Name: surgical size reduction of zebrafish for the study of embryonic pattern scaling
Uploaded: 2019-05-03T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Surgical Size Reduction of Zebrafish for the Study of Embryonic Pattern Scaling at JoVE.com

Les travaux ont été soutenus par le programme PRESTO de l’Agence japonaise pour la science et la technologie (JPMJPR11AA) et un don des instituts nationaux de santé (R01GM107733).

Toutes les procédures liées au poisson ont été effectuées avec l’approbation du Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux (IACUC) de la Harvard Medical School.
1. préparation des outils et des réactifs
<ol><li>
Faire une boucle de fil pour hacher les embryons
	<ol>
<li>Prendre 20 cm de fil d’acier inoxydable rigide et non corrosif d’un diamètre de 40 μm. Boucler le fil dans le capillaire en verre (diamètre extérieur de 1...

<ol>
	<li>Cooke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale+of+body+pattern+adjusts+to+available+cell+number+in+amphibian+embryos.">Scale of body pattern adjusts to available cell number in amphibian embryos.</a> Nature. 290, 775-778 (1981).</li><li>Driesch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entwicklungsmechanische+Studien:+I.+Der+Werthe+der+beiden+ersten+Furchungszellen+in+der+Echinogdermenentwicklung.+Experimentelle+Erzeugung+von+Theil-+und+Doppelbildungen.">Entwicklungsmechanische Studien: I. Der Werthe der beiden ersten Furchungszellen in der Echinogdermenentwicklung. Experimentelle Erzeugung von Theil- und Doppelbildungen.</a> Zeitschrift fur wissenschaftliche Zoologie. , (1892).</li><li>Morgan, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Half+embryos+and+whole+embryos+from+one+of+the+first+two+blastomeres.">Half embryos and whole embryos from one of the first two blastomeres.</a> Anatomischer Anzeiger. 10, 623-638 (1895).</li><li>Ishimatsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-reduced+embryos+reveal+a+gradient+scaling-based+mechanism+for+zebrafish+somite+formation.">Size-reduced embryos reveal a gradient scaling-based mechanism for zebrafish somite formation.</a> Development. 145, (2018).</li><li>Megason, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+toto+imaging+of+embryogenesis+with+confocal+time-lapse+microscopy.">In toto imaging of embryogenesis with confocal time-lapse microscopy.</a> Methods in Molecular Biology. 546, 317-332 (2009).</li><li>Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+the+zebrafish+embryonic+brain+by+confocal+microscopy.">Live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy.</a> Journal of Visualized Experiments. (26), e1217 (2009).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+zebrafish+embryos+to+analyze+gene+function.">Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function.</a> Journal of Visualized Experiments. (25), e1115 (2009).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos.">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> Journal of Visualized Experiments. (27), e1113 (2009).</li><li>Sorlien, E. L., Witucki, M. A., Ogas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+Production+and+Identification+of+CRISPR/Cas9-generated+Gene+Knockouts+in+the+Model+System+Danio+rerio.">Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio.</a> Journal of Visualized Experiments. (138), e56969 (2018).</li><li>Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+chimeric+zebrafish+embryos+by+transplantation.">Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (29), e1394 (2009).</li><li>Mizuno, T., Shinya, M., Takeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+and+tissue+transplantation+in+zebrafish+embryos.">Cell and tissue transplantation in zebrafish embryos.</a> Methods in Molecular Biology. 127, 15-28 (1999).</li><li>Cooke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+somite+number+during+morphogenesis+of+a+vertebrate,+Xenopus+laevis.">Control of somite number during morphogenesis of a vertebrate, Xenopus laevis.</a> Nature. 254, 196-199 (1975).</li><li>Inomata, H., Shibata, T., Haraguchi, T., Sasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaling+of+dorsal-ventral+patterning+by+embryo+size-dependent+degradation+of+Spemann's+organizer+signals.">Scaling of dorsal-ventral patterning by embryo size-dependent degradation of Spemann's organizer signals.</a> Cell. 153, 1296-1311 (2013).</li><li>Gomez, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+segment+number+in+vertebrate+embryos.">Control of segment number in vertebrate embryos.</a> Nature. 454, 335-339 (2008).</li><li>Lauschke, V. M., Tsiairis, C. D., Francois, P., Aulehla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaling+of+embryonic+patterning+based+on+phase-gradient+encoding.">Scaling of embryonic patterning based on phase-gradient encoding.</a> Nature. 493, 101-105 (2013).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9, 676-682 (2012).</li><li>Almuedo-Castillo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale-invariant+patterning+by+size-dependent+inhibition+of+Nodal+signalling.">Scale-invariant patterning by size-dependent inhibition of Nodal signalling.</a> Nature Cell Biology. 20, 1032-1042 (2018).</li><li>Koos, D. S., Ho, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nieuwkoid+gene+characterizes+and+mediates+a+Nieuwkoop-center-like+activity+in+the+zebrafish.">The nieuwkoid gene characterizes and mediates a Nieuwkoop-center-like activity in the zebrafish.</a> Current Biology. 8, 1199-1206 (1998).</li><li>Yamanaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+homeobox+gene,+dharma,+can+induce+the+organizer+in+a+non-cell-autonomous+manner.">A novel homeobox gene, dharma, can induce the organizer in a non-cell-autonomous manner.</a> Genes and Development. 12, 2345-2353 (1998).</li><li>Jesuthasan, S., Stahle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+microtubules+and+specification+of+the+zebrafish+embryonic+axis.">Dynamic microtubules and specification of the zebrafish embryonic axis.</a> Current Biology. 7, 31-42 (1997).</li><li>Schier, A. F., Talbot, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+organizer.">The zebrafish organizer.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 8, 464-471 (1998).</li></ol>

Historiquement, parmi les animaux vertébrés, la réduction de la taille a été principalement réalisée à l’aide d’embryons d’amphibiens, en bisayant les embryons le long de l’axe animal-végétal à une phase blastula12. Cependant, il y a principalement deux différences entre les embryons de grenouille et de zébrafish lorsque nous bisect embryons. Premièrement, au stade où les embryons de zébrafish deviennent tolérants au bisou (stade blastula), l?...

Les scientifiques ont longtemps connu que les embryons ont une capacité remarquable à former des proportions constantes du corps bien que la taille de l’embryon peut varier grandement à la fois dans les conditions naturelles et expérimentales1,2,3. Malgré des décennies d’études théoriques et expérimentales, cette robustesse à la variation de taille, appelée mise à l’échelle, et ses mécanismes sous-jacents demeurent inconnus dans de nombreux tissus et organes. Afin de capturer directement la dynamique du système en développement, nous avons établi une technique de réduction de taille reproductible et simple dans le poisson zèbre4, qui a le grand avantage dans l’imagerie en direct in vivo5.
Le zébrafish a servi de modèle d’animal vertébré pour étudier plusieurs disciplines de la biologie, y compris la biologie du développement. En particulier, le zébrafish est idéal pour l’imagerie en direct in vivo6 parce que 1) le développement peut se dérouler normalement à l’extérieur de la mère et de la coquille d’oeuf, et 2) les embryons sont transparents. En outre, les embryons peuvent résister à certaines fluctuations de température et d’environnement, ce qui leur permet d’être étudiés dans des conditions de laboratoire. En outre, en plus de la perturbation conventionnelle d’expression génique par morpholino et l’injection de mRNA7,8, les progrès récents dans la technologie crispr/Cas9 a fait la génétique inversée dans le poisson zèbre très efficace9. En outre, de nombreuses techniques classiques en embryologie, telles que la transplantation cellulaire ou la chirurgie tissulaire peuvent être appliquées4,10,11.
Des techniques de réduction de la taille ont été développées à l’origine chez les amphibiens et autres animaux non vertébrés12. Par exemple, dans Xenopus laevis, un autre modèle animal de vertébrés populaire, la bissection le long de l’axe animal-végétal au stade blastula peut produire des embryons réduits de taille12,13. Cependant, dans nos mains cette approche en une étape entraîne des embryons dorsalisés ou ventralisés dans le zébrafish, vraisemblablement parce que les déterminants dorsales sont distribués de manière inégale et on ne peut pas connaître leur localisation de la morphologie des embryons. Nous montrons ici une technique alternative de hachage en deux étapes pour le zébrafish qui produit des embryons normalement en développement mais plus petits. Avec cette technique, les cellules sont d’abord retirées du pôle animal, une région de cellules naïves manquant dans l’activité de l’organisateur. Pour équilibrer la quantité de jaune et de cellules, ce qui est important pour l’épibolie et la morphogenèse subséquente, le jaune est ensuite enlevé. Ici, nous détaillons ce protocole et fournissons deux exemples d’invariance de taille dans la formation de modèle; formation de somite et le modelage du tube neural ventrale. Combinée à l’imagerie quantitative, nous avons utilisé la technique de réduction de la taille pour examiner la façon dont les tailles des somites et du tube neural sont affectées par la taille des embryons réduits.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:608px;" width="609">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">60 mm PYREX Petri dish</td>
			<td style="width:107px;">CORNING</td>
			<td style="width:119px;">&#160;3160-60</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose</td>
			<td style="width:107px;">affymetrix</td>
			<td align="right" style="width:119px;">75817</td>
			<td>For making a mount for live imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Agarose, low gelling temperature Type VII-A</td>
			<td style="width:107px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:119px;">A0701-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CaCl2</td>
			<td style="width:107px;">EMD</td>
			<td style="width:119px;">CX0130-1</td>
			<td>For 1/3 Ringer&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CaSO4</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For egg water</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Cover slip (25 mm x 25 mm, Thickness 1)</td>
			<td style="width:107px;">CORNING</td>
			<td style="width:119px;">2845-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Disposable Spatula</td>
			<td style="width:107px;">VWR&#160;</td>
			<td style="width:119px;">80081-188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foam board</td>
			<td style="width:107px;">ELMER&#39;S</td>
			<td align="right" style="width:119px;">951300</td>
			<td>For microscope incubator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forcept (No 55)</td>
			<td style="width:107px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:107px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">14673-043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">HEPES</td>
			<td style="width:107px;">SIGMA Life Science</td>
			<td style="width:119px;">H4034</td>
			<td>For 1/3 Ringer&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">INCUKIT XL for Cabinet Incubators</td>
			<td style="width:107px;">INCUBATOR Warehouse.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For microscope incubator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Instant sea salt</td>
			<td style="width:107px;">Instant Ocean</td>
			<td align="right" style="width:119px;">138510</td>
			<td>For egg water</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:107px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:119px;">P4504</td>
			<td>For 1/3 Ringer&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Methyl cellulose</td>
			<td style="width:107px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:119px;">M0387-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:107px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:119px;">S7653</td>
			<td>For 1/3 Ringer&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Petri dish</td>
			<td style="width:107px;">Falcon</td>
			<td align="right" style="width:119px;">351029</td>
			<td>For making a mount for live imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Phenol red</td>
			<td style="width:107px;">SIGMA Life Science</td>
			<td style="width:119px;">P0290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pipette pump</td>
			<td style="width:107px;">BEL-ART PRODUCTS</td>
			<td style="width:119px;">F37898</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pronase</td>
			<td style="width:107px;">EMD Millipore Corp</td>
			<td style="width:119px;">53702-250KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Tricaine-S (MS222)</td>
			<td style="width:107px;">WESTERN CHEMICAL INC</td>
			<td style="width:119px;">NC0135573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra thin bright annealed 316L dia. 0.035 mm Stainless Steel Weaving Wires</td>
			<td style="width:107px;">Sandra</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>The wire we used was obtained ~20 years ago and we could not find exactly the same one. This product has the same material and diameter as the one we use.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surgical size reduction of zebrafish for the study of embryonic pattern scaling

Dans le processus de développement, les embryons montrent une capacité remarquable à assortir leur modèle corporel à leur taille corporelle; leur proportion corporelle est maintenue même chez les embryons plus grands ou plus petits, dans certaines limites. Bien que ce phénomène de mise à l’échelle ait attiré l’attention depuis plus d’un siècle, la compréhension des mécanismes sous-jacents a été limitée, en partie en raison d’un manque de description quantitative de la dynamique du développement chez les embryons de tailles variées. Pour surmonter cette limitation, nous avons développé une nouvelle technique pour réduire chirurgicalement la taille des embryons de zébrafish, qui ont de grands avantages pour l’imagerie en direct in vivo. Nous démontrons qu’après l’élimination équilibrée des cellules et du jaune au stade blastula dans des étapes distinctes, les embryons peuvent rapidement se rétablir dans les bonnes conditions et se développer en embryons plus petits mais normalement normaux. Comme cette technique ne nécessite pas d’équipement spécial, elle est facilement adaptable et peut être utilisée pour étudier un large éventail de problèmes de dimensionnement, y compris la robustesse du modelage par médiation morphogénique.

La réduction du volume du jaune est importante pour la morphologie normale Comme nous l’avons récemment décrit dans Almuedo-Castillo et al.17, la réduction de la taille des embryons peut être obtenue sans réduire le volume du jaune. Pour comparer avec et sans réduction du volume du jaune, nous avons effectué deux étapes de hachage (blastula et jaune) et de hachage blastula seulement (figure 2 et film supplémentaire 1). ...

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Surgical Size Reduction of Zebrafish for the Study of Embryonic Pattern Scaling

Ici, nous décrivons une méthode pour réduire la taille des embryons de zébrafish sans perturber les processus de développement normaux. Cette technique permet d’étudier la mise à l’échelle des patrons et la robustesse du développement contre le changement de taille.

Réduction chirurgicale de la taille du Zébrafish pour l’étude de l’échelle des motifs embryonnaires

In the developmental process, embryos exhibit a remarkable ability to match their body pattern to their body size; their body proportion is maintained ...

Bien que l’échelle soit l’un des attributs universels et fondamentaux des systèmes de développement, les mécanismes sous-jacents n’ont pas été compris dans de nombreux organes et tissus. La technique de réduction de taille du poisson zèbre présentée dans cette vidéo vous permettra de mieux comprendre les mécanismes sous-jacents aux processus d’échelle dynamique. Les avantages de travailler avec le poisson zèbre sont qu’il est facile d’effectuer l’imagerie vivante, la génétique et l’analyse quantitative.Notre technique est également très simple et facile à appliquer sans aucun équipement spécialisé ou formation intensive. La santé des embryons est la clé du succès avec cette technique. Utilisez les jeunes poissons comme parents et faites attention à minimiser les dommages en enlevant les chorions.Et aussi jouer dans la taille de la plaie sur le jaune, et combien de cellules sont enlevées. Comme les embryons que nous utilisons sont très jeunes et fragiles, ils doivent être manipulés très soigneusement lors du transfert et du hachage. Dans le même temps, il doit être rapide afin que la procédure peut être faite dans la bonne fenêtre de temps de développement.La démonstration visuelle peut donner une bonne idée de la façon de produire des embryons plus petits efficacement. Pour faire une boucle métallique pour hacher les embryons, alimentez un fil d’acier inoxydable rigide et non corrosif de 20 centimètres de long à travers un capillaire en verre, faisant une petite boucle d’un millimètre de long au sommet. Placez une petite gouttelette de vernis à ongles clair sur le bout de la classe capillaire, entre le capillaire et la boucle métallique pour le maintenir en place, en s’assurant de ne pas obtenir de vernis à ongles sur la partie boucle, car il peut endommager les embryons.Et puis laissez-le sécher. Utilisez du ruban adhésif de laboratoire pour fixer le capillaire en verre avec la boucle sur une baguette en bois, laissant environ deux centimètres et demi du capillaire en verre s’étendant au-delà de la baguette de sorte que la partie baguette de l’outil ne plonge pas dans l’eau plus tard. Dans un plat Petri en verre de 100 millimètres à l’aide d’une spatule en plastique, étendre environ 0,5 millilitres de cellulose méthyle à 2 % près du centre du fond à une épaisseur d’environ 0,5 millimètre.Verser environ 30 millilitres de solution d’un tiers de Ringer sur le côté du plat, et lui permettre de s’étendre sur le reste du plat et couvrir la cellulose méthylique. Placer les embryons précédemment dé-chorionated à la cellule 256 à un stade de cellule K sur 2% cellulose méthyle, en s’assurant que les embryons sont orientés sur leur côté. Pour hacher blastula, utilisez la boucle métallique pour couper près du pôle animal, perpendiculairement à l’axe végétal animal et couper environ 30 à 40% des cellules blastoderm.Puis appuyez doucement sur les extrémités ensemble pour aider les cellules restantes à revenir en arrière. Pour le jaune, utiliser le fil monté pour faire une petite plaie près du pôle végétal en entaillant la membrane de l’œuf, ce qui fera suinter le jaune pendant quelques minutes, puis guérir. Lorsque le jaune cesse de suinter, utiliser une pipette pour déplacer l’embryon à l’extérieur de la cellulose méthylique dans le même plat pour la récupération.Répéter le hachage du blastula et du jaune pour tous les embryons, puis laisser le plat intact pendant 30 minutes pendant que les embryons se rétablissent. Ensuite, utilisez une pipette en verre pour transférer les embryons dans le plat en verre de 35 millimètres précédemment préparé contenant la solution fraîche d’un tiers de Ringer et placez-les dans un incubateur de 28,5 degrés Celsius pour permettre une récupération complète avant de poursuivre l’imagerie. Après avoir effectué deux étapes de hachage avec blastula et jaune, les embryons ont montré une morphologie globale apparemment normale tout au long des stades de développement par rapport aux embryons de contrôle, autre que la différence de taille.D’autre part, les embryons hachés blastula-seulement ont montré une morphologie particulière, particulièrement aux étapes antérieures. Pendant l’épicorps, les embryons ont eu un aspect serré et indented. Au stade suivant de somite, des structures de midline se sont trouvées aplaties à beaucoup de niveaux axiaux.À des stades ultérieurs, les structures corporelles adjacentes au jaune, comme le milieu et l’arrière-pays, présentaient encore une forme relativement aplatie, peut-être en raison de la tension accrue du jaune relativement plus gros. La formation image de time lapse de la formation de somite a prouvé que dans les embryons de contrôle et hachés, les tailles des somites qui ont été formées aux étapes ultérieures étaient plus petites comparées à celles des étapes précédentes. En outre, tout au long des stades de formation de somite, les embryons hachés ont eu de plus petits somites que ceux dans les embryons de contrôle.Quand la technique de hachage en deux étapes a été exécutée sur les embryons injectés de mCherry de membrane, la formation image de leurs moelles épinières à 20 heures après fertilisation a montré la réduction des hauteurs de tube neural due à la réduction de taille. Deux étapes de hachage est très important pour obtenir des embryons plus petits mais autrement normaux avec une efficacité élevée. Il est important de se rappeler de ne pas hacher le jaune tout en coupant les cellules de la blastula.Pour le jaune, faire une petite plaie sur elle pour le contenu à suinter. Et la membrane jaune guérira naturellement dans le tampon approprié. Puisque les embryons hachés peuvent être récupérés rapidement, toutes les méthodes ou analyses peuvent être appliquées aux embryons normaux peuvent être exécutées suivant la méthode de réduction de taille.La simplicité et la polyvalence de cette technique est très puissant que n’importe qui pourrait introduire cette technique pour étudier le problème d’échelle dans n’importe quel tissu ou organe dans le poisson zèbre. Nous croyons qu’avec cette technique, les chercheurs peuvent s’attaquer aux problèmes d’échelle dans une variété de systèmes qui n’ont jamais été touchés auparavant. Nous avons déjà fait d’importantes découvertes dans l’échelle des motifs de somite et de tube neural.

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The zebrafish has become a very important model organism for studying vertebrate development, physiology, disease, and tissue regeneration. A thorough ...

Hepatocyte-specific Ablation in Zebrafish to Study Biliary-driven Liver Regeneration

Ablation spécifique des hépatocytes chez le poisson zèbre pour étudier conduit biliaire-Régénération hépatique

The liver has a great capacity to regenerate. Hepatocytes, the parenchymal cells of the liver, can regenerate in one of two ways: hepatocyte- or ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse des Muscle intégrité poisson zèbre larves squelettique avec colorant bleu Evans

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Generation of Parabiotic Zebrafish Embryos by Surgical Fusion of Developing Blastulae

Génération de parabiose Zebrafish Embryons par Fusion chirurgicale de développement blastulas

Surgical parabiosis of two animals of different genetic backgrounds creates a unique scenario to study cell-intrinsic versus cell-extrinsic roles for ...

Culture of Murine Embryonic Metatarsals: A Physiological Model of Endochondral Ossification

Culture de murines embryonnaires Métatarsiens: un modèle physiologique de endochondrale ossification

The fundamental process of endochondral ossification is under tight regulation in the healthy individual so as to prevent disturbed development and/or ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

Imagerie in vivo de Transgenic Gene Expression en Retinal individuelle progéniteurs dans chimériques Zebrafish Embryons à étudier cellulaires Influences non autonomes

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

A Method for Characterizing Embryogenesis in Arabidopsis

A Method for Characterizing Embryogenesis in Arabidopsis

Une méthode de caractérisation de l’embryogenèse chez Arabidopsis

Given the highly predictable nature of their development, Arabidopsis embryos have been used as a model for studies of morphogenesis in plants. However, ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Méthode de Culture organotypique pour étudier le développement des tissus embryonnaires de poulet

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

Modèles de lésion du poisson-zèbre adulte pour étudier les effets de la Prednisolone dans la régénération de tissu osseux

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...