Name: using deuterium oxide as a non-invasive, non-lethal tool for assessing body composition and water consumption in mammals
Uploaded: 2020-02-20T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals at JoVE.com

Esta investigación fue apoyada por el Acuerdo Cooperativo MDC (#416), el Acuerdo Cooperativo de Servicio Forestal de los Estados Unidos (16-JV-11242311-118), la Academia Americana de Nutrición Veterinaria y Waltham/Royal Canin, LA Subvención de los Estados Unidos (número de subvención: 00049049), la beca de capacitación NIH (número de subvención: T32OS011126) y el Programa de Estudios Otoros de Investigación Veterinaria de la Universidad de Missouri. Los autores agradecen a Shannon Ehlers por pre-revisar este manuscrito. Agradecemos al Dr. Robert Backus por proporcionar las normas D2O y permitir el uso de su laboratorio.

Todos los experimentos descritos aquí fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Missouri y llevados a cabo bajo el #17649 #16409 permiso de Colección Científica de Vida Silvestre del Departamento de Conservación de Missouri (MDC, por sus).
1. Preparación de solución estéril, isotónica y salinizada D2O
<ol><li>Haga una solución de stock de 50 ml de 9,0 g/L salinizado D2O.<ol>
<li>Pesar 450 mg de NaCl de grado farmacéutico...

<ol>
	<li>Schiffmann, C., Clauss, M., Hoby, S., Hatt, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+body+condition+scoring+in+zoo+animals+&#8211;+composite,+algorithm+and+overview+approaches.">Visual body condition scoring in zoo animals &#8211; composite, algorithm and overview approaches.</a> Journal of Zoo Aquarium Research. 5 (1), (2017).</li><li>Peig, J., Green, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+perspectives+for+estimating+body+condition+from+mass/length+data:+the+scaled+mass+index+as+an+alternative+method.">New perspectives for estimating body condition from mass/length data: the scaled mass index as an alternative method.</a> Oikos. 118 (12), 1883-1891 (2009).</li><li>Bissell, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Body Condition Scoring Resource Center. , (2017).</li><li>McWilliams, S. R., Whitman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-destructive+techniques+to+assess+body+composition+of+birds:+a+review+and+validation+study.">Non-destructive techniques to assess body composition of birds: a review and validation study.</a> Journal of Ornithology. 154 (3), 597-618 (2013).</li><li>Lukaski, H. C., Johnson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+inexpensive+method+of+determining+total+body+water+using+a+tracer+dose+of+D2O+and+infrared+absorption+of+biological+fluids.">A simple, inexpensive method of determining total body water using a tracer dose of D2O and infrared absorption of biological fluids.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 41 (2), 363-370 (1985).</li><li>Chusyd, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiposity+and+Reproductive+Cycling+Status+in+Zoo+African+Elephants.">Adiposity and Reproductive Cycling Status in Zoo African Elephants.</a> Obesity (Silver Spring). 26 (1), 103-110 (2018).</li><li>Kanchuk, M. L., Backus, R. C., Calvert, C. C., Morris, J. G., Rogers, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutering+Induces+Changes+in+Food+Intake+Body+Weight,+Plasma+Insulin+and+Leptin+Concentrations+in+Normal+and+Lipoprotein+Lipase&#8211;Deficient+Male+Cats.">Neutering Induces Changes in Food Intake Body Weight, Plasma Insulin and Leptin Concentrations in Normal and Lipoprotein Lipase&#8211;Deficient Male Cats.</a> The Journal of Nutrition. 132 (6), 1730S-1732S (2002).</li><li>Eichhorn, G., Visser, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+Comment:+Evaluation+of+the+Deuterium+Dilution+Method+to+Estimate+Body+Composition+in+the+Barnacle+Goose:+Accuracy+and+Minimum+Equilibration+Time.">Technical Comment: Evaluation of the Deuterium Dilution Method to Estimate Body Composition in the Barnacle Goose: Accuracy and Minimum Equilibration Time.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 81 (4), 508-518 (2008).</li><li>Hooper, S. E., Backus, R., Amelon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+dietary+selenium+and+moisture+on+the+physical+activity+and+thyroid+axis+of+cats.">Effects of dietary selenium and moisture on the physical activity and thyroid axis of cats.</a> Journal of Animal Physiolgy and Animal Nutrition (Berl). 102 (2), 495-504 (2018).</li><li>Stevenson, K. T., van Tets, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-Energy+X-Ray+Absorptiometry+(DXA)+Can+Accurately+and+Nondestructively+Measure+the+Body+Composition+of+Small,+Free-Living+Rodents.">Dual-Energy X-Ray Absorptiometry (DXA) Can Accurately and Nondestructively Measure the Body Composition of Small, Free-Living Rodents.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 81 (3), 373-382 (2008).</li><li>Jennings, G., Bluck, L., Wright, A., Elia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+infrared+spectrophotometry+for+measuring+body+water+spaces.">The use of infrared spectrophotometry for measuring body water spaces.</a> Clinical Chemistry. 45 (7), 1077-1081 (1999).</li><li>Beuth, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Body Composition, movemement phenology and habitat use of common eider along the southern new england coast. Master of Science in Biological and Environmental Sciences (MSBES) thesis. , (2013).</li><li>Coplen, T. B., Hopple, J., Peiser, H., Rieder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compilation+of+minimum+and+maximum+isotope+ratios+of+selected+elements+in+naturally+occurring+terrestrial+materials+and+reagents.">Compilation of minimum and maximum isotope ratios of selected elements in naturally occurring terrestrial materials and reagents.</a> U.S. Geological Survey Water-Resources Investigations Report 01-4222. , (2002).</li><li>Karasov, W. H., Pinshow, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+lean+mass+and+in+organs+of+nutrient+assimilation+in+a+long-distance+passerine+migrant+at+a+springtime+stopover+site.">Changes in lean mass and in organs of nutrient assimilation in a long-distance passerine migrant at a springtime stopover site.</a> Physiological Zoology. 71 (4), 435-448 (1998).</li><li>Hood, W. R., Oftedal, O. T., Kunz, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+body+composition+of+female+big+brown+bats+(Eptesicus+fuscus.)+during+lactation.">Variation in body composition of female big brown bats (Eptesicus fuscus.) during lactation.</a> Journal of Comparative Physiology B. 176 (8), 807-819 (2006).</li><li>Backus, R. C., Havel, P. J., Gingerich, R. L., Rogers, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+serum+leptin+immunoreactivity+and+body+fat+mass+as+estimated+by+use+of+a+novel+gas-phase+Fourier+transform+infrared+spectroscopy+deuterium+dilution+method+in+cats.">Relationship between serum leptin immunoreactivity and body fat mass as estimated by use of a novel gas-phase Fourier transform infrared spectroscopy deuterium dilution method in cats.</a> American Journal of Veterinary Research. 61 (7), 796-801 (2000).</li><li>Moore, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Total+Body+Water+and+Solids+with+Isotopes.">Determination of Total Body Water and Solids with Isotopes.</a> Science. 104 (2694), 157-160 (1946).</li><li>Voigt, C., Cruz-Neto, A., Parsons, S., Kunz, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ecological and Behavioral Methods in the Study of Bats. , 621-645 (2009).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Assessment of Body Composition and Total Energy Expenditure in Humans Using Stable Isotope Techniques. , (2009).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Body Composition Assessment Using the Deuterium Dilution Technique with Analysis of Saliva Samples by Fourier Transform Infrared Spectrometry. , (2011).</li><li>Shimamoto, H., Komiya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Turnover+of+Body+Water+as+an+Indicator+of+Health.">The Turnover of Body Water as an Indicator of Health.</a> Journal of Physiological Anthropology and Applied Human Science. 19 (5), 207-212 (2000).</li></ol>

El uso de óxido de deuterio para determinar TBW se ha utilizado desde la década de 194017 y se utiliza en los seres humanos y una variedad de especies domésticas y de vida silvestre4,6,7. Se han desarrollado otras técnicas no destructivas, como el análisis de impedancia bioeléctrica (BIA), DXA y la resonancia magnética cuantitativa (QMR). Cada método tiene ventajas y desventajas que deben tenerse ...

Los sistemas de puntuación de condición corporal y los índices de condición corporal son técnicas comunes utilizadas para evaluar el estado de salud o la aptitud de una especie1,2. Muchas especies domésticas y zoológicas tienen sistemas únicos de puntuación de condición corporal (BCS) que se utilizan para evaluar el músculo de un animal y el tejido graso superficial3. Sin embargo, la evaluación de BCS se basa en el evaluador, lo que significa que el BCS es una medida objetiva o semicuantitativa cuando es evaluada por un evaluador capacitado. En las especies de vida silvestre, los índices de condición corporal se utilizan comúnmente en lugar de BCS y se basan en una proporción de masa corporal al tamaño del cuerpo o masa corporal al antebrazo2. Condición del cuerpo indicis son a menudo confundidos por los efectos de la forrajeo y pueden ser confundidos por el tamaño del cuerpo, así como los problemas estadísticos e inferenciales4.
Una alternativa a los sistemas de puntuación de condición corporal y los índices de condición corporal es utilizar un isótopo estable para determinar la composición corporal. Un isótopo estable comúnmente utilizado es el óxido de deuterio (D2O), una forma no radiactiva de agua en la que los átomos de hidrógeno son isótopos de deuterio. El método de dilución de óxido de deuterio descrito en este estudio puede ser una técnica no subjetiva, cuantitativa y repetible utilizada para estimar la composición corporal en humanos5 y una amplia gama de especies4,6,7. Esta técnica puede ser ventajosa para estudiar la composición corporal en la vida silvestre. Por ejemplo, se puede utilizar para evaluar los cambios longitudinales en la composición corporal, como antes y después de una acción de gestión. Sin embargo, en algunas especies de vida silvestre el óxido de deuterio puede sobreestimar el contenido real de agua8. Por lo tanto, al adaptar la técnica para una especie, es importante validar el método comparando el método de óxido de deuterio con el análisis de canales para especies no amenazadas. En el caso de las especies amenazadas y en peligro de extinción, un método no destructivo como la absortiometría de rayos X dual (DXA) debe considerarse como un método de comparación alternativo al método destructivo estándar del oro para el análisis completo de la canal.
Además de la composición corporal, la técnica de dilución D2O se puede utilizar para determinar el consumo de agua de un animal individual9. Esta aplicación única de D2O se puede utilizar para responder no sólo preguntas de investigación, pero puede ser útil para evaluar el consumo de agua de animales individuales alojados en grandes entornos sociales.
Aquí, describimos la adaptación de la técnica de dilución D2O para evaluar la composición corporal en un insectívoro, grandes murciélagos marrones (Eptesicus fuscus), y para evaluar el consumo de agua en un carnívoro, gatos (Felis catis).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 micron non-pyrogenic disk filter</td>
			<td>Argos Technologies</td>
			<td>FN32S</td>
			<td>nylon, 30mm diameter, 0.22um, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL conical microcentrifuge tubes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1415-9701</td>
			<td>1.5 ml self-standing microcentrifuge tube, natural with blue cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL sterile glass vial for injection</td>
			<td>Mountainside Medical Equipment</td>
			<td>MS-SEV10</td>
			<td>clear, sterile glass injection unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305219</td>
			<td>sterile 10 mL syringe individually wrapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mL sterile glass vial for injection</td>
			<td>Mountainside Medical Equipment</td>
			<td>AL-SV10020</td>
			<td>clear, sterile glass injection unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 gauge needle</td>
			<td>Exel</td>
			<td>26417</td>
			<td>needles hypodermic 20g x 1&#34; plastic hub (yellow) / regular bevel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 gauge needle</td>
			<td>Exel</td>
			<td>26411</td>
			<td>needles hypodermic 22g x 1&#34; plastic hub (black) / regular bevel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>deuterium oxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>151882-25G</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isofluorane</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>3060</td>
			<td>fluriso isoflurane, USP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OMNIC Spectra Software</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>833-036200</td>
			<td>FT-IR standard software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petroleum jelly</td>
			<td>Vaseline</td>
			<td>305212311006</td>
			<td>Vaseline, 100% pure petroleum jelly, original, skin protectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic capillary tubes</td>
			<td>Innovative Med Tech</td>
			<td>100050</td>
			<td>sodium heparin anticoagulant, 50 &#956;L capacity, 30 mm length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sealed liquid spectrophotometer SL-3 FTIR CAF2 Cell</td>
			<td>International Crystal Laboratory</td>
			<td>0005D-875</td>
			<td>0.05 mm Pathlength</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium chloride</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.37017</td>
			<td>suitable for biopharmaceutical production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Electron Nicolet 380 FT-IR Spectrometer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269-169400</td>
			<td>discontinued model, newer models available</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using deuterium oxide as a non-invasive, non-lethal tool for assessing body composition and water consumption in mammals

Los sistemas de puntuación de condición corporal y los índices de condición corporal son técnicas comunes utilizadas para evaluar el estado de salud o la aptitud de una especie. Los sistemas de puntuación de condición del cuerpo dependen del evaluador y tienen el potencial de ser altamente subjetivos. Los índices de condición corporal pueden confundirse por forrajeo, los efectos del peso corporal, así como problemas estadísticos e inferenciales. Una alternativa a los sistemas de puntuación de condición corporal y los índices de condición corporal es el uso de un isótopo estable como el óxido de deuterio para determinar la composición corporal. El método de dilución de óxido de deuterio es una técnica cuantitativa repetible que se utiliza para estimar la composición corporal en humanos, vida silvestre y especies domésticas. Además, la técnica de dilución de óxido de deuterio se puede utilizar para determinar el consumo de agua de un animal individual. Aquí, describimos la adaptación de la técnica de dilución de óxido de deuterio para evaluar la composición corporal en grandes murciélagos marrones (Eptesicus fuscus) y para evaluar el consumo de agua en gatos (Felis catis).

La técnica de dilución de óxido de deuterio se puede utilizar para evaluar la composición corporal de una variedad de especies. Para demostrar la adaptabilidad, estamos reportando el primer uso de la técnica de dilución de óxido de deuterio en una especie de murciélago insectívoro norteamericano, Eptesicus fuscus, el gran murciélago marrón para resultados representativos. Se completó una meseta de cronometraje tomando muestras de sangre de inyección de 2 O antes y de...

Watch this Scientific Journal Video about Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals at JoVE.com

Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals

Este artículo describe la técnica de dilución de óxido de deuterio en dos mamíferos, un insectívoro y carnívoro, para determinar el agua corporal total, la masa corporal magra, la masa grasa corporal y el consumo de agua.

Uso de óxido de deuterio como herramienta no invasiva y no letal para evaluar la composición corporal y el consumo de agua en mamíferos

Body condition scoring systems and body condition indices are common techniques used for assessing the health status or fitness of a species. Body ...

Usando este protocolo, el óxido de deuterio, o D2O, un isótopo estable y no radioactivo de agua, se puede utilizar para estimar la composición corporal y el consumo de agua. Esta técnica no es invasiva y, por lo tanto, se puede utilizar para evaluar la composición corporal en especies en peligro de extinción, así como en humanos y especies domésticas. Una aplicación única de la técnica de dilución de óxido de deuterio es la capacidad de medir el consumo de agua de la vida silvestre de rango libre con altas tasas de recaptura o de animales alojados socialmente.Si bien no se requiere anestesia, puede ser más fácil para aquellos que no están familiarizados con la administración de inyecciones subcutáneas para sedar a los animales antes de administrar el óxido de deuterio. Demostrando el procedimiento con Sarah Hooper y yo seremos Amanda Eshelman y Ashley Cowan, estudiantes de veterinaria, y Alicia Roistacher, una estudiante de posgrado de mi laboratorio. Para hacer una solución de 50 mililitros de óxido de deuterio salinizado de nueve gramos por litro, primero pese 450 miligramos de cloruro de sodio de grado farmacéutico y registre la cantidad exacta a cuatro decimales.Transfiera toda la sal a un vaso de precipitado esterilizado de 100 mililitros y mida 50 gramos de más o igual al 99,8% de óxido de deuterio en un cilindro estéril graduado. Registre la cantidad exacta de óxido de deuterio a cuatro decimales, y transfiera el óxido de deuterio al vaso de precipitados estériles de cloruro de sodio. A continuación, coloque una aguja de calibre 20 en un filtro de disco estéril no espía con poros submicrónicos equipados con un barril de jeringa de 10 mililitros e inserte la aguja en el tabique de un vial estéril, vacío de 100 mililitros.Coloque un tubo de vacío en una aguja del calibre 22 e inserte la aguja en el tabique del vial de 100 mililitros. A continuación, cargue 10 mililitros de cloruro sódico de resistencia isosmótica en el barril de la jeringa y encienda lentamente el vacío hasta que la solución de óxido de deuterio comience a filtrarse lentamente en el vial. Continúe vertiendo la solución de material de óxido de deuterio en el barril de la jeringa hasta que se haya filtrado todo el volumen de 50 mililitros.Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco en un murciélago anestesiado, utilice una almohadilla de preparación de alcohol para limpiar el uropatagium sobre la vena interfemoral y deje que la membrana de cola desinfectado se seque. Aplique una fina capa de vaselina sobre la vena interfemoral, y utilice una aguja del calibre 29 para perforar la porción dorsal de la vena interfemoral. Luego use tubos capilares de heparina sódica de plástico para recoger 100 microlitros de sangre.Para asegurar una mezcla adecuada de toda la sangre con la heparina sódica, enrolle suavemente cada tubo después de la acumulación de sangre antes de etiquetar. Después de determinar la masa de óxido de deuterio en gramos para inyectar, cargue una jeringa de insulina equipada con una aguja de calibre 29 con el volumen adecuado de óxido de deuterio. Pesar la jeringa y la aguja de insulina cargadas de deuterio, registrando el peso en cuatro decimales, e inyectar todo el volumen de óxido de deuterio por vía subcutánea sobre la región dorsal de la cadera del murciélago anestesiado.Recomendamos utilizar una báscula de precisión con un protector de corriente de aire antiestático y asegurarse de tirar hacia atrás en el émbolo para garantizar la presión negativa antes de la inyección. Inmediatamente después de la inyección, pese la jeringa y la aguja de insulina ahora vacías y registre el peso en cuatro decimales. Dentro de los 30 minutos después de la recolección de sangre, utilice una centrífuga de hematocrito para girar cada tubo capilar a 10.000 veces g durante cinco minutos.Usando tijeras afiladas, corte el tubo capilar de plástico entre toda la sangre y el plasma, y utilice una pipeta de 200 microlitros para expulsar el plasma directamente en un tubo de almacenamiento etiquetado de 500 microlitros. Después del período de equilibrio, recoger y almacenar otros 100 microlitros de sangre de la vena interfemoral como acaba de demostrar. Para el análisis de espectrofotometría FTIR, ajuste la temperatura de un baño de arena a 60 grados centígrados para facilitar la destilación, y agregue 50 microlitros de cada muestra de plasma y de serie en tapas de microcentrífugas cónicas individuales de 1,5 mililitros.Manteniendo la tapa de microcentrífuga boca abajo, atornille el tubo de microcentrífuga cónica de 1,5 mililitros en la tapa y coloque el tubo invertido en contacto con la arena en el baño de arena durante un mínimo de 12 horas. A la mañana siguiente, coloque una tapa nueva y limpia en cada tubo y pulse los tubos de microcentrífuga durante 10 segundos en una microcentrífuga. Instale una célula de transmisión líquida en el espectrómetro FTIR y llene la célula con metanol.Conecte el puerto de inyección y llene lentamente la célula con agua de fondo mientras retira cuidadosamente la jeringa de metanol para reducir el riesgo de burbujas de aire. Conecte el tubo al puerto de salida para permitir la eliminación de las muestras después del análisis y abra el software del espectrómetro FTIR. Establezca los parámetros de acuerdo con la tabla y recoja una muestra de fondo utilizando el agua destilada filtrada por diluyente 0,22 micrómetros.Inyecte 40 microlitros de un estándar de cero partes por millón de óxido de deuterio y registre y guarde los espectros como un archivo de valores separados por comas. Después de inyectar y guardar los espectros de todos los estándares para crear una curva estándar, inyecte 40 microlitros de cada muestra destilada en la célula de transmisión líquida y guarde los espectros. Con un tiempo de equilibrio conocido, se puede determinar el agua corporal total, la masa corporal magra y la masa grasa corporal para los murciélagos marrones grandes capturados salvajemente y los murciélagos marrones grandes cautivos.Una masa grasa corporal negativa se puede calcular debido a una o más de las siguientes razones: no recibir la dosis completa de óxido de deuterio, volverse torpe durante la fase de equilibrio, tener masas grasas anormalmente grandes y masas magras mínimas, o tener menos de tres a 5% de grasa corporal según lo determinado por la absorción de rayos X dual. Aquí, se muestra un porcentaje representativo de grasa corporal determinada por la técnica de dilución de óxido de deuterio en comparación con la absorción de rayos X duales. Las dos técnicas están bien correlacionadas, con la masa grasa corporal mostrando fuertes correlaciones entre la grasa corporal y el peso corporal y con la técnica de dilución de óxido de deuterio no consistentemente sobre o subestimando la masa grasa corporal.El método de dilución de óxido de deuterio ha sido previamente validado en gatos, y la técnica fue adaptada para permitir la medición del consumo diario de agua de gatos alojados socialmente durante cada bloque dietético del experimento. Recuerde que esta técnica debe realizarse sólo en animales sanos y que debe pesar, registrar y entregar con precisión la dosis completa de óxido de deuterio a cada animal. Se puede completar un método secundario para determinar la composición corporal, como el análisis completo de la carcasa o DEXA, para validar la técnica del óxido de deuterio.Esta técnica nos permitió identificar un gato socialmente alojado que consumía cantidades anormalmente altas de agua sin separar a cada gato para medir sus consumos de agua.

Research

JoVE Journal

Environment

Laboratory-determined Phosphorus Flux from Lake Sediments as a Measure of Internal Phosphorus Loading

Laboratorio-determinado Fósforo Flujo de sedimentos lacustres como medida de fósforo Interna Loading

Eutrophication is a water quality issue in lakes worldwide, and there is a critical need to identify and control nutrient sources. Internal phosphorus (P) ...

Investigación

Medio ambiente

Use of Chironomidae (Diptera) Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

Use of Chironomidae Diptera Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

El uso de Chironomidae (Diptera) en superficie flotante pupal Exuviae como Protocolo Bioassessment rápida para las Masas de Agua

Rapid bioassessment protocols using benthic macroinvertebrate assemblages have been successfully used to assess human impacts on water quality. ...

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. Part III. Virus Detection by RT-qPCR

Método EPA 1615. La medición de enterovirus y norovirus Ocurrencia en agua por cultura y RT-qPCR. Parte III. Detección de virus por RT-qPCR

EPA Method 1615 measures enteroviruses and noroviruses present in environmental and drinking waters. This method was developed with the goal of having a ...

Removal of Trace Elements by Cupric Oxide Nanoparticles from Uranium In Situ Recovery Bleed Water and Its Effect on Cell Viability

Removal of Trace Elements by Cupric Oxide Nanoparticles from Uranium In Situ Recovery Bleed Water and Its Effect on Cell Viability

La eliminación de oligoelementos por cúprico Óxido nanopartículas de uranio<em&gt; In Situ</em&gt; Recuperación de purga de agua y su efecto sobre la viabilidad celular

In situ recovery (ISR) is the predominant method of uranium extraction in the United States. During ISR, uranium is leached from an ore body and extracted ...

Soil Lysimeter Excavation for Coupled Hydrological, Geochemical, and Microbiological Investigations

Lisímetro suelo de excavación para acoplados hidrológicos, geoquímicos, e investigaciones microbiológicas

Studying co-evolution of hydrological and biogeochemical processes in the subsurface of natural landscapes can enhance the understanding of coupled ...

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

La detección de la actividad endocrina en Uso de Agua comercialmente disponibles<em&gt; In Vitro</em&gt; Transactivación bioensayos

In vitro transactivation bioassays have shown promise as water quality monitoring tools, however their adoption and widespread application has been ...

Protocol for Assessing the Relative Effects of Environment and Genetics on Antler and Body Growth for a Long-lived Cervid

Protocolo para la evaluación de los efectos relativos de medio ambiente y la genética en el asta y el crecimiento del cuerpo para una larga vida cérvidos

Cervid phenotype can be placed into one of two categories: efficiency, which promotes survival over extravagant morphometric growth, and luxury, which ...

Composition and Properties of Aquafaba: Water Recovered from Commercially Canned Chickpeas

Composición y propiedades de Aquafaba: agua recuperados de garbanzos enlatados comercialmente

Chickpea and other pulses are commonly sold as canned products packed in a thick solution or a brine. This solution has recently been shown to produce ...

A Simple Planting Technique for Re-establishing Trees Where Frequent Inundation Occurs

Una sencilla técnica de plantación para restablecer los árboles donde se produce la inundación frecuente

Many of the Everglades tree islands have lost elevation over the past century and most of their trees have died such that they are now covered with ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Procedimiento optimizado para la determinación de la adsorción de los fosfonatos en hidróxido férrico Granular utilizando un método de determinación de fósforo miniaturizados

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...