Name: using deuterium oxide as a non-invasive, non-lethal tool for assessing body composition and water consumption in mammals
Uploaded: 2020-02-20T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals at JoVE.com

Denna forskning stöddes av MDC Cooperative Agreement (#416), US Forest Service Cooperative Agreement (16-JV-11242311-118), American Academy of Veterinary Nutrition och Waltham / Royal Canin, USA Grant (bidragsnummer: 00049049), NIH utbildningsbidrag (bidragsnummer: T32OS011126) och University of Missouri Veterinary Research Scholars Program. Författarna tackar Shannon Ehlers för att pre-granska detta manuskript. Vi tackar Dr Robert Backus för att ge D2O standarder och tillåta användning av hans laboratorium.

Alla experiment som beskrivs här godkändes av University of Missouri Animal Care and Use Committee och genomfördes under Missouri Department of Conservation (MDC) Wildlife Scientific Collection tillstånd (Tillstånd #16409 och #17649).
1. Beredning av steril, isotonisk, salinerat D2O lagerlösning
<ol><li>Gör en 50 ml lagerlösning på 9,0 g/L salinerade D2O.<ol>
<li>Väg 450 mg läkemedelskvalitet NaCl och överför alla NaCl till en 100 ml, steriliserad bägare. ...

<ol>
	<li>Schiffmann, C., Clauss, M., Hoby, S., Hatt, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+body+condition+scoring+in+zoo+animals+&#8211;+composite,+algorithm+and+overview+approaches.">Visual body condition scoring in zoo animals &#8211; composite, algorithm and overview approaches.</a> Journal of Zoo Aquarium Research. 5 (1), (2017).</li><li>Peig, J., Green, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+perspectives+for+estimating+body+condition+from+mass/length+data:+the+scaled+mass+index+as+an+alternative+method.">New perspectives for estimating body condition from mass/length data: the scaled mass index as an alternative method.</a> Oikos. 118 (12), 1883-1891 (2009).</li><li>Bissell, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Body Condition Scoring Resource Center. , (2017).</li><li>McWilliams, S. R., Whitman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-destructive+techniques+to+assess+body+composition+of+birds:+a+review+and+validation+study.">Non-destructive techniques to assess body composition of birds: a review and validation study.</a> Journal of Ornithology. 154 (3), 597-618 (2013).</li><li>Lukaski, H. C., Johnson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+inexpensive+method+of+determining+total+body+water+using+a+tracer+dose+of+D2O+and+infrared+absorption+of+biological+fluids.">A simple, inexpensive method of determining total body water using a tracer dose of D2O and infrared absorption of biological fluids.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 41 (2), 363-370 (1985).</li><li>Chusyd, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiposity+and+Reproductive+Cycling+Status+in+Zoo+African+Elephants.">Adiposity and Reproductive Cycling Status in Zoo African Elephants.</a> Obesity (Silver Spring). 26 (1), 103-110 (2018).</li><li>Kanchuk, M. L., Backus, R. C., Calvert, C. C., Morris, J. G., Rogers, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutering+Induces+Changes+in+Food+Intake+Body+Weight,+Plasma+Insulin+and+Leptin+Concentrations+in+Normal+and+Lipoprotein+Lipase&#8211;Deficient+Male+Cats.">Neutering Induces Changes in Food Intake Body Weight, Plasma Insulin and Leptin Concentrations in Normal and Lipoprotein Lipase&#8211;Deficient Male Cats.</a> The Journal of Nutrition. 132 (6), 1730S-1732S (2002).</li><li>Eichhorn, G., Visser, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+Comment:+Evaluation+of+the+Deuterium+Dilution+Method+to+Estimate+Body+Composition+in+the+Barnacle+Goose:+Accuracy+and+Minimum+Equilibration+Time.">Technical Comment: Evaluation of the Deuterium Dilution Method to Estimate Body Composition in the Barnacle Goose: Accuracy and Minimum Equilibration Time.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 81 (4), 508-518 (2008).</li><li>Hooper, S. E., Backus, R., Amelon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+dietary+selenium+and+moisture+on+the+physical+activity+and+thyroid+axis+of+cats.">Effects of dietary selenium and moisture on the physical activity and thyroid axis of cats.</a> Journal of Animal Physiolgy and Animal Nutrition (Berl). 102 (2), 495-504 (2018).</li><li>Stevenson, K. T., van Tets, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-Energy+X-Ray+Absorptiometry+(DXA)+Can+Accurately+and+Nondestructively+Measure+the+Body+Composition+of+Small,+Free-Living+Rodents.">Dual-Energy X-Ray Absorptiometry (DXA) Can Accurately and Nondestructively Measure the Body Composition of Small, Free-Living Rodents.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 81 (3), 373-382 (2008).</li><li>Jennings, G., Bluck, L., Wright, A., Elia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+infrared+spectrophotometry+for+measuring+body+water+spaces.">The use of infrared spectrophotometry for measuring body water spaces.</a> Clinical Chemistry. 45 (7), 1077-1081 (1999).</li><li>Beuth, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Body Composition, movemement phenology and habitat use of common eider along the southern new england coast. Master of Science in Biological and Environmental Sciences (MSBES) thesis. , (2013).</li><li>Coplen, T. B., Hopple, J., Peiser, H., Rieder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compilation+of+minimum+and+maximum+isotope+ratios+of+selected+elements+in+naturally+occurring+terrestrial+materials+and+reagents.">Compilation of minimum and maximum isotope ratios of selected elements in naturally occurring terrestrial materials and reagents.</a> U.S. Geological Survey Water-Resources Investigations Report 01-4222. , (2002).</li><li>Karasov, W. H., Pinshow, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+lean+mass+and+in+organs+of+nutrient+assimilation+in+a+long-distance+passerine+migrant+at+a+springtime+stopover+site.">Changes in lean mass and in organs of nutrient assimilation in a long-distance passerine migrant at a springtime stopover site.</a> Physiological Zoology. 71 (4), 435-448 (1998).</li><li>Hood, W. R., Oftedal, O. T., Kunz, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+body+composition+of+female+big+brown+bats+(Eptesicus+fuscus.)+during+lactation.">Variation in body composition of female big brown bats (Eptesicus fuscus.) during lactation.</a> Journal of Comparative Physiology B. 176 (8), 807-819 (2006).</li><li>Backus, R. C., Havel, P. J., Gingerich, R. L., Rogers, Q. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+serum+leptin+immunoreactivity+and+body+fat+mass+as+estimated+by+use+of+a+novel+gas-phase+Fourier+transform+infrared+spectroscopy+deuterium+dilution+method+in+cats.">Relationship between serum leptin immunoreactivity and body fat mass as estimated by use of a novel gas-phase Fourier transform infrared spectroscopy deuterium dilution method in cats.</a> American Journal of Veterinary Research. 61 (7), 796-801 (2000).</li><li>Moore, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Total+Body+Water+and+Solids+with+Isotopes.">Determination of Total Body Water and Solids with Isotopes.</a> Science. 104 (2694), 157-160 (1946).</li><li>Voigt, C., Cruz-Neto, A., Parsons, S., Kunz, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ecological and Behavioral Methods in the Study of Bats. , 621-645 (2009).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Assessment of Body Composition and Total Energy Expenditure in Humans Using Stable Isotope Techniques. , (2009).</li><li>International Atomic Energy Agency. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Introduction to Body Composition Assessment Using the Deuterium Dilution Technique with Analysis of Saliva Samples by Fourier Transform Infrared Spectrometry. , (2011).</li><li>Shimamoto, H., Komiya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Turnover+of+Body+Water+as+an+Indicator+of+Health.">The Turnover of Body Water as an Indicator of Health.</a> Journal of Physiological Anthropology and Applied Human Science. 19 (5), 207-212 (2000).</li></ol>

Användningen av deuteriumoxid för att bestämma TBW har använts sedan 1940-talet17 och används till människor och en mängd olika inhemska arter och djurarter4,6,7. Andra icke-förstörande tekniker har utvecklats, inklusive bioelektrisk impedansanalys (BIA), DXA och kvantitativ magnetisk resonans (QMR). Varje metod har fördelar och nackdelar som bör beaktas innan man väljer en viss metod för att...

Body condition scoring system och kroppsförhållanden index är vanliga tekniker som används för att bedöma hälsostatus eller lämplighet av en art1,2. Många inhemska och zoologiska arter har unika kropp tillstånd scoring (BCS) system som används för att bedöma ett djurs muskler och ytlig fettvävnad3. BCS-bedömningen bygger dock på utvärderaren, vilket innebär att BCS är en objektiv eller halvkvantitativ mätning vid bedömningen av en utbildad utvärderare. I djurarter, kroppsförhållanden index används ofta snarare än BCS och är baserade på ett förhållande av kroppsmassa till kroppsstorlek eller kroppsmassa till underarm2. Kroppstillstånd indicis är ofta förvirrade av effekterna av födosök och kan blandas av kroppsstorlek samt statistiska och inferential problem4.
Ett alternativ till kroppens tillstånd poängsystem och kroppens tillstånd index använder en stabil isotop för att bestämma kroppssammansättning. En vanlig stabil isotop är deuteriumoxid (D2O), en icke-radioaktiv form av vatten där väteatomer är deuteriumisotoper. Den deuteriumoxid utspädningmetod som beskrivs i denna studie kan vara en icke-subjektiv, kvantitativ och repeterbar teknik som används för att uppskatta kroppssammansättning hos människor5 och ett brett spektrum av arter4,6,7. Denna teknik kan vara fördelaktigt för att studera kroppens sammansättning i vilda djur. Den kan till exempel användas för att bedöma längsgående förändringar i kroppssammansättningen, till exempel före och efter en hanteringsåtgärd. Men i vissa vilda arter deuteriumoxid kan överskatta den faktiskavattenhalten 8. När tekniken anpassas för en art är det därför viktigt att validera metoden genom att jämföra deuteriumoxidmetoden med slaktkroppens analys för icke-utrotningshotade arter. För hotade och utrotningshotade arter bör en icke-förstörande metod som dubbel röntgenabsorptiometri (DXA) betraktas som en alternativ jämförelsemetod med den guldstandarddestruktiva metoden för fullständig slaktkroppanalys.
Förutom kroppssammansättning kan D2O-utspädningstekniken användas för att bestämma vattenförbrukningen för ett enskilt djur9. Denna unika tillämpning av D2O kan användas för att svara inte bara på forskningsfrågor, utan kan vara användbar för att bedöma vattenförbrukningen för enskilda djur som är inrymt i stora sociala miljöer.
Här beskriver vi anpassningen av D2O-utspädningstekniken för bedömning av kroppssammansättning i en insektsätare, stora bruna fladdermöss(Eptesicus fuscus), och för att bedöma vattenförbrukningen i en köttätare, katter (Felis catis).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 micron non-pyrogenic disk filter</td>
			<td>Argos Technologies</td>
			<td>FN32S</td>
			<td>nylon, 30mm diameter, 0.22um, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL conical microcentrifuge tubes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1415-9701</td>
			<td>1.5 ml self-standing microcentrifuge tube, natural with blue cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL sterile glass vial for injection</td>
			<td>Mountainside Medical Equipment</td>
			<td>MS-SEV10</td>
			<td>clear, sterile glass injection unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305219</td>
			<td>sterile 10 mL syringe individually wrapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mL sterile glass vial for injection</td>
			<td>Mountainside Medical Equipment</td>
			<td>AL-SV10020</td>
			<td>clear, sterile glass injection unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 gauge needle</td>
			<td>Exel</td>
			<td>26417</td>
			<td>needles hypodermic 20g x 1&#34; plastic hub (yellow) / regular bevel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 gauge needle</td>
			<td>Exel</td>
			<td>26411</td>
			<td>needles hypodermic 22g x 1&#34; plastic hub (black) / regular bevel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>deuterium oxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>151882-25G</td>
			<td>99.9 atom % D</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isofluorane</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>3060</td>
			<td>fluriso isoflurane, USP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OMNIC Spectra Software</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>833-036200</td>
			<td>FT-IR standard software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petroleum jelly</td>
			<td>Vaseline</td>
			<td>305212311006</td>
			<td>Vaseline, 100% pure petroleum jelly, original, skin protectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic capillary tubes</td>
			<td>Innovative Med Tech</td>
			<td>100050</td>
			<td>sodium heparin anticoagulant, 50 &#956;L capacity, 30 mm length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sealed liquid spectrophotometer SL-3 FTIR CAF2 Cell</td>
			<td>International Crystal Laboratory</td>
			<td>0005D-875</td>
			<td>0.05 mm Pathlength</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium chloride</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1.37017</td>
			<td>suitable for biopharmaceutical production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Electron Nicolet 380 FT-IR Spectrometer</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>269-169400</td>
			<td>discontinued model, newer models available</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using deuterium oxide as a non-invasive, non-lethal tool for assessing body composition and water consumption in mammals

Body condition scoring system och kroppsförhållanden index är vanliga tekniker som används för att bedöma hälsotillstånd eller lämplighet av en art. Kroppstillstånd poängsättning system är utvärderare beroende och har potential att vara mycket subjektiva. Kroppstillståndindex kan blandas ihop genom födosök, effekterna av kroppsvikt, samt statistiska och inferential problem. Ett alternativ till kroppens tillstånd poängsystem och kroppens tillstånd index använder en stabil isotop såsom deuteriumoxid för att bestämma kroppssammansättning. Deuteriumoxidutspädningsmetoden är en repeterbar, kvantitativ teknik som används för att uppskatta kroppssammansättning hos människor, vilda djur och tama arter. Dessutom kan deuteriumoxidutspädningstekniken användas för att bestämma vattenförbrukningen hos ett enskilt djur. Här beskriver vi anpassningen av deuteriumoxid utspädningsteknik för att bedöma kroppssammansättning i stora bruna fladdermöss(Eptesicus fuscus)och för att bedöma vattenförbrukning hos katter (Felis catis).

Deuteriumoxidutspädningstekniken kan användas för att bedöma kroppssammansättningen hos en mängd olika arter. För att visa anpassningsförmågan rapporterar vi den första användningen av deuteriumoxidutspädningstekniken i en nordamerikansk insektsätande fladdermusart, Eptesicus fuscus, den stora bruna fladdermusen för representativa resultat. En tidsplatå slutfördes genom att ta före och efter D2O injektion blodprov som bör göras med alla arter där j?...

Watch this Scientific Journal Video about Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals at JoVE.com

Using Deuterium Oxide as a Non-Invasive, Non-Lethal Tool for Assessing Body Composition and Water Consumption in Mammals

Denna artikel beskriver deuteriumoxid utspädningsteknik i två däggdjur, en insektsätare och köttätare, för att bestämma totalt kroppsvatten, muskelmassa, kroppsfett massa, och vattenförbrukning.

Använda Deuteriumoxid som ett icke-invasivt, icke-dödligt verktyg för bedömning av kroppssammansättning och vattenförbrukning hos däggdjur

Body condition scoring systems and body condition indices are common techniques used for assessing the health status or fitness of a species. Body ...

Med hjälp av detta protokoll, deuteriumoxid, eller D2O, en nonradioactive, stabil isotop av vatten, kan användas för att uppskatta kroppssammansättning och vattenförbrukning. Denna teknik är noninvasiv och kan därför användas för att bedöma kroppssammansättning hos utrotningshotade arter, liksom hos människor och inhemska arter. En unik tillämpning av deuteriumoxidutspädningstekniken är förmågan att mäta vattenförbrukningen av frigående vilda djur med höga återerövringshastigheter eller av socialt inhysta djur.Även anestesi krävs inte, det kan vara lättare för dem som inte känner till att ge subkutana injektioner för att lugna djuren innan du levererar deuterium oxid. Visar förfarandet med Sarah Hooper och mig kommer att Amanda Eshelman och Ashley Cowan, veterinärstudenter, och Alicia Roistacher, en doktorand från mitt laboratorium. För att göra en 50-milliliter stamlösning på nio gram per litersalterad deuteriumoxid, först väga 450 milligram farmaceutisk kvalitet natriumklorid, och registrera den exakta mängden till fyra decimaler.Överför allt salt till en steriliserad 100-milliliter bägare, och mäta ut 50 gram större än eller lika med 99,8%deuteriumoxid i en steril, graderad cylinder. Anteckna den exakta mängden deuteriumoxid till fyra decimaler, och överför deuteriumoxiden till den sterila bägaren av natriumklorid. Därefter fäster du en 20-gauge nål på ett ickepyrogent, sterilt diskfilter med submicronpor som är försedda med en 10-milliliter spruta fat, och sätt in nålen i septum av en steril, tom, 100-milliliter injektionsflaska.Fäst ett vakuumrör på en nål med 22 gauge, och stick in nålen i septum av 100-milliliter injektionsflaskan. Ladda sedan 10 milliliter av isosomets styrka natriumklorid i sprutan fat, och långsamt slå på vakuum tills deuterium oxidlösningen börjar långsamt filtrera in i injektionsflaskan. Fortsätt hälla deuteriumoxid stamlösningen i sprutan fat tills hela 50-milliliter volym har filtrerats.Efter att ha bekräftat en brist på svar på tå nypa i en sövd fladdermus, använd en alkohol prep pad för att rengöra uropatagium över interfemoral ven, och låta desinficerade svansmembranet att torka. Applicera ett tunt lager av vaselin över interfemoral ven, och använda en 29-gauge nål för att punktera den dorsala delen av interfemoral ven. Använd sedan plast natrium heparin kapillärrör för att samla 100 mikroliter blod.För att säkerställa en tillräcklig blandning av helblod med natrium heparin, försiktigt rulla varje rör efter bloduppsamlingen innan märkning. Efter bestämning av massan av deuteriumoxid i gram för att injicera, ladda en insulinspruta utrustad med en 29-gauge nål med lämplig volym av deuteriumoxid. Väg den deuterium-laddade insulinsprutan och -nålen, registrera vikten till fyra decimaler, och injicera hela volymen av deuteriumoxid subkutant över den rygghöftade regionen i den sövda fladdermusen.Vi rekommenderar att du använder en precisionsskala med ett antistatiskt utkast till sköld och att se till att dra tillbaka kolven för att säkerställa undertryck före injicering. Omedelbart efter injektionen, väg den nu tomma insulinsprutan och nålen, och registrera vikten till fyra decimaler. Inom 30 minuter efter blod insamling, använd en hematokrit centrifug att snurra ner varje kapillärrör på 10, 000 gånger g i fem minuter.Skär plastmönsillröret mellan helblod och plasma och använd en 200-mikroliterpipett för att driva ut plasman direkt i ett märkt lagerrör med 500 mikroliter. Efter jämviktsperioden, samla in och lagra ytterligare 100 mikroliter blod från interfemoral anda som just visat. För FTIR spektrofotometri analys, ange temperaturen på ett sandbad till 60 grader Celsius för att underlätta destillation, och tillsätt 50 mikroliter av varje plasmaprov och standard i enskilda 1,5-milliliter koniska mikrocentrifug lock.Håll mikrocentrifuglocket upp och ned, skruva fast 1,5-milliliter koniska mikrocentrifugröret på locket och placera det inverterade röret i kontakt med sanden i sandbadet i minst 12 timmar. Nästa morgon, placera en ny, ren mössa på varje rör, och puls mikrocentrifugrören i 10 sekunder i en mikrocentrifug. Installera en flytande överföringscell i FTIR-spektrometern, och fyll cellen med metanol.Anslut injektionsporten, och fyll långsamt cellen med bakgrundsvatten samtidigt som du försiktigt tar bort metanolsprutan för att minska risken för luftbubblor. Fäst slangar till utgångsporten för att möjliggöra borttagning av proverna efteranalys, och öppna ftir-spektrometerprogramvaran. Ställ in parametrarna enligt tabellen, och samla ett bakgrundsprov med hjälp av spädningsvätskan, 0,22-mikrometer-filtrerat, destillerat vatten.Injicera 40 mikroliter av en nolldelar per miljon deuteriumoxid standard, och registrera och spara spektra som ett kommatecken-separerade värden fil. Efter att ha injicerat och sparat spektra av alla standarder för att skapa en standardkurva, injicera 40 mikroliter av varje destillerat prov i vätskeöverföringscellen, och spara spektra. Med en känd jämviktstid kan den totala kroppsvattnet, lean body mass, och kroppsfett massa för vildfångade stora bruna fladdermöss och fångenskap stora bruna fladdermöss fastställas.En negativ kroppsfettmassa kan beräknas på grund av en eller flera av följande orsaker:inte ta emot hela dosen deuteriumoxid, bli torpid under jämviktsfasen, ha onormalt stora fettmassor och minimala muskelmassa, eller som har under tre till 5%kroppsfett som bestäms av dubbel röntgenabsorptiometri. Här visas en representativ procent av kroppsfett som bestäms av deuteriumoxidspädningstekniken jämfört med dubbelröntgen absorptiometri. De två teknikerna är väl korrelerade, med kroppen fett massa visar starka korrelationer mellan kroppsfett och kroppsvikt och med deuterium oxid utspädning tekniken inte konsekvent över eller underskatta kroppen fett massa.Deuteriumoxidspädningsmetoden har tidigare validerats hos katter, och tekniken anpassades för att möjliggöra mätning av den dagliga vattenförbrukningen hos socialt inhysta katter under varje kostblock av experimentet. Kom ihåg att denna teknik bör utföras endast på friska djur och att du bör noggrant väga, registrera, och leverera hela dosen av deuteriumoxid till varje djur. En sekundär metod för bestämning av kroppssammansättning, såsom fullständig slaktkroppsanalys eller DEXA, kan slutföras för att validera deuteriumoxidtekniken.Denna teknik tillät oss att identifiera en socialt inhyst katt som konsumerar onormalt stora mängder vatten utan att separera varje katt för att mäta deras vattenförbrukning.

Research

JoVE Journal

Environment

Laboratory-determined Phosphorus Flux from Lake Sediments as a Measure of Internal Phosphorus Loading

Laboratorium bestämda Fosfor Flux från sjösediment som ett mått på intern fosforbelastning

Eutrophication is a water quality issue in lakes worldwide, and there is a critical need to identify and control nutrient sources. Internal phosphorus (P) ...

Use of Chironomidae (Diptera) Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

Use of Chironomidae Diptera Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

Användning av Chironomidae (Diptera) Utanpå Flytande PUPP exuviae som en snabb Bioassessment protokoll för vattenförekomster

Rapid bioassessment protocols using benthic macroinvertebrate assemblages have been successfully used to assess human impacts on water quality. ...

EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. Part III. Virus Detection by RT-qPCR

EPA Metod 1615 Mätning av Enterovirus och Norovirus förekomst i vatten efter kultur och RT-qPCR. Del III. Virus Detection med RT-qPCR

EPA Method 1615 measures enteroviruses and noroviruses present in environmental and drinking waters. This method was developed with the goal of having a ...

Removal of Trace Elements by Cupric Oxide Nanoparticles from Uranium In Situ Recovery Bleed Water and Its Effect on Cell Viability

Removal of Trace Elements by Cupric Oxide Nanoparticles from Uranium In Situ Recovery Bleed Water and Its Effect on Cell Viability

Borttagning av spårämnen av kopparoxid nanopartiklar från uran<em&gt; In Situ</em&gt; Återställning Bleed Vatten och dess effekt på cellviabilitet

In situ recovery (ISR) is the predominant method of uranium extraction in the United States. During ISR, uranium is leached from an ore body and extracted ...

Soil Lysimeter Excavation for Coupled Hydrological, Geochemical, and Microbiological Investigations

Jord lysimeter Grävning för kopplade Hydrologiska, geokemiska och mikrobiologiska undersökningar

Studying co-evolution of hydrological and biogeochemical processes in the subsurface of natural landscapes can enhance the understanding of coupled ...

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

Screening for Endocrine Activity in Water Using Commercially-available In Vitro Transactivation Bioassays

Screening för endokrin aktivitet i vatten med hjälp av kommersiellt tillgängliga<em&gt; In Vitro</em&gt; Transaktiverings Bioanalyser

In vitro transactivation bioassays have shown promise as water quality monitoring tools, however their adoption and widespread application has been ...

Protocol for Assessing the Relative Effects of Environment and Genetics on Antler and Body Growth for a Long-lived Cervid

Protokoll för att bedöma relativa effekterna av miljö och genetik på hjorthorn och kroppens tillväxt för en långlivad hjortdjur

Cervid phenotype can be placed into one of two categories: efficiency, which promotes survival over extravagant morphometric growth, and luxury, which ...

Composition and Properties of Aquafaba: Water Recovered from Commercially Canned Chickpeas

Sammansättning och egenskaper Aquafaba: vatten återvinns från kommersiellt konserverade kikärter

Chickpea and other pulses are commonly sold as canned products packed in a thick solution or a brine. This solution has recently been shown to produce ...

A Simple Planting Technique for Re-establishing Trees Where Frequent Inundation Occurs

En enkel plantering teknik för åter upprättar träd där frekvent översvämning uppstår

Many of the Everglades tree islands have lost elevation over the past century and most of their trees have died such that they are now covered with ...

Optimized Procedure for Determining the Adsorption of Phosphonates onto Granular Ferric Hydroxide using a Miniaturized Phosphorus Determination Method

Optimerad förfarandet för bestämning av Adsorption av fosfonater på granulat järnklorid hydroxid metoden en miniatyriserade fosfor bestämning

This paper introduces a procedure to investigate the adsorption of phosphonates onto iron-containing filter materials, particularly granular ferric ...