Name: using deuterium oxide as a non-invasive, non-lethal tool for assessing body composition and water consumption in mammals
Uploaded: 2020-02-20T12:00:00
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Questa ricerca è stata sostenuta da MDC Cooperative Agreement (#416), US Forest Service Cooperative Agreement (16-JV-11242311-118), American Academy of Veterinary Nutrition and Waltham/Royal Canin, USA Grant (numero di sovvenzione: 00049049), NIH training grant (numero di sovvenzione: T32OS011126), e l'Università del Missouri Veinteran Research Scholars Program. Gli autori ringraziano Shannon Ehlers per aver pre-esaminato questo manoscritto. Ringraziamo il Dr. Robert Backus per aver fornito gli standard D2O e per aver permesso l'uso del suo laboratorio.

Tutti gli esperimenti qui descritti sono stati approvati dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università del Missouri e condotti nell'ambito del permesso di raccolta scientifica della fauna selvatica (Permesso #16409 e #17649 del Missouri Department of Conservation) (Permesso #16409 e #17649).
1. Preparazione della soluzione di stock sterile, isotonica, salinizzata D2O
<ol><li>Crea una soluzione stock da 50 mL di 9,0 g/L salinated D2O.<ol>
<li>Pesare 450...

<ol>
	<li>Schiffmann, C., Clauss, M., Hoby, S., Hatt, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+body+condition+scoring+in+zoo+animals+&#8211;+composite,+algorithm+and+overview+approaches.">Visual body condition scoring in zoo animals &#8211; composite, algorithm and overview approaches.</a> Journal of Zoo Aquarium Research. 5 (1), (2017).</li><li>Peig, J., Green, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+perspectives+for+estimating+body+condition+from+mass/length+data:+the+scaled+mass+index+as+an+alternative+method.">New perspectives for estimating body condition from mass/length data: the scaled mass index as an alternative method.</a> Oikos. 118 (12), 1883-1891 (2009).</li><li>Bissell, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Body Condition Scoring Resource Center. , (2017).</li><li>McWilliams, S. R., Whitman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-destructive+techniques+to+assess+body+composition+of+birds:+a+review+and+validation+study.">Non-destructive techniques to assess body composition of birds: a review and validation study.</a> Journal of Ornithology. 154 (3), 597-618 (2013).</li><li>Lukaski, H. C., Johnson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+inexpensive+method+of+determining+total+body+water+using+a+tracer+dose+of+D2O+and+infrared+absorption+of+biological+fluids.">A simple, inexpensive method of determining total body water using a tracer dose of D2O and infrared absorption of biological fluids.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 41 (2), 363-370 (1985).</li><li>Chusyd, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiposity+and+Reproductive+Cycling+Status+in+Zoo+African+Elephants.">Adiposity and Reproductive Cycling Status in Zoo African Elephants.</a> Obesity (Silver Spring). 26 (1), 103-110 (2018).</li><li>Kanchuk, M. L., Backus, R. C., Calvert, C. C., Morris, J. G., Rogers, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutering+Induces+Changes+in+Food+Intake+Body+Weight,+Plasma+Insulin+and+Leptin+Concentrations+in+Normal+and+Lipoprotein+Lipase&#8211;Deficient+Male+Cats.">Neutering Induces Changes in Food Intake Body Weight, Plasma Insulin and Leptin Concentrations in Normal and Lipoprotein Lipase&#8211;Deficient Male Cats.</a> The Journal of Nutrition. 132 (6), 1730S-1732S (2002).</li><li>Eichhorn, G., Visser, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+Comment:+Evaluation+of+the+Deuterium+Dilution+Method+to+Estimate+Body+Composition+in+the+Barnacle+Goose:+Accuracy+and+Minimum+Equilibration+Time.">Technical Comment: Evaluation of the Deuterium Dilution Method to Estimate Body Composition in the Barnacle Goose: Accuracy and Minimum Equilibration Time.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 81 (4), 508-518 (2008).</li><li>Hooper, S. E., Backus, R., Amelon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+dietary+selenium+and+moisture+on+the+physical+activity+and+thyroid+axis+of+cats.">Effects of dietary selenium and moisture on the physical activity and thyroid axis of cats.</a> Journal of Animal Physiolgy and Animal Nutrition (Berl). 102 (2), 495-504 (2018).</li><li>Stevenson, K. T., van Tets, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-Energy+X-Ray+Absorptiometry+(DXA)+Can+Accurately+and+Nondestructively+Measure+the+Body+Composition+of+Small,+Free-Living+Rodents.">Dual-Energy X-Ray Absorptiometry (DXA) Can Accurately and Nondestructively Measure the Body Composition of Small, Free-Living Rodents.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 81 (3), 373-382 (2008).</li><li>Jennings, G., Bluck, L., Wright, A., Elia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+infrared+spectrophotometry+for+measuring+body+water+spaces.">The use of infrared spectrophotometry for measuring body water spaces.</a> Clinical Chemistry. 45 (7), 1077-1081 (1999).</li><li>Beuth, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Body Composition, movemement phenology and habitat use of common eider along the southern new england coast. Master of Science in Biological and Environmental Sciences (MSBES) thesis. , (2013).</li><li>Coplen, T. B., Hopple, J., Peiser, H., Rieder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compilation+of+minimum+and+maximum+isotope+ratios+of+selected+elements+in+naturally+occurring+terrestrial+materials+and+reagents.">Compilation of minimum and maximum isotope ratios of selected elements in naturally occurring terrestrial materials and reagents.</a> U.S. Geological Survey Water-Resources Investigations Report 01-4222. , (2002).</li><li>Karasov, W. H., Pinshow, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+lean+mass+and+in+organs+of+nutrient+assimilation+in+a+long-distance+passerine+migrant+at+a+springtime+stopover+site.">Changes in lean mass and in organs of nutrient assimilation in a long-distance passerine migrant at a springtime stopover site.</a> Physiological Zoology. 71 (4), 435-448 (1998).</li><li>Hood, W. R., Oftedal, O. T., Kunz, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+body+composition+of+female+big+brown+bats+(Eptesicus+fuscus.)+during+lactation.">Variation in body composition of female big brown bats (Eptesicus fuscus.) during lactation.</a> Journal of Comparative Physiology B. 176 (8), 807-819 (2006).</li><li>Backus, R. C., Havel, P. J., Gingerich, R. L., Rogers, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+serum+leptin+immunoreactivity+and+body+fat+mass+as+estimated+by+use+of+a+novel+gas-phase+Fourier+transform+infrared+spectroscopy+deuterium+dilution+method+in+cats.">Relationship between serum leptin immunoreactivity and body fat mass as estimated by use of a novel gas-phase Fourier transform infrared spectroscopy deuterium dilution method in cats.</a> American Journal of Veterinary Research. 61 (7), 796-801 (2000).</li><li>Moore, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Total+Body+Water+and+Solids+with+Isotopes.">Determination of Total Body Water and Solids with Isotopes.</a> Science. 104 (2694), 157-160 (1946).</li><li>Voigt, C., Cruz-Neto, A., Parsons, S., Kunz, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ecological and Behavioral Methods in the Study of Bats. , 621-645 (2009).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Assessment of Body Composition and Total Energy Expenditure in Humans Using Stable Isotope Techniques. , (2009).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Body Composition Assessment Using the Deuterium Dilution Technique with Analysis of Saliva Samples by Fourier Transform Infrared Spectrometry. , (2011).</li><li>Shimamoto, H., Komiya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Turnover+of+Body+Water+as+an+Indicator+of+Health.">The Turnover of Body Water as an Indicator of Health.</a> Journal of Physiological Anthropology and Applied Human Science. 19 (5), 207-212 (2000).</li></ol>

L'uso di ossido di deuterio per determinare TBW è stato utilizzato fin dagli anni'40 17 ed è utilizzato negli esseri umani e in una varietà di specie domestiche e selvatiche4,6,7. Sono state sviluppate altre tecniche non distruttive, tra cui l'analisi dell'impedimento bioelettrico (BIA), il DXA e la risonanza magnetica quantitativa (QMR). Ogni metodo ha vantaggi e svantaggi che dovrebbero essere consid...

I sistemi di punteggio delle condizioni del corpo e gli indici delle condizioni del corpo sono tecniche comuni utilizzate per valutare lo stato di salute o l'idoneità di una specie1,2. Molte specie domestiche e zoologiche hanno sistemi unici di punteggio delle condizioni del corpo (BCS) che vengono utilizzati per valutare il muscolo di un animale e il tessuto adiposo superficiale3. Tuttavia, la valutazione BCS si basa sul valutatore, il che significa che il BCS è una misura oggettiva o semiquantitativa quando valutata da un valutatore addestrato. Nelle specie selvatiche, gli indici delle condizioni del corpo sono comunemente utilizzati piuttosto che BCS e si basano su un rapporto tra massa corporea e dimensione corporea o massa corporea e avambraccio2. Gli indici delle condizioni del corpo sono spesso confusi dagli effetti del foraggiamento e possono essere confusi in base alle dimensioni del corpo e ai problemi statistici e inferenziali4.
Un'alternativa ai sistemi di punteggio delle condizioni del corpo e agli indici delle condizioni del corpo sta usando un isotopo stabile per determinare la composizione corporea. Un isotopo stabile comunemente usato è l'ossido di deuterio (D2O), una forma non radioattiva di acqua in cui gli atomi di idrogeno sono isotopi di deuterio. Il metodo di diluizione dell'ossido di deuterio descritto in questo studio può essere una tecnica non soggettiva, quantitativa e ripetibile utilizzata per stimare la composizione corporea in esseri umani5 e una vasta gamma di specie4,6,7. Questa tecnica può essere vantaggiosa per studiare la composizione corporea nella fauna selvatica. Ad esempio, può essere utilizzato per valutare i cambiamenti longitudinali nella composizione corporea, ad esempio prima e dopo un'azione di gestione. Tuttavia, in alcune specie selvatiche l'ossido di deuterio può sopravvalutare il contenuto effettivo di acqua8. Pertanto, quando si adatta la tecnica per una specie, è importante convalidare il metodo confrontando il metodo dell'ossido di deuterio con l'analisi della carcassa per le specie non a rischio. Per le specie minacciate e in via di estinzione, un metodo non distruttivo come la doppia absorptiometria a raggi-X (DXA) dovrebbe essere considerato come un metodo di confronto alternativo al metodo distruttivo gold-standard dell'analisi completa della carcassa.
Oltre alla composizione corporea, la tecnica di diluizione D2O può essere utilizzata per determinare il consumo di acqua di un singolo animale9. Questa applicazione unica di D2O può essere utilizzata non solo per rispondere a domande di ricerca, ma può essere utile per valutare il consumo di acqua di singoli animali ospitati in grandi contesti sociali.
Qui, descriviamo l'adattamento della tecnica di diluizione D2O per valutare la composizione corporea in un insettivoro, grandi pipistrelli marroni (Eptesicus fuscus), e per valutare il consumo di acqua in un carnivoro, gatti (Felis catis).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 micron non-pyrogenic disk filter</td>
			<td>Argos Technologies</td>
			<td>FN32S</td>
			<td>nylon, 30mm diameter, 0.22um, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL conical microcentrifuge tubes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1415-9701</td>
			<td>1.5 ml self-standing microcentrifuge tube, natural with blue cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL sterile glass vial for injection</td>
			<td>Mountainside Medical Equipment</td>
			<td>MS-SEV10</td>
			<td>clear, sterile glass injection unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305219</td>
			<td>sterile 10 mL syringe individually wrapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mL sterile glass vial for injection</td>
			<td>Mountainside Medical Equipment</td>
			<td>AL-SV10020</td>
			<td>clear, sterile glass injection unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 gauge needle</td>
			<td>Exel</td>
			<td>26417</td>
			<td>needles hypodermic 20g x 1&#34; plastic hub (yellow) / regular bevel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 gauge needle</td>
			<td>Exel</td>
			<td>26411</td>
			<td>needles hypodermic 22g x 1&#34; plastic hub (black) / regular bevel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>deuterium oxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>151882-25G</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isofluorane</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>3060</td>
			<td>fluriso isoflurane, USP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OMNIC Spectra Software</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>833-036200</td>
			<td>FT-IR standard software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petroleum jelly</td>
			<td>Vaseline</td>
			<td>305212311006</td>
			<td>Vaseline, 100% pure petroleum jelly, original, skin protectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic capillary tubes</td>
			<td>Innovative Med Tech</td>
			<td>100050</td>
			<td>sodium heparin anticoagulant, 50 &#956;L capacity, 30 mm length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sealed liquid spectrophotometer SL-3 FTIR CAF2 Cell</td>
			<td>International Crystal Laboratory</td>
			<td>0005D-875</td>
			<td>0.05 mm Pathlength</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium chloride</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.37017</td>
			<td>suitable for biopharmaceutical production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Electron Nicolet 380 FT-IR Spectrometer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269-169400</td>
			<td>discontinued model, newer models available</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using deuterium oxide as a non-invasive, non-lethal tool for assessing body composition and water consumption in mammals

I sistemi di punteggio delle condizioni del corpo e gli indici delle condizioni del corpo sono tecniche comuni utilizzate per valutare lo stato di salute o l'idoneità di una specie. I sistemi di punteggio delle condizioni del corpo dipendono dal valutatore e hanno il potenziale per essere altamente soggettivi. Gli indici delle condizioni del corpo possono essere confusi dal foraggiamento, gli effetti del peso corporeo, nonché problemi statistici e inferenziali. Un'alternativa ai sistemi di punteggio condizione del corpo e gli indici delle condizioni del corpo sta usando un isotopo stabile come l'ossido di deuterio per determinare la composizione corporea. Il metodo di diluizione dell'ossido di deuterio è una tecnica quantitativa ripetibile utilizzata per stimare la composizione corporea negli esseri umani, nella fauna selvatica e nelle specie domestiche. Inoltre, la tecnica di diluizione dell'ossido di deuterio può essere utilizzata per determinare il consumo di acqua di un singolo animale. Qui, descriviamo l'adattamento della tecnica di diluizione dell'ossido di deuterio per valutare la composizione corporea in grandi pipistrelli marroni (Eptesicus fuscus) e per valutare il consumo di acqua nei gatti (Felis catis).

La tecnica di diluizione dell'ossido di deuterio può essere utilizzata per valutare la composizione corporea di una varietà di specie. Per dimostrare l'adattabilità, stiamo segnalando il primo uso della tecnica di diluizione dell'ossido di deuterio in una specie di pipistrello insettivoro nordamericano, Eptesicus fuscus, il grande pipistrello marrone per risultati rappresentativi. Un altopiano di cronometraggio è stato completato premettendo campioni di sangue pre e post-inie...

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Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals

Questo articolo descrive la tecnica di diluizione dell'ossido di deuterio in due mammiferi, un insettivoro e carnivoro, per determinare l'acqua totale del corpo, la massa magra del corpo, la massa grassa del corpo e il consumo di acqua.

Utilizzo dell'ossido di deuterio come strumento non invasivo e non letale per valutare la composizione corporea e il consumo di acqua nei mammiferi

Body condition scoring systems and body condition indices are common techniques used for assessing the health status or fitness of a species. Body ...

Utilizzando questo protocollo, l'ossido di deuterio, o D2O, un isotopo non radioattivo e stabile dell'acqua, può essere utilizzato per stimare la composizione corporea e il consumo di acqua. Questa tecnica non è invasiva e quindi può essere utilizzata per valutare la composizione corporea nelle specie in via di estinzione, così come nell'uomo e nelle specie domestiche. Un'applicazione unica della tecnica di diluizione dell'ossido di deuterio è la capacità di misurare il consumo di acqua della fauna selvatica a libera gamma con alti tassi di ricattura o di animali ospitati socialmente.Sebbene l'anestesia non sia richiesta, potrebbe essere più facile per coloro che non hanno familiarità con l'iniezioni sottocutanee sedare gli animali prima di consegnare l'ossido di deuterio. A dimostrare la procedura con Me e Sarah Hooper ci saranno Amanda Eshelman e Ashley Cowan, studentesse veterinarie, e Alicia Roistacher, una studentessa laureata del mio laboratorio. Per fare una soluzione stock di 50 millilitri di nove grammi per litro di ossido di deuterio salinato, prima pesare 450 milligrammi di cloruro di sodio di grado farmaceutico e registrare la quantità esatta a quattro cifre decimali.Trasferire tutto il sale in un becher sterilizzato da 100 millilitri e misurare 50 grammi di ossido di deuterio maggiore o uguale al 99,8% in un cilindro sterile e graduato. Registrare l'esatta quantità di ossido di deuterio in quattro cifre decimali e trasferire l'ossido di deuterio al becher sterile del cloruro di sodio. Successivamente, attaccare un ago calibro 20 a un filtro a disco sterile non crirogenico con pori submicronico dotati di una canna da siringa da 10 millilitri e inserire l'ago nel setto di una fiala sterile, vuota, da 100 millilitri.Attaccare un tubo sottovuoto a un ago calibro 22 e inserire l'ago nel setto della fiala da 100 millilitri. Quindi caricare 10 millilitri di cloruro di sodio di forza isosmotica nella canna della siringa e accendere lentamente il vuoto fino a quando la soluzione di ossido di deuterio inizia a filtrare lentamente nel flaconcino. Continuare a versare la soluzione di ossido di deuterio nella canna della siringa fino a quando l'intero volume di 50 millilitri non è stato filtrato.Dopo aver confermato una mancanza di risposta al dito del piedi in un pipistrello anestetizzato, utilizzare un tampone di preparazione alcolica per pulire l'uropatagium sulla vena interfemorale e lasciare asciugare la membrana della coda disinfettata. Applicare un sottile strato di vaselina sulla vena interfemorale e utilizzare un ago calibro 29 per forare la porzione dorsale della vena interfemorale. Quindi utilizzare tubi capillari di eparina di sodio di plastica per raccogliere 100 microlitri di sangue.Per garantire un'adeguata miscelazione del sangue intero con l'eparina di sodio, arrotolare delicatamente ogni tubo dopo la raccolta del sangue prima dell'etichettatura. Dopo aver determinato la massa di ossido di deuterio in grammi da iniettare, caricare una siringa per insulina dotata di un ago calibro 29 con il volume appropriato di ossido di deuterio. Pesare la siringa e l'ago di insulina caricati dal deuterio, registrando il peso a quattro cifre decimali, e iniettare l'intero volume di ossido di deuterio per via sottocutanea sulla regione dorsale dell'anetitizzato.Si consiglia di utilizzare una bilancia di precisione con uno scudo antistatico e di assicurarsi di tirare indietro sullo stantuffo per garantire una pressione negativa prima dell'iniezione. Immediatamente dopo l'iniezione, pesare la siringa e l'ago di insulina ora vuoti e registrare il peso a quattro cifre decimali. Entro 30 minuti dalla raccolta post-sangue, utilizzare una centrifuga ematocrit per far girare ogni tubo capillare a 10.000 volte g per cinque minuti.Utilizzando forbici affilate, tagliare il tubo capillare di plastica tra tutto il sangue e il plasma e utilizzare una pipetta da 200 microliter per espellere il plasma direttamente in un tubo di stoccaggio etichettato da 500 microliter. Dopo il periodo di equilibrazione, raccogliere e conservare altri 100 microlitri di sangue dalla vena interfemorale come appena dimostrato. Per l'analisi della spettrofotometria FTIR, impostare la temperatura di un bagno di sabbia a 60 gradi Celsius per facilitare la distillazione e aggiungere 50 microlitri di ogni campione di plasma e standard in singoli tappi microcentrifuge conici da 1,5 millilitri.Tenendo il tappo microcentrifugo capovolto, avvitare il tubo microcentrifugo conico da 1,5 millilitri sul cappuccio e posizionare il tubo invertito a contatto con la sabbia nel bagno di sabbia per un minimo di 12 ore. La mattina seguente, posizionare un nuovo cappuccio pulito su ogni tubo e pulsare i tubi di microcentrifugo per 10 secondi in un microcentrifugo. Installare una cella di trasmissione liquida nello spettrometro FTIR e riempire la cella di metanolo.Collegare la porta di iniezione e riempire lentamente la cella con acqua di fondo rimuovendo accuratamente la siringa a metanolo per ridurre il rischio di bolle d'aria. Collegare i tubi alla porta di uscita per consentire la rimozione dei campioni dopo l'analisi e aprire il software dello spettrometro FTIR. Impostare i parametri in base alla tabella e raccogliere un campione di sfondo utilizzando l'acqua distillata filtrata filtrata da 0,22 micrometri.Iniettare 40 microlitri di zero parti per milione di ossido di deuterio standard e registrare e salvare gli spettri come file di valori separati da virgole. Dopo aver iniettato e salvato gli spettri di tutti gli standard per creare una curva standard, iniettare 40 microlitri di ogni campione distillato nella cella di trasmissione del liquido e salvare gli spettri. Con un tempo di equilibrazione noto, è possibile determinare l'acqua corporea totale, la massa corporea magra e la massa grassa corporea per i grandi pipistrelli marroni catturati allo stato selvatico e i grandi pipistrelli marroni in cattività.Una massa grassa corporea negativa può essere calcolata a causa di uno o più dei seguenti motivi:non ricevere l'intera dose di ossido di deuterio, diventare torpido durante la fase di equilibrazione, avere masse grasse anormalmente grandi e masse magre minime, o avere meno del tre-5% di grasso corporeo come determinato dalla doppia absorptiometria a raggi X. Qui, viene mostrata una percentuale rappresentativa di grasso corporeo determinata dalla tecnica di diluizione dell'ossido di deuterio rispetto alla doppia absorptiometria a raggi X. Le due tecniche sono ben correlate, con la massa grassa corporea che mostra forti correlazioni tra il grasso corporeo e il peso corporeo e con la tecnica di diluizione dell'ossido di deuterio non costantemente sopra o sottovalutando la massa grassa corporea.Il metodo di diluizione dell'ossido di deuterio è stato precedentemente convalidato nei gatti e la tecnica è stata adattata per consentire la misurazione del consumo giornaliero di acqua dei gatti ospitati socialmente durante ogni blocco dietetico dell'esperimento. Ricorda che questa tecnica dovrebbe essere eseguita solo su animali sani e che dovresti pesare, registrare e consegnare accuratamente la dose completa di ossido di deuterio a ogni animale. Un metodo secondario per determinare la composizione corporea, come l'analisi completa della carcassa o LASSA, può essere completato per convalidare la tecnica dell'ossido di deuterio.Questa tecnica ci ha permesso di identificare un gatto socialmente ospitato che consumava quantità di acqua anormalmente elevate senza separare ogni gatto per misurare il loro consumo di acqua.

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Studying co-evolution of hydrological and biogeochemical processes in the subsurface of natural landscapes can enhance the understanding of coupled ...

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

Lo screening per Endocrine attività in acqua mediante disponibili in commercio<em&gt; In Vitro</em&gt; Transattivazione Bioassays

In vitro transactivation bioassays have shown promise as water quality monitoring tools, however their adoption and widespread application has been ...

Protocol for Assessing the Relative Effects of Environment and Genetics on Antler and Body Growth for a Long-lived Cervid

Protocollo per la valutazione degli effetti relativi di ambiente e genetica sulla Antler e la crescita del corpo per un cervide longevo

Cervid phenotype can be placed into one of two categories: efficiency, which promotes survival over extravagant morphometric growth, and luxury, which ...

Composition and Properties of Aquafaba: Water Recovered from Commercially Canned Chickpeas

Composizione e proprietà dei Aquafaba: acqua recuperata da ceci commercialmente in scatola

Chickpea and other pulses are commonly sold as canned products packed in a thick solution or a brine. This solution has recently been shown to produce ...

A Simple Planting Technique for Re-establishing Trees Where Frequent Inundation Occurs

Una semplice tecnica di impianto per ristabilire gli alberi dove si verifica frequente Inundation

Many of the Everglades tree islands have lost elevation over the past century and most of their trees have died such that they are now covered with ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Procedura ottimizzata per determinare l'adsorbimento di fosfonati su idrossido ferrico granulare utilizzando un metodo di determinazione del fosforo miniaturizzato

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...