Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal NIH (DC014423 e DC016224) e il progetto di RealNose con l'agenzia di Defense Advanced Research Project. YF alloggiato presso la Duke University, con il sostegno finanziario dal programma di JSP per avanzare strategico reti internazionali accelerare la circolazione dei ricercatori di talento (R2801). Ringraziamo Sahar Kaleem per l'editing del manoscritto.

1. Hana3A cellule di cultura
<ol><li>Preparare M10 (Medium essenziale minimo (MEM) più 10% siero bovino fetale di v/v (FBS)) e M10PSF (M10 plus 100 µ g/mL di penicillina-streptomicina e 1.25 µ g/mL amfotericina B).</li>
	<li>Coltura di cellule in 10 mL di M10PSF in una piastra di coltura cellulare di 100 mm in un incubatore a 37 ° C e 5% di anidride carbonica (CO2).</li>
	<li>Dividere le celle ogni 2 giorni con un rapporto di 20%: quando la confluenza del 100% delle cellule (circa 1,1 x 107 ce...

La percezione dell'odore è fondamentalmente dipenda l'attivazione di ORs. Di conseguenza, comprensione delle loro funzionalità è necessaria per rompere i complessi meccanismi che utilizzano il cervello a percepire l'ambiente chimico volatile. Tuttavia, la comprensione di questo processo è stata ostacolata dalle difficoltà nello stabilire un metodo affidabile per schermare il repertorio OR per funzionalità contro odoranti in vitro. Cella espressione eterologa e superficie di ORs è stato parzialmente risolt...

Il senso dell'olfatto permette animali terrestri interagire con il loro ambiente chimico volatile per unità comportamenti ed emozioni. Fondamentalmente, il processo di rilevamento di odore comincia con la prima interazione di molecole odorant con il sistema olfattivo, a livello di odorizzante recettori (ORs)1. Nei mammiferi, ORs individualmente sono espressi nei neuroni sensoriali olfattivi (OSNs) situati in epitelio olfattivo2. Appartengono alla famiglia del ricevitore (GPCR) accoppiati a proteine G e più precisamente alla rodopsina-come Sub-famiglia (anche chiamato classe A). Coppia di ORs con stimolatore G proteine Golf cui attivazione porta alla produzione di cAMP seguita dall'apertura di canali di gated nucleotide ciclico e la generazione di potenziali d'azione. È accettato che una percezione di odore si basa su un modello specifico di attivato ORs3,4 e quindi riconoscimento di odore segue uno schema di codifica combinatorio, dove uno o può essere attivato da un set di odorizzazione e una odorant può attivare un combinazione di ORs. E attraverso tale codifica combinatoria, è postulato che gli organismi possono rilevare e discriminare tra una miriade di molecole odorose volatili. Una delle chiavi per comprendere il modo in cui sono percepiti odori è capire come e quali ORs sono attivati da un determinato odore.
Nel tentativo di delucidare odorant- o interazioni, analisi funzionale in vitro hanno giocato un ruolo essenziale. L'identificazione di ligandi odorose agonista per orfano ORs (de-orphanization OR) è stato un campo molto attivo negli ultimi venti anni, attraverso l'uso di vari in vitro, ex vivo e saggi funzionali in vivo5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17.
Sistemi di analisi in vitro sono più adatti per la dettagliata caratterizzazione funzionale di ORs, inclusa l'identificazione i domini funzionali e residui critici di ORs, nonché potenziali applicazioni di ingegneria. Tuttavia, ulteriore sviluppo di sistemi in vitro preziosi per ORs è stata una sfida, in parte a causa di difficoltà con coltura OSNs ed espressione funzionale di ORs in cellule eterologhe. La prima sfida era stato di stabilire protocolli consentiti per l'espressione di superficie delle cellule di ORs funzionale nella mappatura della odorant-interazioni OR. Un numero di gruppi indipendenti hanno utilizzato vari approcci5,6,7,8,9,10,11,12, 14,18,19,20. Uno dei primi risultati è stato effettuato da Krautwurst et in tag N-terminale di ORs con una sequenza abbreviata della rodopsina (Rho-tag) e osservato una miglioramento espressione di superficie di cellule embrionali umane del rene (HEK)13. Variazioni apportate il cartellino attaccato alla sequenza OR è ancora un percorso esplorato per migliorare OR espressione e funzionalità19,21. Saito et al.. quindi identificato il recettore-il trasporto della proteina 1 (RTP1) e RTP2 che facilitano il traffico di OR. 22 una versione più breve di RTP1, chiamato RTP1S, ha anche dimostrata di essere ancor più efficace che la proteina originale23. Lo sviluppo di una linea cellulare (Hana3A) che esprime stabilmente Golf, REEP1, RTP1, RTP2 24, accoppiato con l'uso di adenosina monofosfato ciclico (cAMP) reporter ha permesso la identificazione di odorant-interazioni OR. Il meccanismo da cui la famiglia RTP di proteine promuove espressione di superficie delle cellule di ORs rimane essere determinata.
Un avvertimento di questi metodi consolidati è che si basano sulla stimolazione odorant in fase liquida, ovvero odoranti sono pre-disciolti in un mezzo di stimolazione e stimolano le cellule sostituendo il mezzo. Questo è molto diverso dalle condizioni fisiologiche dove molecole odorant raggiungere l'epitelio olfattivo in fase vapore e attivare ORs di dissoluzione nella mucosa nasale. Per assomigliare più molto attentamente l'esposizione stimolo fisiologicamente rilevanti, Sanz et al.20 proposto un test basato sulla stimolazione vapor applicando una goccia di soluzione di odorizzante per appendere sotto la faccia interna di una pellicola di plastica posizionata sulla cima di pozzi di cella. Hanno registrato le risposte di calcio monitorando l'intensità di fluorescenza. Questo metodo è stato il primo ad utilizzare la stimolazione odorant fase di aria, ma non consentiva una grande proiezione di attivazione OR.
Qui, abbiamo sviluppato un nuovo metodo che consente il monitoraggio in tempo reale di attivazione in vitro OR via stimolazione odorant fase di vapore mediante l'analisi di Glosensor (Figura 1). Questo test è stato utilizzato in precedenza nel contesto del liquido odorizzante stimolazione18,19,25,26,27,28,29, 30 , 31. la sezione monitoraggio del luminometro prima è equilibrata con odorant vaporizzato prima piastra di lettura (Figura 1A). Molecole odorant sono quindi solvatato nel buffer, balneazione Hana3A cellule che esprimono l'OR di interesse, RTP1S e le proteine Glosensor (Figura 1B). Se l'odorant è un agonista dell'OR, OR passare a una conformazione attivata e associare il Golf, attivando l'adenilato ciclasi (AC) e infine causare livelli di cAMP a salire. Questo cAMP aumentante sarà associare a e attivare la proteina di Glosensor per generare luminescenza catalizzando luciferina. Questa luminescenza viene quindi registrato dal luminometro e consente il monitoraggio di attivazione OR. Questo metodo è di grande interesse nel contesto del deorphanization OR come porta sistemi in vitro più vicino alla naturale percezione di odori.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

Percezione olfattiva inizia con l'interazione di odorizzazione con recettori odorant (o) espressi dai neuroni sensoriali olfattivi (OSN). Riconoscimento di odore segue uno schema di codifica combinatorio, dove uno o può essere attivato da un set di odorizzazione e una odorant può attivare una combinazione di ORs. Attraverso tale codifica combinatoria, organismi possono rilevare e discriminare tra una miriade di molecole odorose volatili. Così, un odore a una data concentrazione può essere descritto da un modello di attivazione di ORs, che è specifico per ogni odore. In questo senso, i meccanismi che il cervello utilizza per percepire odore richiede la comprensione odorant di cracking-interazioni OR. Ecco perché la comunità di olfatto è impegnata a "de-orphanize" questi recettori. Sistemi in vitro convenzionali utilizzati per identificare odorant- o interazioni hanno utilizzato incubazione delle cellule media con odorant, che è distinto dal rilevamento naturale degli odori tramite dissoluzione odoranti del vapore nella mucosa nasale prima di interagire con ORs. Qui, descriviamo un nuovo metodo che consente il monitoraggio in tempo reale di attivazione OR via odoranti di fase del vapore. Il nostro metodo si basa sul rilascio campo di misura di luminescenza usando l'analisi di Glosensor. E colma le lacune attuali tra approcci in vivo e in vitro e fornisce una base per un sensore chimico volatile biomimetici.

Abbiamo proiettato la risposta di tre mouse ORs, Olfr746, Olfr124 e Olfr1093 utilizzando la stimolazione di cinnamaldeide vapor (Figura 3). Contemporaneamente, abbiamo utilizzato un controllo di vettore vuoto (Rho-pCI) per assicurare che le attività odorant-indotta delle RUP testate erano specifiche (Figura 3A). L'attivazione in tempo reale delle RUP su stimolo odorant vapor è stato monitorato misura oltre 20 cicli. I dati per ogni bene in pri...

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Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

Fisiologicamente, odorant recettori sono attivati da molecole odorant inalati in fase gassosa. Tuttavia, più sistemi in vitro utilizzano stimolazione odorant fase liquida. Qui, presentiamo un metodo che consente il monitoraggio in tempo reale in vitro dell'attivazione del recettore odorant stimolazione odorant in fase vapore.

In tempo reale In Vitro monitoraggio dell'attivazione del recettore Odorant da un Odorant in fase gassosa

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Il nostro protocollo consente di misurare il rilevamento e la discriminazione degli odori volatili con un pannello di recettori odoranti. Questo metodo apre la possibilità di sviluppare biosensori a base di recettore degli odori. Questa tecnica consente il monitoraggio in vitro in tempo reale dell'attivazione del recettore degli odori sulle molecole odoranti in fase di vapore.Colma il divario tra approcci in vitro e in vivo. Questo metodo può essere utilizzato per comprendere la cinetica degli eventi che portano alla percezione degli odori, incluso il ruolo degli enzimi metabolici mucosi. Per iniziare, preparare M10 e M10 PSF secondo il manoscritto.Le cellule sono coltivate in 10 millilitri di PSF M10 a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. Osserva il piatto della coltura al microscopio a contrasto di fase. Quando raggiunge il 100% di confluenza, dividere le cellule a una concentrazione inferiore aspirando il supporto e lavando delicatamente le cellule con 10 millilitri di PBS.Quindi aspirare il PBS e aggiungere tre millilitri di tripside-EDTA. Lasciare che reagisca per circa un minuto fino a quando le cellule si dissociano dal piatto. Aggiungere cinque millilitri di M10 per inattivare la tripina e pipettare su e giù per staccare le celle attaccate al piatto.Trasferire gli otto millilitri di sospensione cellulare dal piatto a un tubo da 15 millilitri e centrifugare il tubo a 200 volte G per cinque minuti. Aspirare il supernatante e rimescolare le cellule in cinque millilitri di PSF M10 tubazione su e giù per rompere qualsiasi massa cellulare. Evitare di creare bolle nel tubo.Per ottenere il 20% di confluenza di cellule, aggiungere nove millilitri di PSF M10 in un nuovo piatto di coltura cellulare da 1.000 millimetri e trasferire un millilitro della soluzione cellulare risosopensa. Incubare a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. Questo piatto, seduto al 20% di confluenza, raggiungerà il 100% di confluenza in 48 ore.Posizionare il piatto sotto un microscopio a contrasto di fase da osservare. Prendi 1/10 del piatto di coltura di confluenza cellulare al 100%. Aspirare il supporto e lavare delicatamente le cellule con 10 millilitri di PBS.Quindi trattare le cellule con tripsiderina-EDTA e M10, centrifugare e trattare di nuovo con M10 PSF come precedentemente eseguito. Per realizzare una piastra da 96 porri, aggiungere 500 microlitri dai cinque millilitri di cellule rimostrate a 5,5 millilitri di PSF M10 freschi. Mescolare le celle e M10 PSF senza generare bolle d'aria.Pipetta 50 microlitri delle celle sospese diluite in ogni pozzo della piastra da 96 pozza utilizzando una pipetta multicanale. Incubare durante la notte a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. In primo luogo, posizionare la piastra a 96 pozzetti coltivata durante la notte sotto un microscopio a contrasto di fase, osservare la confluenza cellulare e assicurarsi che sia compresa tra il 30% e il 50%Preparare una prima miscela di trasfezione in un tubo da 1,5 millilitri che contiene i plasmidi comuni all'intera piastra secondo il manoscritto.Rho-pCi è un controllo negativo vettoriale vuoto, e Olfr1377 è un controllo positivo noto per rispondere all'acetofenone odorante testato. Dividere il mix in due miscele di trasfezione contenenti uno dei plasmidi di controllo. Preparare un secondo mix di trasfezione contenente 500 microlitri di MEM e 20 microlitri di lipofectamina 2000 reagente.Aggiungere bene metà del secondo mix a ciascun serbatoio e mescolare delicatamente pipettando su e giù. Incubare il tubo per 15 minuti a temperatura ambiente. Aggiungere cinque millilitri di M10 per una piastra da 96 po'.Aggiungere bene 2,5 millilitri in ogni serbatoio e mescolare delicatamente. Sostituire l'M10 PSF nella piastra da 96 po' placcata in precedenza con 50 microlitri del supporto di trasfezione finale. Incubare durante la notte a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica.Quindi aprire la porta del luminometro e inserire il tubo collegato alla pompa per vuoto. Aspirare la camera del luminometro durante la notte. Dopo la trasfezione, osservare la piastra a 96 porri sotto un microscopio a contrasto di fase per assicurare una confluenza cellulare tra il 60% e il 100%Preparare la soluzione di stimolazione della soluzione di sale bilanciato di Hank contenente 10 millimolare di HEPES e cinque millimolare di D-glucosio.Rimuovere il mezzo di trasfezione dalla piastra da 96 po 'e lavare le cellule aggiungendo 50 microlitri di soluzione di stimolazione fresca ad ogni pozzo. Per diluire la soluzione di reagente GloSensor cAMP, pipettare 2,75 millilitri della soluzione di stimolazione in un tubo da cinque millilitri e aggiungere 75 microlitri della soluzione reagente cAMP. Rimuovere la soluzione di stimolazione dai pozzi e aggiungere 25 microlitri di soluzione reagente cAMP diluita ad ogni pozzo.Incubare la piastra di 96 po 'a temperatura ambiente in un ambiente buio e privo di odori per due ore. In primo luogo, diluire l'acetofenone odorante all'1% in 10 millilitri di olio minerale e limitare il tubo. Prima della fine del tempo di incubazione del reagente cAMP, aggiungere 25 microlitri della soluzione di odorante ad ogni pozzo in una nuova piastra da 96 porri.Quindi posizionare questa piastra odorante nella camera del luminometro per cinque minuti per equilibrare la camera con molecole di odoro volatili. Impostare il luminometro per registrare la luminescenza con zero secondi di ritardo durante 20 cicli di misurazione della piastra di 90 secondi, con 0,7 secondi di intervallo tra i cicli. Poco prima di leggere la piastra, rimuovere la piastra odorante dalla camera.Nella piastra da 96 porri contenente le cellule trasfette, aggiungere 25 microlitri di odorante nello spazio tra i pozzi e rimettere rapidamente la piastra nella camera. Avviare la misurazione della luminescenza di tutti i pozzi per 20 cicli entro 30 minuti. Dopo la misurazione della luminescenza, rimuovere l'odore rimanente all'interno del luminometro aspirando ampiamente gli odori nella camera di lettura per almeno due ore.Sostituire con aria fresca inviando aria compressa per cinque minuti prima di incubare l'odore successivo per evitare la contaminazione incrociata dei volatili dell'odore. Per iniziare l'analisi dei dati, esportare i dati dal software del luminometro. Mediare le repliche dello stesso OR per ogni tempo di registrazione.Per calcolare la risposta OR normalizzata a qualsiasi controllo finale, dividere il valore medio vettoriale vuoto nel valore medio OR ad ogni tempo di registrazione. Normalizzare ogni risposta OR alla propria attività basale dividendo la risposta OR media a zero secondi per ogni risposta di tempo di registrazione. Per ottenere un singolo valore di risposta OR per la curva di ogni OR, sommare tutti i valori di luminescenza di ogni tempo di registrazione per ogni OR al fine di ottenere l'area sotto la curva.In questo esperimento, l'attivazione in tempo reale delle RO dei topi su stimolo odorante al vapore è stata monitorata su 20 cicli di misurazione. Un controllo vettoriale vuoto è stato utilizzato per garantire che le attività indotte da odori delle RO testate fossero specifiche. I dati per ogni pozzo sono stati prima normalizzati al valore medio di controllo vettoriale vuoto per ogni ciclo.Quindi, per confrontare le diverse risposte delle RO, i dati sono stati normalizzati ai livelli di OR di attività basale in questo saggio. I valori di attivazione singola per ogni OR sono stati calcolati calcolando l'area sotto la curva per ogni OR sommando i valori di emissione di tutti i cicli di misurazione. Inoltre, le risposte dose-dipendenti possono essere misurate utilizzando dosi di odori crescenti.È stata registrata la risposta di Olfr1377 alla stimolazione dell'acetofenone a cinque concentrazioni. Solo le tre concentrazioni più elevate sono state in grado di attivare Olfr1377. La stimolazione del composto puro mostra una tendenza a diminuire la risposta or nel tempo, probabilmente a causa della tossicità cellulare.Durante il passaggio, è necessario aggiungere l'odore diluito tra il pozzo ed essere preparati ad avviare rapidamente la registrazione della piastra. Il tempo tra l'aggiunta di odori e il monitoraggio dovrebbe essere ridotto al minimo e costante tra due esperimenti. Nelle cellule atri ci sono materiale rischioso, quindi ricorda di smaltire le cellule nei dispensari appropriati.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Odorizzante indotte risposte registrate da neuroni recettori olfattivi con la tecnica della pipetta di aspirazione

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Ricerca

Neuroscienze

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

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I cambiamenti di monitoraggio della concentrazione di calcio intracellulare ed efficacia Synaptic nel Mollusco<em&gt; Aplysia</em

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Un<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Laser-indotta Spinal Cord Injury modello per valutare i meccanismi di degenerazione assonale in tempo reale

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Perforato Patch-clamp registrazione di topo neuroni sensoriali olfattivi In neuroepithelium intatto: Analisi funzionale di neuroni Esprimendo un Identificato odorizzante Receptor

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Un protocollo per l'amministrazione di Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

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Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

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Localizzazione dei geni del recettore degli odoranti nell&#39;antenna di Locust da RNA<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

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Oculare cinematica misurata dalla stimolazione In Vitro dei nervi cranici in tartaruga

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

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Identificazione della dopamina D1-alfa del ricevitore all'interno del roditore Nucleus Accumbens da un innovativo RNA In Situ Detection Technology

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...