Name: real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase
Uploaded: 2019-04-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Bu eser NIH (DC014423 ve DC016224) ve savunma ileri araştırma ajansı RealNose projesi hibe tarafından desteklenmiştir. YF JSP'ler Program stratejik Uluslararası ağlar, yetenekli araştırmacıların dolaşımı (R2801) hızlandırmak ilerlemek için mali desteği ile Duke Üniversitesi'nde kaldı. Sahar Kaleem yazması düzenleme için teşekkür ediyoruz.

1. Hana3A kültür hücreleri
<ol><li>M10 hazırlayın (en az önemli orta (MEM) artı % 10 v/v fetal sığır serum (FBS)) ve M10PSF (M10 artı 100 µg/mL penisilin-streptomisin ve 1,25 µg/mL Amfoterisin B).</li>
	<li>M10PSF 100 mm hücre kültür bulaşık kuluçka 37 ° C ve % 5 karbon dioksit (CO2) ayarla içinde içinde 10 mL hücrelerde kültür.</li>
	<li>2 günde % 20 oranında Hücreleri Böl: % 100 izdiham hücre (yaklaşık 1.1 x 107 hücreleri) faz kontrast mikroskop altında gözlene...

Koku algı temelde ORs etkinleştirme üzerinde bağlıdır. Sonuç olarak, anlayış işlevleriyle beyin kullanın uçucu kimyasal çevresine algıladıkları için karmaşık mekanizmaları çatlamak için gereklidir. Ancak, bu işlem anlayış tarafından OR repertuar odorants tüp bebek. karşı işlevsellik için ekran için sağlam bir yöntem oluşturulmasında zorluklar engel Hücre ORs yüzey ve kapaklı ifade kısmen çözüldü etiketli reseptörleri13,<sup class="xr...

Koku alma duygusu karasal hayvanlar uçucu kimyasal çevreleri sürücü davranışları ve duyguları ile etkileşimine izin verir. Temelde, koku alma sistemi, propil reseptörleri (ORs)1düzeyinde ilk etkileşim propil moleküllerin koku Algılama işlemi başlar. Memelilerde, ORs tek tek koku epitel2' de yer alan koku duyusal nöronlar (OSNs) ifade edilir. Ait oldukları G-protein birleştiğinde reseptör (GPCR) ailesi ve daha doğrusu rhodopsin benzeri alt aile (sınıf A olarak da bilinir). ORs çift kimin harekete geçirmek ardından döngüsel nükleotit geçişli kanal açılması ve aksiyon potansiyelleri nesil kamp üretim yol açan uyarıcı G protein Golf ile. Bir koku algılama etkinleştirilmiş ORs3,4 belirli bir desen kullanır ve bu nedenle koku tanıma nerede bir OR odorants bir dizi ile aktif ve bir propil etkinleştirmek bir birleşimsel kodlama düzeni izler kabul edilen bir ORs birleşimi. Ve böyle Kombinatorik kodlama aracılığıyla, bu organizmalar algılayabilir ve sayısız uçucu koku molekülleri arasında ayrımcılık öne ise. Bir kokuları nasıl algılandığını anlamak için anahtar olduğunu anlamak için nasıl ve hangi ORs tarafından verilen bir koku harekete geçirmek.
Bir girişim propil aydınlatmak için- veya etkileşimler, tüp bebek fonksiyonel deneyleri önemli bir rol oynamıştır. Yetim ORs (OR de-orphanization) için agonist kokulu ligandlar tanımlaması çok aktif bir alan son yirmi yıldır, ex vivo ve içinde vivo işlevsel testleri5,6,7 tüp bebek, çeşitli aracılığıyla olmuştur ,8,9,10,11,12,13,14,15,16, 17.
İn vitro tahlil sistemleri en iyi ORs işlevsel etki alanları ve kritik artıkları ORs yanı sıra potansiyel mühendislik uygulamaları da dahil olmak üzere, ayrıntılı fonksiyonel karakterizasyonu için uygundur. Ancak, daha fazla değerli tüp bebek sistemlerinin geliştirilmesi için ORs kodlamayla OSNs ile zorluk ve kapaklı hücrelerdeki ORs işlev ifadesi nedeniyle kısmen bir mücadele vardı. İlk challenge propil haritalama işlevsel ORs hücre yüzey ifade için izin iletişim kuralları kurmak için olmuştu-OR etkileşimleri. Bir dizi bağımsız gruplar çeşitli yaklaşımlar5,6,7,8,9,10,11,12kullanılan, 14,18,19,20. En erken başarılarından Krautwurst vd tarafından yapıldı ın rhodopsin (Rho-etiket) kısaltılmış bir dizi ile N-terminus, ORs öğesini ve geliştirilmiş yüzey ifade insan embriyonik böbrek (HEK) hücreleri13' te görülmektedir. Varyasyonları OR dizisine bağlı etiketi için yapılan olduğunu hala bir yol OR ifade ve işlevselliği19,21artırmak için araştırdı. Saito ve ark. sonra teşhis reseptör taşıma proteini 1 (RTP1) ve OR ticareti kolaylaştırmak RTP2. 22 RTP1, RTP1S, olarak adlandırılan daha kısa bir sürümünü de özgün protein23daha da etkili olduğu gösterilmiştir. Geliştirme stabil Golfifade bir hücre satırı (Hana3A), siklik adenozin monofosfattır (kampı) gazetecilere kullanımı ile birleştiğinde REEP1, RTP1 ve RTP2 24, propil tanımlaması sağladı-OR etkileşimleri. Hangi RTP aile proteinlerin hücre yüzey ifade belirlenecek ORs kalıntılarının teşvik mekanizması.
Kurulan bu yöntemlerin bir uyarı onlar odorants bir stimülasyon orta önceden çözülür ve orta değiştirerek hücreleri uyarmak anlamında propil stimülasyon sıvı faz, güvenmek olduğunu. Bu fizyolojik şartlarda nerede propil molekülleri koku epitel buharı aşamasında ulaşmak ve ORs dağılması tarafından nazal mukoza etkinleştirmek çok farklıdır. Daha yakından benzer fizyolojik ilgili uyarıcı pozlama, Sanz vd.20 altında hücre kuyu üstüne yerleştirilen bir plastik film iç yüzü asmaya propil çözüm bir damla uygulayarak buharı stimülasyon üzerinde dayalı bir tahlil evlenme teklif etti. Onlar kalsiyum yanıt floresan yoğunluğu izleme tarafından kaydedildi. Bu yöntem ilk hava fazlı propil stimülasyon kullanın, ama OR harekete geçirmek büyük bir tarama izin vermedi.
Burada, gerçek zamanlı buharı faz propil stimülasyon ile tüp bebek OR etkinleştirme Glosensor assay (şekil 1) tarafından izlenmesi sağlar yeni bir yöntem geliştirdi. Bu tahlil daha önce sıvı propil stimülasyon18,19,25,26,27,28,29, bağlamında kullanılan 30 , 31. luminometer izleme odası ilk plaka (şekil 1A) okuma önce buharlaşmış propil ile equilibrated. Propil moleküllerdir sonra faiz, RTP1S ve Glosensor proteinler (şekil 1B) OR ifade Hana3A hücreleri banyo arabellek içine solvated. Propil bir agonist or ise, OR için aktif bir uyum geçin ve gozlemler cyclase (AC) aktive Golf, bağlama ve sonuçta kamp düzeyleri yükselmeye neden. Yükselen bu kampı bağlamak ve Glosensor protein biyoluminesans katalizlerler ışıma oluşturmak için harekete geçirmek. Bu ışıma sonra luminometer tarafından kaydedilir ve OR etkinleştirme izleme sağlar. Tüp Bebek sistemleri yakınlaştırmayı kokular doğal algı getiriyor gibi yüksek faiz OR deorphanization bağlamında bu yöntem kullanılabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:867px;" width="866">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:205px;">0.05 % trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:449px;">0.05% Trypsin - EDTA (1x), phenol red - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm cell culture dish&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td>100 mm x 20 mm cell culture dish&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352099</td>
			<td style="width:449px;">17 mm x 120 mm conical tubes</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">96-well plate</td>
			<td style="width:93px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3843</td>
			<td style="width:449px;">96 well, with LE lid white with clear bottom Poly-D-lysine coated Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Amphotericin</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15290-018</td>
			<td style="width:449px;">Amphotericin B 250 &#181;g/mL - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifuge machine</td>
			<td>Jouan</td>
			<td>C312</td>
			<td style="width:449px;">Centrifuge machine with swinging bucket rotor for 15 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Class II Type A/B3 fumehood</td>
			<td>NUAIRE</td>
			<td>NU-407-500</td>
			<td style="width:449px;">fumehood for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">FBS</td>
			<td style="width:93px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">16000-044</td>
			<td style="width:449px;">Fetal Bovine Serum - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">GloSensor cAMP Reagent</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E1290</td>
			<td style="width:449px;">GloSensor cAMP Reagent luminescent protein substrate - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Incubator 37 &#176;C; 5 % CO2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-676-604</td>
			<td style="width:449px;">Incubator for cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine 2000 reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:449px;">Lipofectamine 2000 Reagent 1mg/ml transfection reagent - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Luminometer POLARstar OPTIMA</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td>discontinued</td>
			<td style="width:449px;">96 well plate reader for luminescence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:449px;">Solvent for odorants - store at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Minimum Essential Medium (MEM)</td>
			<td style="width:93px;">Corning cellgro</td>
			<td style="width:119px;">10-010-CV</td>
			<td style="width:449px;">Minimum Essential Medium Eagle with Earle&#8217;s salts &#38; L-glutamine - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4333</td>
			<td style="width:449px;">Penicillin-Streptomycin solution stabilized with 10,000 U of penicillin and 10 mg streptomycin - store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:205px;">pGlosensor</td>
			<td style="width:93px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">E2301</td>
			<td style="width:449px;">pGloSensor-22F cAMP luminescent protein plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">phase contrast microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>090-131.001</td>
			<td style="width:449px;">phase contrast microscope with x4, x10, x20 objectives</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:205px;">RTP1S</td>
			<td style="width:93px;">H. Matsunami lab</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td style="width:449px;">100 ng/&#181;L plasmid - store at 4&#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time in vitro monitoring of odorant receptor activation by an odorant in the vapor phase

Koku algı odorants etkileşim propil reseptörleri ile başlar (veya) koku duyusal sinir hücreleri tarafından (OSN) dile getirdi. Koku tanıma nerede bir OR odorants bir dizi ile etkinleştirilebilir ve bir propil ORs bir arada etkinleştirebilirsiniz bir birleşimsel kodlama düzeni izler. Böyle Kombinatorik kodlama aracılığıyla, organizmalar algılayabilir ve sayısız uçucu koku molekülleri arasında ayırımcılık. Böylece, belirli bir konsantrasyon, bir koku ORs, tarafından bir harekete geçirmek desen her koku için belirli olan tanımlanabilir. Bu anlamda, koku gerektirir anlayış propil algıladıkları için beyin kullandığı düzeneklerini çatlama-OR etkileşimleri. Bu yüzden koku alma toplum "Bu reseptörleri de-orphanize için" taahhüt eder. Propil tanımlamak için kullanılan geleneksel tüp bebek sistemleri- veya etkileşimler ORs ile etkileşim daha önce doğal algılama kokuları buharı odorants dağılması ile burun mukozası içine sorumluluk alanlarından olan hücre ortamla kuluçka propil, kullanılan. Burada, OR etkinleştirme buharı fazlı odorants üzerinden gerçek zamanlı izlenmesi için izin yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Bizim yöntem Glosensor tahlil kullanarak ışıldama tarafından kamp yayın ölçme üzerinde dayanır. İçinde vivo ve tüp bebek yaklaşımlar arasındaki geçerli boşlukları arasında köprü görevi gören ve bir biomimetic uçucu kimyasal duyumsal için bir temel sağlar.

Yanıt üç fare ORs, Olfr746, Olfr124 ve Olfr1093 ekranlı cinnamaldehyde buharı stimülasyon (şekil 3) kullanarak. Aynı anda, biz test ORs propil kaynaklı faaliyetlerinin belirli sağlamak için bir boş vektör kontrolü (Rho-PCI) kullanılan (şekil 3A). ORs buharı propil uyarıcı üzerine gerçek zamanlı etkinleştirme izlenen 20'den fazla ölçüm devir oldu. Her veri de ilk boş vektör kontrolü ortalama değerine her çevriminde ...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase at JoVE.com

Real-time In Vitro Monitoring of Odorant Receptor Activation by an Odorant in the Vapor Phase

Fizyolojik açıdan, propil reseptörleri buharı aşamasında inhale propil moleküller tarafından etkinleştirilir. Ancak, en tüp bebek sistemleri sıvı faz propil stimülasyon yararlanmak. Burada, propil reseptör etkinleştirme propil stimülasyon buharı faz üzerine gerçek zamanlı tüp bebek izleme sağlayan bir yöntem mevcut.

Gerçek zamanlı olarak buharı aşamasında propil reseptör etkinleştirme bir propil tarafından in Vitro izlenmesi

Olfactory perception begins with the interaction of odorants with odorant receptors (OR) expressed by olfactory sensory neurons (OSN). Odor recognition ...

Protokolümüz, koku reseptörlerinden oluşan bir panel ile uçucu kokuların saptanmasını ve ayrımcılığını ölçmeyi sağlar. Bu yöntem koku reseptör tabanlı biyosensörler geliştirme imkanını açar. Bu teknik, buhar fazında koku molekülleri üzerine odorant reseptör aktivasyonunun gerçek zamanlı in vitro olarak izlenmesini sağlar.Bu in vitro ve in vivo yaklaşımlar arasındaki boşluğu doldurur. Bu yöntem, mukozal metabolik enzimlerin rolü de dahil olmak üzere koku algısına yol açan olayların kinetik lerini anlamak için kullanılabilir. Başlamak için, el yazmasına göre M10 ve M10 PSF'yi hazırlayın.Hücreler 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksit M10 PSF 10 mililitre kültürlü. Bir faz kontrast mikroskobu altında kültür çanak gözlemleyin. %100 birleştiğinde, medyayı aspire ederek ve hücreleri 10 mililitre PBS ile hafifçe yıkayarak hücreleri daha düşük bir konsantrasyona bölün.Sonra PBS aspire ve tripsin-EDTA üç mililitre ekleyin. Hücreler çanak kopana kadar yaklaşık bir dakika tepki versin. Tripsini inaktive etmek için beş mililitre M10 ekleyin ve çanağa bağlı hücreleri ayırmak için yukarı ve aşağı pipet.Sekiz mililitre hücre süspansiyonunu 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve tüpü 200-kat-G'de beş dakika santrifüj edin. Süpernatant aspire ve herhangi bir hücre kütlesi kırmak için yukarı ve aşağı borulama tarafından M10 PSF beş mililitre hücreleri yeniden askıya. Tüp kabarcıklar oluşturmaktan kaçının.Hücrelerin %20'sini elde etmek için, yeni 1,000 milimetrelik hücre kültürü yemeğine dokuz mililitre M10 PSF ekleyin ve yeniden askıya alınan hücre çözeltisinin bir mililitresini aktarın. 37 santigrat derecede kuluçka ve %5 karbondioksit. Bu çanak, % 20 birleştiğinde oturan, 48 saat içinde% 100 birleştiği nde ulaşacaktır.Gözlemlemek için bir faz kontrast mikroskobu altında çanak yerleştirin. 100% hücre birleştirme kültür çanak 1/10 atın. Ortamı aspire edin ve hücreleri 10 mililitre PBS ile nazikçe yıkayın.Daha sonra hücreleri tripsin-EDTA ve M10, santrifüj ile tedavi edin ve daha önce yapıldığı gibi M10 PSF ile tekrar tedavi edin. Bir 96-iyi plaka gerçekleştirmek için, taze M10 PSF 5.5 mililitre resuspended hücrelerin beş mililitre 500 mikrolitre ekleyin. Hava kabarcıkları üretmeden hücreleri ve M10 PSF karıştırın.Pipet 50 mikrolitre seyreltilmiş askıda hücrelerin her bir kuyuya 96 kuyulu bir pipet kullanarak. Bir gecede 37 santigrat derece ve %5 karbondioksit le kuluçkaya yat. İlk olarak, bir faz kontrast mikroskobu altında bir gecede kültürlü 96-iyi plaka yerleştirin, hücre birleşimi gözlemlemek ve% 30 ve% 50 arasında olduğundan emin olun 1.5 mililitrelik bir tüp içinde ilk transfeksiyon karışımı hazırlayın 1.5 mililitrelik bir tüp içinde tüm plaka için ortak plazmidler el yazmasına göre.Rho-pCi boş vektör negatif kontrol, ve Olfr1377 test odorant aseton yanıt bilinen olumlu bir kontrol. Karışımı kontrol plazmidlerinden birini içeren iki transfeksiyon karışımına bölün. 500 mikrolitre MEM ve 20 mikrolitre lipofektamin 2000 reaktif içeren ikinci bir transfeksiyon karışımı hazırlayın.Her rezervuar iyi ikinci karışımın yarısını ekleyin ve yavaşça yukarı ve aşağı boru lama tarafından karıştırın. Tüpoda sıcaklığında 15 dakika kuluçkaya yatın. Bir 96-iyi plaka için M10 beş mililitre ekleyin.Her rezervuar içine 2,5 mililitre iyi ekleyin ve yavaşça karıştırın. M10 PSF'yi daha önce kaplanmış 96 kuyulu plakadaki son transfeksiyon ortamının 50 mikrolitresiyle değiştirin. Bir gecede 37 santigrat derece ve %5 karbondioksit le kuluçkaya yat.Daha sonra luminometrenin kapısını açın ve vakum pompasına bağlı tüpü takın. Bir gecede luminometre nin haznesini vakumla. Transfeksiyondan sonra, %60 ile %100 arasında bir hücre birleşimini sağlamak için 96 kuyulu plakayı faz kontrast mikroskobu altında gözlemleyin Hank'in 10 milimolar HEPES ve beş milimolar D-glukoz içeren Dengeli Tuz Çözeltisinin stimülasyon çözeltisini hazırlayın.Transfeksiyon ortamını 96 kuyulu plakadan çıkarın ve her kuyuya 50 mikrolitre taze stimülasyon çözeltisi ekleyerek hücreleri yıkayın. GloSensor cAMP reaktif çözeltisini seyreltmek için, stimülasyon çözeltisinin 2,75 mililitrelik pipeti beş mililitrelik bir tüpe ve cAMP reaktif çözeltisinin 75 mikrolitresini ekleyin. Kuyulardan stimülasyon çözeltisini çıkarın ve her kuyuya 25 mikrolitre seyreltilmiş cAMP reaktif çözeltisi ekleyin.96 kuyulu plakayı karanlık ve kokusuz bir ortamda oda sıcaklığında iki saat kuluçkaya yatırın. İlk olarak, mineral yağ 10 mililitre içinde% 1 odorant astofenon seyreltin ve tüp kapağı. CAMP reaktif kuluçka süresi nin bitiminden önce, her kuyuya 96 kuyulu yeni bir plaka içinde 25 mikrolitre koku çözeltisi ekleyin.Daha sonra bu koku tabakasını, uçucu koku molekülleri ile odayı dengelemek için beş dakika boyunca luminometre odasına yerleştirin. Luminometreyi, döngüler arasında 0,7 saniyelik aralıkla 90 saniyelik plaka ölçümünün 20 döngüsü boyunca sıfır saniyegecikmeyle parlaklık kaydedin. Tabağı okumadan hemen önce, haznedeki hazneyi çıkarın.Transfected hücreleri içeren 96-iyi plaka, kuyular arasındaki boşlukta koku 25 mikrolitre ekleyin ve hızlı bir şekilde odasına plaka geri koymak. 30 dakika içinde 20 döngü için tüm kuyuların parlaklık ölçümü başlatın. Parlaklık ölçümünden sonra, luminometrenin içindeki kalan kokuyu, okuma odasındaki kokuları en az iki saat boyunca vakumlayarak çıkarın.Koku uçucularının çapraz kontaminasyonunu önlemek için bir sonraki kokuyu kuluçkaya yatırmadan önce beş dakika basınçlı hava göndererek temiz hava ile değiştirin. Veri analizine başlamak için, luminometre yazılımındaki verileri dışa aktarın. Her kayıt zamanı için aynı OR'un kopyalarını ortalaman.Herhangi bir nihai denetime normalleştirilmiş OR yanıtını hesaplamak için, boş vektör ortalaması değeri her kayıt zamanında OR ortalaması değerine bölün. Ortalama OR yanıtını her kayıt süresi yanıtına sıfır saniyede bölerek her BIR OR yanıtını bazal aktivitelerine normalleştirin. Her OR'un eğrisi için tek bir OR yanıt değeri elde etmek için, eğrinin altındaki alanı elde etmek için her veya kayıt zamanının tüm parlaklık değerlerini toplar.Bu deneyde, fare lerin buhar koku verici stimülasyonu üzerine gerçek zamanlı aktivasyonu 20 ölçüm döngüsü nde izlendi. Test edilen OR'lerin koku kaynaklı aktivitelerinin spesifik olduğundan emin olmak için boş bir vektör kontrolü kullanıldı. Her kuyunun verileri ilk olarak her çevrim için boş vektör kontrolü ortalaması değerine normalleştirildi.Daha sonra, farklı ORs'lerinin yanıtlarını karşılaştırmak için, veriler bu testteki bazal aktivitenin OR düzeylerine göre normalleştirildi. Her OR için tek aktivasyon değerleri, tüm ölçüm döngülerinin emisyon değerleri toplanarak her veya her biri için eğrinin altındaki alan hesaplanarak hesaplandı. Ayrıca, doza bağlı yanıtlar artan koku dozları kullanılarak ölçülebilir.Olfr1377'nin beş konsantrasyonda asetik uyarıma yanıtı kaydedildi. Sadece üç yüksek konsantrasyon Olfr1377'yi aktive edebildi. Saf bileşik stimülasyon zaman içinde OR tepkisini azaltmak için bir eğilim gösterir, muhtemelen hücre toksisitesi nedeniyle.Adım sırasında, kuyu arasında seyreltilmiş odorant eklemeniz gerekir, ve hızlı bir şekilde plaka kaydı başlatmak için hazır olun. Koku ilavesi ile izleme arasındaki süre en aza indirilmeli ve iki deney arasında sabit olmalıdır. Atria hücrelerinde biyolojik olarak tehlikeli madde vardır, bu yüzden hücreleri uygun dispanserlere atmayı hatırlatın.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Emme Pipet Tekniği kullanılarak Olfaktör Reseptör Nöronlar Kaydedilmiş odorant bağlı Cevapları

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Monitoring Changes in the Intracellular Calcium Concentration and Synaptic Efficacy in the Mollusc Aplysia

Mollusk içinde hücre içi kalsiyum konsantrasyonu ve Synaptic Etkinliği İzlenmesi Değişiklikler<em&gt; Aplysia&#39;nın</em

It has been suggested that changes in intracellular calcium mediate the induction of a number of important forms of synaptic plasticity (e.g., ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Lazer kaynaklı Omurilik Felçlileri Modeli Gerçek zamanlı aksonal Dejenerasyon mekanizmaları değerlendirmek için

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Bozulmamış neuroepithelium Fare Koku Duyu Nöronlar Delikli Patch-kelepçe Kayıt: Bir Belirlenen Odorant Reseptör ifade Nöronlar Fonksiyonel Analiz

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Gerçek zamanlı yönetim fMRI psikoterapi eğitimi için bir iletişim kuralı

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Motor Nöron benzeri NSC-34 Hücrelerinde Gerçek Zamanlı Nükleositoplazmik Taşınımı Ölçüm Testi

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

Canlı hücre ölçüm propil reseptörü harekete geçirmek kullanımı gerçek zamanlı bir kamp tahlil

The enormous sizes of the mammalian odorant receptor (OR) families present difficulties to find their cognate ligands among numerous volatile chemicals. ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Locust Antenlerinde Odorant Reseptör Genlerinin RNA ile Lokalizasyonu<em&gt; Yerinde</em&gt; Hibridizasyon

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Ocular Kinematics Measured by In Vitro Stimulation of the Cranial Nerves in the Turtle

Oküler kinematik Vitro uyarılması kaplumbağa kranial sinirler tarafından ölçülen

After animals are euthanized, their tissues begin to die. Turtles offer an advantage because of a longer survival time of their tissues, especially when ...