Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Detta arbete stöds av bidrag från NIH (DC014423 och DC016224) och Defense Advanced projektet byrån RealNose forskningsprojektet. YF bott vid Duke University med ekonomiskt stöd från JSPS Program för att främja strategiska internationella nätverk att påskynda spridningen av begåvade forskarna (R2801). Vi tackar Sahar Kaleem för redigering av manuskriptet.

1. Hana3A celler kultur
<ol><li>Förbereda M10 (minst viktigt Medium (MEM) plus 10% v/v fetalt bovint serum (FBS)) och M10PSF (M10 plus 100 µg/mL penicillin-streptomycin och 1,25 µg/mL amfotericin B).</li>
	<li>Odla cellerna i 10 mL M10PSF i en 100 mm cell kultur maträtt i en inkubator inställd på 37 ° C och 5% koldioxid (CO2).</li>
	<li>Dela upp cellerna varannan dag i förhållandet 20%: när 100% sammanflödet av celler (cirka 1,1 x 107 celler) observeras under en faskontrastmikroskop, as...

Uppfattningen av lukt är grunden beroende av aktiveringen av ORs. Följaktligen krävs förståelse för deras funktionalitet att knäcka de komplexa mekanismer som hjärnan använder för att uppfatta dess flyktiga kemiska miljö. Dock har förståelse för denna process hämmats av svårigheterna att fastställa en robust metod skärm OR repertoaren för funktionalitet mot odoranter in vitro-. Cell surface och heterologa uttryck för ORs har delvis lösts genom skapandet av märkta receptorer<sup class="xref"...

Luktsinnet kan landlevande djur att interagera med sin flyktiga kemiska miljö till drive beteenden och känslor. Fundamentalt, lukt upptäckt processen börjar med första växelverkan av luktämnet molekyler med luktsinnet, i nivå med luktämnet receptorer (ORs)1. Hos däggdjur uttrycks ORs individuellt i lukt sensoriska nervceller (OSNs) ligger i luktepitel2. De tillhör familjen G-protein kopplade receptorer (GPCR) och mer exakt till familjen rhodopsin-liknande sub (kallas även klass A). ORs par med den stimulerande G protein Golf vars aktivering leder till cAMP produktion följt av öppnandet av cykliska nukleotid gated kanaler och generering av handlingspänningar. Det är accepterat att en lukt percept förlitar sig på ett visst mönster av aktiverade ORs3,4 och lukt erkännande följer således en kombinatoriska kodning, där en OR kan aktiveras av en uppsättning odoranter och en luktämnen kan aktivera ett kombination av ORs. Och genom sådana kombinatoriska kodning, är det postulerade att organismer kan upptäcka och diskriminera en myriad av flyktiga lukt molekyler. En av nycklarna till att förstå hur lukter uppfattas är att förstå hur och som ORs aktiveras av en viss lukt.
I ett försök att belysa luktämnet- eller interaktioner, in vitro-funktionella analyser har spelat en viktig roll. Identifiering av agonist illaluktande ligander för föräldralös ORs (OR de orphanization) har varit ett mycket aktivt fält för de senaste tjugo åren, med hjälp av olika in vitro, ex vivo och Invivo funktionella analyser5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17.
In vitro test system är bäst lämpade för detaljerad funktionell karakterisering av ORs, inklusive att identifiera funktionella domäner och kritiska rester av ORs, liksom potentiella tekniska tillämpningar. Dock har ytterligare utveckling av värdefulla in vitro-system för ORs varit en utmaning, delvis på grund av svårigheter med odling OSNs och funktionella uttryck för ORs i heterologa celler. Den första utmaningen hade varit att upprätta protokoll som tillåts av cell surface uttryck för funktionella ORs i kartläggningen av luktämnet-OR interaktioner. Ett antal oberoende grupper har använt olika metoder5,6,7,8,9,10,11,12, 14,18,19,20. En av de tidigaste landvinningar gjordes av Krautwurst et al. i märkta N-terminalen av ORs med en förkortad sekvens av rhodopsin (Rho-tag) och observerade ett förbättrad yta uttryck i mänskliga embryonala njurar (HEK) celler13. Ändringar i för fästade OR sekvensen är fortfarande en sökväg som utforskas för att förbättra OR uttryck och funktionalitet19,21. Saito et al. sedan identifierat receptor-transporterar protein 1 (RTP1) och RTP2 som underlättar OR människohandel. 22 en kortare version av RTP1, kallas RTP1S, har också visat sig vara ännu effektivare än den ursprungliga protein23. Utvecklingen av en cellinje (Hana3A) som stabilt uttrycker Golf, REEP1, RTP1 och RTP2 24, tillsammans med användning av cykliskt adenosinmonofosfat (cAMP) reportrar har aktiverat identifiering av luktämnet-OR interaktioner. Mekanismen genom vilken familjen RTP av proteiner främjar cell surface uttryck för ORs återstår för att pröva.
En varning av dessa etablerade metoder är att de som är beroende av luktämnet stimulering i flytande fas, vilket innebär att odoranter löses före till en stimulering medium och stimulera celler genom att ersätta mediet. Detta skiljer sig mycket från de fysiologiska förhållanden där luktämnet molekyler nå luktepitel i gasfasen och aktivera ORs genom upplösning i nässlemhinnan. För att mer likna fysiologiskt relevanta stimulans exponering, Sanz et al.20 föreslog ett test baserat på vapor stimulering genom att tillämpa en droppe luktämnet lösning att hänga under inre ansikte av en plastfilm som placeras på toppen av cell brunnar. De spelade in kalcium Svaren genom att övervaka fluorescensintensiteten. Denna metod var de första att använda air-fas luktämnet stimulering, men det tillät inte en stor genomgång av OR aktivering.
Här utvecklade vi en ny metod som möjliggör realtidsövervakning av in vitro-OR aktiveringen via vapor fas luktämnet stimulering av Glosensor analysen (figur 1). Denna analys har använts tidigare i samband med flytande luktämnet stimulering18,19,25,26,27,28,29, 30 , 31. övervakning kammaren av luminometern är först jämviktas med förångade luktämnet innan plattan läsning (figur 1A). Luktämnet molekyler är sedan solvatiserade in i bufferten, bad Hana3A celler som uttrycker eller intresse, RTP1S och Glosensor proteiner (figur 1B). Om luktämnet är en agonist av eller, kommer att eller byta till en aktiverad konformation binda den Golf, aktivera den viktreglerande cyclase (AC) och slutligen orsaka cAMP-nivåerna stiger. Detta stigande läger kommer att binda till och aktivera det Glosensor proteinet för att generera luminiscens katalysera luciferin. Detta luminiscens registreras sedan av luminometern och möjliggör OR aktiveringen övervakning. Denna metod är av stort intresse i samband med OR deorphanization det leder in vitro-system närmare till naturliga uppfattningen av lukter.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

Olfactory uppfattning börjar med samspelet mellan odoranter med luktämnet receptorer (eller) uttryckt av lukt sensoriska neuroner (OSN). Lukt erkännande följer en kombinatoriska kodning, där en OR kan aktiveras av en uppsättning odoranter och en luktämnen kan aktivera en kombination av ORs. Genom sådana kombinatoriska kodning, kan organismer upptäcka och diskriminera en myriad av flyktiga lukt molekyler. En lukt vid en given koncentration kan således beskrivas av en aktivering mönster av ORs, som är specifika för varje lukt. I det avseendet knäcka de mekanismer som hjärnan använder för att uppfatta lukt kräver förståelse luktämnet-OR interaktioner. Det är därför olfaction gemenskapen har förbundit sig att ”de-orphanize” dessa receptorer. Konventionella in vitro-system används för att identifiera luktämnet- eller interaktioner har utnyttjat ruvande cell media med luktämnen, som är skild från naturlig detektion av lukter via vapor odoranter upplösning i nässlemhinnan före interagera med ORs. Här beskriver vi en ny metod som möjliggör realtidsövervakning av OR aktiveringen via gasfasen doftämnen. Vår metod bygger på mätning cAMP release av luminiscens med Glosensor analys. Det överbryggar nuvarande luckor mellan in vivo och in vitro-metoder och ger en grund för en biomimetiska flyktiga kemiska sensor.

Vi tre mus ORs, Olfr746, Olfr124 och Olfr1093 svar använda kanelaldehyd vapor stimulering (figur 3). Samtidigt, vi använde en tom vector kontroll (Rho-pCI) för att säkerställa att de testade ORs luktämnet-inducerad verksamhet var specifika (figur 3A). Realtid aktiveringen av de yttersta randområdena vid vapor luktämnen stimulanspaket var övervakade över 20 mätning cykler. Data för varje var väl först normaliserade till Tom vektor i...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

Fysiologiskt, som luktämnen receptorer aktiveras av luktämnet molekyler inandning i gasfasen. Men, mest in vitro-system använda flytande fas luktämnet stimulering. Här presenterar vi en metod som möjliggör realtidsövervakning av in vitro-av luktämnet receptor aktiveringen vid luktämnet stimulering i gasfasen.

Realtid i Vitro övervakning av luktreceptor aktivering av en Luktämnet i gasfasen

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Vårt protokoll gör det möjligt att mäta upptäckt och diskriminering av flyktiga lukter med en panel av luktreceptorer. Denna metod öppnar möjligheten att utveckla luktreceptorbaserade biosensorer. Denna teknik möjliggör realtid in vitro-övervakning av odorant receptor aktivering vid odorant molekyler i ångfasen.Det fyller gap mellan in vitro och in vivo tillvägagångssätt. Denna metod kan användas för att förstå kinetiken av händelser som leder till lukt uppfattning, inklusive rollen av mucosal metabola enzymer. Till att börja med förbereda M10 och M10 polyesterstapel polyester enligt manuskriptet.Celler odlas i 10 milliliter M10 polyesterstapelfiber vid 37 grader Celsius och 5%koldioxid. Observera odlingsfatet under ett faskontrastmikroskop. När den når 100%sammanflödet, dela cellerna till en lägre koncentration genom att aspirera media och tvätta cellerna försiktigt med 10 milliliter PBS.Sedan aspirera PBS och tillsätt tre milliliter trypsin-EDTA. Låt den reagera i ungefär en minut tills cellerna separerar från skålen. Tillsätt fem milliliter M10 för att inaktivera trypsin, och pipetten upp och ner för att lossa cellerna fäst vid skålen.Överför de åtta milliliter cell suspension från skålen till en 15-milliliter rör, och centrifug röret på 200-gånger-G i fem minuter. Aspirera supernatant och resuspend cellerna i fem milliliter av M10 polyesterstapeltar genom pipettering upp och ner för att bryta upp någon cell massa. Undvik att skapa bubblor i röret.För att få 20%sammanflödet av celler, tillsätt nio milliliter M10 polyesterstapelceller i en ny 1, 000-millimeters cellodlingsskål och överför en milliliter av den återanvända celllösningen. Inkubera vid 37 grader Celsius och 5%koldioxid. Denna maträtt, sittande vid 20% sammanflödet, kommer att nå 100% sammanflödet i 48 timmar.Placera skålen under en fas kontrast mikroskop att observera. Ta 1/10 av 100%cell sammanflödet kultur skålen. Aspirera media och tvätta cellerna försiktigt med 10 milliliter PBS.Behandla sedan cellerna med trypsin-EDTA och M10, centrifug, och behandla igen med M10 polyesterstapelceller som tidigare utförts. För att realisera en 96-brunnsplatta, tillsätt 500 mikroliter från de fem milliliter av återanvändbara celler till 5,5 milliliter färska M10-polyesterstapel. Blanda cellerna och M10-polyesterstapelfibern utan att generera luftbubblor.Pipett 50 mikroliter av de utspädda upphängda cellerna i varje brunn av 96-brunnsplattan med hjälp av en flerkanalig pipett. Inkubera över natten vid 37 grader Celsius och 5%koldioxid. Först, placera 96-väl plattan odlade över natten under en fas kontrast mikroskop, observera cellen sammanflödet, och se till att det är mellan 30%och 50%Förbered en första transfection mix i en 1,5-milliliter rör som innehåller plasmider gemensamma för hela plattan enligt manuskriptet.Rho-pCi är en tom-vektor negativ kontroll, och Olfr1377 är en positiv kontroll känd för att svara på den testade odorant acetophenone. Dela blandningen i två transfektionsblandningar som innehåller en av manöverplasmiderna. Förbered en andra transfektionsmix innehållande 500 mikroliter av MEM och 20 mikroliter av lipofectamine 2000 reagens.Tillsätt hälften av den andra blandningen till varje reservoar väl och blanda försiktigt genom pipettering upp och ner. Inkubera röret i 15 minuter i rumstemperatur. Tillsätt fem milliliter M10 för en 96-brunnsplatta.Tillsätt 2,5 milliliter i varje reservoar väl och blanda försiktigt. Byt ut M10-polyesterstapeln i den tidigare pläterade 96-brunnsplattan mot 50 mikroliter av det slutliga transfektionsmediet. Inkubera över natten vid 37 grader Celsius och 5%koldioxid.Öppna sedan luminometerns dörr och sätt in röret som är anslutet till vakuumpumpen. Dammsug luminometerns kammare över natten. Efter transfektion, observera 96-brunnsplattan under ett faskontrastmikroskop för att försäkra en cellkonfluens mellan 60%och 100%Bered stimulationslösningen av Hanks Balanced Salt Solution innehållande 10-millimolar av HEPES och fem-millimolar av D-glukos.Ta bort transfektionsmediet från 96-brunnsplattan och tvätta cellerna genom att tillsätta 50 mikroliter av färsk stimuleringslösning till varje brunn. För att späda ut GloSensor cAMP-reagenslösningen, pipetteras 2,75 milliliter av stimuleringslösningen i ett fem-milliliterrör och tillsätt 75 mikroliter av cAMP-reagenslösningen. Ta bort stimuleringslösningen från brunnarna, och tillsätt 25 mikroliter av utspädd cAMP-reagenslösning till varje brunn.Inkubera 96-brunnsplattan i rumstemperatur i en mörk och luktfri miljö i två timmar. Först späd odorant acetophenon till 1%i 10 milliliter mineralolja och locket röret. Innan slutet av cAMP reagens inkubationstiden, tillsätt 25 mikroliter av odorantlösningen till varje brunn i en ny 96-brunnsplatta.Placera sedan denna luktplatta i luminometerkammaren i fem minuter för att jämviktsrelibrera kammaren med flyktiga luktmolekyler. Ställ in luminometern så att luminecisen registreras med noll sekunders fördröjning under 20 cykler av 90-sekunders plåtmätning, med 0,7 sekunders intervall mellan cyklerna. Precis innan du läser plattan, ta bort luktplattan från kammaren.I 96-brunnsplattan som innehåller de transfekterade cellerna, tillsätt 25 mikroliter odorant i utrymmet mellan brunnarna, och sätt snabbt tillbaka plattan i kammaren. Starta luminindemätningen av alla brunnar under 20 cykler inom 30 minuter. Efter luminescencemätningen avlägsnar du den återstående luktanten inuti luminometern genom att dammsuga luktämnen i läskammaren i stor utsträckning i minst två timmar.Ersätt med frisk luft genom att skicka tryckluft i fem minuter innan du inkuberar nästa luktämne för att undvika korskontaminering av luktflyktiga ämnen. För att påbörja dataanalysen, exportera data från programvaran luminometer. Medelvärde för replikaten av samma ELLER för varje inspelningstid.Om du vill beräkna det normaliserade ELLER-svaret på någon eventuell kontroll delar du det tomma vektorsnittade värdet till det OR-genomsnittsvärde vid varje inspelningstid. Normalisera varje ELLER-svar på deras basala aktivitet genom att dividera det genomsnittliga ELLER-svaret vid noll sekunder till varje inspelningstidsvar. För att erhålla ett enskilt ELLER-svarsvärde för kurvan för varje ELLER, summerar du alla luminindevärden för varje inspelningstid för varje ELLER för att få fram området under kurvan.I detta experiment, realtid aktivering av möss ORs vid ånga odorant stimulans övervakades över 20 mätcykler. En tom vektor kontroll användes för att försäkra att odorant-inducerad verksamhet av de testade ORs var specifika. Datan för varje brunn normaliserades först till det tomma vektorn kontrollerar-genomsnitt värderar för varje cyklar.Sedan, för att jämföra olika ORs'responses, normaliserades data till DE ELLER nivåerna av basal aktivitet i denna analys. Enkelaktiveringsvärden för varje ELLER beräknades genom att beräkna området under kurvan för varje ELLER genom att summera utsläppsvärdena för alla mätcykler. Dessutom kan dosberoende svar mätas med hjälp av ökande luktdoser.Svaret av Olfr1377 till acetophenone stimulering vid fem koncentrationer spelades in. Endast de tre högre koncentrationerna kunde aktivera Olfr1377. Den rena sammansatta stimuleringen visar en tendens att minska ELLER-svaret över tiden, sannolikt på grund av celltoxicitet.Under steget bör du lägga till den utspädda lukten mellan brunnen, och vara beredd att snabbt starta inspelningen av plattan. Tiden mellan odorant tillägg och övervakning bör minimeras och konstant mellan två experiment. I atria celler är biohazardous material, så påminn om att avyttra cellerna i lämpliga apotek.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Luktämne-inducerade svar in från luktreceptorceller Nervceller användning av tekniken Sug Pipettera

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Övervakning av förändringar i den intracellulära kalciumkoncentrationen och synaptisk effekt i Blötdjur<em&gt; Aplysia</em

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Laser-inducerad ryggmärgsskada modell för bedömning Mekanismer axonal degeneration i realtid

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Perforerade Patch-clamp inspelning av Mouse Olfactory sensoriska neuroner i Intakt neuroepithelium: Funktionell analys av nervceller som uttrycker en identifierad luktreceptor

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Ett protokoll för den Administration av Real-Time fMRI Neurofeedback träning

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Analys för att mäta nukleocytoplasmisk transport i realtid inom motor neuronliknande NSC-34-celler

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

Live-cell mätning av luktämnet Receptor aktiveringen med en realtid cAMP-analys

The enormous sizes of the mammalian odorant receptor (OR) families present difficulties to find their cognate ligands among numerous volatile chemicals. ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Lokalisering av luktantreceptormener i lokalisationsantennen genom RNA<em&gt; I situ</em&gt; Hybridisering

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Okulär kinematik mätt In Vitro stimulering av kranialnerver i sköldpaddan

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...