Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
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Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH (DC014423 et DC016224) et le Defense Advanced Research Office RealNose le projet. FJ est resté à l’Université Duke avec l’appui financier du programme JSPS pour faire progresser des réseaux stratégiques International accélérer la Circulation des chercheurs talentueux (R2801). Nous remercions Sahar Kaleem pour l’édition du manuscrit.

1. Culture de cellules de Hana3A
<ol><li>Préparer la M10 (milieu essentiel Minimum (MEM) plus 10 % v/v foetale de sérum bovin (FBS)) et M10PSF (M10 plus 100 µg/mL de pénicilline-streptomycine et 1,25 µg/mL, amphotéricine B).</li>
	<li>La culture des cellules dans 10 mL de M10PSF dans une boîte de Petri de cellule de 100 mm dans un incubateur à 37 ° C et 5 % de dioxyde de carbone (CO2).</li>
	<li>Diviser les cellules tous les 2 jours à un taux de 20 % : lorsque 100 % confluence des cellules (enviro...

La perception des odeurs dépend fondamentalement de l’activation de l’ORs. En conséquence, il faut comprendre leur fonctionnalité pour casser les mécanismes complexes qui le cerveau permet de percevoir son environnement chimique volatile. Cependant, la compréhension de ce processus a été entravée par les difficultés à établir une méthode robuste pour le répertoire de l’OR pour la fonctionnalité contre Odorisants in vitro. d’écran Cellule de surface et hétérologue expression de sor a ét?...

Le sens de l’odorat permet d’interagir avec leur environnement chimique volatile d’émotions et de comportements en voiture, les animaux terrestres. Fondamentalement, le processus de détection d’odeur commence avec la première interaction des molécules odorantes avec le système olfactif, au niveau de l’odorisant récepteurs (ORs)1. Chez les mammifères, les ORs sont individuellement exprimés dans les neurones sensoriels olfactifs (OSNs) situés dans l' épithélium olfactif2. Ils appartiennent à la famille G-protéine a couplé des récepteurs (GPCR) et plus précisément à la sous-famille de type rhodopsine (également appelé classe A). ORs de couple avec le stimulateur G protéine Golf dont l’activation mène à la production d’AMPc suivie de l’ouverture des canaux nucléotide cyclique contrôlé et la génération de potentiels d’action. Il est admis qu’un percept odeur s’appuie sur un modèle spécifique d’activés ORs3,4 et reconnaissance de l’odeur suit donc un schéma de codage combinatoire, où un ou peut être activé par un ensemble de substances odorantes et une substance odorante peut activer un combinaison d’ORs. Et par le biais de ce codage combinatoire, on émet l’hypothèse que les organismes peuvent détecter et distinguer une myriade de molécules odorantes volatiles. Une des clés pour comprendre la façon dont sont perçus les odeurs est de comprendre comment et qui sor est activés par une odeur donnée.
Pour tenter d’élucider odorant- ou des interactions, des essais fonctionnels in vitro ont joué un rôle essentiel. L’identification des ligands odorant agoniste pour orphelin ORs (dé-orphanization OR) a été un champ très actif pendant les vingt dernières années, grâce à l’utilisation de divers in vitro, ex vivo et des épreuves fonctionnelles in vivo5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17.
Systèmes de test in vitro sont plus adaptés pour la caractérisation fonctionnelle détaillée de RUP, y compris l’identification des domaines fonctionnels et résidus importants de SRO, ainsi que les applications potentielles de génie. Cependant, outre développement des systèmes in vitro précieux pour ORs a été un défi, en partie en raison de la difficulté avec OSNs culture et expression fonctionnelle d’ORs en cellules hétérologues. Le premier défi a été d’établir des protocoles permettant l’expression en surface cellulaire de SRO fonctionnelle dans le mappage de substance odorante-interactions OR. Un certain nombre de groupes indépendants ont utilisé diverses approches5,6,7,8,9,10,11,12, 14,18,19,20. Une des premières réalisations a été faite par Krautwurst et coll. dans le tag N-terminal du sor avec une séquence raccourcie de la rhodopsine (Rho-tag) et observé une expression de surface améliorée de cellules humaines embryonnaires de rein (HEK)13. Modifications apportées à l’étiquette associée à la séquence de l’OR est toujours un chemin exploré pour améliorer OR expression et la fonctionnalité de19,21. Saito et al.. alors identifié la protéine du récepteur-transport 1 (RTP1) et RTP2 qui facilitent le trafic d’OR. 22 une version courte de RTP1, appelé RTP1S, a également démontrée pour être encore plus efficace que l’original de protéine23. Le développement d’une lignée cellulaire (Hana3A) qui exprime stablement Golf, REEP1, RTP1 et RTP2 24, associée à l’utilisation de reporters de l’adénosine monophosphate cyclique (AMPc) a permis l’identification de la substance odorante-interactions OR. Le mécanisme par lequel la famille RTP de protéines favorise l’expression à la surface cellulaire de SRO reste à déterminer.
Une mise en garde de ces méthodes est qu’ils s’appuient sur la stimulation de la substance odorante en phase liquide, ce qui signifie que les composés malodorants sont préalablement dissous dans un milieu de stimulation et stimulent les cellules en remplaçant le milieu. C’est très distincte de l’état physiologique, où les molécules odorantes atteignent l’épithélium olfactif en phase gazeuse et activer l’ORs par dissolution dans la muqueuse nasale. Pour ressembler plus étroitement à exposition relance physiologiquement pertinents, Sanz et coll.20 a proposé une analyse basée sur la stimulation de la vapeur en appliquant une goutte de solution d’odorants à accrocher sous la face intérieure d’un film plastique sur le dessus du puits de la cellule. Ils ont enregistré les réponses de calcium en contrôlant l’intensité de la fluorescence. Cette méthode a été le premier à utiliser la stimulation odorante phase aérienne, mais elle ne permettait pas une grande projection d’activation de l’OR.
Ici, nous avons développé une nouvelle méthode qui permet de surveiller en temps réel d’activation in vitro d’OR via la stimulation de vapor phase odorant par le dosage de la Glosensor (Figure 1). Ce test a été utilisé précédemment dans le contexte du liquide odorant stimulation18,19,25,26,27,28,29, 30 , 31. la chambre suivie du luminomètre est tout d’abord équilibrée avec vaporisé odorante avant plaque lecture (Figure 1A). Molécules odorantes sont solvatés dans la mémoire tampon, baignade Hana3A cellules exprimant l’OR d’intérêt, les RTP1S et les Glosensor de protéines (Figure 1B). Si l’odeur est un agoniste de l’OR, l’OR va passer à une conformation activée lier le Golf, activation de l’adénylate cyclase (AC) et finir par provoquer des taux d’AMPc à augmenter. Ce cAMP montante va se lier à et activer la protéine Glosensor pour générer la luminescence catalysant la luciférine. Cette luminescence est ensuite enregistrée par le luminomètre et permet la surveillance d’activation OR. Cette méthode est d’un grand intérêt dans le cadre de deorphanization d’OR car elle apporte des systèmes in vitro plus près à la perception naturelle des odeurs.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

La perception olfactive commence par l’interaction des substances odorantes avec les récepteurs odorants (ou) exprimé par les neurones sensoriels olfactifs (OSN). Reconnaissance de l’odeur suit un schéma de codage combinatoire, où un ou peut être activé par un ensemble de substances odorantes et une substance odorante peut activer une combinaison d’ORs. Grâce à ce codage combinatoire, les organismes peuvent détecter et distinguer une myriade de molécules odorantes volatiles. Ainsi, une odeur à une concentration donnée peut être décrit par un modèle d’activation des RUP, qui est propre à chaque odeur. En ce sens, fissuration des mécanismes que le cerveau utilise pour percevoir l’odeur nécessite la compréhension odorant-interactions OR. C’est pourquoi la communauté de l’olfaction s’est engagée à « l’orphanize » ces récepteurs. Les systèmes in vitro conventionnelles permet d’identifier la substance odorante- ou interactions ont utilisé des milieux cellulaires en incubation avec odorant, qui se distingue par la détection naturelle des odeurs par dissolution de substances odorantes de vapeur dans la muqueuse nasale avant d’interagir avec les ORs. Nous décrivons ici une nouvelle méthode qui permet de surveiller en temps réel de l’activation d’OR par l’intermédiaire de substances odorantes vapor phase. Notre méthode repose sur la mesure cAMP libération par luminescence à l’aide du test Glosensor. Il comble les lacunes entre les approches in vivo et in vitro et fournit une base pour un capteur chimique volatile biomimétique.

Nous avons projeté la réponse des trois ORs de souris, Olfr746, Olfr124 et Olfr1093 en utilisant une stimulation vapor Cinnamaldéhyde (Figure 3). En même temps, nous avons utilisé une lutte antivectorielle vide (Rho-pCI) pour assurer que les activités induite par l’odeur des RUP testés étaient spécifiques (Figure 3A). L’activation en temps réel des RUP sur relance de vapeur odorante a été surveillé mesure plus de 20 cycles. Les ...

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Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

Physiologiquement, les odorants récepteurs sont activés par des molécules odorantes inhalés en phase vapeur. Cependant, la plupart des systèmes in vitro utilisent une stimulation de la phase liquide odorant. Nous présentons ici une méthode qui permet un suivi en temps réel in vitro de l’activation des récepteurs odorants lors de la stimulation de la substance odorante en phase gazeuse.

En temps réel en Vitro suivi d’Activation des récepteurs de l’odeur par une substance odorante en Phase vapeur

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Notre protocole permet de mesurer la détection et la discrimination des odeurs volatiles avec un panneau de récepteurs odorants. Cette méthode ouvre la possibilité de développer des biocapteurs à base de récepteurs odorants. Cette technique permet une surveillance in vitro en temps réel de l’activation des récepteurs odorants sur les molécules d’odorant en phase de vapeur.Il comble l’écart entre les approches in vitro et in vivo. Cette méthode peut être utilisée pour comprendre la cinétique des événements qui conduisent à la perception des odeurs, y compris le rôle des enzymes métaboliques muqueales. Pour commencer, préparez M10 et M10 PSF selon le manuscrit.Les cellules sont cultivés en 10 millilitres de M10 PSF à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone. Observez le plat de culture sous un microscope à contraste de phase. Quand il atteint 100% confluent, divisez les cellules à une concentration inférieure en aspirant le média et en lavant les cellules doucement avec 10 millilitres de PBS.Puis aspirer le PBS et ajouter trois millilitres de trypsine-EDTA. Laisser réagir pendant environ une minute jusqu’à ce que les cellules se dissocient du plat. Ajouter cinq millilitres de M10 pour inactiver la trypsine, et pipette de haut en bas pour détacher les cellules attachées au plat.Transférer les huit millilitres de suspension cellulaire du plat dans un tube de 15 millilitres et centrifuger le tube à 200 fois G pendant cinq minutes. Aspirer le supernatant et résusquer les cellules en cinq millilitres de M10 PSF en pipetage de haut en bas pour briser toute masse cellulaire. Évitez de créer des bulles dans le tube.Pour obtenir 20% de confluence des cellules, ajoutez neuf millilitres de PSF M10 dans un nouveau plat de culture cellulaire de 1000 millimètres, et transférez un millilitre de la solution cellulaire résuspendue. Incuber à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone. Ce plat, assis à 20% de confluence, atteindra 100% de confluence en 48 heures.Placer le plat sous un microscope à contraste de phase à observer. Prenez 1/10 du plat de culture de confluence 100% cellulaire. Aspirer le média et laver les cellules doucement avec 10 millilitres de PBS.Ensuite, traitez les cellules avec trypsine-EDTA et M10, centrifugeuse, et traiter à nouveau avec M10 PSF comme précédemment effectué. Pour réaliser une plaque de 96 puits, ajoutez 500 microlitres des cinq millilitres des cellules résuspendues à 5,5 millilitres de M10 PSF frais. Mélangez les cellules et le PSF M10 sans générer de bulles d’air.Pipette 50 microlitres des cellules suspendues diluées dans chaque puits de la plaque de 96 puits à l’aide d’une pipette multicanal. Incuber toute la nuit à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone. Tout d’abord, placez la plaque de 96 puits cultivé pendant la nuit sous un microscope à contraste de phase, observez la confluence cellulaire et assurez-vous qu’elle se situe entre 30 % et 50 % Préparez un premier mélange de transfection dans un tube de 1,5 millilitre qui contient les plasmides communs à l’ensemble de la plaque selon le manuscrit.Rho-pCi est un contrôle négatif vecteur vide, et Olfr1377 est un contrôle positif connu pour répondre à l’acétophénone odorant testé. Diviser le mélange en deux mélanges de transfection contenant l’un des plasmides de contrôle. Préparer un deuxième mélange de transfection contenant 500 microlitres de MEM et 20 microlitres de lipofectamine 2000 réagent.Ajouter la moitié du deuxième mélange à chaque réservoir bien et mélanger délicatement en pipetting de haut en bas. Incuber le tube pendant 15 minutes à température ambiante. Ajouter cinq millilitres de M10 pour une plaque de 96 puits.Ajouter 2,5 millilitres dans chaque puits de réservoir et mélanger délicatement. Remplacez le M10 PSF dans la plaque de 96 puits précédemment plaquée par 50 microlitres du dernier média de transfection. Incuber toute la nuit à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone.Ouvrez ensuite la porte du luminomètre et insérez le tube relié à la pompe à vide. Passer l’aspirateur dans la chambre du luminomètre pendant la nuit. Après la transfection, observez la plaque de 96 puits sous un microscope de contraste de phase pour assurer une confluence cellulaire entre 60% et 100%Préparez la solution de stimulation de la solution de sel équilibré de Hank contenant 10 millimolar de HEPES et cinq millimolar de D-glucose.Retirer le milieu de transfection de la plaque de 96 puits et laver les cellules en ajoutant 50 microlitres de solution de stimulation fraîche à chaque puits. Pour diluer la solution de reagent GloSensor cAMP, pipette 2,75 millilitres de la solution de stimulation dans un tube de cinq millilitres et ajouter 75 microlitres de la solution de réaccente cAMP. Retirez la solution de stimulation des puits et ajoutez 25 microlitres de solution réaccienne diluée à chaque puits.Incubez la plaque de 96 puits à température ambiante dans un environnement sombre et sans odeur pendant deux heures. Tout d’abord, diluer l’acétophénone odorant à 1% dans 10 millilitres d’huile minérale et capuchon du tube. Avant la fin du temps d’incubation du réaccônable de l’AMP, ajouter 25 microlitres de la solution odorante à chaque puits dans une nouvelle plaque de 96 puits.Ensuite, placez cette plaque d’odorant dans la chambre du luminomètre pendant cinq minutes pour équilibrer la chambre avec des molécules odorantes volatiles. Réglez le luminomètre pour enregistrer la luminescence avec zéro seconde de retard pendant 20 cycles de mesure de la plaque de 90 secondes, avec 0,7 seconde d’intervalle entre les cycles. Juste avant de lire la plaque, retirer la plaque d’odorant de la chambre.Dans la plaque de 96 puits contenant les cellules transfectées, ajouter 25 microlitres d’odorant dans l’espace entre les puits, et remettre rapidement la plaque dans la chambre. Commencez la mesure de luminescence de tous les puits pendant 20 cycles dans les 30 minutes. Après la mesure de la luminescence, retirer le odorant restant à l’intérieur du luminomètre en aspirant abondamment les odorants dans la chambre de lecture pendant au moins deux heures.Remplacer par de l’air frais en envoyant de l’air comprimé pendant cinq minutes avant d’incuber le prochain odorant afin d’éviter la contamination croisée des odeurs volatiles. Pour commencer l’analyse des données, exportez les données à partir du logiciel luminomètre. Moyenne des répliques du même OR pour chaque temps d’enregistrement.Pour calculer la réponse normalisée de la SALLE à tout contrôle éventuel, divisez la valeur moyenne vectorielle vide à la valeur moyenne de la SALLE à chaque heure d’enregistrement. Normalisez chaque réponse or à leur activité basale en divisant la réponse moyenne ou à zéro seconde à chaque réponse de temps d’enregistrement. Pour obtenir une valeur de réponse or unique pour la courbe de chaque OR, résumez toutes les valeurs de luminescence de chaque temps d’enregistrement pour chaque PIÈCE afin d’obtenir la zone sous la courbe.Dans cette expérience, l’activation en temps réel des ors de souris sur le stimulus d’odorant de vapeur a été surveillée sur 20 cycles de mesure. Une lutte antivectorielle vide a été utilisée pour s’assurer que les activités induites par les odorants des OP testées étaient spécifiques. Les données de chaque puits ont d’abord été normalisées à la valeur moyenne de contrôle vectoriel vide pour chaque cycle.Ensuite, pour comparer les différentes réponses des OR, les données ont été normalisées aux niveaux d’activité basale de la SA dans cet essai. Les valeurs d’activation unique pour chaque OR ont été calculées en calculant la zone sous la courbe pour chaque OR en résumant les valeurs d’émission de tous les cycles de mesure. En outre, les réponses dépendantes de la dose peuvent être mesurées à l’aide de doses croissantes d’odorants.La réponse d’Olfr1377 à la stimulation d’acétophénone à cinq concentrations a été enregistrée. Seules les trois concentrations plus élevées ont pu activer Olfr1377. La stimulation composée pure montre une tendance à diminuer la réponse de LA au fil du temps, probablement due à la toxicité cellulaire.Pendant l’étape, vous devez ajouter l’odorant dilué entre le puits, et être prêt à commencer rapidement l’enregistrement de la plaque. Le temps entre l’ajout d’odorants et la surveillance doit être réduit au minimum et constant entre deux expériences. Dans les cellules d’atria sont des matériaux biodangereux, alors rappelez-vous de disposer les cellules dans les dispensaires appropriés.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Odorant induites réponses enregistrées à partir de neurones récepteurs olfactifs en utilisant la technique de la pipette d&#39;aspiration

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Recherche

Neurosciences

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

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Mesure des variations de la concentration de calcium intracellulaire et de l&#39;efficacité synaptique dans le mollusque<em&gt; Aplysie</em

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

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Une<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Induite par laser Spinal Cord Injury modèle pour évaluer les mécanismes de la dégénérescence axonale dans en temps réel

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Perforé patch-clamp enregistrement des souris neurones sensoriels olfactifs dans neuroépithélium Intact: Analyse fonctionnelle des neurones exprimant un récepteur odorant Identifié

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Un protocole pour l’Administration de la Real-Time IRMf formation Neurofeedback

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Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

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Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

Cellules vivantes mesure d’odorants récepteur Activation en utilisant un essai en temps réel de cAMP

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Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

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Localisation des gènes des récepteurs odorants dans les antennes acridiennes par ARN<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridation

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

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