Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
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Este trabajo fue financiado por becas del NIH (DC014423 y DC016224) y el defensa avanzada proyecto Agencia RealNose proyecto de investigación. YF me alojé en Duke University con apoyo financiero del programa JSP para avance estratégico internacional redes acelerar la circulación de investigadores talentosos (R2801). Agradecemos a Sahar Kaleem para la edición del manuscrito.

1. Hana3A las células de cultura
<ol><li>Preparar M10 (medio esencial mínimo (MEM) más 10% v/v suero fetal bovino (FBS)) y M10PSF (M10 más 100 μg/mL de penicilina-estreptomicina y 1,25 μg/mL anfotericina B).</li>
	<li>Las células en 10 mL de M10PSF en una placa de cultivo celular de 100 mm en una incubadora a 37 ° C y 5% de dióxido de carbono (CO2) de la cultura.</li>
	<li>Las células se dividen cada 2 días en una proporción de 20%: cuando la confluencia 100% de las células (aproximadamente 1.1 ...

La percepción del olor es fundamentalmente dependiente de la activación de las RUP. En consecuencia, entendimiento de su funcionalidad es necesaria para romper los complejos mecanismos que utiliza el cerebro para percibir su entorno químico volátil. Sin embargo, la comprensión de este proceso ha sido obstaculizada por las dificultades en el establecimiento de un método robusto para el repertorio de OR para funcionalidad contra olores in vitro. de la pantalla Célula de expresión heteróloga y superficie d...

El sentido del olfato permite que los animales terrestres interactuar con su ambiente químico volátil para coche comportamientos y emociones. Fundamentalmente, el proceso de detección de olor comienza con la primera interacción de moléculas de olor con el sistema olfativo, en el nivel de odorante receptores (SRO)1. En los mamíferos, ORs individualmente se expresan en neuronas sensoriales olfativas (OSNs) localizadas en el epitelio olfatorio2. Pertenecen a la familia de receptores (GPCR) proteína G acoplada y más precisamente a la subfamilia rhodopsin-como (también llamado clase A). Pareja de SRO con el estimulante G proteínas Golf cuya activación conduce a campo producción seguido por la apertura de canales de nucleótido cíclico cerrado y la generación de potenciales de acción. Se acepta que el percept de un olor se basa en un patrón específico de ORs activado3,4 y por lo tanto reconocimiento de olor sigue un esquema de codificación combinatorio, donde uno OR puede ser activado por un conjunto de olores y un odorante puede activar una combinación de ORs. Y a través de tal codificación combinatoria, se postula que los organismos pueden detectar y discriminar entre un gran número de moléculas de olor volátil. Una de las claves para entender cómo se perciben los olores es entender cómo y que ORs son activados por un olor determinado.
En un intento de aclarar olor- o interacciones, ensayos funcionales in vitro han jugado un papel esencial. La identificación de ligandos los agonistas para el huérfano ORs (orphanization de OR) ha sido un campo muy activo durante los últimos veinte años, mediante el uso de vario in vitro, ex vivo e in vivo análisis funcional5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17.
Sistemas de ensayo in vitro son los más adecuados para la caracterización funcional detallada de ORs, incluyendo identificación de los dominios funcionales y residuos críticos de SRO, así como posibles usos de la ingeniería. Sin embargo, más desarrollo de valiosos sistemas in vitro para SRO ha sido un reto, en parte debido a la dificultad de cultivo OSNs y expresión funcional de las RUP en células heterólogas. El primer desafío había sido establecer protocolos que permitían la expresión superficial de la célula de SRO funcional en el mapeo de olor-interacciones de OR. Un número de grupos independientes ha utilizado varios enfoques5,6,7,8,9,10,11,12, 14,18,19,20. Uno de los primeros logros fue hecha por Krautwurst et en la etiqueta el N-terminal de SRO con una secuencia acortada de la rodopsina (Rho-tag) y observó una mejor expresión superficial en células de riñón embrionario humano (HEK)13. Variaciones a la etiqueta colocada en la secuencia OR sigue siendo un camino explorado para mejorar OR expresión y funcionalidad de19,21. Saito et al.. identificado entonces transporte de receptores Proteína 1 (RTP1) y RTP2 que facilitan el tráfico de OR. 22 una versión reducida de RTP1, llamado RTP1S, también ha demostrado ser incluso más eficaz que la proteína original23. El desarrollo de una línea celular (Hana3A) que expresa estable Golf, REEP1 y RTP1, RTP2 24, juntada con el uso de reporteros de monofosfato de adenosina cíclico (campo) ha permitido la identificación de olor-interacciones de OR. El mecanismo por el cual la familia RTP de proteínas promueve la expresión superficial de la célula de ORs queda por determinarse.
Una advertencia de estos métodos establecidos es que cuentan con estímulo odorante en fase líquida, lo que significa que olores se disuelven previamente en un medio de estimulación y estimulan las células mediante la sustitución del medio. Esto es muy distinto de las condiciones fisiológicas donde odorante moléculas alcanzan el epitelio olfatorio en fase de vapor y activan ORs por disolución en la mucosa nasal. Para asemejan más exposición estímulo fisiológico relevantes, Sanz et al.20 propone un análisis basado en la estimulación de vapor aplicando una gota de solución de odorante para colgar debajo de la cara interior de una película plástica colocada en la parte superior de pozos de la célula. Grabaron las respuestas de calcio mediante el control de intensidad de fluorescencia. Este método fue el primero en utilizar la estimulación olfativa de fase de aire, pero que no permitió una proyección grande de la activación de la OR.
Aquí, hemos desarrollado un nuevo método que permite la monitorización en tiempo real de la activación de OR in vitro mediante la estimulación de odorante de fase de vapor por el análisis de Glosensor (figura 1). Este análisis se ha utilizado previamente en el contexto de olor líquido estimulación18,19,25,26,27,28,29, 30 , 31. la cámara de vigilancia de luminómetro primero es equilibrada con aroma vaporizado antes de la placa (figura 1A) de lectura. Las moléculas de olor son entonces solvated en el búfer, bañando las células Hana3A expresan la o de interés, RTP1S y la Glosensor de proteínas (figura 1B). Si el olor es un agonista de la o, o cambiar a una conformación activa y enlazar la Golf, activación del cyclase del adenylyl (AC) y en última instancia causar los niveles de campo aumenten. Este campo creciente se unen y activan a la proteína de Glosensor para generar luminiscencia catalizando luciferin. Esta luminiscencia es luego registrado por el luminómetro y permite el seguimiento de la activación de OR. Este método es de gran interés en el contexto de deorphanization OR que trae sistemas in vitro más cercano a la percepción natural de los olores.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

Percepción olfativa comienza con la interacción de olores con los receptores de olor (o) expresados por las neuronas sensoriales olfativas (OSN). Reconocimiento de olor sigue un esquema de codificación combinatorio, donde uno OR puede ser activado por un conjunto de olores y un odorante puede activar una combinación de ORs. A través de tal codificación combinatoria, organismos pueden detectar y discriminar entre un gran número de moléculas de olor volátil. Así, un olor a una concentración determinada puede ser descrito por un patrón de activación de las RUP, que es específica para cada olor. En ese sentido, se agrieta los mecanismos que el cerebro utiliza para percibir el olor requiere el olor comprensión-interacciones de OR. Por esta razón la comunidad de olfato se ha comprometido a "la orphanize" estos receptores. Sistemas in vitro convencionales usados para identificar el olor- o interacciones han utilizado incubación media de células con olor, que es distinta de la natural detección de olores mediante disolución de Odorantes de vapor en la mucosa nasal antes de interactuar con la SRO. Aquí, describimos un nuevo método que permite la monitorización en tiempo real de la activación de OR por olores fase de vapor. Nuestro método se basa en medir campo liberación por luminiscencia usando el análisis de Glosensor. Puentes actuales brechas entre los métodos in vivo e in vitro y proporciona una base para un sensor químico volátil biomiméticos.

Defendimos la respuesta de tres ORs de ratón, Olfr746, Olfr124 y Olfr1093 utilizando la estimulación de vapor del cinamaldehído (figura 3). Al mismo tiempo, utilizamos un control vector vacío (Rho-pCI) para asegurar que las actividades inducidas por el olor de las RUP probadas fueron específicas (figura 3A). La activación en tiempo real de las RUP a estímulos de olor de vapor fue monitoreada medición de más de 20 ciclos. Los datos para ...

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Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

Fisiológicamente, los receptores odorantes son activados por moléculas odorantes inhaladas en la fase de vapor. Sin embargo, más sistemas in vitro utilizan la estimulación olfativa de fase líquida. Aquí, presentamos un método que permite en tiempo real monitoreo in vitro de la activación del receptor odorante al estímulo odorante en fase de vapor.

En tiempo real en el seguimiento de Vitro de la activación del Receptor odorante por un olor en la fase de Vapor

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Nuestro protocolo permite medir la detección y discriminación de olores volátiles con un panel de receptores de olores. Este método abre la posibilidad de desarrollar biosensores basados en receptores de olores. Esta técnica permite el monitoreo in vitro en tiempo real de la activación del receptor de olores sobre moléculas de olor en fase de vapor.Llena el vacío entre los enfoques in vitro e in vivo. Este método se puede utilizar para entender la cinética de los eventos que conducen a la percepción del olor, incluyendo el papel de las enzimas metabólicas mucosas. Para empezar, prepare M10 y M10 PSF de acuerdo con el manuscrito.Las células se cultivan en 10 mililitros de PSF M10 a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono. Observe el plato de cultivo bajo un microscopio de contraste de fase. Cuando alcance el 100% de confluencia, divida las células a una concentración más baja aspirando los medios y lavando las células suavemente con 10 mililitros de PBS.A continuación, aspirar el PBS y añadir tres mililitros de trippsina-EDTA. Dejar reaccionar durante aproximadamente un minuto hasta que las células se disocien del plato. Agregue cinco mililitros de M10 para inactivar la trippsina, y pipetee hacia arriba y hacia abajo para separar las celdas unidas al plato.Transfiera los ocho mililitros de suspensión celular de la placa a un tubo de 15 mililitros, y centrifuga el tubo a 200 veces-G durante cinco minutos. Aspirar el sobrenadante y resuspender las células en cinco mililitros de PSF M10 pipeteando hacia arriba y hacia abajo para descomponer cualquier masa celular. Evite crear burbujas en el tubo.Para obtener un 20% de confluencia de células, agregue nueve mililitros de PSF M10 en un nuevo plato de cultivo celular de 1.000 milímetros, y transfiera un mililitro de la solución celular resuspendida. Incubar a 37 grados centígrados y 5% dióxido de carbono. Este plato, sentado al 20% de confluencia, alcanzará el 100% de confluencia en 48 horas.Coloque el plato bajo un microscopio de contraste de fase para observar. Tome 1/10 del plato de cultivo de confluencia de 100% celda. Aspirar los medios y lavar las células suavemente con 10 mililitros de PBS.Luego trate las células con tripina-EDTA y M10, centrífuga, y trate de nuevo con M10 PSF como se realizó anteriormente. Para realizar una placa de 96 pozos, agregue 500 microlitros de los cinco mililitros de células resuspendidas a 5,5 mililitros de PSF M10 fresco.Pipeta 50 microlitros de las células suspendidas diluidas en cada pozo de la placa de 96 pozos utilizando una pipeta multicanal. Incubar durante la noche a 37 grados centígrados y 5% dióxido de carbono. En primer lugar, coloque la placa de 96 pocillos cultivada durante la noche bajo un microscopio de contraste de fase, observe la confluencia celular y asegúrese de que esté entre el 30% y el 50%Prepare una primera mezcla de transfección en un tubo de 1,5 mililitros que contenga los plásmidos comunes a toda la placa según el manuscrito.Rho-pCi es un control negativo de vector vacío, y Olfr1377 es un control positivo conocido para responder a la acetofenona de olor probado. Divida la mezcla en dos mezclas de transfección que contengan uno de los plásmidos de control. Preparar una segunda mezcla de transfección que contenga 500 microlitros de MEM y 20 microlitros de lipofectamina 2000 reactivo.Agregue la mitad de la segunda mezcla a cada pozo de embalse y mezcle suavemente en pipeteando hacia arriba y hacia abajo. Incubar el tubo durante 15 minutos a temperatura ambiente. Agregue cinco mililitros de M10 para una placa de 96 pozos.Agregue 2,5 mililitros en cada pozo de depósito y mezcle suavemente. Sustituya el PSF M10 en la placa de 96 pocillos previamente chapada por 50 microlitros del soporte de transfección final. Incubar durante la noche a 37 grados centígrados y 5% dióxido de carbono.A continuación, abra la puerta del luminómetro e inserte el tubo conectado a la bomba de vacío. Vacíe la cámara del luminómetro durante la noche. Después de la transfección, observe la placa de 96 pocillos bajo un microscopio de contraste de fase para asegurar una confluencia celular entre 60% y 100%Preparar la solución de estimulación de la solución de sal equilibrada de Hank que contiene 10 mililitros de HEPES y cinco mililimolares de D-glucosa.Retire el medio de transfección de la placa de 96 pocillos y lave las células añadiendo 50 microlitros de solución de estimulación fresca a cada pocero. Para diluir la solución de reactivo de campo GloSensor, pipetear 2,75 mililitros de la solución de estimulación en un tubo de cinco mililitros y añadir 75 microlitros de la solución de reactivo de campo. Retire la solución de estimulación de los pozos y agregue 25 microlitros de solución de reactivo de campo diluido a cada pozo.Incubar la placa de 96 pozos a temperatura ambiente en un ambiente oscuro y libre de olor durante dos horas. Primero, diluir la acetofenona oloral al 1%en 10 mililitros de aceite mineral y tapar el tubo. Antes del final del tiempo de incubación del reactivo de campo, añadir 25 microlitros de la solución de olor a cada pozo en una nueva placa de 96 pocillos.A continuación, coloque esta placa de olor en la cámara del luminómetro durante cinco minutos para equilibrar la cámara con moléculas de olor volátiles. Ajuste el luminómetro para registrar la luminiscencia con cero segundos de retardo durante 20 ciclos de medición de placa de 90 segundos, con 0,7 segundos de intervalo entre ciclos. Justo antes de leer la placa, retire la placa de olor de la cámara.En la placa de 96 pozos que contiene las células trans infectadas, agregue 25 microlitros de olor en el espacio entre los pozos, y vuelva a colocar rápidamente la placa en la cámara. Inicie la medición de luminiscencia de todos los pozos durante 20 ciclos en 30 minutos. Después de la medición de luminiscencia, retire el olor restante dentro del luminómetro aspirando los olorantes en la cámara de lectura extensamente durante al menos dos horas.Reemplazar con aire fresco enviando aire comprimido durante cinco minutos antes de incubar el siguiente olor para evitar la contaminación cruzada de los olores volátiles. Para iniciar el análisis de datos, exporte los datos desde el software luminómetro. Promedio de las réplicas del mismo OR para cada tiempo de grabación.Para calcular la respuesta OR normalizada a cualquier control eventual, divida el valor promediado vectorial vacío en el valor promediado de OR en cada momento de grabación. Normalice cada respuesta OR a su actividad basal dividiendo la respuesta OR promediada en cero segundos a cada respuesta de tiempo de grabación. Para obtener un único valor de respuesta OR para la curva de cada quirófano, sume todos los valores de luminiscencia de cada tiempo de grabación para cada quirófano con el fin de obtener el área debajo de la curva.En este experimento, la activación en tiempo real de los quirófanos ratones sobre el estímulo del olor al vapor se monitorizó durante 20 ciclos de medición. Se utilizó un control vectorial vacío para asegurar que las actividades inducidas por el olor de los quirófanos probados fueran específicas. Los datos de cada pozo se normalizaron primero al valor promediado de control vectorial vacío para cada ciclo.A continuación, para comparar las diferentes respuestas de quirófanos, los datos se normalizaron a los niveles de OR de actividad basal en este ensayo. Los valores de activación única para cada quirófano se calcularon calculando el área debajo de la curva para cada quirófano sumando los valores de emisión de todos los ciclos de medición. Además, las respuestas dependientes de la dosis se pueden medir utilizando dosis crecientes de olor.Se registró la respuesta de Olfr1377 a la estimulación de la acetofenona a cinco concentraciones. Sólo las tres concentraciones más altas fueron capaces de activar Olfr1377. La estimulación compuesta pura muestra una tendencia a disminuir la respuesta del quirófano con el tiempo, probablemente debido a la toxicidad celular.Durante el paso, debe añadir el olor diluido entre el pozo, y estar preparado para iniciar rápidamente la grabación de la placa. El tiempo entre la adición de olores y la supervisión debe ser minimizado y constante entre dos experimentos. En las aurículas las células son material biopeligroso, así que recuerde eliminar las células en los dispensarios apropiados.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Inducidas Odorante-respuestas registradas de neuronas olfativas del receptor utilizando la técnica de aspiración con una pipeta

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Investigación

Neurociencias

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Seguimiento de los cambios en la concentración de calcio intracelular y la eficacia sináptica en el molusco<em&gt; Aplysia</em

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Una<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Médula espinal inducida por láser Lesiones modelo para evaluar los mecanismos de degeneración axonal en tiempo real

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Perforado grabación de patch-clamp de ratón neuronas sensoriales olfativas en neuroepitelio Intacto: Análisis funcional de las neuronas que expresan un odorante del receptor Identificado

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Un protocolo para la administración de Real-Time fMRI entrenamiento de Neurofeedback

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Ensayo para medir el transporte nucleocitoplasmático en tiempo real dentro de las células NSC-34 similares a neuronas motoras

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

Células vivas medición de olor del Receptor activación utilizando un ensayo de campo en tiempo real

The enormous sizes of the mammalian odorant receptor (OR) families present difficulties to find their cognate ligands among numerous volatile chemicals. ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localización de Genes Receptor Odorante en Antenas Locustinas por RNA<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridación

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Cinemática ocular midiendo In Vitro la estimulación de los nervios craneales en la tortuga

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identificación del Receptor de dopamina D1-alfa en roedores núcleo Accumbens por una innovador ARN In Situ la tecnología de detección

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...