Name: direct intrabronchial administration to improve the selective agent deposition within the mouse lung
Uploaded: 2019-05-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Intrabronchial Administration to Improve the Selective Agent Deposition Within the Mouse Lung at JoVE.com

Bu çalışma tarafından finanse edildi NHLBı Grant HL125371 için E.P.S. ve DOD tarafından (CDMRP) Grant W81XWH-17-1-0051 için Y.Y.

Tüm hayvan protokolleri Colorado Denver kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıAYUC) Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. Aşağıda açıklanan tüm prosedürler (Bölüm 4 – 7) hem erkek hem de kadın C57BL/6 fareler kullanılarak optimize edilmiştir. Bu yaklaşım, vücut ağırlığı 19 – 40 g arasında değişen fareler kullanılarak doğrulandı.
1. ıB yönetimi için platformun oluşturulması
<ol><li>Defter ucunu, bazal kanat ile ayakta kanat arasındaki ori...

<ol>
	<li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation.">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of Applied Physiology. 106 (3), 984-987 (2009).</li><li>Thomas, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotracheal+intubation+in+mice+via+direct+laryngoscopy+using+an+otoscope.">Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), (2014).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), 53771 (2016).</li><li>McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+respiratory+system+mechanics+in+mice+using+the+forced+oscillation+technique.">Evaluation of respiratory system mechanics in mice using the forced oscillation technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (75), e50172 (2013).</li><li>Halbower, A. C., Mason, R. J., Abman, S. H., Tuder, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agarose+infiltration+improves+morphology+of+cryostat+sections+of+lung.">Agarose infiltration improves morphology of cryostat sections of lung.</a> Laboratory Investigation. 71 (1), 149-153 (1994).</li><li>Thrall, R. S., McCormick, J. R., Jack, R. M., McReynolds, R. A., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis+in+the+rat:+inhibition+by+indomethacin.">Bleomycin-induced pulmonary fibrosis in the rat: inhibition by indomethacin.</a> American Journal of Pathology. 95 (1), 117-130 (1979).</li><li>Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+lung+injury.">Animal models of acute lung injury.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (3), L379-L399 (2008).</li><li>Del Sorbo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratracheal+Administration+of+Small+Interfering+RNA+Targeting+Fas+Reduces+Lung+Ischemia-Reperfusion+Injury.">Intratracheal Administration of Small Interfering RNA Targeting Fas Reduces Lung Ischemia-Reperfusion Injury.</a> Criticial Care Medicine. 44 (8), e604-e613 (2016).</li><li>McLemore, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+intrapulmonary+model+for+orthotopic+propagation+of+human+lung+cancers+in+athymic+nude+mice.">Novel intrapulmonary model for orthotopic propagation of human lung cancers in athymic nude mice.</a> Cancer Research. 47 (19), 5132-5140 (1987).</li><li>Vertrees, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+human+to+murine+orthotopic+xenotransplanted+lung+cancer+model.">Development of a human to murine orthotopic xenotransplanted lung cancer model.</a> Journal of Investigative Surgery. 13 (6), 349-358 (2000).</li></ol>

Akciğer hasarı klasik olarak BLM6gibi ZARARLı ajanlar BT yönetimini kullanarak kemirgenler modellenmiştir. Böyle bir BT yönetimi, ancak, sadece bu yaklaşım ile akciğer teslimat hedefsiz doğası yansıtan, yamalı yaralanma yol açar7. Akciğer yaralanması modelleme bu sınırlamalar ilaçlar, siRNA veya hücresel tedaviler gibi non-zararlı deneysel ajanlar, It teslim çalışırken karşılaştığı öğretici zorluklar vardır.
Bu ...

Farelerde deneysel ajanlar doğrudan pulmoner uygulanması akciğer immün tepkiler çalışması için izin verir, akut akciğer hasarı, ve akciğer fibrozis. Doğrudan pulmoner yönetim, daha önce1,2,3olarak açıklandığı gibi intratrakeal (It) instıtasyon yoluyla genellikle gerçekleştirilir. Ancak, bu yaklaşım seçici olmayan, hem akciğerleri hedefsiz ve genellikle asimetrik bir biçimde etkileyen.  Akciğer yaralanması deneysel modelleme bir kontrol olarak kontralateral akciğer kullanımı için izin, seçici bir belirli akciğer hedef yeteneği yararlanabilir. Tersine, insan diffik akciğer hastalıkları doğru modelleme bilateral akciğer parankime deneysel ajanlar simetrik dağılımı yararlanır.
Bu raporun genel amacı, deneysel ajanlar bir fare sol veya sağ akciğer seçici teslimat için bir yöntem açıklamak için (Şekil 1). Bu intrabronchial (ıB) yönetim yaklaşımı bir fare akciğer tek taraflı tedavi sağlar ve kolayca bilateral mainstem bronşi bir ajan eşit teslim sağlamak için adapte edilebilir. Daha küçük sol akciğere (yani doz ayarlı ıB yönetimi) daha büyük sağ akciğer ve daha küçük hacimler için deneysel ajanlar daha büyük dozlarda sunmak için ıB yönetimini kullanarak, bu raporda gösterilen pulmoner homojenlik bir gelişme Deneysel ajanlar teslim, fareler diffuzu akciğer hasarı modelini optimize. Bu nedenle, bu rapor ya tek taraflı olarak farelere deneysel ajanlar yönetmek veya her iki akciğerde ilaç birikimi simetri geliştirmek isteyen müfettişlerin değeri tutabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:739px;" width="739">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">22 G shielded IV Catheter</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:140px;">381423</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Bleomycin</td>
			<td style="width:139px;">Enzo life sciences</td>
			<td style="width:140px;">BML-AP302-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">Compact Mini rodent anesthesia machine&#160;</td>
			<td style="width:139px;">DRE Veterinary</td>
			<td style="width:140px;">9280</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Evans blue dye</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">FITC-dextran</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">FD150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:139px;">Piramal Critical Care</td>
			<td style="width:140px;">NDC&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">LED-30W Fiber Optic Dual Gooseneck Lights Microscope Illuminator</td>
			<td style="width:139px;">AmScope</td>
			<td style="width:140px;">LED-30W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Low temperature cautery with fine tip&#160;</td>
			<td style="width:139px;">Bovie</td>
			<td style="width:140px;">AA02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Precisionglide needle, 18G x 1&#34;</td>
			<td style="width:139px;">BD</td>
			<td style="width:140px;">305195</td>
			<td>Beveled tip, 12 mm in length&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Xylazine</td>
			<td style="width:139px;">AKORN</td>
			<td style="width:140px;">NDC 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Zatamine</td>
			<td>VetOne</td>
			<td style="width:140px;">NDC 13985-702-10&#160;</td>
			<td>Ketamine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct intrabronchial administration to improve the selective agent deposition within the mouse lung

Deneysel ajanların intratracheal (It) yönetimi, bleomisin kaynaklı pulmoner fibrozis gibi differe akciğer hastalıklarının duvar modellerinde temel bir tekniktir.  Ancak, intratracheally uygulanan ajanlar distal fare akciğerine dağılımı genellikle asimetrik, akciğer parankimal konsantrasyonları daha küçük artar (ama eşit erişilebilir) fare sol akciğer.  Bu raporda açıklanan bir roman intrabronchial (ıB) yaşam fareleri sol ve/veya sağ akciğerleri olmayan operatively kanüle yaklaşımı.  Aynı zamanda bu yaklaşım seçici bir akciğer veya adapte ajanlar yönetmek için nasıl kullanılacağı gösterilmiştir (yoluyla doz-ayarlanmış IB teslimat) deneysel ajanlar akciğer teslim sol-sağ simetri geliştirmek için, böylece differ modelleri iyileştirilmesi pulmoner fibrozis gibi akciğer hastalığı.

Seçmeli ıB entübasyon belirli lobları (sağ akciğer) veya baziler segmentlerini (Sol akciğer) hedefler.
EBD 'nin sağ akciğere IB yönetimi, 5,1 bölümünde açıklandığı şekilde gerçekleştirildi. Denemenin tamamlandıktan sonra fareler ölümcül dozda intraperitoneal ketamin/xylazine uygulanmıştır ve akciğer EBD dağılımı gösterimi için hasat edildi (Şekil 4A</stron...

Watch this Scientific Journal Video about Direct Intrabronchial Administration to Improve the Selective Agent Deposition Within the Mouse Lung at JoVE.com

Direct Intrabronchial Administration to Improve the Selective Agent Deposition Within the Mouse Lung

Farelerde deneysel ajanlar intratracheal (It) yönetimi genellikle distal akciğerlere asimetrik teslim sonuçlanır.  Bu raporda, her akciğeri operatif olmayan canlı fareler içinde cannulate için doğrudan intrabronchial (ıB) yaklaşımı açıklanmaktadır.  Bu yaklaşım, bir akciğer için seçici olarak ajanlar yönetmek için kullanılabilir ya da her iki akciğerde simetrik Ajan teslim geliştirmek için adapte olabilir.

Fare akciğer Içinde seçici Ajan biriktirme geliştirmek için doğrudan Intrabronchial yönetim

Intratracheal (IT) administration of experimental agents is an essential technique in murine models of diffuse lung diseases, such as bleomycin-induced ...

Farelerde akciğer hastalığı nı modellemek için deneysel ajanlar genellikle intratrakeal enjeksiyon yoluyla uygulanır. Ancak bu yaklaşım seçici olarak bir akciğeri hedefleyemez ve dağılım akciğerler arasında asimetrik olabilir. Tek bir akciğeri anestezili bir fareye benzeterek, tek taraflı olarak deneysel ajanlar uygulayabiliriz.Modifikasyon ile bu yaklaşım, her iki akciğerde birikintisi simetrisini geliştirerek bilateral olarak kullanılabilir. Parlatma, hafif angülasyon ve etiketleme gibi kateter hazırlama başarı için anahtar unsurdur. Tabii ki, bu tekniği uygulama da gereklidir.Prosedürü gösteren Sumei Liao, benim laboratuvar profesyonel araştırma görevlisi olacaktır. Parmak sıkışmasına yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, bir dikiş oryantasyonunda dökümlü bir dikiş çizgisi üzerindeki kesici dişlerden sekiz ila 10 haftalık, C57-Siyah/6 fareyi askıya alın. Fareyi iki ila üç parça kancayla sabitleyin ve havalandırma kısıtlamasını önleyerek bandı döndürün ve ışık yayan diyot fiber optik aydınlatıcıyı açın.Operatörü platformun arkasına, dorsal'ı fareye yerleştirin. Aydınlatıcının kaz yakasını fareden 2-3 santimetre uzağa yönlendirin, böylece gırtlak alanını deriden geçirin. Baskın elde steril forseps kullanarak, ağız boşluğundan dil çekin.Yaygın orofarenks ortaya çıkarmak için dilin kökdüzleştirmek için baskın olmayan el ve steril depressor kullanın. Forseps serbest bıraktıktan sonra, oral kavite yoluyla trakea içine genişletilmiş kateter entübe etmek için baskın el kullanın. Şırıngadaki kabarcığın her nefeste yukarı ve aşağı hareket edip etmediğini gözlemleyerek yerleşimi onaylayın.Distal sağ akciğerin selektif lobar kanülasyonu için, intratal entübasyondan sonra plastik tahtayı 30 derece döndürün ve kateterin merkezini, tabloda belirtildiği gibi farenin orta çizgisine paralel olarak uygun ağırlık tabanlı derinliğe doğru yönlendirin. Bir jel yükleme ucu kullanarak, kateter içine% 0.3 Evans mavi boya 20 mikrolitre teslim, cam damlalık tarafından hava bir ila iki 100 mikrolitre aliquots takip. Daha sonra kateteri çekin ve hayvanı Tam iyileşmeye kadar izleyerek, hayvanı ısınma battaniyesine yerleştirmeden önce fareyi 30 saniye boyunca pozisyonda takın.Distal sol akciğerin selektif lobar kanülasyonu için, intratrakeal entübasyondan sonra, plastik tahtayı eksi 74 derece döndürün ve kateteri yavaşça sol mainstem bronşlarına doğru ilerletin ve mütevazı basıncı 90 derece aşağı ve kitap ucuna doğru hareket ettirin. Sol alt akciğer segmentleri cannulating sonra, plastik tahta eksi 30 derece döndürmek ve bir jel yükleme ucu ile 0,3% Evans mavi boya 40 mikrolitre teslim. Daha sonra, cam damlalık üzerinden bir ila iki 100-300 mikrolitrelik hava aliquots teslim ve fare kurtarmak için izin vermek için kateter çekin, gösterildiği gibi.Sağ akciğer yönetimi için, intratrakeal entübasyon dan sonra, plastik tahta30 derece döndürün ve sağ taraflı distal lobar kanülasyonu için gerekli derinliklere ulaşan, fare orta hattına paralel kateter kılavuzu. Takyofenişaretinin görünümünü onaylayın ve ajan teslimatı için yerçekimi yardımı sağlamak için fareyi eksi 74 derece döndürün. Kateteri sağ mainstem bronşlarının kalkışına karşılık gelen bir pozisyona çekin ve kateterin gövdesinin aşağıya dönük olduğundan emin olun.Sağ akciğere %0,3 Evans mavi boyasının 30 mikrolitresini, ardından 1 ila 2 ila 300 mikrolitre lik hava maddelerini iletin. Ardından kateteri geri çekin ve farenin kurtarılmasına izin verin. Sol akciğer yönetimi için, intratrakeal kanülasyon sonra, plastik tahta eksi 74 derece döndürmek ve yavaşça sol mainstem bronş içine kateter ilerlemek mütevazı basınç hem 90 derece aşağı ve bookend doğru yerleştirerek.Tachypnea işaretini onaylayın ve ajan yönetimi ile yerçekimi yardımı sağlamak için fareyi 86 derece döndürün. Kateteri sol mainstem bronşlarına çekin ve kateterin gövdesini aşağıya bakacak şekilde döndürün. Sol akciğere jel yükleme ucu ile % 0.3 Evans mavi boya 30 mikrolitre teslim, hava bir ila iki 100-300 mikrolitre aliquots takip.Daha sonra, farenin gösterildiği gibi toparlanmasını sağlamak için kateteri geri çekin. HEM intratrakeal hem de simetrik intrabronşiyal uygulama ile FITC-dekstran bilateral doğum sol akciğerde daha fazla göreceli konsantrasyonları ile asimetrik akciğer parenkimal FITC floresan yol açar. Bu, intratrakeal uygulama sonrası deneysel ajanların asimetrik akciğer tesliminin bu ajanların her mainstem bronşlara asimetrik olarak sunumunun bir sonucu olmadığını, ancak eşit mainstem iletiminin akciğer ağırlığı ve kütlesindeki farklılıklarla seyreltildiğini göstermektedir.Doza göre ayarlanmış intrabronşiyal uygulama akciğer parankimal ajan doğumunun simetrisini artırır. Ancak bu düzeltmeye rağmen sağ akciğerin farklı loblarda kalıcı heterojenite gözlenmektedir. İntratrakeal bleomisin indüklenen fibrotik akciğer hasarından 21 gün sonra, inflamasyon ağırlıklı olarak sol akciğerde görülür ve sağ akciğerde daha az yaralanma görülür.Tersine, doza göre ayarlanmış intrabronşiyal bleomisin uygulaması sol akciğerde hafif bir azalma ve sağ akciğerde artmış yaralanma ile sonuçlanır, en büyük yaralanma orta ve üst loblarda belirgindir. Tüm akciğer yönetimi sırasında, kateteri geri çekmek ve kateter yüz aşağı eğimli eğilimindedir unutmayın.

Research

JoVE Journal

Medicine

High-frequency High-resolution Echocardiography: First Evidence on Non-invasive Repeated Measure of Myocardial Strain, Contractility, and Mitral Regurgitation in the Ischemia-reperfused Murine Heart

Yüksek frekanslı Yüksek çözünürlüklü Ekokardiyografi: İskemi-Reperfüze murin Kalp Miyokard Strain, kontraktilite ve Mitral Yetmezliğinde Non-invaziv Tekrarlanan Ölçüm İlk Kanıt

Ischemia-reperfusion (IR) was surgically performed in murine hearts which were then subjected to repeated imaging to monitor temporal changes in ...

Bronchial Thermoplasty:  A Novel Therapeutic Approach to Severe Asthma

Bronş Thermoplasty: Şiddetli Astım Yeni Bir Tedavi Yaklaşımı

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled ...

Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung

Noninvaziv Entübasyon Fare Akciğer Patolojisi ve Fizyolojisi Eğitim için

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular ...

Diagnostic Ultrasound Imaging of Mouse Diaphragm Function

Fare Diyafram Fonksiyonu Diagnostik Ultrason Görüntüleme

Function analysis of rodent respiratory skeletal muscles, particularly the diaphragm, is commonly performed by isolating muscle strips using invasive ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

Biyomedikal Araştırma Sığır Akciğer: Görme Kılavuzlu Bronkoskopi, intrabronşiyal Aşılama ve<em&gt; In Vivo</em&gt; Örnekleme Teknikleri

There is an ongoing search for alternative animal models in research of respiratory medicine. Depending on the goal of the research, large animals as ...

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

Görselleştirme<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Kalp Microlesions ve sonraki Kardiyak Tadilat içinde

During bacteremia Streptococcus pneumoniae can translocate across the vascular endothelium into the myocardium and form discrete bacteria-filled ...

Design, Fabrication, and Administration of the Hand Active Sensation Test (HASTe)

Design, Fabrication, and Administration of the Hand Active Sensation Test HASTe

Tasarım, ve Yönetim El Fabrikasyon Aktif Sensation Testi (Haste)

The concept of personalizing neurologic rehabilitation, based on individual impairments, has experienced a recent surge. In parallel, the number of ...

2-Methacryloyloxyethyl Phosphorylcholine Polymer Treatment of Complete Dentures to Inhibit Denture Plaque Deposition

Tam Protez 2-metakriloiloksietil Fosforilkolin Polimer Tedavi Protez Plak birikmesini engelleyen için

Removable dentures made of poly (methyl methacrylate) (PMMA) are prone to bacterial adherence and dental plaque formation, which is called denture plaque. ...

Quantitative Mapping of Specific Ventilation in the Human Lung using Proton Magnetic Resonance Imaging and Oxygen as a Contrast Agent

Proton manyetik rezonans görüntüleme ve oksijen kontrast ajan olarak kullanarak ınsan akciğerinde spesifik havalandırma niceliksel haritalama

Specific ventilation imaging (SVI) is a functional magnetic resonance imaging technique capable of quantifying specific ventilation &#8213; the ratio of ...