Name: an in vitro model for studying tau aggregation using lentiviral-mediated transduction of human neurons
Uploaded: 2019-05-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Model for Studying Tau Aggregation Using Lentiviral-mediated Transduction of Human Neurons at JoVE.com

Die Autoren danken Dr. Peter Davies vom Albert Einstein College of Medicine für die Lieferung von PHF-1 und CP13-Antikörpern und Dr. Marc Diamond an der University of Texas, im Südwesten, für die Bereitstellung der Tau-Konstrukte. Diese Arbeit wurde unterstützt durch Stipendien der Alzheimer es Association (NIRG-14-322164) an S.H.Y. und des California Institute for Regenerative Medicine (TB1-01193) an P.R.

1. Vorbereitung von Medien und Reagenten
<ol><li>Tauen Sie die Kellermembranmatrix-Beschichtung für Kulturplatten bei 4 ° C auf (lassen Sie die Kellermembranmatrix nicht erwärmen oder sie wird sich verfestigen). 1 mL aliquots machen und bei-20 ° C oder-70 ° C aufbewahren.</li>
	<li>Reconstitute basic fibroblaast growth factor (bFGF) in sterile Phosphat-gepufferte Saline (PBS) bei 10 μg/mL und machen 10 μL Aliquots. Speichern Sie sie bei 4 ° C.</li>
	<li>Zu einer neuen, unöffneten 500 ml Flasche DMEM/F12 mit Gl...

<ol>
	<li>Rojas, J. C., Boxer, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurodegenerative+disease+in+2015:+Targeting+tauopathies+for+therapeutic+translation.">Neurodegenerative disease in 2015: Targeting tauopathies for therapeutic translation.</a> Nature Reviews Neurology. 12 (2), 74-76 (2016).</li><li>Kadavath, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tau+stabilizes+microtubules+by+binding+at+the+interface+between+tubulin+heterodimers.">Tau stabilizes microtubules by binding at the interface between tubulin heterodimers.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (24), 7501-7506 (2015).</li><li>Wang, Y., Mandelkow, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tau+in+physiology+and+pathology.">Tau in physiology and pathology.</a> Nature Reviews Neurology. 17 (1), 5-21 (2016).</li><li>Gomez-Ramos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+and+consequences+of+muscarinic+receptor+activation+by+tau+protein.">Characteristics and consequences of muscarinic receptor activation by tau protein.</a> European Neuropsychopharmacology. 19 (10), 708-717 (2009).</li><li>Warmus, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tau-mediated+NMDA+receptor+impairment+underlies+dysfunction+of+a+selectively+vulnerable+network+in+a+mouse+model+of+frontotemporal+dementia.">Tau-mediated NMDA receptor impairment underlies dysfunction of a selectively vulnerable network in a mouse model of frontotemporal dementia.</a> Journal of Neuroscience. 34 (49), 16482-16495 (2014).</li><li>DeVos, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tau+reduction+in+the+presence+of+amyloid-beta+prevents+tau+pathology+and+neuronal+death+in+vivo.">Tau reduction in the presence of amyloid-beta prevents tau pathology and neuronal death in vivo.</a> Brain. 141 (7), 2194-2212 (2018).</li><li>Cheng, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tau+reduction+diminishes+spatial+learning+and+memory+deficits+after+mild+repetitive+traumatic+brain+injury+in+mice.">Tau reduction diminishes spatial learning and memory deficits after mild repetitive traumatic brain injury in mice.</a> PLOS ONE. 9 (12), e115765 (2014).</li><li>Ando, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+human+mutant+tau+aggregation+by+knocking+out+murine+tau+in+a+transgenic+mouse+model.">Accelerated human mutant tau aggregation by knocking out murine tau in a transgenic mouse model.</a> The American Journal of Pathology. 178 (2), 803-816 (2011).</li><li>Reilly, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+human+neuronal+tau+model+exhibiting+neurofibrillary+tangles+and+transcellular+propagation.">Novel human neuronal tau model exhibiting neurofibrillary tangles and transcellular propagation.</a> Neurobiology of Disease. 106, 222-234 (2017).</li><li>Kfoury, N., Holmes, B. B., Jiang, H., Holtzman, D. M., Diamond, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-cellular+Propagation+of+Tau+Aggregation+by+Fibrillar+Species.">Trans-cellular Propagation of Tau Aggregation by Fibrillar Species.</a> The Journal of Biological Chemistry. 287 (23), 19440-19451 (2012).</li><li>Yuan, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-surface+marker+signatures+for+the+isolation+of+neural+stem+cells,+glia+and+neurons+derived+from+human+pluripotent+stem+cells.">Cell-surface marker signatures for the isolation of neural stem cells, glia and neurons derived from human pluripotent stem cells.</a> PLOS ONE. 6 (3), e17540 (2011).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passaging+human+neural+stem+cells.">Passaging human neural stem cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (7), e263 (2007).</li><li>Lathuiliere, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motifs+in+the+tau+protein+that+control+binding+to+microtubules+and+aggregation+determine+pathological+effects.">Motifs in the tau protein that control binding to microtubules and aggregation determine pathological effects.</a> Scientific Reports. 7 (1), 13556 (2017).</li><li>Asai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+microglia+and+inhibition+of+exosome+synthesis+halt+tau+propagation.">Depletion of microglia and inhibition of exosome synthesis halt tau propagation.</a> Nature Neuroscience. 18 (11), 1584-1593 (2015).</li></ol>

Dieses Protokoll beschreibt die Generierung eines In-vitro-Modells menschlicher Tauopathie, das silberfarbene Flecken positive Aggregate und Thioflavin-positive neurofibrilläre Tangles (NFTs) aufweist. Darüber hinaus weisen die übertragenen Zellen tau-induzierte Pathologien wie morphologische Defekte, eine reduzierte Synaptogenese und ein erhöhtes lysosomales Volumen auf. Der Hauptvorteil dieses Protokolls besteht darin, dass es ein zugängliches und kostengünstiges Modell der neuronalen Tauopathie bietet, das sowoh...

Die pathologische Aggregation des mikrotubule-assoziierten Proteintau ist ein prägendes Merkmal vieler neurodegenerativer Erkrankungen, darunter AD, frontotemporale Demenz (FTD), Pick es Krankheit und progressive supranuclear Lähmung (PSP) 1. In einem nicht erkrankten Zustand bindet tau Mikrotubule-Filamente in neuronalen Axonen2und stabilisiert sie. Die krankheitsbedingte Hyperphosphoryation von Tau fördert jedoch die Tau-Aggregation, die Trennung von Mikrotubuli und die neuronale Toxizität 3. Die toxischen Wirkungen des aggregierten Tau können eine aberzogeneAktivierung von cholinergen 4 und glutamatergischen Rezeptoren5 beinhalten, die zu einer Dysregulation von intrazellulärem Kalzium und schließlich zum Zelltod führen. In Tiermodellen verbessert die Reduktion des Hirntau die Pathologiebei AD-Mäuse 6 und bei Mausmodellen der sich wiederholendenmilden traumatischen Hirnverletzung 7.
Montierende Beweise zeigen, dass sich die Struktur und die Bindungsaffinität von Maus-Tau von der vom Menschen abgeleiteten Taube unterscheiden und dass die Maus tau für die Modellierung menschlicher Tauopathien ungeeignet ist. Menschliche Zelltauopathie-Modelle sind jedoch nicht weit verbreitet. Das übergeordnete Ziel dieser Arbeit ist es, ein In-vitro-Modell der Tau-Aggregation zu beschreiben, in dem menschliche Neuronen mit liniviralen Vektoren übertragen werden, die mutierende menschlicheTau-Konstrukte 9 enthalten. Tau Aggregat verursacht Linziviralkonstrukte für die Tau-Wiederholungsdomäne P301L und V337M Mutationen, die zu einem YFP-Reporter verschmolzen sind (Tau-R@ DLM-YFP) während der Steuerung den Code für die Wild-typ (Wt) tau-wiederholen Domain, die mit einem YFP-Reporter (Tau-Wt-YFP) verschmolzen ist. Neuronale Kulturen, die mit dieser Methode transduced werden, drücken etwa neunmal mehr Tau aus als nicht übertragene Kulturen. Obwohl die Menge der überdrückten Tau-Expressions-Expression in etwa gleich ist zwischen Tau-RDLM-YFP-und Tau-Wt-YFP-übertragenen Zellen, werden nur Neuronen mit Tau-RDLM-YFP-Displayaggregaten übertragen. Die Kulturen, die mit Tau-RDLM-YFP-Fleck positiv für Thioflavin übertragen werden, zeigen eine Reduktion der axonalen Länge und der synaptischen Dichte. Daher kann dieses zelluläre Modell ein nützliches Werkzeug sein, um die Tau-Aggregation in vitro zu untersuchen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10 cm culture dishes</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>12556002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tubes</td>
			<td>Biopioneer</td>
			<td>CNT-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% paraformaldehyde</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>50-980-487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well culture plates</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>930186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tubes</td>
			<td>Biopioneer</td>
			<td>CNT-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol in spray bottle</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement membrane matrix (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic FGF</td>
			<td>Biopioneer</td>
			<td>HRP-0011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture incubator</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM-F12 culture media with glutamine</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10565042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (50% concentration or higher)</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flourescently labeled secondary antibodies</td>
			<td>Various Sources, experiment dependent</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent microscope</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>1254581</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human neural stem cells</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentiviral vectors</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>custom order</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting media</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibodies</td>
			<td>Various Sources, experiment dependent</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rocking or rotating platform</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile cell culture hood</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thioflavin S</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1892-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>BP151-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Various sources</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vitro model for studying tau aggregation using lentiviral-mediated transduction of human neurons

Die Aberrante Aggregation des Proteintau ist pathogenisch an einer Reihe neurodegenerativer Erkrankungen beteiligt, darunter die Alzheimer-Krankheit (AD). Obwohl Mausmodelle der Tauopathie eine wertvolle Ressource für die Untersuchung der neurotoxischen Mechanismen des aggregierten Tau zur Verfügung gestellt haben, wird immer deutlicher, dass das Maushirn aufgrund der Unterschiede zwischen den Arten in der Neurophysiologie ungeeignet ist. Modellierung des menschlichen Zustandes. Fortschritte in den Methoden der Zellkultur haben menschliche neuronale Kulturen für den experimentellen Einsatz in vitro zugänglich gemacht und bei der Entwicklung der Neurotherapie geholfen. Trotz der Anpassung der menschlichen neuronalen Zellkulturen sind In-vitro-Modelle menschlicher Tauopathie aber noch nicht weit verbreitet. Dieses Protokoll beschreibt ein zelluläres Modell der Tau-Aggregation, in dem menschliche Neuronen mit Linsenvektoren transferiert werden, die für pathogenisch mutierte Tau kodieren, die zu einem gelben Fluoreszenzprotein (YFP)-Reporter verschmolzen sind. Durchgeführte Kulturen produzieren Tau-Aggregate, die positiv für Thioflavin und Anzeige von Markern der Neurotoxizität, wie verminderte axonale Länge und erhöhte lysosomale Volumen. Dieses Verfahren kann ein nützliches und kostengünstiges Modell für die Untersuchung menschlicher Tauopathien sein.

Tau-RDLM-YFP-übertragene Neuronen wurden fluoreszierend mit YFP versehen, und RDLM-übertragene Kulturen zeigten Aggregate nach der Transduktion. Diese Einschlüsse befleckten positiv für Thioflavin (Abbildung 1). Wie Abbildung 1 zeigt , produziert dieses Protokoll neuronale Kulturen, die Thioflavin-positive Tau-Aggregate aufweisen. Für erste Experimente wird empfohlen, dass die neuronale Differenzierung durch die Immunolabeling des neuronenspezifischen Marke...

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An In Vitro Model for Studying Tau Aggregation Using Lentiviral-mediated Transduction of Human Neurons

Ein In-Vitro-Modell für das Studium der Tau Aggregation mit Lentiviral-vermittelter Transkription menschlicher Neuronen

In diesem Protokoll wird ein Verfahren beschrieben, bei dem menschliche neuronale Kulturen mit Linsenkonstrukten übertragen werden, die für mutwillige menschliche Tauben kodieren. Durchgeführte Kulturen zeigen Tau-Aggregate und damit verbundene Pathologien.

Aberrant aggregation of the protein tau is pathogenically involved in a number of neurodegenerative diseases, including Alzheimer&#8217;s disease (AD). ...

In diesem Protokoll beschreiben wir ein In-vitro-Modell der menschlichen Tauopathie. Diese Methode erfüllt einen Materialbedarf, der für Arzneimittelscreenings und Krankheitsmechanismusstudien nützlich sein kann. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass das Zellkulturparadigma eine schnellere Bewertung der Tau-Toxizität und potenzieller Tau-Therapeutika im Vergleich zu Tierstudien ermöglicht. Um dieses Verfahren zu beginnen, taut die Kellermembran-Matrixbeschichtung für Kulturplatten bei vier Grad Celsius auf.Machen Sie ein Milliliter Aliquots und lagern Sie sie bei minus 20 oder minus 70 Grad Celsius. Als nächstes rekonstituieren Sie den grundlegenden Fibroblasten-Wachstumsfaktor in sterilen PBS in einer Konzentration von 10 Mikrogramm pro Milliliter. Machen Sie 10-Mikroliter-Aliquots und lagern Sie sie bei vier Grad Celsius.Dann legen Sie eine neue ungeöffnete 500-Milliliter-Flasche DMEM-F12 mit Glutamin auf. Fügen Sie 10 Milliliter B27, fünf Milliliter N2 und fünf Milliliter Penicillin-Streptomycin hinzu, um neuronale Stammzellmedien vorzubereiten. 50 Milliliter der NSC-Medien in ein konisches Rohr geben und 10 Mikroliter des vorbereiteten bFGF hinzufügen.Bewahren Sie dieses NSC plus bFGF-Medien bei vier Grad Celsius auf. Entfernen Sie zunächst eine Aliquot von gefrorenen Kellermembran-Matrix-Beschichtung für Zellkulturplatten aus dem Gefrierschrank und lassen Sie es bei vier Grad Celsius auftauen. Fügen Sie 385 Mikroliter der aufgetauten Kellermembranmatrixbeschichtung zu fünf MilliliterdmEM-F12-Medien hinzu, die Penicillin-Streptomycin enthalten.Wenn Zellen aus gefrorenen NSC-Beständen aufgetaut werden, nehmen Sie eine Durchstechflasche mit gefrorenen Zellen aus dem Gefrierschrank und erwärmen Sie sie in einem auf 37 Grad Celsius erhitzten Wasserbad, indem Sie die Durchstechflasche im Wasser hin- und herbewegen. Danach die Durchstechflasche mit 70% Ethanol besprühen. Dann übertragen Sie die Zellen unter einer Zellkulturhaube auf ca. 10 Milliliter DMEM-F12-Medien, die Penicillin-Streptomycin enthalten.Zentrifuge bei Raumtemperatur bei 1 000 mal g für fünf Minuten. Dann die Medien ansaugen und die Zellen in NSC-Medien wieder aussetzen. Verdünnen Sie die Zellen in NSC-Medien, um die entsprechende Saatdichte für das verwendete Zellkulturgefäß zu erhalten.Fügen Sie genügend Zellen hinzu, die in NSC-Medien aufgehängt sind, um die mit der Kellermembran matrixbeschichteten Kulturgerichte auszusäen. Wachsen Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid, bis sie 75 bis 80% konfluent sind, stellen Sie sicher, dass die Medien jeden zweiten Tag zu ändern. Um Neuronen mit Lentivirus zu transduzieren, verwenden Sie eine Titerzahl von 340. 000 transduzierbaren Einheiten pro Zelle.Verdünnen Sie die transduzierbaren Einheiten in Zellkulturmedien auf die notwendige Konzentration und fügen Sie sie den Zellen hinzu. Zwei Tage nach dem Hinzufügen des Lentivirus, waschen Sie die Zellen einmal mit frischen Medien, die bFGF nicht enthalten. Die Zellkultivierung bei 37 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid in Medien ohne bFGF.Pflegen Sie die Zellen für etwa acht Wochen nach der Transduktion, um sicherzustellen, dass die Zellkultur-Medien jeden zweiten Tag zu ändern. Verwenden Sie ein Lichtmikroskop, um die Zellen routinemäßig zu visualisieren und die Lebensfähigkeit zu gewährleisten. Nach der Transduktion, entfernen Sie die Kulturgerichte aus dem Brutkasten, um sicherzustellen, dass der Deckel auf ihnen zu halten, um die Kultur gut steril zu halten.Verwenden Sie ein Fluoreszenzmikroskop, das in der Lage ist, Live-Zell-Bildgebung zu machen, um die Zellen unter einem 10-fachen Objektiv mit einer Anregung von 514 Nanometern und einem Emissionsfilter von 527 Nanometern zu visualisieren. In dieser Studie werden Neuronen, die mit Tau-RDLM-YFP lentivirus transduziert sind, fluoreszierend mit YFP markiert. RDLM-transduced Kulturen werden gesehen, um Aggregate nach der Transduktion anzuzeigen.Diese Einschlüsse färben positiv für Thioflavin. Die neuronale Differenzierung wird durch Immunlabelierung des neuronspezifischen Markers Beta-Tubulin III in Kulturen bestätigt. Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass fluoreszierend markierte sekundäre Antikörper ein Anregungsemissionsspektrum haben sollten, das sich nicht mit dem von YFP überschneidet.Obwohl gelbe Fluoreszenz-Tau-Aggregate ohne Färbung sichtbar sein werden, sollte Thioflavin auch für die Bildgebung verwendet werden, um zu bestätigen, dass das fluoreszierende Signal tau und nicht zellulärer Schmutz ist. Nach der Generierung von Tau-Überexemittierungszellen kann eine Reihe von Bewertungen der neuronalen Gesundheit und Tau-Aggregation durchgeführt werden. Zum Beispiel haben wir festgestellt, dass diese Zellen axonale Degeneration zeigen.Zusätzlich zu Zellkulturstudien haben wir diese Methode verwendet, um die Pathogenität exosomal abgeleitete Tau zu untersuchen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

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In utero Elektroporation gefolgt von primären neuronalen Kultur für ein Studium Gene Function in Subset von kortikalen Neuronen

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Forschung

Neurowissenschaften

Studying the Integration of Adult-born Neurons

Die Untersuchung der Integration von Adult-geboren Neurons

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Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

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Lentivirus-vermittelte Gen-Manipulation und Visualisierung von Riechzellen In vivo</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

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Selektive Viral Transduktion von Adult-geboren olfaktorischen Neuronen für chronische In vivo Optogenetische Stimulation

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