Name: direct intrabronchial administration to improve the selective agent deposition within the mouse lung
Uploaded: 2019-05-20T14:00:00
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이 작품은 NHLBI 교부금 HL125371에 의해 E.P.S.와 DOD (CDMRP) 교부금 W81XWH-17-1-0051Y에 의해 지원되었다.

모든 동물 프로토콜은 콜로라도 덴버 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 아래에 설명 된 모든 절차 (섹션 4-7) 남성과 여성 C57BL/6 마우스를 사용 하 여 최적화 되었습니다. 이 접근은 체중에 있는 19-40 g에 구역 수색하는 마우스를 사용하여 유효했습니다.
1. IB경영을 위한 플랫폼 구축
<ol><li>기저 날개와 스탠딩 윙 사이의 원래 90° 각도에서 북엔?...

<ol>
	<li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of Applied Physiology. 106 (3), 984-987 (2009).</li><li>Thomas, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+in+mice+via+direct+laryngoscopy+using+an+otoscope.">Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), 53771 (2016).</li><li>McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+respiratory+system+mechanics+in+mice+using+the+forced+oscillation+technique.">Evaluation of respiratory system mechanics in mice using the forced oscillation technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (75), e50172 (2013).</li><li>Halbower, A. C., Mason, R. J., Abman, S. H., Tuder, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agarose+infiltration+improves+morphology+of+cryostat+sections+of+lung.">Agarose infiltration improves morphology of cryostat sections of lung.</a> Laboratory Investigation. 71 (1), 149-153 (1994).</li><li>Thrall, R. S., McCormick, J. R., Jack, R. M., McReynolds, R. A., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis+in+the+rat:+inhibition+by+indomethacin.">Bleomycin-induced pulmonary fibrosis in the rat: inhibition by indomethacin.</a> American Journal of Pathology. 95 (1), 117-130 (1979).</li><li>Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+lung+injury.">Animal models of acute lung injury.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (3), L379-L399 (2008).</li><li>Del Sorbo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratracheal+Administration+of+Small+Interfering+RNA+Targeting+Fas+Reduces+Lung+Ischemia-Reperfusion+Injury.">Intratracheal Administration of Small Interfering RNA Targeting Fas Reduces Lung Ischemia-Reperfusion Injury.</a> Criticial Care Medicine. 44 (8), e604-e613 (2016).</li><li>McLemore, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+intrapulmonary+model+for+orthotopic+propagation+of+human+lung+cancers+in+athymic+nude+mice.">Novel intrapulmonary model for orthotopic propagation of human lung cancers in athymic nude mice.</a> Cancer Research. 47 (19), 5132-5140 (1987).</li><li>Vertrees, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+to+murine+orthotopic+xenotransplanted+lung+cancer+model.">Development of a human to murine orthotopic xenotransplanted lung cancer model.</a> Journal of Investigative Surgery. 13 (6), 349-358 (2000).</li></ol>

폐 상해는 BLM 6과 같은 해로운 에이전트의 IT 행정을사용하여 설치류에서 고전적으로 모델링되었습니다. 그러나 이러한 IT 관리는 이러한 접근법을 통해 폐 전달의 비표적 특성을반영하여 누덕거리는 상해로 이어질 뿐이다 7. 폐 상해 모델링의 이러한 제한은 약물, siRNA 또는 세포 치료와 같은 비 해로운 실험 에이전트의 IT 전달을 시도할 때 직면한 유익한 과제?...

마우스에서 실험제의 직접 폐 투여는 폐 면역 반응, 급성 폐 손상, 및 폐 섬유증의 연구를 허용한다. 직접 폐 투여는 전형적으로 설명된 바와 같이, 내강내(IT) 주입을 통해 수행된다1,2,3. 그러나, 이 접근은 비선택적이고, 비표적및 수시로 비대칭 적인 방식으로 두 폐에 영향을 미칩니다.  폐 손상의 실험 적인 모델링은 선택적으로 대조군으로 반대쪽 폐의 사용을 허용하는 1개의 특정 폐를 표적으로 하는 기능에서 유익할 수 있습니다. 반대로, 인간 확산 폐 질환의 정확한 모델링은 양측 폐 실치종에 대한 실험제의 대칭 분포로부터 유익합니다.
이 보고서의 전체적인 목표는 마우스의 왼쪽 또는 오른쪽 폐에 실험제제를 선택적으로전달하는 방법을 설명하는 것이다(도 1). 이러한 기관내(IB) 투여 접근법은 마우스 폐의 일방적인 치료를 허용하고 양측 메인스템 기관지에게 제제의 동등한 전달을 보장하기 위해 용이하게 적응될 수 있다. IB 투여를 사용하여 더 큰 우측 폐에 더 큰 용량의 실험제제를 전달하고 더 작은 좌측 폐(즉, 투여량 조정 IB 투여)에 더 작은 부피를 전달함으로써, 이 보고서에서 입증된 폐의 균질성의 개선은 폐의 균질성의 개선이다. 실험 에이전트의 전달, 마우스에서 확산 폐 손상의 모델을 최적화. 이와 같이, 이 보고는 마우스에 실험에이전트를 일방적으로 관리하거나 두 폐에 있는 약 증착의 대칭을 향상하기 위하여 노력하는 조사자들을 위한 가치를 보유할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:739px;" width="739">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">22 G shielded IV Catheter</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:140px;">381423</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Bleomycin</td>
			<td style="width:139px;">Enzo life sciences</td>
			<td style="width:140px;">BML-AP302-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">Compact Mini rodent anesthesia machine&#160;</td>
			<td style="width:139px;">DRE Veterinary</td>
			<td style="width:140px;">9280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Evans blue dye</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">FITC-dextran</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">FD150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:139px;">Piramal Critical Care</td>
			<td style="width:140px;">NDC&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">LED-30W Fiber Optic Dual Gooseneck Lights Microscope Illuminator</td>
			<td style="width:139px;">AmScope</td>
			<td style="width:140px;">LED-30W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Low temperature cautery with fine tip&#160;</td>
			<td style="width:139px;">Bovie</td>
			<td style="width:140px;">AA02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Precisionglide needle, 18G x 1&#34;</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:140px;">305195</td>
			<td>Beveled tip, 12 mm in length&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Xylazine</td>
			<td style="width:139px;">AKORN</td>
			<td style="width:140px;">NDC 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Zatamine</td>
			<td>VetOne</td>
			<td style="width:140px;">NDC 13985-702-10&#160;</td>
			<td>Ketamine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct intrabronchial administration to improve the selective agent deposition within the mouse lung

실험제의 INTratracheal (IT) 투여는 출혈성 폐 섬유증과 같은 확산 폐 질환의 뮤린 모델에서 필수적인 기술이다.  그러나, 말단 마우스 폐에 경부 투여 에이전트의 분포는 종종 비대칭, 폐 실치 농도가 마우스의 작은 (그러나 동등하게 접근) 왼쪽 폐에서 증가와.  본 보고서에 기재된 것은 살아있는 마우스의 왼쪽 및/또는 우측 폐를 비수술적으로 캐뉼로 하는 새로운 기관내(IB) 접근법이다.  또한 이 접근법이 실험제의 폐 전달의 좌우 대칭성을 개선하기 위해 하나의 폐에 제제를 선택적으로 투여하거나 적응(투여량 조정 IB 전달을 통해)하는 데 사용될 수 있는 방법을 입증하여 확산 모델을 개선하는 방법을 입증하였다. 청혈유도 폐 섬유증과 같은 폐 질환.

선택적 IB 삽관은 특정 로브 (오른쪽 폐) 또는 바실라 세그먼트 (왼쪽 폐)를 대상으로합니다.
오른쪽 폐에 대한 EBD의 IB 투여는 섹션 5.1에 기재된 바와 같이 수행되었다. 실험이 완료된 후, 마우스는 복강내 케타민/자일라진의 치명적인 용량을 투여하였고, 폐는 EBD 분포의 데모를 위해 수확되었다(도4A...

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Direct Intrabronchial Administration to Improve the Selective Agent Deposition Within the Mouse Lung

쥐에서 실험제의 INTracheal (IT) 투여는 종종 말단 폐에 비대칭 전달을 초래한다.  이 보고에서는, 우리는 살아있는 마우스에 있는 각 폐를 비 작동가능하게 캐뉼기 위하여 직접적인 기관내 (IB) 접근을 기술합니다.  이러한 접근법은 하나의 폐에 제제를 선택적으로 투여하기 위해 사용될 수 있거나 또는 두 폐에 대한 대칭에이전트 전달을 개선하기 위해 적응될 수 있다.

마우스 폐 내 선택적 에이전트 침착을 개선하기 위한 직접 기관내 투여

Intratracheal (IT) administration of experimental agents is an essential technique in murine models of diffuse lung diseases, such as bleomycin-induced ...

마우스에서 폐 질환을 모델링하기 위해 실험제는 종종 장내 주사를 통해 투여됩니다. 그러나 이러한 접근법은 1개의 폐를 선택적으로 표적으로 할 수 없으며, 분포는 폐 사이의 비대칭일 수 있다. 마취 된 마우스에 개별 폐를 투여함으로써 실험에이전트를 일방적으로 투여 할 수 있습니다.수정으로, 이 접근은 두 폐에 걸쳐 증착의 대칭을 향상, 양측으로 사용될 수 있습니다. 연마, 약간의 협응성 및 라벨링을 포함한 카테터 제제는 성공의 핵심 요소입니다. 물론 이 기술을 연습하는 것도 필요합니다.절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 전문 연구 조수 인 Sumei Liao가 될 것입니다. 발가락 핀치에 대한 응답의 부족을 확인 한 후, supine 방향으로 드레이프 봉합사 라인에 앞개에서 마취, 8 - 10 주 된, C57-블랙 / 6 마우스를 일시 중단합니다. 마우스를 2~3개 후크로 느슨하게 고정하고 테이프를 반복하여 환기 제한을 피하고 발광 다이오드 광섬유 조명기를 켭니다.연산자가 플랫폼 뒤에 배치하고 마우스에 등갈을 배치합니다. 발루미네이터의 구스넥을 마우스로부터 2~3센티미터 떨어진 곳에 향하게 하여 후두 부위를 피부를 통해 점등합니다. 지배적 인 손에 멸균 집게를 사용하여 구강에서 혀를 그립니다.비지배적인 손과 멸균 우울기를 사용하여 혀의 뿌리를 평평하게 하여 구로하린을 널리 노출시하십시오. 집게를 풀어낸 후, 지배적인 손을 사용하여 확장된 카테터를 구강을 통해 기관으로 삽관합니다. 주사기의 거품이 호흡마다 위아래로 움직이는지 관찰하여 배치를 확인합니다.탈경 오른쪽 폐의 선택적 엽 칸포의 경우, 내외 삽관 후 플라스틱 보드 30도 회전하고 테이블에 표시된 대로 마우스 미드라인에 병렬로 카테터의 허브를 안내합니다. 젤 로딩 팁을 사용하여 카테터에 0.3%의 에반스 블루 염료 20마이크로리터를 전달하고 유리 드롭퍼로 1~2개의 100마이크로리터 알리쿼트를 배출합니다. 그런 다음, 카테터를 철회하고, 전체 복구까지 모니터링, 온난화 담요에 동물을 배치하기 전에 30 초 동안 위치에 마우스를 유지합니다.탈경 좌측 폐의 선택적 엽 캔터의 경우, 자궁 내 삽 관식 후 플라스틱 보드를 영하 74도 회전시키고 카테터를 왼쪽 메인스템 기관지로 부드럽게 전진시키면서 적당한 압력을 90도 아래로 그리고 북엔드쪽으로 배치한다. 왼쪽 하부 폐 세그먼트를 캐너팅 한 후 플라스틱 보드를 영하 30도 회전시키고 겔 로딩 팁으로 0.3 %의 에반스 블루 염료 40 마이크로 리터를 제공합니다. 이어서, 유리 드롭퍼를 통해 1내지 2개의 100-300 마이크로리터 알리쿼트의 공기를 전달하고, 카테터를 철회하여 마우스가 회복할 수 있도록 한다.오른쪽 전체 폐 투여의 경우, 내내 삽 관식 후 플라스틱 보드를 30도 회전시키고 마우스 미드라인에 병렬로 카테터를 안내하여 오른쪽 단반 캐누레이션에 필요한 깊이에 도달합니다. 빈치피네아 기호의 모양을 확인하고 마우스를 영하 74도 회전하여 에이전트 전달을 위한 중력 지원을 가능하게 합니다. 카테터를 오른쪽 주줄기 기관지의 이륙에 해당하는 위치로 철회하고 카테터의 벨이 아래쪽으로 향하도록 합니다.오른쪽 폐에 0.3%의 에반스 블루 염료 30개를 전달하고, 그 다음으로 1-2개의 100-300 마이크로리터 알리쿼트의 공기를 전달합니다. 그런 다음 카테터를 철회하고 마우스가 복구할 수 있도록 합니다. 왼쪽 전체 폐 투여의 경우, 내막 캐누레이션 후 플라스틱 보드를 영하 74도 회전시키고 카테터를 왼쪽 주줄기 기관지로 부드럽게 전진시키면서 90도 아래로 그리고 북엔드쪽으로 적당한 압력을 가한다.빈맥 기호를 확인하고 마우스 86도 회전하여 에이전트 투여에 대한 중력 지원을 허용합니다. 카테터를 왼쪽 주줄기 기관지로 인출하고 카테터의 벨을 회전하여 아래쪽으로 향합니다. 왼쪽 폐에 젤 로딩 팁이 있는 0.3%의 에반스 블루 염료 30개를 전달하고, 그 다음으로 1~2개의 100-300 마이크로리터 알리쿼트의 공기를 전달합니다.그런 다음, 설명된 대로 마우스가 회복되도록 카테터를 철회한다. FITC-dextran의 양자 전달은 자궁 내 및 대칭 내 막부 투여로 인해 왼쪽 폐에 지적된 상대적 농도가 더 큰 비대칭 폐 빈약한 FITC 형광으로 이어집니다. 이는 장내 투여 후 실험제의 비대칭 폐 전달이 각 주줄기 기관지에 대한 비대칭 프리젠테이션의 결과가 아니라 폐 중량과 질량의 차이에 의해 동등한 주줄기 전달이 희석된다는 것을 시사한다.투여량 조정 기관내 투여는 폐 빈장체 전달의 대칭성을 향상시킵니다. 그러나 이러한 교정에도 불구하고, 지속적인 이질성은 여전히 오른쪽 폐의 다른 로브 내에서 관찰된다. 장내 출혈로 유발된 섬유성 폐 손상 후 21일 후, 염증은 오른쪽 폐에서 눈에 띄는 부상이 적고 왼쪽 폐에서 주로 관찰됩니다.반대로, 투여량 조정 된 장간 출혈 성 투여는 왼쪽 폐에 약간 감소 된 부상과 오른쪽 폐에 부상이 증가하며 중간 및 우수한 엽에서 가장 큰 부상이 나타납니다. 전체 폐 투여 하는 동안, 카테터를 철회 하 고 아래로 카테터의 bevel 경향이 잊지 마세요.

Research

JoVE Journal

Medicine

High-frequency High-resolution Echocardiography: First Evidence on Non-invasive Repeated Measure of Myocardial Strain, Contractility, and Mitral Regurgitation in the Ischemia-reperfused Murine Heart

고주파 고해상도 Echocardiography : 국소 빈혈 - reperfused Murine 중심부에 심근 스트레인, 수축성 및 승모판 병리 현상의 비침습 반복 측정에 대한 최초의 증거

Ischemia-reperfusion (IR) was surgically performed in murine hearts which were then subjected to repeated imaging to monitor temporal changes in ...

연구

의학

Bronchial Thermoplasty:  A Novel Therapeutic Approach to Severe Asthma

기관지 Thermoplasty : 심한 천식에 소설 치료 접근

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled ...

Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung

비 침습적 기관 내 삽관 마우스 폐의 병리학 및 생리학을 연구하는

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular ...

Diagnostic Ultrasound Imaging of Mouse Diaphragm Function

마우스 다이어프램 기능의 진단 초음파 이미징

Function analysis of rodent respiratory skeletal muscles, particularly the diaphragm, is commonly performed by isolating muscle strips using invasive ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

생물 의학 연구에 소 폐 : 시각적으로 유도 기관지, Intrabronchial 접종 및<em&gt; 생체</em&gt; 샘플링 기법

There is an ongoing search for alternative animal models in research of respiratory medicine. Depending on the goal of the research, large animals as ...

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

시각화<em&gt; 폐렴 구균</em&gt; 심장 Microlesions 및 후속 심장 리모델링 내

During bacteremia Streptococcus pneumoniae can translocate across the vascular endothelium into the myocardium and form discrete bacteria-filled ...

Design, Fabrication, and Administration of the Hand Active Sensation Test (HASTe)

Design, Fabrication, and Administration of the Hand Active Sensation Test HASTe

디자인, 및 관리 손의 제작 활동 감각 테스트 (가속)

The concept of personalizing neurologic rehabilitation, based on individual impairments, has experienced a recent surge. In parallel, the number of ...

2-Methacryloyloxyethyl Phosphorylcholine Polymer Treatment of Complete Dentures to Inhibit Denture Plaque Deposition

전체 틀니의 2- 메타 크릴로 일 옥시 에틸 포스 포릴 폴리머 치료는 틀니 플라크 침착을 억제하는

Removable dentures made of poly (methyl methacrylate) (PMMA) are prone to bacterial adherence and dental plaque formation, which is called denture plaque. ...

Quantitative Mapping of Specific Ventilation in the Human Lung using Proton Magnetic Resonance Imaging and Oxygen as a Contrast Agent

양성자 자기 공명 영상 및 조 영제로 산소를 사용 하 여 인간의 폐에 특정 통풍의 정량 매핑

Specific ventilation imaging (SVI) is a functional magnetic resonance imaging technique capable of quantifying specific ventilation &#8213; the ratio of ...