Name: lipidomics and transcriptomics in neurological diseases
Uploaded: 2022-03-18T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lipidomics and Transcriptomics in Neurological Diseases at JoVE.com

We dragen dit artikel op aan Dr. Ermelinda Lomazzo. Tijdens de voltooiing van dit manuscript overleed Dr. Ermelinda Lomazzo. Ze is de belichaming van passie voor wetenschap en onbaatzuchtige betrokkenheid bij teamwerk om een zinvol onderzoeksdoel te vervullen. Ze heeft er altijd van gedroomd om een zinvolle bijdrage te leveren aan het grotere welzijn van de mens. Haar goedhartige aard werd nooit aangetast door de inspannende wegen van wetenschap en leven. Ze zal van onschatbare waarde blijven, en voor altijd, in onze harten.
Julia M. Post werd gefinancierd door focusprogramma voor translationele neurowetenschappen (FTN) aan het Universitair Medisch Centrum van de Johannes Gutenberg Universiteit Mainz en wordt momenteel gefinancierd door het SPP-2225 EXIT-project aan LB. Raissa Lerner werd gedeeltelijk gefinancierd door DZHK-project 81X2600250 naar LB en Lipidomics Core Facility. Gedeeltelijke financiering voor deze studies werd verstrekt door de Lipidomics Core Facility, Institute of Physiological Chemistry en Intramurale fondsen (aan LB) van het Universitair Medisch Centrum van de Johannes Gutenberg Universiteit Mainz.

Alle hier beschreven experimentele procedures zijn in overeenstemming met de richtlijn van de Raad van de Europese Gemeenschap van 22 september 2010 (2010/63EU) en zijn goedgekeurd door het plaatselijke dierencomité van de deelstaat Rijnland-Palts, Duitsland (dossierreferentie: 23 177-07/G16-1-075).
1. Diermodel van acute en profylactisch behandelde KA-geïnduceerde epilepsie
<ol><li>Voer epileptische inductie, behandeling en gedragsscores uit.<ol>
<li>Scheid muizen (minimaal n = 6 muizen p...

<ol>
	<li>Aronica, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroinflammatory+targets+and+treatments+for+epilepsy+validated+in+experimental+models.">Neuroinflammatory targets and treatments for epilepsy validated in experimental models.</a> Epilepsia. 58, 27-38 (2017).</li><li>Lerner, R., Post, J., Loch, S., Lutz, B., Bindila, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+brain+and+peripheral+plasticity+of+the+lipidome+in+acute+kainic+acid-induced+epileptic+seizures+in+mice+via+quantitative+mass+spectrometry.">Targeting brain and peripheral plasticity of the lipidome in acute kainic acid-induced epileptic seizures in mice via quantitative mass spectrometry.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipids. 1862 (2), 255-267 (2017).</li><li>Schuhmann, K., Almeida, R., Baumert, M., Herzog, R., Bornstein, S. R., Shevchenko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shotgun+lipidomics+on+a+LTQ+Orbitrap+mass+spectrometer+by+successive+switching+between+acquisition+polarity+modes.">Shotgun lipidomics on a LTQ Orbitrap mass spectrometer by successive switching between acquisition polarity modes.</a> Journal of Mass Spectrometry. 47 (1), 96-104 (2012).</li><li>Puppolo, M., Varma, D., Jansen, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+analytical+methods+for+eicosanoids+in+brain+tissue.">A review of analytical methods for eicosanoids in brain tissue.</a> Journal of Chromatography B: Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 964, 50-64 (2014).</li><li>Blewett, A. J., Varma, D., Gilles, T., Libonati, J. R., Jansen, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+high-performance+liquid+chromatography-electrospray+mass+spectrometry+method+for+the+simultaneous+determination+of+23+eicosanoids.">Development and validation of a high-performance liquid chromatography-electrospray mass spectrometry method for the simultaneous determination of 23 eicosanoids.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 46 (4), 653-662 (2008).</li><li>Lerner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+lipidomic+and+transcriptomic+profiling+in+mouse+brain+punches+of+acute+epileptic+seizure+model+compared+to+controls.">Simultaneous lipidomic and transcriptomic profiling in mouse brain punches of acute epileptic seizure model compared to controls.</a> Journal of Lipid Research. 59, 283-297 (2017).</li><li>Lerner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+lipidomic+and+transcriptomic+profiling+in+mouse+brain+punches+of+acute+epileptic+seizure+model+compared+to+controls.">Simultaneous lipidomic and transcriptomic profiling in mouse brain punches of acute epileptic seizure model compared to controls.</a> Journal of Lipid Research. , 1-48 (2018).</li><li>L&#233;vesque, M., Avoli, M., Bernard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+temporal+lobe+epilepsy+following+systemic+chemoconvulsant+administration.">Animal models of temporal lobe epilepsy following systemic chemoconvulsant administration.</a> Journal of Neuroscience Methods. 260, (2016).</li><li>Eyo, U. B., Murugan, M., Wu, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia-Neuron+Communication+in+Epilepsy.">Microglia-Neuron Communication in Epilepsy.</a> Glia. 65 (1), 5-18 (2017).</li><li>Zhu, J., Zheng, X. Y., Zhang, H. L., Luo, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kainic+acid-induced+neurodegenerative+model:+Potentials+and+limitations.">Kainic acid-induced neurodegenerative model: Potentials and limitations.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 457079 (2011).</li><li>Park, S. H., Sim, Y. B., Kim, C. H., Lee, J. K., Lee, J. H., Suh, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+&#945;-CGRP+in+the+regulation+of+neurotoxic+responses+induced+by+kainic+acid+in+mice.">Role of &#945;-CGRP in the regulation of neurotoxic responses induced by kainic acid in mice.</a> Peptides. 44, 158-162 (2013).</li><li>Lerner, R., Cuadrado, D. P., Post, J. M., Lutz, B., Bindila, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad+lipidomic+and+transcriptional+changes+of+prophylactic+PEA+administration+in+control+mice.">Broad lipidomic and transcriptional changes of prophylactic PEA administration in control mice.</a> Frontiers in Neuroscience. 13, 527 (2019).</li><li>Post, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiepileptogenic+Effect+of+Subchronic+Palmitoylethanolamide+Treatment+in+a+Mouse+Model+of+Acute+Epilepsy.">Antiepileptogenic Effect of Subchronic Palmitoylethanolamide Treatment in a Mouse Model of Acute Epilepsy.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 11, (2018).</li><li>Schauwecker, P. E., Steward, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+determinants+of+susceptibility+to+excitotoxic+cell+death:+Implications+for+gene+targeting+approaches.">Genetic determinants of susceptibility to excitotoxic cell death: Implications for gene targeting approaches.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (8), 4103-4108 (2002).</li><li>Monory, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Endocannabinoid+System+Controls+Key+Epileptogenic+Circuits+in+the+Hippocampus.">The Endocannabinoid System Controls Key Epileptogenic Circuits in the Hippocampus.</a> Neuron. 51 (4), 455-466 (2006).</li><li>Konsman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates.">The mouse Brain in Stereotaxic Coordinates.</a> Psychoneuroendocrinology. 28 (6), (2003).</li><li>Spijker, S., Li, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Rondent+Brain+Regions.">Dissection of Rondent Brain Regions.</a> Neuroproteomics. 57, 13-27 (2011).</li><li>Gross, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+lipidomics+through+space+and+time.">The evolution of lipidomics through space and time.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Lipids. 1862 (8), 731-739 (2017).</li><li>Wang, M., Wang, C., Han, R. H., Han, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+advances+in+shotgun+lipidomics+for+biology+and+medicine.">Novel advances in shotgun lipidomics for biology and medicine.</a> Progress in Lipid Research. 61, 83-108 (2016).</li><li>Abbott, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+high-throughput+lipid+extraction+method+for+the+analysis+of+human+brain+lipids.">An improved high-throughput lipid extraction method for the analysis of human brain lipids.</a> Lipids. 48 (3), 307-318 (2013).</li><li>Matyash, V., Liebisch, G., Kurzchalia, T. V., Shevchenko, A., Schwudke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+extraction+by+methyl-tert-butyl+ether+for+high-throughput+lipidomics.">Lipid extraction by methyl-tert-butyl ether for high-throughput lipidomics.</a> Journal of Lipid Research. 49 (5), 1137-1146 (2008).</li></ol>

De neurolipidomische en transcriptomische methodologie die hier wordt beschreven, is een levensvatbaar middel om elke ziekte of gezonde ontwikkeling bij hoge en lage ruimtelijke resolutie in de hersenen en perifere organen te onderzoeken. Vanwege de geoptimaliseerde plasmabemonsterings- en behandelingsprocedures kan plasmalipomische analyse ook worden uitgevoerd van dezelfde dieren die zijn opgeofferd voor weefsellipomica en transcriptomica, waardoor de betrouwbaarheid van moleculaire correlaten van weefselbloed en de on...

Recente ontwikkelingen in de functie van lipiden en hun rol in het begin en de progressie van neurologische ziekten openen nieuwe onderzoeks- en ontwikkelingslocaties van nieuwe therapeutische doelen en opheldering van het ziektemechanisme1. Gedocumenteerde verschillen in lipidesamenstelling in verschillende hersengebieden, benadrukt door moderne moleculaire beeldvormingstechnieken zoals massaspectrometrie beeldvorming en geavanceerde massaspectrometrieprofilering, verschuift het paradigma van lipidenonderzoek van hele hersenen naar functioneel verschillende en discrete hersengebieden. Het feit dat de lipidesamenstelling varieert in verschillende hersengebieden leidt tot nieuwe conceptualisering van zowel membraanlipidegevoeligheid als stroomafwaartse lipidesignalering als reactie op een hersenbelediging of stimuli in de functioneel verschillende hersengebieden. Daarom vereisen lipideprotocollen nieuwe ontwikkelingen om de uitdaging van lage weefselhoeveelheden aan te pakken voor detectie en kwantificering met een hogere ruimtelijke resolutie, en tegelijkertijd analyse van meerdere lipidecomponenten van celmembranen en signaalroutes. Ook de bepaling van enzymen, lipideliganden en receptoren die betrokken zijn bij de regulatie van hun niveaus en functie is van het grootste belang om de signaalroutes die bij een neurologische ziekte worden beïnvloed, op te helderen en nieuwe mechanistische onderzoeken in een pathofysiologische context te begeleiden.
Naast de verhoogde ruimtelijke resolutie van de hersenen, zijn er twee grote problemen die de ontwikkeling van nieuwe neurolipidomische benaderingen uitdagen. Ten eerste zijn de lipide-signaleringsmoleculen meestal van zeer lage abundantie in vergelijking met membraanvormende lipiden. Ten tweede vertoont het lipidoom een hoge structurele heterogeniteit, moeilijk te ontleden met behulp van een enkele analytische benadering. Daarom zijn extractie- en analysemethoden afgestemd op verschillende lipidecategorieën en worden ze vaak uitgevoerd in verschillende weefselmonsters2. Shotgun lipidomische methoden3 zijn uitstekende hulpmiddelen om snel een breed profiel van membraanlipiden te onthullen, terwijl verhoogde gevoeligheid en selectiviteit die worden geboden door de gerichte ontdekking en kwantificering massaspectrometrische methoden worden benut voor onderzoek van laag overvloedige signaallipiden, waaronder: i) inflammatoire lipiden en ii) lipiden die betrokken zijn bij de modulatie van neuronale activiteit, zoals endocannabinoïden (eCB's), aminozuurgerelateerde lipiden, enz.4,5. Om lipideveranderingen op zowel het celmembraan als het signaleringsniveau te omvatten die optreden in hersengebieden van neurologische ziektemodellen, worden de lipide-extractie en -analyse meestal uitgevoerd in verschillende weefselmonsters, verkregen uit verschillende dierlijke batches of uit verschillende hemisferen, of door een groter weefselgebied in meerdere stukken te ontleden. Wanneer mRNA-niveaus van enzymreceptoren ook van belang zijn, vereist hun onderzoek meestal de verkrijging van een afzonderlijk weefselmonster. Het onderzoek van membraanlipiden, endogene cannabinoïden en mRNA zou bijvoorbeeld drie verschillende weefselmonsters vereisen (bijvoorbeeld twee monsters voor de twee lipide-extractiemethoden - membraanlipiden en signaleringslipiden - en daaropvolgende twee lipidenanalysemethoden - en één monster voor mRNA-analyse). Onderzoek naar inflammatoire lipiden en endogene cannabinoïden vereist respectievelijk twee verschillende weefselmonsters, extractiemethoden en analysemethoden. Een ander voorbeeld is het onderzoek van mRNA en van elke lipidecategorie in een hersenpunch- of lasermicrodissectiemonster, waardoor twee verschillende dieren twee monsters per hersengebied (sub)regio moeten verkrijgen. Een aanzienlijke mate van variabiliteit en/of slechte reproduceerbaarheid van de resultaten komt in dergelijke gevallen vaak voor, als gevolg van biologische variabiliteit en/of weefselheterogeniteit. Geleid door deze praktische beperkingen van multimoleculaire analyse, die met name optreden bij hoge ruimtelijke resolutie in de hersenen, werd een driemodule neurolipidomicsprotocol ontworpen dat omvat: 1) co-extractie en co-analyse door LC / MRM van inflammatoire lipiden (bijv. Eicosanoïden (eiCs)) en lipiden die betrokken zijn bij modulatie van neuronale activiteit, zoals eCB's2; 2) co-extractie van fosfolipiden (PR's) en eCB's met daaropvolgende multiscan LC/MRM en precursor/neutrale verliesscananalyse2; en 3) dubbele extractie van membraan (fosfo)lipiden en eCB's, evenals mRNA, met daaropvolgende LC/MRM en qPCR of RNA sequencing analyse6. Afhankelijk van de biologische vraag die moet worden behandeld bij een neurologische ziekte en het hersengebied van belang, kan een combinatie van het eerste en het tweede protocol, of het eerste en het derde protocol, worden toegepast op hetzelfde weefselmonster voor weefsels met een gewicht van ongeveer 4 mg. Het eerste en derde protocol kunnen onafhankelijk worden toegepast voor weefsels rond 2 mg. Het tweede protocol kan worden toegepast voor weefsels met een gewicht van slechts 0,5 mg. Ongeacht de geselecteerde neurolipidomische protocolmodule zijn de weefselbemonstering en pre-analytische verwerking, de hersenisolatie en regiodissectie, evenals de procedure voor het opofferen van het diermodel gestandaardiseerd en identiek voor alle drie de modules van het protocol. In ons onderzoek naar neurologische aandoeningen worden perifere organen die relevant zijn voor de pathologische gevolgen van de ziekte altijd ook verzameld en geanalyseerd met behulp van deze modulaire protocollen. Bovendien wordt bloed regelmatig bemonsterd voor plasmalipideomica om te dienen als een uitleesinstrument van neurologische ziekten met het oog op prospectieve translationele toepassingen. Het hier gepresenteerde modulaire lipidomics-protocol is zeer veelzijdig: schaalbaar naar grotere weefselhoeveelheden en gemakkelijk toepasbaar voor vrijwel elk weefseltype en elke ziekte. Voor de toepassing van het modulaire protocol (Figuur 1) bij neurologische ziekten is elk gestandaardiseerd knaagdiermodel van het begin en de progressie van neurologische aandoeningen, zoals traumatisch hersenletsel, de ziekte van Parkinson, de ziekte van Alzheimer of epilepsie vatbaar.
Deze protocollen zijn uitgebreid toegepast om veranderingen in het weefsellipideoom en /of transcriptoom in de acute fase van epilepsie te bestuderen in het door kaïnzuur (KA) geïnduceerde muismodel van epilepsie2,7, een model dat veel wordt gebruikt in preklinische studies vanwege de gelijkenis met humane temporale kwab epilepsie (TLE)8,9,10,11. Met behulp van deze protocollen werd het therapeutisch potentieel van geneesmiddelen zoals Palmitoylethanolamide (PEA)12,13 beoordeeld in hetzelfde muismodel van epilepsie. De studie identificeerde lipide- en mRNA-veranderingen bij hoge en lage ruimtelijke resolutie in de hersenen en periferie, op het tijdstip van maximale acute aanvalsintensiteiten (bij 60 min posteizure inductie), en bij subchronische en acute behandeling met PEA op vier verschillende tijdstippen (20, 60, 120 en 180 min) na KA-aanvalsinductie, een tijdvenster dat de acute fase van epilepsie bestrijkt. Plasma, hersenen en perifere organen van onbehandelde KA-geïnjecteerde muizen, acute en subchronisch PEA-behandelde muizen, evenals voertuig- en PEA-voertuigcontrolemuizen, werden verzameld op elk tijdstip12,13 en onderzocht met deze moleculaire analyse. De moleculaire gegevens werden gecorreleerd met gedragsfenotypen verkregen door het scoren van aanvallen, evenals met immunohistochemische afgeleide gegevens over neurodegeneratieve processen, om de progressie van de acute epilepsiefase en het potentieel van PEA om het te verlichten te ontrafelen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12(S)-HETE</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay10007248-25</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12(S)-HETE-d8</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay334570-25</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1200 series LC System</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2100 Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5(S)-HETE-d8</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay 334230</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABI 7300 Real-Time PCR cycler</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile LC-MS Chroma Solv</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>9814920</td>
			<td>Solvent/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>amber eppendorf tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analyst 1.6.2 Software</td>
			<td>AB SCIEX, Darmstadt</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arachidonic Acid-d8 MS Standard</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay-10007277</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bessmann Tissue Pulverizer</td>
			<td>Spectrum Laboratories, Inc. (Breda, Netherlands)</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bino</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cleaved Caspase 3 antibody</td>
			<td>Cellsignaling</td>
			<td>9661S</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat, Leica CM3050 S</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTC HTC PAL autosampler</td>
			<td>CTC Analytics AG</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Curved Forceps Dumoxel #7</td>
			<td>FST</td>
			<td>11271-30</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forceps Super fine tip #5SF (x2)</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA 1000 A R&#246;hrchen</td>
			<td>Kabe Labortechnik</td>
			<td>078001</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP-1 EconoPump</td>
			<td>BioRAD</td>
			<td>700BR07757</td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps Mirror Finish</td>
			<td>FST</td>
			<td>11412-11</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Iris Scissors straight sharp</td>
			<td>FST</td>
			<td>14094-11</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissor Tungsten Carbide straight</td>
			<td>FST</td>
			<td>14568-09</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Spatulae</td>
			<td>FST</td>
			<td>10094-13</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kainic acid</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab120100</td>
			<td>Epileptic drug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipid View software</td>
			<td>AB SCIEX, Darmstadt</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPC 17:0</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>855676P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPC 18:0</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>855775P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna 2,5&#181;m C18(2)- HAST 100A LC column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00D-4446-B0</td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnifying lamp</td>
			<td>Maul GmbH</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol LC-MS Chroma Solv 99.9%</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>9814920</td>
			<td>Solvent/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motic Camara</td>
			<td>Motic</td>
			<td></td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTBE</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>34875-1L</td>
			<td>Solvent/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MultiQuant 3.0 quantitation software package</td>
			<td>AB SCIEX, Darmstadt</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000c Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PA 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>840857P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PA 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1404</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoyl Ethanolamide</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay90350-100</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palmitoyl Ethanolamide-d5</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay9000573-5</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>850457P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>850457P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1004</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>850757P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1104</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PG 16:0-18:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>840457P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PG 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1204</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PI 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1504</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precelleys 24</td>
			<td>Peqlab</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precellys Keramik-K&#252;gelchen</td>
			<td>Peqlab</td>
			<td>91-pcs-ck14p</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precellys Stahlkugeln 2,8mm</td>
			<td>Peqlab</td>
			<td>91-PCS-MK28P</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precellys-keramik-kit 1,4 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>91-PCS-CK14</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin D2</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay 12010</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin D2-d4</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay 312010</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin E2</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay10007211-1</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prostaglandin E2-d9</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay10581-50</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PS 17:0-14:1</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-1304</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q Trap 5500 triple-quadrupole linear ion trap MS</td>
			<td>AB SCIEX</td>
			<td>AU111609004</td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Real Time PCR System</td>
			<td>Appliert Biosystem</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resolvin D1</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay10012554-11</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rneasy Mini Kit - RNAase-Free DNase Set (50)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79254</td>
			<td>Sample Prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Security Guard precolumn</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/LCMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon coverplates</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>72110017</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon slide rack and lid</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>73310017</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SM 18:0</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>860586P</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SM d18:1/12:0</td>
			<td>Avanis Polaris</td>
			<td>LM-2312</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Forceps straight Smooth</td>
			<td>FST</td>
			<td>11016-17</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissor ToughCut Standard Pattern</td>
			<td>FST</td>
			<td>14130-17</td>
			<td>Surgical Tools</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T3000 Thermocycler</td>
			<td>Biometra</td>
			<td></td>
			<td>Instrumentation/qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thromboxane B2</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay19030-5</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thromboxane B2-d4</td>
			<td>Biomol</td>
			<td>Cay319030-25</td>
			<td>Lipid Std</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Lyser II</td>
			<td>Qiagen/ Retsch</td>
			<td>12120240804</td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidinblau</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0300.2</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vapotherm</td>
			<td>Barkey</td>
			<td>4004734</td>
			<td>Instrumentation/Sample prep.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wasser LC-MS Chroma Solv</td>
			<td>VWR</td>
			<td>9814920</td>
			<td>Solvent/LCMS</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

lipidomics and transcriptomics in neurological diseases

Lipiden dienen als de primaire interface voor hersenbeledigingen of stimuli die bevorderlijk zijn voor neurologische ziekten en zijn een reservoir voor de synthese van lipiden met verschillende signalerings- of ligandfuncties die het begin en de progressie van ziekten kunnen onderstrepen. Lipiden veranderen vaak op presymptomatisch niveau en zijn een opkomende bron van medicijndoelen en biomarkers. Veel neurologische ziekten vertonen neuro-inflammatie, neurodegeneratie en neuronale prikkelbaarheid als gemeenschappelijke kenmerken, gedeeltelijk gemoduleerd door specifieke lipide signaleringssystemen. De onderlinge afhankelijkheid en onderlinge samenhang van de synthese van verschillende lipiden leidt tot een multilipiden-, multi-enzym- en multireceptoranalyse om de overeenkomsten en specificiteiten van neurologische contexten af te leiden en de ontrafeling van mechanistische aspecten van het begin en de progressie van de ziekte te versnellen. Het toeschrijven van lipiderollen aan verschillende hersengebieden bevordert de bepaling van lipide moleculair fenotype en morfologie geassocieerd met een neurologische ziekte.
Hier wordt een modulair protocol gepresenteerd dat geschikt is voor de analyse van membraanlipiden en downstream lipidesignalen, samen met mRNA van enzymen en mediatoren die ten grondslag liggen aan hun functionaliteit, geëxtraheerd uit discrete hersengebieden die relevant zijn voor een bepaalde neurologische ziekte en / of aandoening. Om nauwkeurige vergelijkende lipidomische profilering te garanderen, werden de workflows en operationele criteria geoptimaliseerd en gestandaardiseerd voor: i) hersenbemonstering en dissectie van interessante regio's, ii) co-extractie van meerdere lipidesignalen en membraanlipiden, iii) dubbele lipide / mRNA-extractie, iv) kwantificering door vloeistofchromatografie multiple reaction monitoring (LC / MRM), en v) standaard mRNA-profilering. Deze workflow is vatbaar voor de lage weefselhoeveelheden die worden verkregen door bemonstering van de functioneel discrete hersensubregio's (d.w.z. door brain punching), waardoor bias in multimoleculaire analyse als gevolg van weefselheterogeniteit en / of dierlijke variabiliteit wordt voorkomen. Om perifere gevolgen van neurologische ziekten te onthullen en translationele moleculaire uitlezingen van neurologische ziektetoestanden vast te stellen, worden perifere orgaanbemonstering, verwerking en hun daaropvolgende lipidomische analyse, evenals plasmalipideomica, ook nagestreefd en beschreven. Het protocol wordt gedemonstreerd op een acuut epilepsiemuismodel.

De reeks beschreven protocollen kan op verschillende niveaus op een doelspecifieke manier worden gecombineerd, zoals de keuze van het diermodel, de bemonsteringsroute, de extractiemethode en de profilering (figuur 1).
Om veranderingen in het lipidenniveau in de hersenen en de periferie te bepalen gedurende een tijdsverloop van een acute epileptische aanvalstoestand en om het potentiële anti-epilept...

Watch this Scientific Journal Video about Lipidomics and Transcriptomics in Neurological Diseases at JoVE.com

Lipidomics and Transcriptomics in Neurological Diseases

Dit artikel presenteert een modulair protocol voor weefsellipideomica en transcriptomica, en plasmalipideomica in neurologische ziektemuismodellen gericht op lipiden die ten grondslag liggen aan ontsteking en neuronale activiteit, membraanlipiden, stroomafwaartse boodschappers en mRNA-coderende enzymen / receptoren die ten grondslag liggen aan de lipidefunctie. Bemonsterings-, monsterverwerkings-, extractie- en kwantificeringsprocedures worden beschreven.

Lipidomics en Transcriptomics bij neurologische aandoeningen

Lipids serve as the primary interface to brain insults or stimuli conducive to neurological diseases and are a reservoir for the synthesis of lipids with ...

Dit modulaire protocol maakt het mogelijk om meerdere moleculaire gebeurtenissen te onderzoeken die worden weergegeven door structurele en signalerende lipiden en / of RNA's, in discrete weefselgebieden en in bloed met een verbeterde kwantitatieve en kwalitatieve gegevensuitvoer per monstermonster. De methode is van toepassing op elk experimenteel model en kan ook worden toegepast op menselijke weefselmonsters en bloed. Claudia Schwitter, een technicus, Julia Post, een afgestudeerde student, en Raissa Lerner, een postdoc in mijn groep, demonstreren de procedure.Neem om te beginnen eerder geïsoleerde, hele, bevroren hersenen van muizen met acute en profylactisch behandelde kaienzuur-geïnduceerde epilepsie. Monteer de hersenen op het montagesysteem van de cryostaat. Stel de dikte in op 50 micrometer en snijd de hersenen in trimmodus dicht bij het interessegebied.Wanneer u het interessante gebied nadert, stelt u de dikte in op 18 tot 20 micrometer. Om de subregio van belang te lokaliseren, kleurt u hersenplakken met behulp van toluidineblauw. Gebruik een microscoop om de gekleurde plakjes te inspecteren om de interessegebieden te identificeren die moeten worden geponst en gebruik een muizenatlas als referentie om de juiste anatomische hersengebieden te vinden.Gebruik monstercorers om ponsen met een diameter van 0,8 tot 1,0 millimeter te nemen. Breng de ponsen voor co-extracties van endocannabinoïden en eicosanoïden over in voorgekoelde amberkleurige buizen van 2 milliliter met zeven voorgekoelde stalen kogels per buis. Voor fosfolipiden en endocannabinoïden co-extractie, dubbele lipide en RNA co-extractie, breng de ponsen over in 2 milliliter RNase-vrije extractiebuizen met keramische kralen.Weeg bevroren stoten in de koelcel en ga onmiddellijk verder met afzuiging of bevries bij 80 graden Celsius. Om vloeistof-vloeistof lipide co-extractie van endocannabinoïden en eicosanoïden uit hersenstukken, ponsen of weefselpoedermonsters uit te voeren, plaatst u de extractiebuizen met de weefselmonsters en zeven stalen ballen op ijs. Voeg 600 microliter ijskoude MTBE en 50 microliter acetonitrilwater toe met daarin de interne normen.Gebruik na het toevoegen van 400 microliter 0,1 molair mierenzuur een weefsellyser om gedurende 30 seconden tot 1 minuut te homogeniseren. Centrifugeer dit homogenaat gedurende 15 minuten bij 5.000 maal g bij 4 graden Celsius. Plaats het gedurende 10 minuten in de vriezer bij 80 graden Celsius om de waterige onderste fase te bevriezen, wat de overdracht van de bovenste organische fase zal vergemakkelijken.Breng de bovenste organische fase over in nieuwe amberkleurige buizen van 1,5 milliliter, verdamp onder een zachte stroom stikstof bij 37 graden Celsius gedurende 10 minuten en reconstitueer vervolgens in 50 microliter acetonitrilwater voor verdere analyse. Bewaar de waterige fase bij 20 of 80 graden Celsius voor verdere analyse van het eiwitgehalte. Om endocannabinoïden en eicosanoïden uit plasmamonsters te co-extraheren, plaatst u de bevroren plasmamonsters op ijs en laat u ze volledig ontdooien.Voeg 800 microliter MTBE en 50 microliter acetonitrilwater toe met daarin de interne normen die zijn geoptimaliseerd voor spiking met behulp van referentieplasmamonsters. Voeg 600 microliter mierenzuur van 0,1 molair mierenzuur en vortex bij 4 graden Celsius gedurende 2 minuten toe. Centrifugeer de monsters op 4.000 keer g gedurende 15 minuten bij 4 graden Celsius.Breng de organische fase over in nieuwe buizen. Verdamp het onder een zachte stroom stikstof bij 37 graden Celsius en reconstitueer het vervolgens met 50 microliter acetonitrilwater voor vloeistofchromatografie meervoudige reactiemonitoringanalyse. Om co-extractie van fosfolipiden en endocannabinoïden uit hersengebieden, ponsen of andere weefselpoedermonsters uit te voeren, plaatst u de extractiebuizen met de weefselmonsters en keramische kralen op ijs.Voeg 800 microliter methyltert-butylether en methanolmengsel en 10 microliter methanol toe die de interne normen bevat. Voeg vervolgens 200 microliter mierenzuur van 0,1% toe met 25 micromolair tetrahydrolipstatine/URB597 en 50 microgram per milliliter BHT. Na homogenisatie met een weefselhomogenisator, centrifugeer op 5.000 keer g en 4 graden Celsius gedurende 15 minuten.Breng de bovenste organische fase over in nieuwe buizen, verdamp onder een zachte stroom stikstof bij 37 graden Celsius en reconstitueer dit lipide-extract vervolgens met 90 microliter methanol. Voeg bij onmiddellijke actie 10% water toe aan een hoeveelheid lipidenextract en injecteer 10 microliter in de LC/MS voor fosfolipideanalyse. Ga voor verdere analyse van endocannabinoïden verder met de volgende stap.Neem een aliquot van het lipide-extract, verdamp tot droogheid en reconstitueer in acetonitrilwater. Om dubbele extractie van RNA en lipiden en co-extractie van fosfolipiden en endocannabinoïden uit weefselmonsters uit te voeren, ontdooi weefselpoeder aliquots of hersentrossen bij 4 graden Celsius. Voeg het weefsel toe aan extractiebuizen met keramische kralen.Voeg vervolgens 600 microliter RLT-buffer toe samen met 200 microliter chloroform. Voor fosfolipide en co-extractie van endocannabinoïden, spike monsters met 10 microliter intern standaardmengsel en homogeniseren met hoge snelheid gedurende 20 seconden. Breng gehomogeniseerde monsters over in nieuwe centrifugebuizen en centrifugeer gedurende vijf minuten op volle snelheid en 4 graden Celsius om de fasescheiding mogelijk te maken.Breng de bovenste fase over naar een verse buis voor RNA-extractie met behulp van een standaardkit. Elute extraheerde RNA in een totaal volume van 50 microliter RNase-vrij water en sloeg het op bij 80 graden Celsius. Voeg voor lipidenextractie 800 microliter MTBE/methanol en 200 microliter mierenzuur toe aan de onderste chloroformbevattende fase.Vortex gedurende 45 minuten bij 4 graden Celsius. Breng de bovenste organische fase over naar een nieuwe buis. Verdamp het onder een zachte stroom stikstof bij 37 graden Celsius.Voor verdere LC/MS-analyse reconstitueer je het monster in 90 microliter methanol en bewaar je het bij 20 of 80 graden Celsius, of ga je onmiddellijk verder met de analyse. Ga voor verdere analyse van endocannabinoïden verder met de volgende stap. Neem een aliquot van het lipide-extract, verdamp tot droogheid en reconstitueer in acetonitrilwater.Injecteer vervolgens 20 microliter in de LC/MS voor endocannabinoïde analyse. Kaienzuurinductie van acute epileptische aanvallen leidde tot een maximale aanvalsintensiteit één uur na de injectie. Lipidomische profilering van endocannabinoïden en eicosanoïden, evenals fosfolipiden en endocannabinoïden, toont veranderingen in het lipidenniveau in de hersenschors, het striatum, het thalamische gebied, de hippocampus, de hypothalamus, het cerebellum en het hart- en longweefsel bij door kaïnzuur geïnduceerde epileptische muizen en controles.Na dubbele extractie van fosfolipiden en endocannabinoïden en RNA voor kwantitatieve profilering van muizenhersenstoten, werd de kwantitatieve verdeling van lipiden in de hypothalamus, basolaterale amygdala en de ventrale en dorsale hippocampus geanalyseerd. Relatieve expressieniveaus van endogene enzymen en receptoren die betrokken zijn bij lipidesignalering, evenals markers voor hersenactiviteit onderzocht op mRNA-niveau in verschillende hersengebieden en subregio's van muizen die werden onderworpen aan kainic acid-geïnduceerde epileptische aanvallen en controles. Kainic acid-geïnduceerde epilepsie veroorzaakte massaal verlies van NeuN-signaal, voornamelijk in het CA1-, CA3- en hilusgebied van de hippocampus, vergezeld van apoptotische gebeurtenissen aangegeven door caspase-3-signaal in vergelijking met de controlezoutoplossing-geïnjecteerde muizen.Na behandeling met subchronisch palmitoylethanolamide bleef het signaal van neuronale kerneneiwit merkbaar behouden en was het CASP3-signaal nauwelijks detecteerbaar. Hersenstoten en dissectie van discrete hersengebieden zijn behoorlijk uitdagend en vereisen fijne vaardigheden om consistente steekproeven in meerdere cohorten te verkrijgen. Daarom worden het oefenen op testorganen en een goede kennis van hersenmorfologie ten zeerste aanbevolen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissectie en Cultuur van Commissural neuronen van het ruggenmerg Embryonic

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

Systemische en lokale Drug Delivery voor de behandeling van ziekten van het centrale zenuwstelsel in knaagdiermodellen

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution ...

Measurement of Total Calcium in Neurons by Electron Probe X-ray Microanalysis

Meting van totale Calcium in Neuronen door Electron Probe X-stralen micro analyse

In this article the tools, techniques, and instruments appropriate for quantitative measurements of intracellular elemental content using the technique ...

Optogenetic Functional MRI

Optogenetische Functionele MRI

The investigation of the functional connectivity of precise neural circuits across the entire intact brain can be achieved through optogenetic functional ...

Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

Het meten van progressieve neurologische Disability in een muismodel van Multiple Sclerose

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

Meten van Synaptic vesikel endocytose in gekweekte Hippocampal neuronen

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Establishing Mouse Models for Zika Virus-induced Neurological Disorders Using Intracerebral Injection Strategies: Embryonic, Neonatal, and Adult

Tot vaststelling van Muismodellen voor Zika-Virus-geïnduceerde neurologische aandoeningen met behulp van intracerebrale injectie strategieën: embryonale, Neonatale en volwassen

The Zika virus (ZIKV) is a flavivirus currently endemic in North, Central, and South America. It is now established that the ZIKV can cause microcephaly ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Een objectieve en reproduceerbare Test van olfactorische leren en discriminatie in muizen

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

Time-lapse Live beeldvorming en kwantificering van snelle dendritische tak dynamiek bij de ontwikkeling van Drosophila neuronen

Highly motile dendritic filopodia are widely present in neurons at early developmental stages. These exploratory dynamic branches sample the surrounding ...

In vitro Modeling for Neurological Diseases using Direct Conversion from Fibroblasts to Neuronal Progenitor Cells and Differentiation into Astrocytes

In vitro modellering voor neurologische ziekten met behulp van directe conversie van fibroblasten naar neuronale voorlopercellen en differentiatie in astrocyten

Research on neurological disorders focuses primarily on the impact of neurons on disease mechanisms. Limited availability of animal models severely ...