Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra NIH (DC014423 og DC016224) og Defense Advanced Research Project Agency RealNose prosjektet. YF bodde ved Duke University med finansiell støtte fra JSP Program for fremme strategiske internasjonale nettverk å akselerere sirkulasjon av dyktige forskere (R2801). Vi takker Sahar Kaleem for redigering av manuskriptet.

1. Hana3A celler kultur
<ol><li>Forberede M10 (minst viktig Medium (MEM) pluss 10% v/v fosterets bovin serum (FBS)) og M10PSF (M10 pluss 100 µg/mL penicillin-streptomycin og 1,25 µg/mL amfotericin B).</li>
	<li>Kultur cellene i 10 mL av M10PSF i en 100 mm celle kultur parabol i en inkubator satt på 37 ° C og 5% karbondioksid (CO2).</li>
	<li>Dele cellene hver 2 dager i 20% forholdet: når 100% samløpet av celler (ca 1.1 x 107 celler) er observert under fase kontrast mikroskop, aspire media og...

Oppfatningen av lukt er fundamentalt avhengig aktivering av ORs. Følgelig kreves forståelse av funksjonaliteten å sprekk de komplekse mekanismene som hjernen bruker oppfatter sin flyktige kjemisk miljø. Imidlertid har forståelse av denne prosessen vært hemmet av vanskelighetene med å etablere en robust metode til skjermen OR repertoaret funksjonalitet mot odorants i vitro. Celle overflaten og heterologous uttrykk for ORs har vært delvis løst ved etableringen av merket reseptorer13</sup...

Luktesans kan terrestriske dyr å samhandle med flyktige kjemiske miljøet å kjøre atferd og følelser. Fundamentalt, lukt søkeprosessen starter med første samspillet av odorant molekyler med olfactory system på nivået av odorant reseptorer (ORs)1. I pattedyr uttrykkes individuelt ORs i olfactory sensoriske neurons (OSNs) ligger i olfactory epitel2. De hører til G-protein kombinert reseptor (GPCR) familien og mer presist til rhodopsin-lignende sub familien (også kalt klasse A). ORs par med stimulerende G protein Golf som aktivering fører til leiren produksjon etterfulgt av åpningen av syklisk nukleotid gated kanaler og generering av handlingen potensialer. Det er akseptert som en odor percept er avhengig av et bestemt mønster i aktivert ORs3,4 og derfor lukt anerkjennelse følger en kombinasjon koding ordningen, der en eller kan aktiveres ved et sett med odorants og én odorant kan aktivere en kombinasjonen av ORs. Og gjennom slike kombinasjon koding, er det postulerte at organismer kan oppdage og diskriminere imellom en myriade av flyktige lukt molekyler. En av nøklene til å forstå hvordan lukt oppfattes er å forstå hvordan og som ORs aktiveres en gitt lukt.
Å belyse odorant- eller interaksjoner, in vitro funksjonelle analyser har spilt en viktig rolle. Identifikasjon av Agonistiske illeluktende ligander for frittstående ORs (OR de orphanization) har vært et svært aktivt felt i de siste tyve årene, ved hjelp av ulike i vitro, ex vivo og i vivo funksjonelle analyser5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17.
In vitro analysen systemer er best egnet for detaljert funksjonelle karakterisering av ORs, inkludert identifisering det funksjonelle og kritisk rester av ORs, samt mulige tekniske programmer. Men har videre utvikling av verdifulle i vitro systemer for ORs vært en utfordring, delvis på grunn av problemer med dyrking OSNs og funksjonelle uttrykk for ORs i heterologous celler. Den første utfordringen var å etablere protokoller som tillatt til cellen overflaten uttrykk for funksjonell ORs i tilordningen av odorant-OR interaksjoner. Flere uavhengige grupper har utnyttet ulike tilnærminger5,6,7,8,9,10,11,12, 14,18,19,20. En av de tidligste prestasjonene ble gjort av Krautwurst et al. i merket N-terminus av ORs med en forkortet sekvens av rhodopsin (Rho-koden) og observert forbedret overflaten uttrykk i menneskelige embryonale nyre (HEK) celler13. Variasjoner gjort i koden knyttet til OR sekvensen er fortsatt en bane utforsket for å forbedre OR uttrykk og funksjonalitet19,21. Saito et al. deretter identifisert reseptor-transport protein 1 (RTP1) og RTP2 som letter OR menneskehandel. 22 en kortere versjon av RTP1, kalt RTP1S, har også vist å være enda mer effektiv enn den opprinnelige protein23. Utviklingen av en celle linje (Hana3A) som uttrykker stabilt Golf, REEP1, RTP1 og RTP2 24, kombinert med bruk av syklisk adenosin monofosfat (cAMP) journalister har aktivert identifikasjon av odorant-OR interaksjoner. Mekanismen som RTP familien av proteiner fremmer celle overflaten uttrykk for ORs gjenstår å fastsettes.
En påminnelse av disse etablerte metoder er at de er avhengige av odorant stimulering i flytende fase, betyr at odorants pre oppløst i en stimulering medium og stimulere celler ved å erstatte medium. Dette er svært forskjellig fra de fysiologiske forholdene der odorant molekyler nå olfactory epitel i damp fase og aktivere ORs ved oppløsningen til nasal mucosa. Slik nærmere fysiologisk relevante stimulans eksponering, Sanz et al.20 foreslått en analyse basert på damp stimulering ved å bruke en dråpe odorant løsning å henge under indre overfor en plastfilm på oversiden av cellen brønner. De spilte inn kalsium svar ved å overvåke fluorescens intensitet. Denne metoden var først til å bruke air-fase odorant stimulering, men det gjorde ikke tillate en stor screening av OR aktivisering.
Her utviklet vi en ny metode som gir sanntids overvåking av i vitro OR aktivisering via damp fasen odorant stimulering av Glosensor analysen (figur 1). Denne analysen er brukt tidligere i forbindelse med flytende odorant stimulering18,19,25,26,27,28,29, 30 , 31. overvåking chamber of the luminometer er første equilibrated med fordampede odorant før plate lese (figur 1A). Odorant molekyler er da solvated inn i bufferen, bading Hana3A celler uttrykke eller interesse, RTP1S og Glosensor proteiner (figur 1B). Hvis odorant er en Agonistiske av OR, vil eller bytte til en aktivert konformasjon binde Golf, aktivere adenylyl cyclase (AC) og til slutt føre til leiren nivåer å stige. Denne stigende leiren vil binde til og aktivere Glosensor protein for å generere luminescence utløse luciferin. Denne luminescence deretter spilles av på luminometer og gjør OR aktivisering overvåking. Denne metoden er av høy rente i sammenheng med OR deorphanization som det bringer i vitro systemer nærmere til naturlige oppfatning av lukt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

Olfactory oppfatning begynner med samspillet av odorants med odorant reseptorer (eller) uttrykt av olfactory sensoriske neurons (OSN). Lukt anerkjennelse følger en kombinasjon koding ordningen, der en eller kan aktiveres ved et sett med odorants og én odorant kan aktivere en kombinasjon av ORs. Gjennom slike kombinasjon koding, kan organismer oppdage og diskriminere imellom en myriade av flyktige lukt molekyler. Dermed kan en lukt i en gitt konsentrasjon beskrives av en aktivisering mønster av ORs, som er spesifikk for hver lukt. I den forstand, sprengning mekanismer som hjernen bruker oppfatter lukt krever forståelse odorant-OR interaksjoner. Det er derfor luktesans samfunnet er forpliktet til "de-orphanize" disse reseptorene. Konvensjonelle i vitro systemer brukes til å identifisere odorant- eller interaksjoner har utnyttet rugende cellen media med odorant, som er forskjellig fra naturlige påvisning av lukt via damp odorants oppløsning i nasal mucosa før samarbeidsstil ORs. Her beskriver vi en ny metode som tillater sanntids overvåking av OR aktivisering via damp-faset odorants. Vår metode er avhengig av måle leiren utgivelsen av luminescence bruker Glosensor analysen. Det bygger gjeldende gapene mellom i vivo og in vitro tilnærminger og gir et grunnlag for en biomimetic flyktige kjemiske sensor.

Vi vist responsen av tre mus ORs, Olfr746, Olfr124 og Olfr1093 bruker cinnamaldehyde damp stimulering (Figur 3). Samtidig, vi brukte en tom vektor kontroll (Rho-pCI) for å sikre at odorant-indusert aktiviteter testet ORs var bestemt (Figur 3A). Sanntid aktivering av ORs på damp odorant stimulans var overvåket over 20 målesykluser. Dataene for hver var godt først normalisert tom vektor kontroll gjennomsnitt verdi for hver syklus (<strong cla...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

Fysiologisk aktiveres odorant reseptorer av odorant molekyler inhalert i damp fase. Men benytter mest i vitro systemer flytende fase odorant stimulering. Her presenterer vi en metode som gjør at sanntid i vitro overvåking av odorant reseptor aktivisering på odorant stimulering i damp fase.

Sanntid i Vitro overvåking av Odorant reseptor aktivering av en Odorant i damp fase

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Vår protokoll gjør det mulig å måle deteksjon og diskriminering av flyktige lukt med et panel av luktreseptorer. Denne metoden åpner opp muligheten for å utvikle luktreseptorbaserte biosensorer. Denne teknikken tillater sanntidin vitro overvåking av luktreseptoraktivering på luktmolekyler i dampfasen.Det fyller gapet mellom in vitro og in vivo tilnærminger. Denne metoden kan brukes til å forstå kinetikken til hendelser som fører til luktoppfatning, inkludert rollen som slimhinne metabolske enzymer. For å begynne, forberede M10 og M10 PSF i henhold til manuskriptet.Celler dyrkes i 10 milliliter M10 PSF ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. Vær oppmerksom på kulturfatet under et fasekontrastmikroskop. Når den når 100% samløpet, del cellene til en lavere konsentrasjon ved å aspirere mediet og vaske cellene forsiktig med 10 milliliter PBS.Deretter aspirerer PBS og legger til tre milliliter trypsin-EDTA. La den reagere i omtrent ett minutt til cellene dissosierer fra parabolen. Tilsett fem milliliter M10 for å inaktivere trypsin, og pipette opp og ned for å løsne cellene festet til parabolen.Overfør de åtte milliliter cellesuspensjon fra fatet til et 15-milliliter rør, og sentrifuger røret ved 200 ganger-G i fem minutter. Aspirer de overnaturante og gjenoppusse cellene i fem milliliter av M10 PSF ved å pipetter opp og ned for å bryte opp noen cellemasse. Unngå å lage bobler i røret.For å oppnå 20% samløpet av celler, tilsett ni milliliter M10 PSF i en ny 1000 millimeter cellekulturrett, og overfør en milliliter av den gjenbrukte celleløsningen. Inkuber ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. Denne retten, sittende ved 20% samløpet, vil nå 100% samløpet i 48 timer.Plasser parabolen under et fasekontrastmikroskop for å observere. Ta 1/10 av 100% celle samløpet kultur parabolen. Aspirer mediet og vask cellene forsiktig med 10 milliliter PBS.Behandle deretter cellene med trypsin-EDTA og M10, sentrifuge, og behandle igjen med M10 PSF som tidligere utført. For å realisere en 96-brønns plate, tilsett 500 mikroliter fra de fem milliliter av resuspended celler til 5,5 milliliter fersk M10 PSF. Bland cellene og M10 PSF uten å generere luftbobler.Pipette 50 mikroliter av de fortynnede suspenderte cellene i hver brønn av 96-brønnsplaten ved hjelp av en flerkanals pipette. Inkuber over natten ved 37 grader Celsius og 5%karbondioksid. Først plasserer du 96-brønnplaten dyrket over natten under et fasekontrastmikroskop, observerer cellekonfluensen og kontrollerer at den er mellom 30% og 50% Forbered en første transfeksjonsblanding i et 1,5-milliliter rør som inneholder plasmidene som er felles for hele platen i henhold til manuskriptet.Rho-pCi er en tomvektor negativ kontroll, og Olfr1377 er en positiv kontroll kjent for å reagere på den testede luktende acetopfenon. Del blandingen i to transfection blandinger som inneholder en av kontrollplasmidene. Forbered en annen transfeksjonsblanding som inneholder 500 mikroliter MEM og 20 mikroliter lipofectamine 2000 reagens.Tilsett halvparten av den andre blandingen til hvert reservoar godt og bland forsiktig ved å pipetter opp og ned. Inkuber t-banen i 15 minutter ved romtemperatur. Tilsett fem milliliter M10 for en 96-brønns plate.Tilsett 2,5 milliliter i hvert reservoar godt og bland forsiktig. Bytt M10 PSF i den tidligere belagte 96-brønnsplaten med 50 mikroliter av det endelige transfeksjonsmediet. Inkuber over natten ved 37 grader Celsius og 5%karbondioksid.Åpne deretter døren til armometeret og sett inn røret som er koblet til vakuumpumpen. Støvsug kammeret på armometeret over natten. Etter transfeksjon, observere 96-brønnsplaten under en fase kontrast mikroskop for å sikre en celle samløpet mellom 60%og 100%Forbered stimuleringsløsningen av Hank balansert salt løsning som inneholder 10-millimolar av HEPES og fem millimolar D-glukose.Fjern transfeksjonsmediet fra 96-brønnplaten og vask cellene ved å tilsette 50 mikroliter frisk stimuleringsløsning til hver brønn. For å fortynne GloSensor cAMP reagensløsning, pipette 2,75 milliliter av stimuleringsløsningen i et fem milliliter rør og tilsett 75 mikroliter av cAMP reagensløsningen. Fjern stimuleringsløsningen fra brønnene, og tilsett 25 mikroliter fortynnet cAMP reagensløsning til hver brønn.Inkuber 96-brønnplaten ved romtemperatur i et mørkt og luktfritt miljø i to timer. Først fortynner du luktende acetopfenon til 1% i 10 milliliter mineralolje og cap røret. Før slutten av cAMP-reagensinkubasjonstiden, tilsett 25 mikroliter av luktmiddeloppløsningen til hver brønn i en ny 96-brønns plate.Legg deretter denne luktplaten i luminometerkammeret i fem minutter for å likevekte kammeret med flyktige luktmolekyler. Still inn armometeret for å registrere lysstyrken med null sekunder med forsinkelse under 20 sykluser med 90-sekunders platemåling, med 0,7 sekunder intervall mellom sykluser. Rett før du leser platen, fjern luktplaten fra kammeret.I 96-brønnplaten som inneholder de trans infiserte cellene, legg til 25 mikroliter lukt i rommet mellom brønnene, og legg raskt platen tilbake i kammeret. Start luminescencemålingen av alle brønnene i 20 sykluser innen 30 minutter. Etter luminescence målingen, fjern den gjenværende luktstoff inne i luminometeret ved å støvsuge luktstoffer i lesekammeret mye i minst to timer.Bytt ut med frisk luft ved å sende trykkluft i fem minutter før du inkuberer neste luktmiddel for å unngå krysskontaminering av lukt flyktige. For å starte dataanalyse, eksporter dataene fra luminometerprogramvaren. Gjennomsnittlig replikeringer av samme ELLER for hver opptakstid.Hvis du vil beregne normalisert ELLER-svar på en eventuell kontroll, deler du den tomme vektorgjennomsnittsverdien til den OR-gjennomsnittlige verdien ved hvert opptakstid. Normaliser hvert OR-svar på basalaktiviteten ved å dele den gjennomsnittlige ELLER-responsen på null sekunder til hvert opptakstidssvar. Hvis du vil ha én enkelt ELLER-svarverdi for kurven for hver OR, summerer du alle luminescence-verdiene for hver opptakstid for hver ELLER for å få området under kurven.I dette eksperimentet ble sanntidsaktiveringen av mus ORs ved dampluktende stimulans overvåket over 20 målesykluser. En tom vektorkontroll ble brukt for å sikre at de luktinduserte aktivitetene til de testede OR-ene var spesifikke. Dataene for hver brønn ble først normalisert til den tomme vektorkontrollgjennomsnittverdien for hver syklus.Deretter, for å sammenligne forskjellige ORs svar, ble dataene normalisert til OR-nivåene av basal aktivitet i denne analysen. Enkeltaktiveringsverdier for hver OR ble beregnet ved å beregne området under kurven for hver OR ved å summere utslippsverdiene for alle målesykluser. I tillegg kan doseavhengige responser måles ved hjelp av økende luktdoser.Responsen fra Olfr1377 på acetopfenonstimulering ved fem konsentrasjoner ble registrert. Bare de tre høyere konsentrasjonene var i stand til å aktivere Olfr1377. Den rene sammensatte stimuleringen viser en tendens til å redusere ELLER-responsen over tid, sannsynligvis på grunn av celletoksisitet.Under trinnet bør du legge til fortynnet luktmiddel mellom brønnen, og være forberedt på å starte raskt opptaket av platen. Tiden mellom luktmiddeltillegg og overvåking bør minimeres og konstant mellom to eksperimenter. I atria celler er biofarlig materiale, så minn på å kaste cellene i de aktuelle dispensaries.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

En<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Laser-indusert ryggmargsskade Model å vurdere Mekanismer av aksonal degenerasjon i sanntid

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Perforert Patch-clamp Opptak av Mouse olfactory sensoriske nevroner i Intakt neuroepithelium: Funksjonell analyse av nerveceller uttrykker en Identifiserte odoranten Receptor

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

En protokoll for administrasjon av Real-Time fMRI Neurofeedback opplæring

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Analyse for å måle nukleocytoplasmisk transport i sanntid innen Motor Neuron-lignende NSC-34-celler

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

Live-celle måling av Odorant reseptor aktivisering benytter en sanntid leiren analysen

The enormous sizes of the mammalian odorant receptor (OR) families present difficulties to find their cognate ligands among numerous volatile chemicals. ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Lokalisering av luktningsmiddelreceptorgener i Locust Antenna av RNA<em&gt; I situ</em&gt; Hybridisering

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Okulære kinematikk målt ved In Vitro stimulering av Hjernenerve i Turtle

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...