Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado por concessões do NIH (DC014423 e DC016224) e o defesa avançada pesquisa Agência RealNose projeto. YF permaneceu na Duke University, com apoio financeiro do programa JSPS para avanço estratégico internacional redes acelerar a circulação de talentosos pesquisadores (R2801). Agradecemos a Sahar Kaleem para edição do manuscrito.

1. Hana3A células de cultura
<ol><li>Preparar M10 (meio essencial mínimo (MEM) mais 10% de soro bovino fetal (FBS) de v/v) e M10PSF (M10 e mais de 100 µ g/mL penicilina-estreptomicina e 1,25 µ g/mL anfotericina B).</li>
	<li>Cultura de células em 10 mL de M10PSF em um prato de cultura de célula de 100 mm em uma incubadora a 37 ° C e 5% de dióxido de carbono (CO2).</li>
	<li>Divida as células a cada 2 dias na proporção de 20%: quando a confluência de 100% das células (aproximadamente 1.1 x 10<sup...

A percepção de odor é fundamentalmente dependente da ativação de ORs. Por conseguinte, compreensão de sua funcionalidade é necessária para quebrar os mecanismos complexos que usam o cérebro para perceber seu ambiente químico volátil. No entanto, a compreensão deste processo tem sido dificultada pelas dificuldades em estabelecer um método robusto para o repertório de OR para funcionalidade contra odores in vitro. da tela Célula expressão heteróloga e superfície do RUP foi parcialmente resolvido ...

O sentido do olfato permite animais terrestres interagir com seu ambiente químico volátil para unidade comportamentos e emoções. Fundamentalmente, o processo de detecção de odor começa com a primeira interação de moléculas odorant com o sistema olfativo, ao nível da odorant receptores (ORs)1. Nos mamíferos, RUP individualmente são expressos em neurônios sensoriais olfativos (OSNs) localizados no epitélio olfatório2. Pertencem à família de receptores (GPCR) proteína G-acoplada e mais precisamente a rodopsina, como sub da família (também chamado de classe A). Casal de SRO com o estimulatórios G proteína Golf cuja ativação leva à produção de campo seguida a abertura de canais de nucleotídeo cíclico fechado e a geração de potenciais de ação. Aceita-se que um perceptivo de odor se baseia em um padrão específico de ativado ORs3,4 e, por conseguinte, o reconhecimento de odor segue um esquema de codificação combinatório, onde um OR pode ser ativado por um conjunto de odores e um odorante pode ativar um combinação de ORs. E através de tal codificação combinatória, postula-se que os organismos podem detectar e discriminar entre uma miríade de moléculas voláteis de odor. Uma das chaves para a compreensão de como os odores são percebidos é entender como e que RUP são ativadas por um determinado odor.
Na tentativa de elucidar odorant- ou interações, ensaios funcionais in vitro têm desempenhado um papel essencial. A identificação de ligantes odoríferos de agonista para órfão ORs (orphanization de OR) tem sido um campo muito ativo nos últimos vinte anos, através da utilização de vários in-vitro, ex vivo e in vivo de ensaios funcionais5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17.
Sistemas de ensaio in vitro são mais adequados para a caracterização funcional detalhada das RUP, incluindo a identificação dos domínios funcionais e resíduos críticos das regiões ultraperiféricas, bem como potenciais aplicações de engenharia. No entanto, mais desenvolvimento de sistemas in vitro valiosos para RUP tem sido um desafio, em parte devido à dificuldade com OSNs cultivo e expressão funcional das RUP em células heterólogos. O primeiro desafio foi estabelecer protocolos que permitiu a expressão de superfície celular de SRO funcional no mapeamento de odorante-interações OR. Um número de grupos independentes que utilizaram várias abordagens5,6,7,8,9,10,11,12, 14,18,19,20. Uma das primeiras realizações foi feita por Krautwurst et al. em tagged N-terminal do RUP com uma sequência curta de rodopsina (Rho-marca) e observaram uma expressão superfície melhorada em células de rim humano embrionário (HEK)13. Variações feitas para a etiqueta colada à sequência de OR é ainda um caminho explorado para melhorar OR expressão e funcionalidade19,21. Saito et al.. , em seguida, identificou a proteína do receptor-transporte 1 (RTP1) e RTP2 que facilitem tráfico de OR. 22 uma versão mais curta da RTP1, chamado RTP1S, também foi mostrada para ser ainda mais eficaz do que a proteína original23. O desenvolvimento de uma linha de celular (Hana3A) que expressa estàvel Golf, REEP1, RTP1 e RTP2 24, juntamente com o uso de repórteres de monofosfato de adenosina cíclico (cAMP) permitiu a identificação de odorante-interações OR. O mecanismo pelo qual a família RTP de proteínas promove a expressão de superfície celular de SRO permanece para ser determinado.
Uma limitação destes métodos estabelecidos é que eles dependem de odorante estimulação na fase líquida, significando que odorantes pre-são dissolvidos em um meio de estimulação e estimulam as células, substituindo o meio. Isto é muito diferente as condições fisiológicas onde moléculas odorant atingir o epitélio olfatório em fase vapor e ativar SRO por dissolução em mucosa nasal. Para mais se assemelham a exposição de estímulo fisiologicamente relevantes, Sanz et al20 propôs um ensaio com base na estimulação vapor aplicando uma gota de solução de odorante para pendurar sob a face interna de um filme plástico colocado no topo de poços de célula. Eles gravaram as respostas de cálcio, monitorando a intensidade de fluorescência. Este método foi o primeiro a usar a estimulação de odorante ar-fase, mas não permitia uma grande seleção de ativação OR.
Aqui, nós desenvolvemos um novo método que permite o monitoramento em tempo real da ativação de OR in vitro através de estimulação de odorante de fase vapor por Glosensor ensaio (Figura 1). Este ensaio tem sido usado anteriormente no contexto do líquido odorant estimulação18,19,25,26,,27,28,29, 30 , 31. a câmara de vigilância do luminómetro primeiro é incubada com odorant vaporizado antes da placa (Figura 1A) de leitura. Odorant moléculas são então solvated o buffer, banhando as células Hana3A, expressando o ou de interesse, RTP1S e as proteínas Glosensor (Figura 1B). Se o odorant é um agonista dos OR, o OR mudar para o uma conformação registrada e vincular o Golf, ativando a adenilato ciclase (AC) e em última análise, causar níveis acampamento a subir. Este acampamento nascente irá vincular a e ativar a proteína Glosensor para gerar luminescência catalisar luciferina. Esta luminescência é então gravada pelo luminómetro e possibilita o monitoramento de ativação OR. Esse método é de grande interesse no contexto do deorphanization OR pois traz sistemas in vitro mais próxima à natural percepção de odores.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

Percepção olfativa começa com a interação dos odorantes com os receptors odorant (ou) expressas pelos neurônios sensoriais olfativos (OSN). Reconhecimento de odor segue um esquema de codificação combinatório, onde um OR pode ser ativado por um conjunto de odores e um odorante pode ativar uma combinação de ORs. Através de tal codificação combinatória, organismos podem detectar e discriminar entre uma miríade de moléculas voláteis de odor. Assim, um odor em uma dada concentração pode ser descrito por um padrão de ativação do RUP, que é específico de cada odor. Nesse sentido, quebrando os mecanismos que o cérebro usa para perceber odor requer o entendimento odorant-interações OR. Eis porque a comunidade de olfação está empenhada em "de orphanize" estes receptores. Sistemas convencionais in-vitro, usados para identificar o odorant- ou interações têm utilizado a incubação mídia celular com odorante, que é distinta da natural detecção de odores através da dissolução de odores de vapor na mucosa nasal antes interagindo com RUP. Aqui, descrevemos um novo método que permite o monitoramento em tempo real de ativação OR através do vapor-fase odorantes. Nosso método se baseia na medição acampamento lançamento por luminescência usando o ensaio de Glosensor. Ele preenche lacunas atuais entre abordagens in vivo e in vitro e fornece uma base para um sensor de químicos voláteis biomimético.

Nós selecionados a resposta de três rato RUP, Olfr746, Olfr124 e Olfr1093 usando estimulação vapor de cinamaldeído (Figura 3). Simultaneamente, usamos um controle de vetor vazio (Rho-pCI) para garantir que as atividades de odorante-induzida das RUP testadas foram específicas(Figura 3). A ativação em tempo real das RUP mediante estímulo de vapor odorante foi monitorado ciclos de medição mais de 20. Os dados para cada bem primeiro foram...

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Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

Fisiologicamente, odorante receptores são ativados por moléculas odorant inaladas na fase de vapor. No entanto, mais sistemas in vitro utilizam o stimulation de odorante de fase líquida. Aqui, apresentamos um método que permite o monitoramento em tempo real e in vitro da ativação de receptores odorant após estimulação odorant em fase vapor.

Em tempo real em Vitro monitoramento da ativação do Odorant Receptor por um odorante na fase de Vapor

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Nosso protocolo permite medir a detecção e a discriminação de odores voláteis com um painel de receptores odorantes. Este método abre a possibilidade de desenvolver biosensores baseados em receptores odorantes. Esta técnica permite o monitoramento in vitro em tempo real da ativação do receptor odonte sobre moléculas odorantes em fase de vapor.Ele preenche a lacuna entre abordagens in vitro e in vivo. Este método pode ser usado para entender a cinética dos eventos que levam à percepção do odor, incluindo o papel das enzimas metabólicas mucosas. Para começar, prepare M10 e M10 PSF de acordo com o manuscrito.As células são cultivadas em 10 mililitros de M10 PSF a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Observe o prato de cultura sob um microscópio de contraste de fase. Quando atingir 100% de confluência, divida as células a uma menor concentração aspirando a mídia e lavando as células suavemente com 10 mililitros de PBS.Em seguida, aspire o PBS e adicione três mililitros de trypsin-EDTA. Deixe-o reagir por aproximadamente um minuto até que as células se dissociem do prato. Adicione cinco mililitros de M10 para inativar a trippsina, e pipeta para cima e para baixo para desacoprar as células ligadas ao prato.Transfira os oito mililitros de suspensão celular do prato para um tubo de 15 mililitros, e centrifugar o tubo a 200 vezes G por cinco minutos. Aspire o supernasce e resuspenda as células em cinco mililitros de M10 PSF, pipetando para cima e para baixo para quebrar qualquer massa celular. Evite criar bolhas no tubo.Para obter 20% de confluência de células, adicione nove mililitros de M10 PSF em um novo prato de cultura celular de 1.000 milímetros, e transfira um milímetro da solução celular resuspended. Incubar a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Este prato, sentado com 20%, atingirá 100% de confluência em 48 horas.Coloque o prato sob um microscópio de contraste de fase para observar. Pegue 1/10 do prato de cultura de confluência 100% celular. Aspire a mídia e lave as células suavemente com 10 mililitros de PBS.Em seguida, trate as células com trippsina-EDTA e M10, centrífuga, e trate novamente com M10 PSF como realizado anteriormente. Para realizar uma placa de 96 poços, adicione 500 microliters dos cinco mililitros de células resuspended a 5,5 mililitros de M10 PSF fresco. Misture as células e O PSF M10 sem gerar bolhas de ar.Pipeta 50 microliters das células suspensas diluídas em cada poço da placa de 96 poços usando uma pipeta multicanal. Incubar durante a noite a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Primeiro, coloque a placa de 96 poços cultivada durante a noite sob um microscópio de contraste de fase, observe a confluência celular e certifique-se de que está entre 30% e 50% Prepare uma primeira mistura de transfecção em um tubo de 1,5 mililitro que contém os plasmídeos comuns a toda a placa de acordo com o manuscrito.Rho-pCi é um controle negativo de vetor vazio, e Olfr1377 é um controle positivo conhecido por responder à acetofenona odorenada testada. Divida a mistura em duas misturas de transfecção contendo um dos plasmídeos de controle. Prepare uma segunda mistura de transfecção contendo 500 microliters de MEM e 20 microliters de reagente lipofectamina 2000.Adicione metade da segunda mistura a cada reservatório bem e misture suavemente por pipetar para cima e para baixo. Incubar o tubo por 15 minutos em temperatura ambiente. Adicione cinco mililitros de M10 para uma placa de 96 poços.Adicione 2,5 mililitros em cada poço do reservatório e misture delicadamente. Substitua o PSF M10 na placa de 96 poços anteriormente banhada por 50 microliters da mídia de transfecção final. Incubar durante a noite a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono.Em seguida, abra a porta do luminômetro e insira o tubo conectado à bomba de vácuo. Aspire a câmara do luminômetro durante a noite. Após a transfecção, observe a placa de 96 poços sob um microscópio de contraste de fase para garantir uma confluência celular entre 60% e 100% Prepare a solução de estimulação da Solução de Sal Balanceado de Hank contendo 10 milimolar de HEPES e cinco mililitros de D-glicose.Remova o meio de transfecção da placa de 96 poços e lave as células adicionando 50 microliters de solução de estimulação fresca a cada poço. Para diluir a solução de reagente GloSensor cAMP, pipeta 2,75 mililitros da solução de estimulação em um tubo de cinco mililitros e adicionar 75 microliters da solução de reagente cAMP. Remova a solução de estimulação dos poços e adicione 25 microliters de solução de reagente cAMP diluída a cada poço.Incubar a placa de 96 poços à temperatura ambiente em um ambiente escuro e livre de odor por duas horas. Primeiro, diluir a acetofenona odonte para 1% em 10 mililitros de óleo mineral e tampar o tubo. Antes do fim do tempo de incubação do reagente cAMP, adicione 25 microliters da solução odoante a cada poço em uma nova placa de 96 poços.Em seguida, coloque esta placa de odonte na câmara de luminômetro por cinco minutos para equilibrar a câmara com moléculas de odorante volátil. Defina o luminômetro para registrar a luminescência com zero segundos de atraso durante 20 ciclos de medição da placa de 90 segundos, com intervalo de 0,7 segundos entre os ciclos. Antes de ler a placa, retire a placa de odorante da câmara.Na placa de 96 poços contendo as células transfeinadas, adicione 25 microliters de odonte no espaço entre os poços, e rapidamente coloque a placa de volta na câmara. Inicie a medição de luminescência de todos os poços por 20 ciclos em 30 minutos. Após a medição da luminescência, remova o odorante restante dentro do luminômetro aspirando odores na câmara de leitura extensivamente por pelo menos duas horas.Substitua com ar fresco enviando ar comprimido por cinco minutos antes de incubar o próximo odor para evitar a contaminação cruzada de voláteis de odor. Para iniciar a análise dos dados, exporte os dados do software luminômetro. Em média, as réplicas do mesmo OR para cada tempo de gravação.Para calcular a resposta or normalizada a qualquer controle eventual, divida o valor vazio da média vetorial para o valor médio do OR a cada momento de gravação. Normalize cada resposta or à sua atividade basal dividindo a resposta or média em zero segundos para cada resposta de tempo de gravação. Para obter um único valor de resposta OR para a curva de cada OR, soma todos os valores de luminescência de cada tempo de gravação para cada OR, a fim de obter a área sob a curva.Neste experimento, a ativação em tempo real de ORs de camundongos sobre o estímulo odorante de vapor foi monitorada em mais de 20 ciclos de medição. Um controle de vetorial vazio foi usado para garantir que as atividades induzidas por odonte das RS testadas fossem específicas. Os dados de cada poço foram primeiro normalizados para o valor médio de controle de vetorial vazio para cada ciclo.Em seguida, para comparar diferentes respostas das ORs, os dados foram normalizados com os níveis de OR de atividade basal neste ensaio. Os valores de ativação única para cada OR foram calculados pelo cálculo da área sob a curva para cada OR, somando os valores de emissão de todos os ciclos de medição. Além disso, as respostas dependentes de dose podem ser medidas usando doses de odorante crescentes.A resposta de Olfr1377 à estimulação de acetofenona em cinco concentrações foi registrada. Apenas as três concentrações mais altas foram capazes de ativar Olfr1377. A estimulação composta pura mostra uma tendência a diminuir a resposta do OR ao longo do tempo, provavelmente devido à toxicidade celular.Durante a etapa, você deve adicionar o odorante diluído entre o poço, e estar preparado para iniciar rapidamente a gravação da placa. O tempo entre a adição e o monitoramento deve ser minimizado e constante entre dois experimentos. Nas células atria são material de risco biológico, então lembre-se de descartar as células nos dispensários apropriados.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Odorante induzidas respostas registradas a partir de neurônios receptores olfativos utilizando a técnica de sucção da pipeta

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Neurociência

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Alterações de monitoramento da concentração de cálcio intracelular e eficácia sináptica no Molusco<em&gt; Aplysia</em

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Um<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Induzida por laser Lesão Medular modelo para avaliar mecanismos de axonal Degeneration em tempo real

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Perfurado gravação patch-clamp de rato Olfactory neurônios sensoriais na Intact neuroepitélio: Análise Funcional do Neurônios Expressando uma Odorant Receptor Identificados

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Um protocolo para a administração do real-time fMRI treinamento de Neurofeedback

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Ensaio para Medir o Transporte Nucleocitoplasmático em Tempo Real dentro de Células NSC-34 do tipo Motor-Neuron

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

Viver-pilha medição de odorante Receptor de ativação usando um ensaio de campo em tempo real

The enormous sizes of the mammalian odorant receptor (OR) families present difficulties to find their cognate ligands among numerous volatile chemicals. ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localização de Genes de Receptor de Odorantes em Antenas de Locustídeo por RNA<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridação

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Cinemática ocular medida na Vitro estimulação dos nervos cranianos na tartaruga

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...