Name: in vivo direct reprogramming of resident glial cells into interneurons by intracerebral injection of viral vectors
Uploaded: 2019-06-17T15:00:00
Duration: 12 min 26 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Direct Reprogramming of Resident Glial Cells into Interneurons by Intracerebral Injection of Viral Vectors at JoVE.com

<p class="jove_content">Marcela Birtele यूरोपीय संघ क्षितिज 2020 कार्यक्रम (H2020-MSCA-ITN-2015) मैरी Sk$odowska-Curie अभिनव प्रशिक्षण नेटवर्क और अनुदान समझौते नंबर 676408 के तहत द्वारा वित्त पोषित किया गया है. डेनिएला Rylander Ottosson स्वीडिश अनुसंधान परिषद (2017-01234) द्वारा वित्त पोषित किया गया है.</p>

<ol>
	<li>Barker, R. A., Parmar, M., Studer, L., Takahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Trials+of+Stem+Cell-Derived+Dopamine+Neurons+for+Parkinson&#39;s+Disease:+Dawn+of+a+New+Era.">Human Trials of Stem Cell-Derived Dopamine Neurons for Parkinson&#39;s Disease: Dawn of a New Era.</a> <em style='font-style: italic'>Cell Stem Cell</em>. <b>21</b> (5), 569-573 (2017).</li><li>Southwell, D. 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<p class="jove_content">लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.</p>

<p class="jove_content">विवो प्रत्यक्ष reprogramming में क्रे-एक्सप्रेसिंग माउस उपभेदों में एएवी FLEX सदिशों का उपयोग कर प्राप्त किया जा सकता है। यह नोट करना महत्वपूर्ण है कि माउस उपभेदों के बीच reprogramming प्रभावकारिता के संबंध में मतभेद देखा गया है. के लिए vivo striatum में reprogramming, NG2-Cre माउस लाइन और अधिक कुशल जब अन्य उपभेदों के साथ तुलना में साबित कर दिया है. एक नया पशु तनाव का उपयोग शुरू करने से पहले, यह समय के साथ क्रे अभिव्यक्ति के बारे में माउस प्रदाता दिशा निर्देशों की जांच करने के लिए महत्वपूर्ण है, जानवरों की उम्र के रूप में अक्सर इस प्रोटीन अभिव्यक्ति की विशिष्टता को प्रभावित करता है. हमारे अध्ययन में, 12 सप्ताह से पुराने जानवरों के लिए vivo reprogramming में इस्तेमाल नहीं किया गया के रूप में वहाँ NG2 glia के अलावा अन्य कोशिकाओं में क्रे अभिव्यक्ति के लिए एक जोखिम था. नियंत्रण जानवरों की निरंतर उपस्थिति और निगरानी केवल Synapsin-FLEX-GFP निर्माण के साथ इंजेक्शन की सलाह दी है. यह GFP-सकारात्मक कोशिकाओं के लिए जानवरों की निगरानी की अनुमति देता है कि अगर कोई reprogramming जीन (ALN) का उपयोग किया जाता है मौजूद नहीं होना चाहिए.</p>
<p class="jove_content">नए reprogrammed न्यूरॉन्स की पहचान करने के लिए, इस प्रोटोकॉल में वर्णित एक के रूप में एक न्यूरॉन विशेष पहचान विधि अत्यंत महत्वपूर्ण है. यह एक उचित पहचान और अंतर्जात आसपास की कोशिकाओं है कि विशेष प्रासंगिकता की है जब एक homotopic क्षेत्र में reprogramming से reprogrammed न्यूरॉन्स के भेद के लिए अनुमति देता है.</p>
<p class="jove_content">वायरल इंजेक्शन के लिए सही संरचना को लक्षित करना भी महत्वपूर्ण है। इसलिए, वायरल इंजेक्शन के लिए stereotaxic सर्जरी महत्वपूर्ण है और सटीकता के साथ संपर्क किया जाना चाहिए, खासकर जब मस्तिष्क के छोटे संरचनाओं को लक्षित.</p>
<p class="jove_content">हम पहले से पता चला है<sup class="xref">11</sup> कि यह एक ही reprogramming कारकों का उपयोग कर इन विट्रो reprogramming प्रयोगों के आधार पर vivo reprogramming में के परिणाम की भविष्यवाणी करने के लिए विश्वसनीय नहीं है. ब्याज के सभी कारकों इसलिए vivo में परीक्षण किया जाना चाहिए. हमारे हाथों में, कई अलग अलग कारक संयोजन न्यूरॉन्स के एक ही उपप्रकार दे (यानी, interneurons<sup class="xref">11</sup> vivo में) तथ्य यह है कि इन जीन अन्य न्यूरॉन्स के विकास में फंसाया गया है के बावजूद.</p>
<p class="jove_content">reprogrammed न्यूरॉन्स के लिए पूरे सेल पैच दबाना एक नाजुक तकनीक है और ऊतक प्रसंस्करण एक अच्छा परिणाम के लिए महत्वपूर्ण है. बर्फ ठंडा Krebs समाधान के साथ भ्रम ऊतक की गुणवत्ता में सुधार. इसके अलावा, समझौता न्यूरॉन्स ध्यान से इलाज किया जाना चाहिए. यहां तक कि अगर परिपक्वता और reprogrammed न्यूरॉन्स के phenotypic पहचान कुछ हद तक पूरे सेल पैच दबाना का उपयोग कर मूल्यांकन किया जा सकता है, इन कोशिकाओं को पूरी तरह से उनके अंतर्जात समकक्षों के लिए तुलनीय नहीं हैं. विश्लेषण के अतिरिक्त प्रकार, जैसे जीनोम अनुक्रमण (जैसे, आरएनए अनुक्रमण) का उपयोग पुनः प्रोग्राम किए गए सेल पहचान की पुष्टि करने के लिए किया जाना चाहिए।</p>
<p class="jove_content">यहाँ वर्णित तकनीक भविष्य के उपचार जहां न्यूरॉन प्रतिस्थापन मस्तिष्क में की जरूरत है के विकास के लिए विचार किया जा सकता है. हालांकि विवो reprogramming में अपनी प्रारंभिक अवस्था में अब भी है और मनुष्यों में अनुवाद अभी तक पूर्वानुमान नहीं है, इस तकनीक मस्तिष्क में exogenous जीन समारोह का आकलन और विवो में अध्ययन कोशिका परिपक्वता के लिए एक विधि प्रदान कर सकता है.</p>

<p class="jove_content">इस विधि के समग्र लक्ष्य कुशलता से इस तरह के parvalbumin-expressing interneurons के रूप में कार्यात्मक और उपप्रकार-विशिष्ट न्यूरॉन्स में विवो में मस्तिष्क निवासी ग्लिया परिवर्तित करने के लिए है। यह एक exogenous सेल स्रोत के लिए आवश्यकता के बिना मस्तिष्क रोगों के लिए एक वैकल्पिक सेल रिप्लेसमेंट थेरेपी के विकास की दिशा में एक कदम आगे प्रदान करता है. यह भी सीटू में सेल भाग्य स्विच का अध्ययन करने के लिए एक उपकरण बनाता है।</p>
<p class="jove_content">मस्तिष्क नए न्यूरॉन्स पैदा करने के लिए केवल एक सीमित क्षमता है. इसलिए, स्नायविक रोगों में, मस्तिष्क की मरम्मत के लिए exogenous सेल स्रोतों की जरूरत है. इसके लिए कोशिकाओं के विभिन्न स्रोतों पर पिछले कुछ वर्षों में गहन अनुसंधान किया गया है, जिसमें प्राथमिक ऊतक, स्टेम सेल व्युत्पन्न कोशिकाओं और पुनः क्रमादेशित कोशिकाओं<sup class="xref">1</sup><sup>,</sup><sup class="xref">2</sup><sup>,</sup><sup class="xref">3</sup>से कोशिकाओं को शामिल किया गया है। न्यूरॉन्स में निवासी मस्तिष्क कोशिकाओं के प्रत्यक्ष reprogramming एक हाल ही में दृष्टिकोण है कि मस्तिष्क की मरम्मत के लिए एक आकर्षक तरीका प्रदान कर सकता है के रूप में यह मस्तिष्क के अंदर उपन्यास न्यूरॉन्स पैदा करने के लिए रोगी की अपनी कोशिकाओं का उपयोग करता है. तारीख करने के लिए, कई रिपोर्टों जैसे मस्तिष्क 4<sup class="xref"></sup><sup>,</sup><sup class="xref">5</sup><sup>,</sup>6<sup>,</sup><sup class="xref"></sup><sup class="xref">7</sup><sup class="xref">8</sup><sup>,</sup><sup class="xref">9</sup> में वायरल वेक्टर वितरण के माध्यम से विवो reprogramming में दिखाया गया है कॉर्टेक्स , रीढ़ की हड्डी , स्ट्रेटम और मिडब्रेन<sup class="xref">5</sup><sup>,</sup><sup class="xref">10</sup><sup>,</sup><sup class="xref">11</sup>, साथ ही अक्षुण्ण और घावदार मस्तिष्क<sup class="xref">5</sup>,<sup class="xref">8</sup><sup>,</sup><sup></sup><sup class="xref">11</sup><sup>,</sup><sup class="xref">12</sup>. दोनों निरोधात्मक और उत्तेजक न्यूरॉन्स प्राप्त किया गया है<sup class="xref">4</sup><sup>,</sup><sup class="xref">8</sup>, लेकिन सटीक phenotype या इन कोशिकाओं की कार्यक्षमता अभी तक विस्तार से विश्लेषण नहीं किया गया है.</p>
<p class="jove_content">इस प्रोटोकॉल में, हम एक और अधिक कुशल reprogramming और कोशिका विशेष पहचान vivo reprogrammed न्यूरॉन्स में का वर्णन. हम कार्यक्षमता और इम्यूनोहिस्टोकेमिकल लक्षण के आधार पर न्यूरोनल परिपक्वता और phenotype लक्षण के कार्यात्मक मूल्यांकन के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं।</p>
<p class="jove_content">हम एक Cre-inducible AAV वेक्टर और एक GFP रिपोर्टर का इस्तेमाल किया vivo reprogrammed न्यूरॉन्स की पहचान. वायरल सदिशों के इस चुनाव में मस्तिष्क की विभाजन और गैर-विभाजित कोशिकाओं दोनों को संक्रमित करने का लाभ<sup class="xref"></sup>होता है, जिससे लक्षित कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि होती है, जो रेट्रोवायरस 7,<sup></sup><sup class="xref">8</sup>के उपयोग के विकल्प के रूप में होती है। एक न्यूरॉन विशेष synapsin संचालित FLEX रिपोर्टर (GFP), हमें विशेष रूप से नए उत्पन्न न्यूरॉन्स का पता लगाने के लिए सक्षम. पिछले अध्ययनों में विवो reprogramming में के लिए subtype-विशिष्ट प्रमोटरों का इस्तेमाल किया है<sup class="xref">7</sup><sup>,</sup><sup class="xref">9</sup>, कि भी विशिष्ट सेल प्रकार में जीन और पत्रकारों reprogramming की अभिव्यक्ति की अनुमति. हालांकि, उस विधि रिपोर्टर और न्यूरॉन मार्करों के सह-अभिव्यक्ति के पोस्टमार्टम विश्लेषण द्वारा reprogrammed न्यूरॉन्स के आगे की पहचान की आवश्यकता है. एक न्यूरॉन विशेष संवाददाता का उपयोग, इस तरह के एक यहाँ वर्णित के रूप में, एक प्रत्यक्ष पहचान के लिए अनुमति देता है. यह एक सफल रूपांतरण का एक सीधा सबूत प्रदान करता है और पैच-क्लैम्प इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के लिए आवश्यक है कि एक जीवित सेल पहचान की अनुमति देता है.</p>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td><strong>REAGENTS FOR AAV5 CLONING AND VIRAL VECTOR PREPARATION</strong></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAAV-CA-FLEX</td>
			<td>AddGene</td>
			<td>38042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascl1</td>
			<td>AddGene</td>
			<td>67291</td>
			<td>NM_008553.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lmx1a</td>
			<td>AddGene</td>
			<td>33013</td>
			<td>NM_0033652.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nurr1</td>
			<td>AddGene</td>
			<td>35000</td>
			<td>NM_013613.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFP-syn</td>
			<td>AddGene</td>
			<td>30456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LoxP (FLEX) sequence 1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>GATCTccataacttcgtataaagtatcctatac<br/>gaagttatatcaaaataggaagaccaatgcttc<br/>accatcgacccgaattgccaagcatcaccatcg<br/>acccataacttcgtataatgtatgctatacgaa<br/>gttatactagtcccgggaaggcgaagacgcgga<br/>agaggctctaga</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LoxP (FLEX) sequences 2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>tactagtataacttcgtataggatactttatac<br/>gaagttatcattgggattcttcctattttgatc<br/>caagcatcaccatcgaccctctagtccacatct<br/>caccatcgacccataacttcgtatagcatacat<br/>tatacgaagttatgtccctcgaagaggttcgaa<br/>ttcgtttaaacGGTACCCTCGAC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pDP5</td>
			<td>Plasmid Factory</td>
			<td>PF435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pDP6</td>
			<td>Plasmid Factory</td>
			<td>PF436</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal bovine serum)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10500064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium)+ Glutamax</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>61965026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS (Dulbecco&#39;s Phosphate Buffer Saline)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293 cells</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>85120602-1VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flasks</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>10078780</td>
			<td>175 cm2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris H-CL</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>10812846001</td>
			<td>
			<div>
			<div>For TE buffer use 10 mM, pH 8.0; for lysis buffer use 50mM, pH 8.5; for IE buffer use 20 mM, pH 8.0; for elution buffer use 20 mM, pH 8.0</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>EDTA: Invitrogen</td>
			<td>EDTA: AM9260G</td>
			<td>
			<div>
			<div>For TE buffer use 1 mM EDTA</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>
			<div>
			<div>see Ultrapure water system</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>C5080</td>
			<td>2.5 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#180;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>
			<div>
			<div>FOR HBS use 140 mM; for Lysis Buffer use 150 mM; for IE buffer use 15 mM; for elution buffer use 250 mM</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266-100G</td>
			<td>
			<div>
			<div>For lysis Buffer: 1 mM</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge sealing tubes</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Quick-Seal&#174;&#160;Polypropylene Tube</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiPrep&#8482;&#160;Density Gradient Medium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D1556-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-mL syringe-18G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory glass bottles</td>
			<td>VWR</td>
			<td>?</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anion exchange filter</td>
			<td>PALL laboratory</td>
			<td>MSTG25Q6</td>
			<td>
			<div>
			<div>Acrodisc unit with Mustang Q membrane</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal filter unit</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Z740210-24EA</td>
			<td>
			<div>
			<div>Amicon Ultra-4 device</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotoxin-Free Plasmid DNA Isolation Kits</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A33073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2PO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H7523</td>
			<td>15 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tube</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Corning 352196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tube</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Corning 352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Vials</td>
			<td>Novatech</td>
			<td>30209-1232</td>
			<td>
			<div>
			<div>CGGCCTCAGFGAGCGA</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forward Primer for Inverted Terminal Repeat (ITR) sequence</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>
			<div>
			<div>GGAACCCCTAGTGATGGAGTT</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reverse Primer for Inverted Terminal Repeat (ITR) sequence</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>
			<div>
			<div>CACTCCCTCTCTGCGCGCTCG</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#180;FAM / 3&#180;BHQ1 probe</td>
			<td>Jena Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 mm filter</td>
			<td>Merck</td>
			<td>SLGV004SL</td>
			<td>Millex-GV filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td><strong>EQUIPMENT AAV5 VIRAL VECTOR PREPARATION</strong></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer -20 &#176;C</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer -80 &#176;C</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fridge +4 &#176;C</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAV viral room</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure Water system</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Milli-Q&#174; IQ 7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>444-0004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Beckman Optima LE-80K Ultracentrifuge</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave</td>
			<td>Tuttnauer</td>
			<td>2540 EL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polymerase Chain Reaction (PCR)</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>C1000 Touch Thermal Cycler</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantitative PCR (qPCR)</td>
			<td>Roche</td>
			<td>LightCycler&#174; 480 System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Sorvall ST16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Bath</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>TSGP02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><strong>ANIMAL MODEL</strong></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NG2-Cre mice</td>
			<td>Jackson</td>
			<td>NG2-CrexB6129, Stock #008533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><strong>REAGENTS FOR INJECTION OF REPROGRAMMING FACTORS INTO THE BRAIN</strong></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Apoteket AB</td>
			<td></td>
			<td>70%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Solveco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolfurane</td>
			<td>Apoteket AB</td>
			<td></td>
			<td>
			<div>
			<div>Dilute to 1% solution with warm water.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon</td>
			<td>Viroderm</td>
			<td>7511&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital</td>
			<td>Apoteket AB</td>
			<td>P0500000</td>
			<td>
			<div>
			<div>i.p. for terminal procedure at the dose of 60 mg/ml.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S0389-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blu</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retrobeads</td>
			<td>Lumafluor</td>
			<td>R170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Apoteket AB</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><strong>EQUIPMENT FOR INJECTION OF REPROGRAMMING FACTORS INTO THE BRAIN</strong></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>
			<div>
			<div>From RSG Solingen.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>233-1552</td>
			<td>From Biochem.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>232-0007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>VWR</td>
			<td>232-0120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel holder</td>
			<td>VWR</td>
			<td>RSGA106.621</td>
			<td>Number 20.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>RSGA106.200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic frame</td>
			<td>Stoelting Europe</td>
			<td>51500D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse ear bars</td>
			<td>Stoelting Europe</td>
			<td>51648</td>
			<td>5 ul</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe with Removable needle</td>
			<td>Hamilton Company</td>
			<td>65</td>
			<td>
			<div>
			<div>0,75 inner diameter and 1.5 outer diameter.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capilaries</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary puller</td>
			<td>Sutter company</td>
			<td>P-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental drill</td>
			<td>Agnthos AB</td>
			<td>1464</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaver</td>
			<td>Agnthos AB</td>
			<td>GT420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane Chamber and pump</td>
			<td>Agnthos AB</td>
			<td>8323101</td>
			<td>2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Z118400-30EA</td>
			<td>25G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Z192414&#160;Aldrich</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse and neonatal rat adaptor for stereotaxic fram</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Braintree scientific, inc</td>
			<td>53800M</td>
			<td>
			<div>
			<div>From Covidien 2187.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton gauze</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-037-902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber tube</td>
			<td>Elfa Distrelec</td>
			<td>HFT-A-9.5/4.8 PO-X BK 150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>18-366-473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><strong>REAGENTS FOR WHOLE-CELL PATCH CLAMP RECORDINGS</strong></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>-H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl<sub>2</sub>-6 H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl<sub>2</sub>-6 H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4-7 H<sub>2</sub>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO<sub>3</sub></td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>
			<div>
			<div>see Ultrapure Water system</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure Water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepare 1 or 2M.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5958-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K-D-gluconate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G4500&#160;Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH-EGTA (Etilene glycol-bis-N-tetracetic acid)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E3889&#160;Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH- Hepes acid (N-2-hydroxyethylpiperazine-N&#8217;-2-ethanesulfonic acid)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H7523</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mg2ATP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na3GTP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8877</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biocytin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B4261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrotoxin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>P1675&#160;Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CNQX</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C239&#160;Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><strong>EQUIPMENT FOR WHOLE-CELL PATCH CLAMP RECORDINGS</strong></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass pipette</td>
			<td>Sutter Company</td>
			<td>B150-86-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary puller</td>
			<td>Sutter company</td>
			<td>P-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica VT1000 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WaterBath</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>TSGP02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clampfit software</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiclamp software</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><strong>REAGENTS FOR IMMUNOHISTOCHEMISTRY</strong></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>
			<div>
			<div>Use at a concentration of 4%.&#160;CAUTION:&#160;PFA is a potent fixative. Avoid ingestion and contact with skin.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1040051000</td>
			<td>
			<div>
			<div>Use at a concentration of 0.1%.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10254640</td>
			<td>
			<div>
			<div>Donkey.Use at a concentration of 1 : 400.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serum</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>S30-100ML</td>
			<td>
			<div>
			<div>Reconstitute the powder in Milli-Q water to 1 mg/mL. Aliquot and store at -20&#176;C,&#160;light sensitive. Use at a concentration of 1 : 500.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#8242;,6-Diamidino-2&#8242;-phenylindole dihydrochloride (DAPI)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td>
			<div>
			<div>1: 600 in KPBS-T.</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptavidin- Cy3</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>434315</td>
			<td>1:5000, rabbit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GAD65/67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td></td>
			<td>1:2000, mouse.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PV</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3088</td>
			<td>1:200, goat.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Chat</td>
			<td>Merk</td>
			<td>AB143</td>
			<td>1:5000, rabbit.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NPY</td>
			<td>Immunostar</td>
			<td>22940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub></td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub></td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>NIST200B</td>
			<td>1:1000, chicken.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab13970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>10981</td>
			<td>
			<div>
			<div>Polyvinyl alcohol mounting medium with DABCO&#174;, antifading</div>
			</div>
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT</td>
			<td>Agar Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G9012-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-freeze solution</td>
			<td>Tissue Pro Technology</td>
			<td>AFS05-1000N, 1000 mL/ea.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><strong>EQUIPMENT FOR IMMUNOHISTOCHEMISTRY</strong></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted fluorescence microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI6000 B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP8 laser scanning confocal microscope.</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SM2010R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo direct reprogramming of resident glial cells into interneurons by intracerebral injection of viral vectors

<p class="jove_content">विवो में कार्यात्मक और उपप्रकार-विशिष्ट न्यूरॉन्स में मस्तिष्क में निवासी glia परिवर्तित करने के लिए वैकल्पिक सेल प्रतिस्थापन उपचार के विकास की दिशा में एक कदम आगे प्रदान करता है, जबकि भी उपकरण बनाने के लिए situ में सेल भाग्य का अध्ययन. तारीख करने के लिए, यह vivo reprogramming में के माध्यम से न्यूरॉन्स प्राप्त करने के लिए संभव हो गया है, लेकिन इन न्यूरॉन्स के सटीक phenotype या कैसे वे परिपक्व विस्तार से विश्लेषण नहीं किया गया है. इस प्रोटोकॉल में, हम एक AAV आधारित वायरल वेक्टर प्रणाली का उपयोग कर, में vivo reprogrammed न्यूरॉन्स की एक अधिक कुशल रूपांतरण और सेल-विशिष्ट पहचान का वर्णन. हम भी reprogrammed कोशिकाओं के कार्यात्मक मूल्यांकन के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं' न्यूरॉन परिपक्वता. फ्लिप-एक्साइस (फ्लेक्स) वैक्टर इंजेक्शन लगाकर, मस्तिष्क में विशिष्ट सेल प्रकारों के लिए reprogramming और synapsin-चालित रिपोर्टर जीन युक्त है कि सेल reprogramming के लिए लक्ष्य के रूप में सेवा. इस तकनीक को नए reprogrammed न्यूरॉन्स की आसान पहचान के लिए अनुमति देता है. परिणाम बताते हैं कि प्राप्त reprogrammed न्यूरॉन्स कार्यात्मक समय के साथ परिपक्व, synaptic संपर्क प्राप्त करते हैं और interneurons के विभिन्न प्रकार के electrophysiological गुण दिखा. प्रतिलेखन कारकों Ascl1, Lmx1a और Nurr1 का उपयोग करना, reprogrammed कोशिकाओं के बहुमत तेजी से spiking, parvalbumin युक्त interneurons के गुण है.</p>

<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1">AAV वैक्टर के इंजेक्शन सफलतापूर्वक NG2-Cre माउस striatum में न्यूरॉन्स में निवासी NG2 glia कोशिकाओं reprogram करने के लिए प्रयोग किया जाता है (<strong class="xfig">चित्र 1A</strong>) . विशेष रूप से NG2 glia को लक्षित करने के लिए, REprogramming/reporter जीन के साथ FLEX वैक्टर, एक antisense दिशा में डाला जाता है और antiparallel के दो जोड़े द्वारा flanked, विषमप्ररूपिक loxP साइटों (<strong class="xfig">चित्र 1B</strong>) . तीन reprogramming जीन में से प्रत्येक (Ascl1, Lmx1a और Nurr1) अलग-अलग वैक्टर पर सर्वव्यापी cba प्रमोटर के नियंत्रण में रखा गया है. GFP अभिव्यक्ति एक क्रे-एक्सप्रेशन सेल से शुरू होने वाले reprogrammed न्यूरॉन्स के लिए प्रतिबंधित है बनाने के लिए, GFP न्यूरॉन विशेष synapsin प्रमोटर के नियंत्रण में रखा गया है, (यह भी एक FLEX वेक्टर में).</p>
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1">reprogramming और रिपोर्टर constructs के संयोजन का उपयोग माउस striatum में GFP सकारात्मक न्यूरॉन्स की पीढ़ी के लिए अनुमति देता है (<strong class="xfig">चित्र 1C</strong><strong>, सी ').</strong> पुनः प्रोग्रामजीन की उपस्थिति के बिना रिपोर्टर निर्माण का उपयोग जीएफपी-पॉजिटिव न्यूरॉन्स को प्राप्त नहीं करता है (<strong class="xfig">चित्र 1D</strong>)।</p>
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1">बायोसाइटिन से भरे हुए पुन: प्रोग्राम किए गए न्यूरॉन्स पोस्ट-मॉर्टम इम्यूनो-स्टेनिंग के बाद दिखाई देते हैं (<strong class="xfig">चित्र 2क</strong>)। यदि रूपांतरण सफल होता है, वहाँ व्यापक न्यूरोनल आकारिकी होना चाहिए. पुनः प्रोग्राम किए गए न्यूरॉन्स की इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल रिकॉर्डिंग में स्फूर्तिपूर्ण क्रियाकलाप उपायों के साथ पद-प्रयत्नात्मक क्रियात्मक संबंधों की उपस्थिति दिखाई देती है (<strong class="xfig">चित्र 2 ख</strong>,<strong>ब्</strong>) यह या तो ionotropic GABAergic या glutamatergic अवरोधक के साथ अवरुद्ध किया जा सकता है (Picrotoxin या CNQX), reprogrammed न्यूरॉन्स के लिए दोनों उत्तेजक और निरोधात्मक synaptic इनपुट का सुझाव. समय के बाद वायरल इंजेक्शन (<strong class="xfig">चित्र 2</strong>डी) के साथ सहज गतिविधि की घटना बढ़ जाती है , जो एक क्रमिक परिपक्वता का संकेत देती है।</p>
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1">वर्तमान प्रेरित कार्रवाई क्षमता कार्यात्मक न्यूरॉन्स में मौजूद हैं. क्रिया संभाव्यता रूपांतरण के बाद समय के साथ संख्या में वृद्धि होती है (<strong class="xfig">चित्र 2ई</strong>)। यह आगे न्यूरॉन समारोह में परिपक्वता इंगित करता है. अपरिपक्व तंत्रिकामें, धारा या तो कोई नहीं या बहुत कम क्रिया संभाव्यता को प्रेरित करेगी (<strong class="xfig">चित्र 2 एफ</strong>)।</p>
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1">एक न्यूरॉन की फायरिंग पैटर्न कोशिका प्रकार विशिष्ट है क्योंकि यह कोशिकाओं की आकृति विज्ञान और चैनल अभिव्यक्ति<sup class="xref">15</sup>जैसे कारकों पर निर्भर करता है। इन विवो reprogrammed न्यूरॉन्स में दर्ज पैटर्न समूहों में प्रतिष्ठित किया जा सकता है और अंतर्जात न्यूरॉन उपप्रकारों की तुलना में, उदाहरण के लिए तेजी से spiking interneurons (सेल प्रकार बी, <strong class="xfig">चित्रा 3 बी</strong>) या अन्य सेल प्रकार ( चित्र ासाकीर्तक,<strong class="xfig"></strong><strong>सी,डी </strong>). प्रेक्षित इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल अंतरों की पुष्टि विशिष्ट उपप्रकार मार्करों और जीएफपी के साथ सह-अभिव्यक्ति की उपस्थिति से की जा सकती है (<strong class="xfig">चित्र 3ई</strong><strong>-एच</strong>)। कुल मिलाकर, इस डेटा इंगित करता है कि striatum में मौजूद reprogrammed न्यूरॉन्स interneurons के विभिन्न प्रकार के गुण है, जैसे Parvalbumin-, ChAt- और NPY- interneurons व्यक्त, साथ ही striatal मध्यम spiny न्यूरॉन पहचान (DARPP32 +) ( <strong class="xfig">चित्र 3E</strong> <strong>-H</strong>).</p>
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1"><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59465/59465fig1.jpg"><br><strong>चित्र 1: न्यूरॉन्स में निवासी NG2 glia के vivo reprogramming में.</strong> (क) एएवी वायरस का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व, शितल NG2 ग्लिया के विवो रीप्रोग्रामन में मध्यस्थता किया गया.<strong></strong> (बी) एएवी5 फ्लेक्स का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व विवो रीप्रोग्रामिंग में प्रयोग किया जाता है, जिसमें जीन अभिव्यक्ति को लक्षित कोशिकाओं में क्रे अभिव्यक्ति द्वारा विनियमित किया जाता है।<strong></strong> (<strong>सी</strong> और <strong>सी)</strong>विवो reprogrammed न्यूरॉन्स में, Syn-GFP से जिसके परिणामस्वरूप + ALN इंजेक्शन Striatum में. (घ) जब वायरल कॉकटेल में कोई पुनर्प्रोग्रामन कारक नहीं जोड़े जाते हैं, तो पुनः क्रमादेशित न्यूरॉन्स की अनुपस्थिति, और केवल रिपोर्टर निर्माण विवो में इंजेक्ट किया जाता है।<strong></strong> स्केल बार - 100 मिमी (सी), 25 मिमी (सी'), 25 मिमी (डी)। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59465/59465fig1large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a></p>
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1"><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59465/59465fig2.jpg"><br><strong>चित्रा 2: विवो reprogrammed न्यूरॉन्स में कार्यात्मक हैं और समय</strong> के साथ परिपक्वता दिखा. <strong>(ए</strong>) बायोसाइटिन से भरे पुनर्प्रोग्रामित न्यूरॉन, डेनड्रिटिक रीढ़ सहित परिपक्व न्यूरोनल आकृति विज्ञान को दर्शाता है। ट्रेस से पता चलता है (<strong>बी</strong>) निरोधात्मक (GABAergic) गतिविधि है कि picrotoxin के साथ अवरुद्ध है, एक गाबा<sub>एक</sub> रिसेप्टर विरोधी और (<strong>सी</strong>) उत्तेजक गतिविधि है कि CNQX के साथ अवरुद्ध है, एक AMPA रिसेप्टर विरोधी. (<strong></strong>घ) समय के साथ-साथ पोस्टिनैप्टिक गतिविधि वाले न्यूरॉन्स की संख्या बढ़ जाती है। (<strong>ई</strong>) पैचकिए हुए न्यूरॉन्स में पहले से ही 5 सप्ताह के बाद इंजेक्शन (w.p.i.) पर दोहराए जाने वाली फायरिंग दिखाते हैं और यह दिखाना जारी रखते हैं कि 8 और 12 w.p.i. (<strong>F</strong>) वर्तमान-प्रेरित कार्रवाई क्षमता और किसी अपरिपक्व न्यूरॉन की पोस्टीनैप्टिक गतिविधि, कुछ synaptic दिखा रहा है घटनाओं और कुछ कार्रवाई क्षमता बी और डी स्केल बार की तुलना में - 25 मिमी <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59465/59465fig2large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a></p>
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1"><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59465/59465fig3v2.jpg"><br><strong>चित्रा 3: विवो reprogrammed न्यूरॉन्स में इम्यूनोहिस्टोकेमिकल और striatal interneurons के इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल गुण दिखाते हैं।</strong> <strong>(ए-डी</strong>) विवो reprogrammed न्यूरॉन्स में की फायरिंग पैटर्न अलग प्रकार के हो सकते हैं: (<strong>एक</strong>) प्रकार एक अंतर्जात मध्यम spiny न्यूरॉन के समान है (DARPP32+); (<strong>बी</strong>) तेजी से spiking के समान (पीवी +) interneurons; (<strong>सी</strong>) प्रमुख साग (एनपीवाई +) के साथ कम थ्रेसहोल्ड spiking न्यूरॉन्स के समान; (<strong>डी</strong>) न्यूरॉन्स बड़े के साथ फायरिंग-hyperpolarization (Chat+). (<strong>ई-एच</strong>) GFP के सह-स्थानीयकरण और interneuron मार्करों पीवी (<strong>ई</strong>), ChAT (<strong>एफ</strong>), NPY (<strong>जी</strong>), और प्रक्षेपण न्यूरॉन मार्कर DARPP32 (<strong>एच</strong>) दिखा confocal छवियों . सभी पैमाने पर सलाखों - 50 मिमी. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59465/59465fig3v2large.jpg" target="_blank">कृपया यहाँ क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए.</a></p>

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Direct Reprogramming of Resident Glial Cells into Interneurons by Intracerebral Injection of Viral Vectors at JoVE.com

In Vivo Direct Reprogramming of Resident Glial Cells into Interneurons by Intracerebral Injection of Viral Vectors

वायरल वेक्टर्स के इंट्रासेरेब्रल इंजेक्शन द्वारा इंटरन्यूरॉन्स में निवासी ग्लिल सेल के विवो डायरेक्ट रीप्रोग्रामिंग में

<p class="jove_content">इस प्रोटोकॉल सीधे vivo में reprogrammed interneurons पैदा करना है, मस्तिष्क में एक AAV आधारित वायरल प्रणाली और एक FLEX synapsin संचालित GFP रिपोर्टर, जो सेल पहचान और विवो में आगे विश्लेषण के लिए अनुमति देता है का उपयोग कर.</p>

Converting resident glia in the brain into functional and subtype-specific neurons in vivo provides a step forward towards the development of alternative ...

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Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice Retinal Pigment Epithelium

चूहे रेटिना वर्णक उपकला में जीन थेरेपी के लिए वायरल वाहक के Limbal दृष्टिकोण subretinal इंजेक्शन

The eye is a small and enclosed organ which makes it an ideal target for gene therapy. Recently various strategies have been applied to gene therapy in ...

Intracerebroventricular and Intravascular Injection of Viral Particles and Fluorescent Microbeads into the Neonatal Brain

नवजात मस्तिष्क में वायरल कणों और फ्लोरोसेंट microbeads की Intracerebroventricular और Intravascular इंजेक्शन

In the study on the pathogenesis of viral encephalitis, the infection method is critical. The first of the two main infectious routes to the brain is the ...

Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents

कुतर के Cisterna Magna में प्रवेशनी आरोपण

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

प्रो-भड़काऊ साइटोकिन्स के इंट्रासैरेब्रल इंजेक्शन द्वारा प्रेरित व्यापक सेरेब्रल कॉर्टिकल डेमिलिनेशन का चूहा मॉडल

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...