Name: using deuterium oxide as a non-invasive, non-lethal tool for assessing body composition and water consumption in mammals
Uploaded: 2020-02-20T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals at JoVE.com

Esta pesquisa foi apoiada pelo MDC Cooperative Agreement (#416), Us Forest Service Cooperative Agreement (16-JV-11242311-118), Academia Americana de Nutrição Veterinária e Waltham/Royal Canin, USA Grant (número de subvenção: 00049049), subsídio de treinamento do NIH (número de subvenção: T32OS011126) e o Programa de Estudiosos de Pesquisa Veterinária da Universidade do Missouri. Os autores agradecem a Shannon Ehlers por pré-revisar este manuscrito. Agradecemos ao Dr. Robert Backus por fornecer os padrões D2O e permitir o uso de seu laboratório.

Todos os experimentos aqui descritos foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade do Missouri e conduzidos a permissão de coleta científica do Departamento de Conservação da Vida Selvagem (MDC) do Missouri (Permit #16409 e #17649).
1. Preparação da solução de estoque estéril, isotônica, salinada D2O
<ol><li>Faça uma solução de estoque de 50 mL de 9,0 g/L salinado D2O.<ol>
<li>Pesar 450 mg de NaCl de grau farmacêutico e transfer...

<ol>
	<li>Schiffmann, C., Clauss, M., Hoby, S., Hatt, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+body+condition+scoring+in+zoo+animals+&#8211;+composite,+algorithm+and+overview+approaches.">Visual body condition scoring in zoo animals &#8211; composite, algorithm and overview approaches.</a> Journal of Zoo Aquarium Research. 5 (1), (2017).</li><li>Peig, J., Green, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+perspectives+for+estimating+body+condition+from+mass/length+data:+the+scaled+mass+index+as+an+alternative+method.">New perspectives for estimating body condition from mass/length data: the scaled mass index as an alternative method.</a> Oikos. 118 (12), 1883-1891 (2009).</li><li>Bissell, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Body Condition Scoring Resource Center. , (2017).</li><li>McWilliams, S. R., Whitman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-destructive+techniques+to+assess+body+composition+of+birds:+a+review+and+validation+study.">Non-destructive techniques to assess body composition of birds: a review and validation study.</a> Journal of Ornithology. 154 (3), 597-618 (2013).</li><li>Lukaski, H. C., Johnson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+inexpensive+method+of+determining+total+body+water+using+a+tracer+dose+of+D2O+and+infrared+absorption+of+biological+fluids.">A simple, inexpensive method of determining total body water using a tracer dose of D2O and infrared absorption of biological fluids.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 41 (2), 363-370 (1985).</li><li>Chusyd, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiposity+and+Reproductive+Cycling+Status+in+Zoo+African+Elephants.">Adiposity and Reproductive Cycling Status in Zoo African Elephants.</a> Obesity (Silver Spring). 26 (1), 103-110 (2018).</li><li>Kanchuk, M. L., Backus, R. C., Calvert, C. C., Morris, J. G., Rogers, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutering+Induces+Changes+in+Food+Intake+Body+Weight,+Plasma+Insulin+and+Leptin+Concentrations+in+Normal+and+Lipoprotein+Lipase&#8211;Deficient+Male+Cats.">Neutering Induces Changes in Food Intake Body Weight, Plasma Insulin and Leptin Concentrations in Normal and Lipoprotein Lipase&#8211;Deficient Male Cats.</a> The Journal of Nutrition. 132 (6), 1730S-1732S (2002).</li><li>Eichhorn, G., Visser, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+Comment:+Evaluation+of+the+Deuterium+Dilution+Method+to+Estimate+Body+Composition+in+the+Barnacle+Goose:+Accuracy+and+Minimum+Equilibration+Time.">Technical Comment: Evaluation of the Deuterium Dilution Method to Estimate Body Composition in the Barnacle Goose: Accuracy and Minimum Equilibration Time.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 81 (4), 508-518 (2008).</li><li>Hooper, S. E., Backus, R., Amelon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+dietary+selenium+and+moisture+on+the+physical+activity+and+thyroid+axis+of+cats.">Effects of dietary selenium and moisture on the physical activity and thyroid axis of cats.</a> Journal of Animal Physiolgy and Animal Nutrition (Berl). 102 (2), 495-504 (2018).</li><li>Stevenson, K. T., van Tets, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-Energy+X-Ray+Absorptiometry+(DXA)+Can+Accurately+and+Nondestructively+Measure+the+Body+Composition+of+Small,+Free-Living+Rodents.">Dual-Energy X-Ray Absorptiometry (DXA) Can Accurately and Nondestructively Measure the Body Composition of Small, Free-Living Rodents.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 81 (3), 373-382 (2008).</li><li>Jennings, G., Bluck, L., Wright, A., Elia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+infrared+spectrophotometry+for+measuring+body+water+spaces.">The use of infrared spectrophotometry for measuring body water spaces.</a> Clinical Chemistry. 45 (7), 1077-1081 (1999).</li><li>Beuth, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Body Composition, movemement phenology and habitat use of common eider along the southern new england coast. Master of Science in Biological and Environmental Sciences (MSBES) thesis. , (2013).</li><li>Coplen, T. B., Hopple, J., Peiser, H., Rieder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compilation+of+minimum+and+maximum+isotope+ratios+of+selected+elements+in+naturally+occurring+terrestrial+materials+and+reagents.">Compilation of minimum and maximum isotope ratios of selected elements in naturally occurring terrestrial materials and reagents.</a> U.S. Geological Survey Water-Resources Investigations Report 01-4222. , (2002).</li><li>Karasov, W. H., Pinshow, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+lean+mass+and+in+organs+of+nutrient+assimilation+in+a+long-distance+passerine+migrant+at+a+springtime+stopover+site.">Changes in lean mass and in organs of nutrient assimilation in a long-distance passerine migrant at a springtime stopover site.</a> Physiological Zoology. 71 (4), 435-448 (1998).</li><li>Hood, W. R., Oftedal, O. T., Kunz, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+body+composition+of+female+big+brown+bats+(Eptesicus+fuscus.)+during+lactation.">Variation in body composition of female big brown bats (Eptesicus fuscus.) during lactation.</a> Journal of Comparative Physiology B. 176 (8), 807-819 (2006).</li><li>Backus, R. C., Havel, P. J., Gingerich, R. L., Rogers, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+serum+leptin+immunoreactivity+and+body+fat+mass+as+estimated+by+use+of+a+novel+gas-phase+Fourier+transform+infrared+spectroscopy+deuterium+dilution+method+in+cats.">Relationship between serum leptin immunoreactivity and body fat mass as estimated by use of a novel gas-phase Fourier transform infrared spectroscopy deuterium dilution method in cats.</a> American Journal of Veterinary Research. 61 (7), 796-801 (2000).</li><li>Moore, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Total+Body+Water+and+Solids+with+Isotopes.">Determination of Total Body Water and Solids with Isotopes.</a> Science. 104 (2694), 157-160 (1946).</li><li>Voigt, C., Cruz-Neto, A., Parsons, S., Kunz, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ecological and Behavioral Methods in the Study of Bats. , 621-645 (2009).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Assessment of Body Composition and Total Energy Expenditure in Humans Using Stable Isotope Techniques. , (2009).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Body Composition Assessment Using the Deuterium Dilution Technique with Analysis of Saliva Samples by Fourier Transform Infrared Spectrometry. , (2011).</li><li>Shimamoto, H., Komiya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Turnover+of+Body+Water+as+an+Indicator+of+Health.">The Turnover of Body Water as an Indicator of Health.</a> Journal of Physiological Anthropology and Applied Human Science. 19 (5), 207-212 (2000).</li></ol>

O uso de óxido de deutério para determinar a TBW tem sido usado desde a década de 1940e é usado em humanos e uma variedade de espécies domésticas e da vida selvagem4,6,7. Outras técnicas não destrutivas foram desenvolvidas, incluindo análise de impedância bioelétrica (BIA), DXA e ressonância magnética quantitativa (RQ). Cada método tem vantagens e desvantagens que devem ser consideradas ante...

Sistemas de pontuação de condições corporais e índices de condição corporal são técnicas comuns utilizadas para avaliar o estado de saúde ou aptidão de uma espécie1,2. Muitas espécies domésticas e zoológicas possuem sistemas únicos de pontuação de condição corporal (BCS) que são usados para avaliar o tecido gorduroso muscular e superficial de um animal3. No entanto, a avaliação do BCS depende do avaliador — o que significa que o BCS é uma medida objetiva ou semiquantitativa quando avaliada por um avaliador treinado. Em espécies de animais selvagens, os índices de condição corporal são comumente usados em vez de BCS e são baseados em uma proporção de massa corporal ao tamanho do corpo ou massa corporal ao antebraço2. Os índices de condição corporal são muitas vezes confundidos com os efeitos da forrageamento e podem ser confundidos pelo tamanho do corpo, bem como problemas estatísticos e inferenciais4.
Uma alternativa aos sistemas de pontuação de condições corporais e índices de condição corporal é usar um isótopo estável para determinar a composição corporal. Um isótopo estável comumente usado é o óxido de deutério (D2O), uma forma não radioativa de água na qual os átomos de hidrogênio são isótopos de deutério. O método de diluição de óxido de deutério descrito neste estudo pode ser uma técnica não subjetiva, quantitativa e repetitiva usada para estimar a composição corporal em humanos5 e uma ampla gama de espécies4,6,7. Essa técnica pode ser vantajosa para estudar a composição corporal na vida selvagem. Por exemplo, pode ser usado para avaliar mudanças longitudinalnais na composição corporal, como antes e depois de uma ação de gestão. No entanto, em algumas espécies de animais selvagens o óxido de deutério pode superestimar o teor real de água8. Portanto, ao adaptar a técnica para uma espécie, é importante validar o método comparando o método de óxido de deutério à análise de carcaças para espécies não ameaçadas de extinção. Para espécies ameaçadas e ameaçadas, um método não destrutivo, como a absorção de raios-X duplo (DXA), deve ser considerado como um método alternativo de comparação ao método destrutivo padrão-ouro da análise completa da carcaça.
Além da composição corporal, a técnica d2O de diluição pode ser usada para determinar o consumo de água de um animal individual9. Essa aplicação única de D2O pode ser usada para responder não apenas perguntas de pesquisa, mas pode ser útil para avaliar o consumo de água de animais individuais abrigados em grandes ambientes sociais.
Aqui, descrevemos a adaptação da técnica de diluição D2O para avaliar a composição corporal em um insetoivore, grandesmorcegos marrons ( Eptesicus fuscus), e para avaliar o consumo de água em um carnívoro, gatos (Felis catis).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 micron non-pyrogenic disk filter</td>
			<td>Argos Technologies</td>
			<td>FN32S</td>
			<td>nylon, 30mm diameter, 0.22um, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL conical microcentrifuge tubes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1415-9701</td>
			<td>1.5 ml self-standing microcentrifuge tube, natural with blue cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL sterile glass vial for injection</td>
			<td>Mountainside Medical Equipment</td>
			<td>MS-SEV10</td>
			<td>clear, sterile glass injection unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305219</td>
			<td>sterile 10 mL syringe individually wrapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mL sterile glass vial for injection</td>
			<td>Mountainside Medical Equipment</td>
			<td>AL-SV10020</td>
			<td>clear, sterile glass injection unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 gauge needle</td>
			<td>Exel</td>
			<td>26417</td>
			<td>needles hypodermic 20g x 1&#34; plastic hub (yellow) / regular bevel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 gauge needle</td>
			<td>Exel</td>
			<td>26411</td>
			<td>needles hypodermic 22g x 1&#34; plastic hub (black) / regular bevel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>deuterium oxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>151882-25G</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isofluorane</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>3060</td>
			<td>fluriso isoflurane, USP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OMNIC Spectra Software</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>833-036200</td>
			<td>FT-IR standard software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petroleum jelly</td>
			<td>Vaseline</td>
			<td>305212311006</td>
			<td>Vaseline, 100% pure petroleum jelly, original, skin protectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic capillary tubes</td>
			<td>Innovative Med Tech</td>
			<td>100050</td>
			<td>sodium heparin anticoagulant, 50 &#956;L capacity, 30 mm length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sealed liquid spectrophotometer SL-3 FTIR CAF2 Cell</td>
			<td>International Crystal Laboratory</td>
			<td>0005D-875</td>
			<td>0.05 mm Pathlength</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium chloride</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.37017</td>
			<td>suitable for biopharmaceutical production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Electron Nicolet 380 FT-IR Spectrometer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269-169400</td>
			<td>discontinued model, newer models available</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using deuterium oxide as a non-invasive, non-lethal tool for assessing body composition and water consumption in mammals

Sistemas de pontuação de condições corporais e índices de condição corporal são técnicas comuns utilizadas para avaliar o estado de saúde ou aptidão de uma espécie. Os sistemas de pontuação de condições corporais são dependentes e têm potencial para serem altamente subjetivos. Os índices de condição corporal podem ser confundidos com forrageamento, os efeitos do peso corporal, bem como problemas estatísticos e inferenciais. Uma alternativa aos sistemas de pontuação de condição corporal e índices de condição corporal é usar um isótopo estável, como óxido de deutério para determinar a composição corporal. O método de diluição de óxido de deutério é uma técnica quantitativa repetível usada para estimar a composição corporal em humanos, vida selvagem e espécies domésticas. Além disso, a técnica de diluição de óxido de deutério pode ser usada para determinar o consumo de água de um animal individual. Aqui, descrevemos a adaptação da técnica de diluição de óxido de deutério para avaliação da composição corporal em morcegos marrons grandes (Eptesicus fuscus) e para avaliar o consumo de água em gatos (Felis catis).

A técnica de diluição de óxido de deutério pode ser usada para avaliar a composição corporal de uma variedade de espécies. Para demonstrar a adaptabilidade, estamos relatando o primeiro uso da técnica de diluição de óxido de deutério em uma espécie de morcego insetívoro norte-americano, Eptesicus fuscus,o grande morcego marrom para resultados representativos. Um platô de cronometragem foi concluído tomando amostras de sangue de injeção pré e pós-D2...

Watch this Scientific Journal Video about Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals at JoVE.com

Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals

Este artigo descreve a técnica de diluição de óxido de deutério em dois mamíferos, um insetívoro e carnívoro, para determinar a água total do corpo, a massa corporal magra, a massa de gordura corporal e o consumo de água.

Usando óxido de utério como ferramenta não invasiva e não letal para avaliar composição corporal e consumo de água em mamíferos

Body condition scoring systems and body condition indices are common techniques used for assessing the health status or fitness of a species. Body ...

Usando este protocolo, óxido de deutério, ou D2O, um isótopo nãoradiotivo e estável da água, pode ser usado para estimar a composição corporal e o consumo de água. Esta técnica não é invasiva e, portanto, pode ser usada para avaliar a composição corporal em espécies ameaçadas de extinção, bem como em seres humanos e espécies domésticas. Uma aplicação única da técnica de diluição de óxido de deutério é a capacidade de medir o consumo de água de animais selvagens de alcance livre com altas taxas de recaptura ou de animais socialmente alojados.Embora a anestesia não seja necessária, pode ser mais fácil para aqueles que não estão familiarizados com a injeções subcutâneas sedarem os animais antes de entregar o óxido de deutério. Demonstrando o procedimento com Sarah Hooper e eu estarão Amanda Eshelman e Ashley Cowan, estudantes de veterinária, e Alicia Roistacher, uma estudante de pós-graduação do meu laboratório. Para fazer uma solução de estoque de 50 mililitros de nove gramas por litro de óxido de deutério saliado, primeiro pesar 450 miligramas de cloreto de sódio de grau farmacêutico, e registrar a quantidade exata em quatro locais decimais.Transfira todo o sal para um béquer esterilizado de 100 mililitros e meça 50 gramas de óxido de óxido de 99,8% de deutério em um cilindro estéril e graduado. Registre a quantidade exata de óxido de deutério para quatro locais decimais, e transfira o óxido de deutério para o béquer estéril de cloreto de sódio. Em seguida, conecte uma agulha de 20 bitolas a um filtro de disco não estéril e não estéril com poros de submicron equipado com um barril de seringa de 10 mililitros, e insira a agulha no septo de um frasco estéril, vazio, de 100 mililitros.Conecte um tubo de vácuo a uma agulha de calibre 22 e insira a agulha no septo do frasco de 100 mililitros. Em seguida, carregue 10 mililitros de cloreto de sódio de resistência isomótica no barril de seringa, e lentamente ligue o vácuo até que a solução de óxido de deutério comece a filtrar lentamente no frasco. Continue despejando a solução de estoque de óxido de deutério no barril de seringa até que todo o volume de 50 mililitros tenha sido filtrado.Depois de confirmar a falta de resposta ao aperto do dedo do dedo em um morcego anestesiado, use uma almofada de preparação de álcool para limpar o uropatagium sobre a veia interfemoral, e permitir que a membrana da cauda desinfetada seque. Aplique uma fina camada de geleia de petróleo sobre a veia interfemoral, e use uma agulha de calibre 29 para perfurar a porção dorsal da veia interfemoral. Em seguida, use tubos capilares de heparina de sódio de plástico para coletar 100 microliters de sangue.Para garantir uma mistura adequada de todo o sangue com a heparina de sódio, role suavemente cada tubo após a coleta de sangue antes de rotular. Depois de determinar a massa de óxido de deutério em gramas para injetar, carregue uma seringa de insulina equipada com uma agulha de calibre 29 com o volume apropriado de óxido de deutério. Pesar a seringa e agulha de insulina carregada de deutério, registrando o peso em quatro locais decimais, e injetar todo o volume de óxido de deutério subcutâneamente sobre a região dorsal do quadril do morcego anestesiado.Recomendamos o uso de uma balança de precisão com um escudo de rascunho antiestático e para ter certeza de puxar para trás no êmbolo para garantir pressão negativa antes da injeção. Imediatamente após a injeção, pese a seringa de insulina e agulha agora vazias, e regise o peso em quatro casas decimais. Dentro de 30 minutos após a coleta de sangue, use uma centrífuga hematócrito para girar cada tubo capilar a 10.000 vezes g por cinco minutos.Usando uma tesoura afiada, corte o tubo capilar de plástico entre todo o sangue e o plasma, e use uma pipeta de 200 microliter para expelir o plasma diretamente em um tubo de armazenamento rotulado de 500 microliter. Após o período de equilíbrio, colete e armazene outros 100 microliters de sangue da veia interfemoral como apenas demonstrado. Para análise de espectrofotometria FTIR, defina a temperatura de um banho de areia para 60 graus Celsius para facilitar a destilação, e adicione 50 microliters de cada amostra de plasma e padrão em tampas de microcentrifuge cônicas individuais de 1,5 mililitro.Mantendo a tampa de microcentrifuge de cabeça para baixo, enrosque o tubo de microcentrifutura cônica de 1,5 mililitro na tampa e coloque o tubo invertido em contato com a areia no banho de areia por um mínimo de 12 horas. Na manhã seguinte, coloque uma nova tampa limpa em cada tubo, e pulso os tubos de microcentrifuuge por 10 segundos em um microcentrifuuge. Instale uma célula de transmissão líquida no espectrômetro FTIR e encha a célula com metanol.Conecte a porta de injeção e encha lentamente a célula com água de fundo, removendo cuidadosamente a seringa de metanol para reduzir o risco de bolhas de ar. Anexar tubos à porta de saída para permitir a remoção das amostras após a análise e abrir o software do espectrômetro FTIR. Defina os parâmetros de acordo com a tabela e colete uma amostra de fundo usando a água diluída, filtrada de 0,22 micrômetros.Injete 40 microliters de um padrão de óxido de uterium zero por milhão de óxido de deutério, e regissira e salve o espectro como um arquivo de valores separados por ímã. Depois de injetar e salvar os espectros de todos os padrões para criar uma curva padrão, injete 40 microliters de cada amostra destilada na célula de transmissão líquida e salve o espectro. Com um tempo de equilíbrio conhecido, a água total do corpo, a massa magra do corpo e a massa de gordura corporal para morcegos marrons grandes e grandes morcegos marrons podem ser determinados.Uma massa de gordura corporal negativa pode ser calculada devido a uma ou mais das seguintes razões: não receber toda a dose de óxido de deutério, tornar-se toróide durante a fase de equilíbrio, ter massas de gordura anormalmente grandes e massas magras mínimas, ou ter menos de três a 5% de gordura corporal, conforme determinado pela absorptiometria de raios-X duplo. Aqui, mostra-se uma porcentagem representativa da gordura corporal determinada pela técnica de diluição do óxido de deutério em comparação com a absorptiometria de raios-X duplo. As duas técnicas estão bem correlacionadas, com a massa de gordura corporal mostrando fortes correlações entre a gordura corporal e o peso corporal e com a técnica de diluição de óxido de deuterium não consistentemente sobre ou subestimando a massa de gordura corporal.O método de diluição de óxido de deutério foi previamente validado em gatos, e a técnica foi adaptada para permitir a medição do consumo diário de água de gatos socialmente alojados durante cada bloco dietético do experimento. Lembre-se que esta técnica deve ser realizada apenas em animais saudáveis e que você deve pesar, registrar e entregar com precisão a dose completa de óxido de deutério para cada animal. Um método secundário para determinar a composição corporal, como análise completa da carcaça ou DEXA, pode ser concluído para validar a técnica de óxido de deutério.Essa técnica nos permitiu identificar um gato socialmente alojado que consumia quantidades anormalmente altas de água sem separar cada gato para medir seus consumos de água.

Research

JoVE Journal

Environment

Laboratory-determined Phosphorus Flux from Lake Sediments as a Measure of Internal Phosphorus Loading

Determinados pelo Laboratório Fósforo Flux do Lago Sedimentos como medida de Fósforo Interno Carregando

Eutrophication is a water quality issue in lakes worldwide, and there is a critical need to identify and control nutrient sources. Internal phosphorus (P) ...

Ambiente

Use of Chironomidae (Diptera) Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

Use of Chironomidae Diptera Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

Uso de Chironomidae (Diptera) Pupal Exuviae como um Bioavaliação Protocolo Rápido para massas de água de superfície flutuante

Rapid bioassessment protocols using benthic macroinvertebrate assemblages have been successfully used to assess human impacts on water quality. ...

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. Part III. Virus Detection by RT-qPCR

EPA Método 1615. Medição de Enterovirus e Norovirus Ocorrência na água por cultura e RT-qPCR. Parte III. Detecção de vírus por RT-qPCR

EPA Method 1615 measures enteroviruses and noroviruses present in environmental and drinking waters. This method was developed with the goal of having a ...

Removal of Trace Elements by Cupric Oxide Nanoparticles from Uranium In Situ Recovery Bleed Water and Its Effect on Cell Viability

Removal of Trace Elements by Cupric Oxide Nanoparticles from Uranium In Situ Recovery Bleed Water and Its Effect on Cell Viability

A remoção do Trace Elements por Óxido de Cupric nanopartículas de urânio<em&gt; In Situ</em&gt; Recuperação sangro água e seu efeito na viabilidade celular

In situ recovery (ISR) is the predominant method of uranium extraction in the United States. During ISR, uranium is leached from an ore body and extracted ...

Soil Lysimeter Excavation for Coupled Hydrological, Geochemical, and Microbiological Investigations

Monólito escavação para Coupled Hidrológicos, geoquímicos e microbiológicos Investigações

Studying co-evolution of hydrological and biogeochemical processes in the subsurface of natural landscapes can enhance the understanding of coupled ...

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

Triagem para Endocrine Atividade em Água Utilizando disponíveis comercialmente<em&gt; In Vitro</em&gt; Transativação Bioensaios

In vitro transactivation bioassays have shown promise as water quality monitoring tools, however their adoption and widespread application has been ...

Protocol for Assessing the Relative Effects of Environment and Genetics on Antler and Body Growth for a Long-lived Cervid

Protocolo para avaliar os efeitos relativos do ambiente e da genética na galhada e no crescimento corporal de um cervídeo de vida longa

Cervid phenotype can be placed into one of two categories: efficiency, which promotes survival over extravagant morphometric growth, and luxury, which ...

Composition and Properties of Aquafaba: Water Recovered from Commercially Canned Chickpeas

Composição e propriedades de Aquafaba: água recuperada de grão de bico enlatado comercialmente

Chickpea and other pulses are commonly sold as canned products packed in a thick solution or a brine. This solution has recently been shown to produce ...

A Simple Planting Technique for Re-establishing Trees Where Frequent Inundation Occurs

Uma simples técnica de plantação para restabelecer as árvores onde ocorre a inundação frequente

Many of the Everglades tree islands have lost elevation over the past century and most of their trees have died such that they are now covered with ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Procedimento otimizado para determinar a adsorção de fosfonatos para Granular hidróxido férrico, usando um método de determinação de fósforo miniaturizado

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...