسرعة عالية لمدة 20 ثانية. نقل العينات المتجانسة إلى أنابيب جديدة لأجهزة الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي لمدة خمس دقائق بأقصى سرعة و 4 درجات مئوية لتمكين فصل الطور.انقل المرحلة العليا إلى أنبوب جديد لاستخراج الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة قياسية. استخرج Elute الحمض النووي الريبي في حجم إجمالي قدره 50 ميكرولتر من الماء الخالي من RNase وخزنه عند 80 درجة مئوية. لاستخراج الدهون ، أضف 800 ميكرولتر من MTBE / الميثانول و 200 ميكرولتر من حمض الفورميك بنسبة 0.1٪ إلى المرحلة الأقل المحتوية على الكلوروفورم.دوامة لمدة 45 دقيقة عند 4 درجات مئوية. نقل المرحلة العضوية العليا إلى أنبوب جديد. تبخره تحت تيار لطيف من النيتروجين عند 37 درجة مئوية.لمزيد من تحليل LC / MS ، أعد تكوين العينة في 90 ميكرولتر من الميثانول وتخزينها عند 20 أو 80 درجة مئوية ، أو انتقل على الفور إلى التحليل. لمزيد من تحليل endocannabinoid ، تابع الخطوة التالية. خذ أليكوت من مستخلص الدهون ، وتبخر إلى الجفاف ، وأعد تشكيله في ماء الأسيتونيتريل.ثم ، حقن 20 ميكرولتر في LC / MS لتحليل endocannabinoid. أدى تحريض حمض كاينيك لنوبات الصرع الحادة إلى أقصى شدة للنوبة بعد ساعة واحدة من الحقن. يظهر التنميط الشحمي لل endocannabinoids و eicosanoids ، وكذلك الدهون الفوسفاتية و endocannabinoids ، تغيرات في مستوى الدهون عبر القشرة الدماغية ، المخطط ، المنطقة المهادية ، الحصين ، تحت المهاد ، المخيخ وكذلك أنسجة القلب والرئة في الفئران الصرع الناجمة عن حمض كاينيك والضوابط.بعد الاستخراج المزدوج للفوسفوليبيد و endocannabinoids و RNA للتنميط الكمي لكمات دماغ الفئران ، تم تحليل التوزيع الكمي للدهون في منطقة ما تحت المهاد ، واللوزة القاعدية الجانبية ، والحصين البطني والظهري. مستويات التعبير النسبية للإنزيمات والمستقبلات الداخلية المشاركة في إشارات الدهون ، وكذلك علامات نشاط الدماغ التي تم التحقيق فيها على مستوى الحمض النووي الريبوزي المرسال في مناطق الدماغ المختلفة والمناطق الفرعية من الفئران المعرضة لنوبات الصرع الناجمة عن حمض الكاينيك وضوابطها. تسبب الصرع الناجم عن حمض كاينيك في فقدان هائل لإشارة NeuN ، في الغالب في منطقة CA1 و CA3 و hilus في الحصين ، مصحوبة بأحداث استماتية تشير إليها إشارة caspase-3 مقارنة بالفئران التي يتم حقنها بمحلول ملحي التحكم.بعد العلاج باستخدام بالميتويل إيثانولاميد شبه المزمن ، تم الحفاظ على إشارة بروتين النوى العصبية بشكل ملحوظ وكانت إشارة CASP3 بالكاد يمكن اكتشافها. يعد لكم الدماغ وتشريح مناطق الدماغ السرية تحديا كبيرا ويتطلب مهارات دقيقة للحصول على عينات متسقة عبر مجموعات متعددة. لذلك ، يوصى بشدة بالممارسة على أجهزة الاختبار والمعرفة الجيدة بمورفولوجيا الدماغ.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

النظامية والمحلية تسليم المخدرات لعلاج أمراض الجهاز العصبي المركزي في المجموعات القوارض

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution ...

Measurement of Total Calcium in Neurons by Electron Probe X-ray Microanalysis

قياس إجمالي الكالسيوم في الخلايا العصبية بواسطة الكترون مسبار الأشعة السينية التحليل المجهري

In this article the tools, techniques, and instruments appropriate for quantitative measurements of intracellular elemental content using the technique ...

Optogenetic Functional MRI

التصوير بالرنين المغناطيسي الوظيفي علم البصريات الوراثي

The investigation of the functional connectivity of precise neural circuits across the entire intact brain can be achieved through optogenetic functional ...

Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

قياس التقدمي العصبية الإعاقة في نموذج الفأر من مرض التصلب العصبي المتعدد

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

قياس الالتقام حويصلة متشابك في الخلايا العصبية هيبوكامبال مثقف

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Establishing Mouse Models for Zika Virus-induced Neurological Disorders Using Intracerebral Injection Strategies: Embryonic, Neonatal, and Adult

إنشاء نماذج الماوس للاضطرابات العصبية التي يسببها فيروس Zika استخدام استراتيجيات حقن Intracerebral: الأجنة والأطفال حديثي الولادة والكبار

The Zika virus (ZIKV) is a flavivirus currently endemic in North, Central, and South America. It is now established that the ZIKV can cause microcephaly ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

إجراء اختبار موضوعي واستنساخه من التعلم حاسة الشم والتمييز في الفئران

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

الفاصل الزمني التصوير الحي والقياس الكمي لديناميات فرع التقشر السريع في تطوير الخلايا العصبية Drosophila

Highly motile dendritic filopodia are widely present in neurons at early developmental stages. These exploratory dynamic branches sample the surrounding ...

In vitro Modeling for Neurological Diseases using Direct Conversion from Fibroblasts to Neuronal Progenitor Cells and Differentiation into Astrocytes

في المختبر النمذجة للأمراض العصبية باستخدام التحويل المباشر من الخلايا الليفية إلى خلايا السلف العصبية والتمايز إلى الخلايا الفلكية

Research on neurological disorders focuses primarily on the impact of neurons on disease mechanisms. Limited availability of animal models severely ...