Name: data collection on marine litter ingestion in sea turtles and thresholds for good environmental status
Uploaded: 2019-05-18T14:00:00
Duration: 13 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Data Collection on Marine Litter Ingestion in Sea Turtles and Thresholds for Good Environmental Status at JoVE.com

作者感谢瓦伦西亚的法国救援中心 (Jean-Batiste Senegas)、搁浅网络 (Jacques Sacchi) 和兽医实验室 (Joanne Belfort) 以及 Jessiaca Martin 和 Marie Sabatte、Cetacean 和海龟搁浅网络社区, 包括卡瓦尼尔斯研究所 (巴伦西亚大学) 海洋动物学股和瓦伦西亚纳将军生物多样性处、葡萄牙亚速尔科学和技术区域基金 (玛丽亚·维尔)、意大利救援组织中心 (Stazione zoologica "Anton Dohrn" 那不勒斯和 Sardinian CREs) 兽医实验室 (IZSLT M. Aleandri Roma;IZSAM G. Caporale Teramo;IZSS G. Pegreffi Otistano;。IZS Cortam 巴勒莫), INDICIT 咨询委员会和采购干事的成员, 以及参与国的环境部和区域政府的支持。
两位匿名审阅者的建议和意见。
本议定书是由 INDICIT 财团在欧洲 DG-ENV 项目 GA 第 11.066(066--748064/SUB-SUB-ENV) 的框架内执行的。C2。

建议收集一系列 "基本" 和 "可选" 参数。基本参数对应于完成标准 D10C3 的最小参数, 而可选参数允许获得更多关于海龟行为生物学的知识。这里提供了一份观察数据表和一份在实地取样和在实验室进行垃圾分析所需的材料清单, 以便按照标准化表格进行数据记录和统计分析。海洋垃圾子类别是根据物品的形状和类型选择的。海龟的食物和任何天然的非食物物品 (石头、木头、浮石等) 都需要考虑阈值和动物的饮食。该议定书的所有实验活动都是根据有关国家的法律和国际规则对死海龟进行的。所有的尸检都必须在授权的中心进行。
1. 从尸体中取样: 填写观察表 (补充文件1和2附录 1)
<ol><li>填写联系方式, 包括观察员 (数据收集器) 的姓名、联系人 (电话、邮件) 和机构。</li>
	<li>确定物种如下: Cc (caretta 管线, linnaeus 1758);Dc (dermochelys coriacea, vandelli 1761);Cm (chchonia mydas, linnaeus 1758);埃伊(Eretmochelys,linnaeus 1766);罗(Lepepocochelys 橄榄色, Eschscholtz 1829);Lk(Lepepochelys Kempii, garman 1880年);Nd(纳托尔·德普雷苏, 加曼 1880年)。</li>
	<li>标签: 如果触发器上已存在标记, 请指定数字 (n°。说明电子芯片的存在和数量。否则, 请注意编号。</li>
	<li>指定动物识别码。例如: "两个字母为国家" _ "两个字母的位置 (例如, 区域或机构)" _ "YY" _ "mm" _ "dd" _ "芯片号码"。</li>
	<li>请注意发现的日期 (ymm/dd)。</li>
	<li>指定发现的位置, 即恢复区域或以十进制为单位的坐标。</li>
	<li>报告标本的身体状况水平: 1 (活), 2 (最近新鲜死亡), 3 (部分分解的内脏器官仍然处于良好状态), 4 (先进的分解皮肤鳞片上升或丢失),5 (骨骼或身体的一部分的木乃伊部分丢失)。请参见图 1。</li>
	<li>发现情况: 注意四类情况:绞线(在海滩或海岸线上发现的动物);By-catch/Fisheries/ficy(渔民积极捕获的动物, 例如, 摄入钩子、被困在渔网中、被渔民带回等);在海上发现(在海面上发现的动物);死在康复中心(动物活着到达, 但在恢复过程中死亡)。</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59466/59466fig1.jpg"> 图 1: 标本的身体状况水平或分解状态。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59466/59466fig1large.jpg" target="_blank">请点击这里查看此图的较大版本.</a>
2. 海龟尸检: 生物鉴别测量和胃肠道内容物的提取
<ol><li>安排将动物运送到授权的尸检中心。如果是极其腐烂的动物, 在被授权的中心处置之前, 要评估消化道的完整性。如果恢复后无法立即完成尸检, 请将尸体冻结在-20°c。</li>
	<li>在尸检操作之前, 请在恢复文件的特定部分记录生物特征测量。弯曲的甲壳长度, 缺口到尖端 23, 是强制性的;其他措施是可选的 (例如, 弯曲的甲壳宽度、重量)。</li>
	<li>对动物身体进行外部检查, 并在尸检档案的特定部分报告信息。还要检查口腔是否存在异物。</li>
	<li>通过沿边缘进行一个由黄线突出显示的切口, 将梯形从甲壳中分离并取出 (图 2a)。</li>
	<li>使用短刀片或水平倾斜切割, 避免损坏内部部件 (图 2 b-c)。当胸膜与甲壳分离时, 必须切断胸椎和骨盆腰带的韧带连接, 以便于获得和处理。</li>
	<li>清除胃肠道 (GI), 去除胸肌和海龟的心脏 (图 2d)。</li>
	<li>(可选)通过评估胸肌萎缩 (非中重) 和关节腔和线圈膜 (基本正常-低-无) 脂肪厚度, 定性地评估营养状态。</li>
	<li>提取 GI 并将其放置在检查台上。对两个运算符执行此操作, 以使操作更轻松。当一个操作员保持尸体放置在一边, 另一个分离的韧带从不同的器官和膜从甲壳使用小刀片或剪刀, 并从动物中删除 GI (图 2f)。</li>
	<li>使用塑料夹具隔离食道、胃和肠。将这些放在靠近口腔、食管瓣膜、挂钩和阴囊的食道上, 尽可能靠近黄色箭头所指示的肛门口 (图 2f)。</li>
	<li>尽可能记录动物的性别。</li>
	<li>通过放置第二个夹子 (对应于切割点), 明确分离食道、胃和肠, 以避免内容物溢出。</li>
	<li>使用剪刀 (或可能的手指) 纵向打开 GI 部分, 然后通过用自来水清洁 GI 壁, 将包含的材料直接放入1毫米网筛中。</li>
	<li>注意 GI 中的每个异常 (如溃疡、穿孔、粘连、炎症)。</li>
	<li>检查筛子中的内容物, 最终检测到必须单独取出和处理的任何焦油、油或易碎材料。</li>
	<li>通过筛子冲洗内容物, 以去除液体部分、粘液和无法识别的消化物质。</li>
	<li>分别对每个 GI 部分重复该序列。</li>
	<li>冷冻筛子收集的所有材料, 或将其存放在含有70% 酒精溶液的罐子中。 注: 更多细节关于海龟的解剖学也参见 Wyneken (2001)24。</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59466/59466fig2.jpg"> 图 2: 海龟尸检的顺序.(a) 对死海龟的全景。黄线表示切割的方式, 以便将平台与海龟的其他部分分开。(b, c)水平切割, 以防止影响内部器官。(d) 打开的海龟的中央视野。(e) 提取胃肠道。(f) 整个 gi 的视图, 黄色箭头表示必须在哪里安装夹具, 以便将三个不同的 gi 部分分开。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59466/59466fig2large.jpg" target="_blank">请点击这里查看此图的较大版本.</a>
3. 数据收集和分析: 海洋垃圾分类
<ol><li>标记示例代码和相应的 GI 部分。</li>
	<li>清空1毫米网状筛子上的罐子, 收集所有的材料。</li>
	<li>用水清洗收集到的材料, 以消除酒精和清洁垃圾。</li>
	<li>将海洋垃圾与有机成分或其他材料分开, 通过目视分析确定海洋垃圾的类别, 将材料分类到 Petri 菜盘上, 并将收集到的物品分潜为不同的类别。</li>
	<li>用收集到的信息填充数据表。</li>
	<li>使用立体显微镜仔细观察任何无法识别的材料。</li>
	<li>在室温下或在35°c 的烤箱中干燥海洋垃圾12小时。</li>
	<li>在35°c 的烤箱中将有机分数干燥12小时或在干燥机中干燥。</li>
	<li>报告不同类别的海洋垃圾的数量和干重。</li>
	<li>报告有机部分的干重, 细分为食物, 自然非食品保持不变。总干质量 (重量以克为单位, 精确到小数点后两位) 是监测程序中使用的主要信息, 其次是项目数量 (丰度)。</li>
	<li>记录其他信息, 如物品的颜色、垃圾量、食道、胃、肠中垃圾发生率的不同以及每垃圾类别的发生率, 因为这对研究和影响分析很有用。原始数据将为 GI 的每个部分提供各种信息;这三个部分内的海洋垃圾的总含量将在最终数据中予以说明。</li>
</ol>

作者没有什么可透露的。

该议定书允许评估海洋垃圾的总数量, 并确定海龟摄入的主要垃圾类别。与其他有海上活动的监测方案相比, 它的成本更低, 因为海龟在海滩搁浅后可以收集, 也可以被渔民回收。由于物品尺寸的下限为1毫米, 确定海洋垃圾类别是容易和迅速的。该议定书的一个局限性是使用海龟, 因为所有7种海龟都列在《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录一27中;因此, 只有经授权的人员才能处理活的和死的动物或其部分。海龟的管理和回收应报告, 并与相应的当局进行协调。在处理死亡或活着的野生动物时, 必须采取卫生预防措施, 以尽量减少人畜共患病的风险。该协议已在物种上进行了测试, 但适用于所有7种海龟。应分别对每个物种进行数据分析。标本的身体状况被认为是从活海龟到木乃伊海龟的五个层次以下。考虑对标本的身体状况进行更详细的分类, 以防海龟在恢复后在救援中心死亡。该协议适用于2级至4级的死亡个人, 也适用于康复后死亡的个人 (情况: 在恢复中心死亡)。第2级和第3级足以适用于该协议, 而第4级允许测量生物鉴别数据和评估是否存在摄入垃圾, 以评估发生频率 (FO%), 以及在整个样品。第5级的人, 一般已经失去了胃肠道内容, 不能考虑收集和量化垃圾摄入。在处理前对动物进行拍照, 可以提供更多关于样本的信息, 作为死亡或主要伤害和纠结的可能原因。在图片上包含刻度栏是很重要的。即使海龟的鱼钩往往在其 GI 中有鱼钩, 但数据不必列入分析, 因为延绳钓受害者积极被捕获的鱼钩不被视为 "海洋垃圾"。钩子的存在应记录在笔记中。收集数据应在 GI 的每个部分 (食道、胃、肠) 单独进行, 以便评估考虑到 GI 堵塞或通过排便消除其的能力, 对海洋垃圾摄入的耐受程度, 如在以前的研究中证明了 16、28、29、30、31、32.在项目数的集合中可以找到协议的关键步骤。多个片段可以从 GI 内同一对象的碎片或单独摄入的结果中派生出来。对单个项目或多个单独部分的主观解释可能对应于记录编号中的潜在偏差 (图 6)。因此, 只使用摄入的海洋垃圾质量数据 (如 fulmar ecoqo17,25) 来计算阈值。
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59466/59466fig6.jpg"> 图 6: 在摄入之前或喂养过程中, 单个物品可能会发生碎裂, 从而产生计数偏差.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59466/59466fig6large.jpg" target="_blank">请点击这里查看此图的较大版本.</a>
该协议要求根据不同的塑料项目的形状分类 (使用 SHE, 使用 THR)。这个细分是有用的, 以确定海洋垃圾的来源与物品清单根据其丰富程度。它协助决策者制定措施方案, 通过评估项目的实力, 迅速证明他们在针对项目方面的效率。例如, 市场上禁止使用塑料袋应与今后采集的海龟样本中摄入的 USE SHE 类别减少 (图 4,图 5) 相对应。该协议的应用将使欧盟成员国能够满足 MSFD 的要求, 评估自己的基线, 并确定实现 GES 的阈值。阈值应在原始区域或靠近原始区域确定。由于塑料在海洋环境中的普遍存在, 因此不存在一个原始的区域。根据示例数据 (表 1), 区域5是最清晰的区域, 可以表示地中海盆地要达到的值 (y)。成员国应根据自身与这一价值的距离大幅缩小来确定门槛值。根据最近的一项审查18, 海洋垃圾摄取单位应正常化到海龟的大小, 特别是如果目标是比较不同的年龄类别。然而, 不同的作者发现了摄入垃圾的数量与海龟大小之间的关系, 其值为 16、26、32、33、 34岁我们的协议不包括动物大小在第一种情况下, 但它可以估计身体负担, 评估质量的海龟使用弯曲的甲壳长度 (CCL)35 , 并使用重量的重量比的海龟, 而不是仅摄入的塑料 (Y) 克。在任何情况下, 我们建议在将海洋阶段海龟与神经类海龟或早期幼龟与成虫合并之前, 核实任何可能的显著差异, 以便更好地对样本 16、26 进行分层。第二种情况更多的是与个人健康状况有关, 可以更好地回答标准 D10C3: "海洋动物摄入的垃圾和微垃圾的数量达到不会对物种健康产生不利影响的水平"有关 "。事实上, 摄入塑料物品的影响最常见的是亚致命影响, 而不是致命影响28、36、37、38、39。我们也很少发现由于塑料摄入而导致的闭塞或穿孔, 这可能会导致海龟死亡。亚致死影响不容易被发现, 也不容易与其他污染物造成的影响区分开来。当海洋垃圾在海龟的 GI 内, 就会发生饮食稀释或吸收污染物.因此, 比食物残留量更多的塑料样本可能表明动物的健康状况非常糟糕。为了与北欧国家使用的 fulmar ecoqo17(25 ) 保持一致, 这两种情况都考虑塑料重量, 而不是海洋垃圾重量。
最后, 重要的是要澄清 (一) 分析海龟摄入塑料作为对种群产生影响的人口影响指标与 (二) 分析海龟摄入塑料的情况之间的区别, 这些因素如下:对沿海和海洋环境影响的生物指标20、40。要了解这种影响对海龟种群保护的影响, 需要更多的信息, 更好的数据分层是必要的.通过面对来自13个国家的35名专家的意见, 海龟显然多年来一直在广泛研究, 尽管仍有必要调查与人类的相互作用活动, 从而评估人口状况和潜在威胁43。
这意味着, 对于所有专题研究来说, 单一的议定书不能被视为详尽无遗, 需要进行更多的研究, 以了解塑料在人口层面的影响。
即使是坚硬的塑料也可被认为对海龟造成的损害很低, 就副渔获物或生境破坏而言, 在过去几年中, 减少副渔获物的数量具有挑战性, 必须详细说明快速测量方法。在使用搁浅的海龟进行监测方面存在争议, 因为根据一些作者的说法, 它们不能代表整个人口40, 而另一些作者则宣布, 搁浅的海龟并不代表海洋的偏见在背景人口中的垃圾摄入率44。此外, 在许多国家, 没有一个组织良好的搁浅网络或系统将救援中心与渔民联系起来, 也缺乏关于副渔获物和渔业释放后死亡率的信息。因此, 在死亡和到达海滩之前的一段时间内, 如果没有正常的喂养行为, 就不能总是将搁浅的样本视为病海龟;其中许多是被冲到岸上的 "海龟死", 通常被用作监测活动的样本 26、32、38、45.我们认为, 搁浅的样本有助于提供关于环境中海洋垃圾丰富程度的信息, 我们建议将仅将胃肠道完全空无一的海龟排除在这一分析之外, 因为它们可能会长期患病死前的时间。该议定书的使用将有助于评估海洋生物的环境状况和海洋垃圾的供应情况。这也有助于提高我们对海龟行为的了解。该方法对 MSFD TS-ML 准则22的重要性在于7个国家的统一和测试过的样本数量 (n = 700)。根据初步结果, 确定了标本的身体状态水平, 减少了海洋垃圾的摄入类别。此外, 这是首次显示具有代表性的结果并将其与 GES 阈值连接。
该议定书是研究人员了解塑料对全球或地方海洋环境的影响以及与邻国比较标准化数据的有效工具。由于不同国家之间的数据差异, 这一结果以前无法实现, 妨碍了任何空间比较。

海洋垃圾是一个需要解决的复杂问题, 因为它可以通过多种来源和形式进入海洋。在海洋环境中遇到的垃圾中, 超过80% 是由塑料1组成的。从经济角度来看, 这种材料的作用在过去50年里一直在增加。因此, 自1960年以来, 其产量也增加了 20倍, 2016年达到3.35亿吨。这一数值预计将在未来 20年内翻番2。此外, 据估计, 每年约有500万至 1 300万吨塑料进入海洋 (相当于全球塑料产量的 1.5% 至 4%)2,3.塑料运动受其物理性质 (如浮力) 或环境变量 (如潮水和河流) 的影响, 塑料可在所有海洋隔间4,5中积累。面对塑料问题, 必须铭记, 与许多其他环境问题一样, 它是跨界的, 因此, 解决治理问题是复杂的.为了更好地实现这一目标, 我们必须考虑到区域和国际框架, 以便在全球提高或保持海洋环境意识和保护7。欧洲联盟《海洋战略框架指令》的最终目标是到2020年在欧洲水域实现良好的环境状况, 保护海洋生物多样性, 并促进海洋环境的可持续利用。这将通过11个定性描述符进行, 其中说明10侧重于海洋垃圾, 其定义是 "海洋垃圾的性质和数量不会对沿海和海洋环境造成损害"。在这一描述范围内, 新委员会第8号决定决定增加 D10C3 标准----"海洋动物摄入的垃圾和微垃圾的数量达到不会对有关物种的健康产生不利影响的水平"----因为它是:被认为是评价 GES 的相关标准。因此, 请成员国编制一份物种清单, 制定方法标准, 并通过区域或分区域合作确定阈值。
1838年首次科学出版物发表后, 在 stormpetrel 上, 用一根摄入的蜡烛棒, 列出了500多种海洋物种, 用于摄入海洋垃圾10、11、12、13 14岁, 海龟是最早摄入塑料碎片的分类群之一.鉴于海龟摄入垃圾的倾向、其广泛分布以及在其生命中使用的大量生境, 海龟, 特别是落叶物种Caretta k酱保管物 (linnaeus 1758) 被选定为地中海盆地16, 象海鸟fulmarus 冰川(linnaeus, 1761) 为北欧水域17。即使经过50年的研究, 关于方法标准化的讨论也非常有限,科学界缺乏一种对野生动物塑料摄入进行量化的有凝聚力的方法.需要有标准化的取样规程以及分析检测方法和指标, 以评估海洋生物区系的塑料摄入情况;最近的一篇论文显示了利用海洋物种作为塑料污染生物指标的潜在好处和局限性20。根据 2011年 Matiddi 等人 (其) 2011年关于将 loggerhead 作为生物指标的提议和海洋垃圾报告技术小组第22号, 制定并测试了一项审议海龟摄入的海洋垃圾的具体议定书。在欧洲 INDICIT 项目 (GA n°11.0661/2016/748064/SUB/ENV 内, 在地中海和大西洋7个国家建立10个伙伴。C2)。该议定书为分析海龟摄入的海洋垃圾提供了标准化方法, 以支持要求确定阈值的委员会新的 (欧盟)第8号决定----标准 D10C3。根据 COM8提供的定义, 阈值是一个数字或范围, 允许评估是否达到了质量水平标准, 从而有助于评估 ges。拟议的评估海龟摄入的垃圾的议定书将有助于收集关于垃圾成分和丰富程度的数据, 并评价其对海洋环境的影响。此外, 收集这类标准化数据将有助于确定门槛值。在这里, 我们考虑两种类型的方案。第一种情况是考虑到在奥斯巴地区实施的 Fulmar 垃圾 EcoQO 监测: "在每个子区域的50-100 只死亡海龟的样本中, 在 GI 中具有 Y g 或更多塑料的海龟中, 应该只有不到 X% 的人使用 y g 或更多的塑料考虑到所有样品和 x% 的塑料摄入重量是比 Y 重 (克) 更多的海龟的百分比。第二个目的是考虑个人健康水平的代名词: "在每个亚区域的50-100 只死亡海龟的样本中, 塑料重量 (克) 的海龟在 GI 中的残留量应该不到 X%"塑料与每个人剩余的食物进行比较。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1047px;" width="1046">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">For the recovery of the animal and the collection of samples at the discovery site</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Boots</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Bottle/ziploc bags</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Camera</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Cooler</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Cut-resistant gloves</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Garbage bag</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Glasses and protective mask or shield</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Gloves</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Integral protective suit&#160;</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Measuring tape</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Observation sheet</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Pen</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Permanent marker</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Rope (to marke-off the zone)</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Transport bins or containers for the turtle</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">For the collection of samples on dead individuals in laboratory and the extraction of the ingested litter from the digestive tract</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td colspan="2" height="32" style="height:32px;width:919px;">In the laboratory room</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Cold chamber or chest freezers (-20&#176;C) with large storage capacity</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Garbage bags</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Proofer (not mandatory)</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;width:919px;">For manipulators</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Boots</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Cut-resistant gloves</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Glasses and protective mask or shield</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Gloves</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Integral protective suit</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;width:919px;">For notes and report</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Camera</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Observation sheet</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Pen</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Permanent marker</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td colspan="2" height="32" style="height:32px;width:919px;">For biometric measurements</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Measuring tape</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Sliding calliper</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td colspan="2" height="48" style="height:48px;width:919px;">For the necropsy and the collection of samples</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Clamps (at least 6) and/or kistchen string or plastic cable clamps</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Clips with claws</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Containers for samples (Bottle/zipped bags)</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Metal containers</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Scalpel (possible with interchangeable blade)</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Scissors</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td colspan="2" height="32" style="height:32px;width:919px;">For the analysis of ingested litter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Binocular (optional)</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Measuring cylinders (10 ml, 25 ml, 50 ml)</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Measuring decimetre</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Precision balance (0.01 g)</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Sieve with 1 mm mesh</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:855px;">Sieve with 5 mm mesh (optional &#8211; for the study of the ingested micro-plastics (1-5 mm))</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

data collection on marine litter ingestion in sea turtles and thresholds for good environmental status

以下议定书旨在满足欧洲联盟海洋战略框架指令 (MSFD) 对委员会 (欧盟) 决定中报告的 D10C3 标准提出的要求, 即海洋动物摄入的垃圾数量。提供了从死海龟身上提取垃圾的标准化方法以及数据分析准则。该协议从收集死海龟开始, 并根据分解状态对样本进行分类。海龟的尸检必须在授权的中心进行, 这里描述的协议解释了胃肠道隔离的最佳程序。GI 的三个部分 (食道、胃、肠) 应分离, 纵向打开, 并使用1毫米网筛过滤内容物。本文介绍了摄入垃圾的分类和定量, 将 GI 内容分为七类不同的海洋垃圾和两类天然遗骸。摄入垃圾的数量应报告为总干重 (重量以克为单位, 小数点后两位) 和丰度 (物品数量)。该议定书提出了两种可能的方案, 以实现良好的环境状况 (GES)。首先: "在每个子区域的50-100 只死海龟的样本中, 在 GI 中具有 Y g 或更多塑料的海龟中, 应该只有不到 X%", 其中 y 是塑料摄入的平均重量, x% 是塑料重量较大的海龟的百分比 (以克为单位)比 Y。第二个问题是, 在每个子区域的50-100 只死海龟的样本中, 食物与塑料的关系是个人健康的代名词, 它的比例应该低于食物中的 x%, 它们的塑料重量 (以克为单位) "。

该议定书源自 MSFD 准则22 , 由来自地中海7个国家的50多个利益攸关方 (来自救援中心、滞留网络、兽医和研究实验室的生物学家) 共同制定和改进并提出了对海龟摄入垃圾的同质化、可行性和简便性评价。该协议已在落叶龟身上进行了测试, 大多数操作也适用于其他海龟物种。该协议的第一个重要结果是根据海洋垃圾的视觉特征对其进行了七个类别的描述 (图 3)。这种分类是由 fulmar ecoqo17,25 推导出来的, 并根据作者在海龟生态学方面的经验进行了修改。第一类, 通常是最不丰富的一类, 是工业塑料 (IND pla), 由塑料颗粒和颗粒组成, 通常呈圆柱形和圆形, 但也呈椭圆形或立方体状, 很少被龟摄入16,26. 第二类包括类似板材的材料的遗骸, 如塑料袋、农业板材或塑料箔。它们以不规则的形状出现, 但始终是薄和灵活的。第三类包括绳索、细丝和其他螺纹状材料, 如通常由尼龙制成的幽灵渔具的残骸 (使用 THR)。第四类包括所有发泡塑料 (使用 foamed), 如聚苯乙烯泡沫或泡沫软橡胶。第五类包括硬塑料制品的碎片 (USE fra)。在 GI 含量上有非常丰富的片段, 它们可以在各种不同的颜色中找到。它们来源于破碎的较大的碎片, 通常是刚性的, 形状不规则, 边缘弯曲得很锋利。任何其他塑料物品, 包括弹力, 密集的橡胶, 气球件, 和软气枪子弹, 被归类为其他用户塑料 (use poth)。所有非塑料海洋垃圾, 如烟头、报纸、垃圾和硬污染物, 都被列入塑料 (其他) 以外的最后一类垃圾, 即使它们不容易在海龟中发现。另外两类未归类为海洋垃圾, 是 (一) 海龟自然饮食的遗存和 (二) 任何天然物品, 不被确认为海龟的猎物, 如石头、木头或浮石 (nfo)。
图 4显示了海洋垃圾类别干质量的一个代表性结果的例子, 其中板状塑料 (use she) 是最丰富的类别, 塑料袋或其部分是主要的摄入物品。图5中显示了类似的项目数 (丰度)。表 1显示了六个不同地区垃圾干质量分析的实例结果, 这有助于根据欧洲联盟 msfd 的要求确定阈值。例如, 这些地区应由地中海盆地的国家或分区域代表。报告的平均数是使用所有被检查的个人计算的, 包括样本而不摄入海洋垃圾。根据我们的例子, 第5区是地中海盆地最清晰的区域, 该区域的数据可用于确定要达到的阈值。对于这一地区, 第一种情况可能是: "在50-100 种海龟的样本中, 在 GI 中具有0.5 克或更多塑料的海龟中, 应该只有不到25%的海龟"。第二种情况可能是: "在50-100 种海龟的样本中, 在 GI 中, 塑料克多于食物遗骸 (foo) 的海龟中, 应该有不到32%的人"。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59466/59466fig3v2.jpg"> 图 3* 为海龟摄入监测而确定的海洋垃圾类别实例.(a) IND pla, (b) 使用 she, (c) 使用 thr, (d) 使用 foa, (e) 使用 fra, (f) 使用 poth, (g) 其他, (h) foo。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59466/59466fig3v2large.jpg" target="_blank">请点击这里查看此图的较大版本.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59466/59466fig4.jpg"> 图 4: 海龟在不同类别内摄入的海洋垃圾重量的例子结果.平均重量值以每个项目的克 (±se) 为单位报告。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59466/59466fig4large.jpg" target="_blank">请点击这里查看此图的较大版本.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59466/59466fig5.jpg"> 图 5: 海龟摄入的海洋垃圾种类的示例结果.报告每个项目的平均数量 (±se)。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59466/59466fig5large.jpg" target="_blank">请点击这里查看此图的较大版本.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>地区</td>
			<td>样品尺寸 (n)</td>
			<td>摄入塑料干重平均值±SE (g)</td>
			<td>塑料大于平均值的海龟百分比 (%)</td>
			<td>塑料多于食物的海龟所占百分比 (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>100元</td>
			<td>1.32±0.03</td>
			<td>27</td>
			<td>64</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>100元</td>
			<td>1.61 ±0.01</td>
			<td>28</td>
			<td>67</td>
		</tr>
<tr>
<td>3个</td>
			<td>100元</td>
			<td>1.35±0.02</td>
			<td>26</td>
			<td>62</td>
		</tr>
<tr>
<td>4个</td>
			<td>95</td>
			<td>0.73±0.02</td>
			<td>34</td>
			<td>40</td>
		</tr>
<tr>
<td>5</td>
			<td>65</td>
			<td>0.55±0.03</td>
			<td>25</td>
			<td>32</td>
		</tr>
<tr>
<td>6</td>
			<td>50</td>
			<td>0.90±0.04</td>
			<td>44</td>
			<td>54</td>
		</tr>
</tbody></table>表 1: 使用干质量海洋垃圾的不同区域 (例如国家、次区域等) 的结果实例.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59466/Table_1.xls.xlsx" target="_blank">请点击这里下载此表作为 excel 文件.</a>
补充文件 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59466/Appendix_1.jpg" target="_blank">请点击此处下载此文件.</a>
补充文件 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59466/Appendix_1bis.jpg" target="_blank">请点击此处下载此文件.</a>

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Data Collection on Marine Litter Ingestion in Sea Turtles and Thresholds for Good Environmental Status

该议定书的重点是收集海龟样本, 描述从动物恢复和尸检到对摄入的海洋垃圾进行分类和量化的所有步骤。此外, 具有代表性的结果表明, 如何利用收集到的数据来制定良好环境状况的可能门槛。

海洋垃圾摄入海龟和环境状态良好的阈值数据收集

The following protocol is intended to respond to the requirements set by the European Union&#39;s Marine Strategy Framework Directives (MSFD) for the ...

以下协议旨在响应新标准的指令要求的海洋战略框架。海洋动物摄入的垃圾和微垃圾数量与对有关物种健康没有不利影响的水平。议定书将有助于收集有关垃圾的组成和丰度的数据，并评估其对海洋环境的影响。这种类型的标准化数据将有助于定义阈值。本议定书的所有实验活动都是根据有关国家和国际规则对海龟进行的。所有尸检必须在您的授权中心进行。在恢复现场，在观测表上记录每个观测结果和可能的数据。报告试样的健康状况水平。活着. 新鲜. 部分分解.高级已分解。木乃伊。组织动物运输到您授权的尸检中心。如果动物极度分解，在处置前评估消化道的完整性。如果在恢复后无法立即进行尸检，请将尸体冻结在零下20摄氏度。在进行尸检操作之前，请将生物特征测量记录在恢复文件的特定部分。弯曲的甲壳长度，缺口到尖端，是强制性的。其他度量值（如重量或宽度）是可选的。对动物身体进行外部检查，并在尸检档案的特定部分报告信息。此外，必须检查口腔是否有异物。通过沿黄线突出显示的边缘执行切口，将板条分离并移除甲壳中的板条。使用带水平倾斜的短刀片或切口，避免损坏内部部件。当板子从甲壳分离时，必须切断胸梁和骨盆腰带的韧带附件，并且易于访问和处理。通过去除胸肌和龟的心脏暴露胃肠道。提取GI并放在检查表面上。使用两个运算符执行此操作以使操作更加容易。当其中一个操作者将尸体放在一边时，另一个操作者用小刀片或剪刀将韧带从不同的器官和膜中分离出，然后从动物中去除GI。必须使用塑料夹隔离食道、胃和肠。它们被放置在靠近口腔的食道上、食道阀、袋子上和氯卡上，尽可能靠近肛门孔，如黄色箭头所示。尽可能使用剪刀或手指打开 GI 截面长度。所含材料必须直接放入一毫米网筛中，用自来水清洁GI壁。记下 GI 中的每一个异常。检查筛子中的内装物，最终检测出必须单独拆卸和处理的任何焦油、油或特定易碎材料。通过筛子冲洗内容物，以去除液体部分、粘液和消化的不可识别物质。分别对每个 GI 部分重复此序列。通过筛子冷冻所有收集的材料，或将其存放在罐中，并配有 70% 酒精溶液。标记示例代码和相应的 GI 部分。清空收集所有材料的一毫米网筛上的罐子。重新用水清洗收集的材料，以消除酒精和清洁垃圾。将海洋垃圾与有机成分或其他材料分开。通过可视化分析确定海洋垃圾的类别，对培养皿上的材料进行排序，将收集的物品细分为不同的类别。用收集的数据填充数据表。使用立体显微镜处理任何不确定的材料。在室温下或在35摄氏度的炉子里晾干海洋垃圾12小时。在35摄氏度的炉子中干燥有机物，12小时或在烘干机中。报告不同类别海洋垃圾的数量和干重。报告在食物中细分的有机部分的干重和天然无食物的保留。总干质量重量（以克为单位）精确到第二位数位是用于监控程序的主要信息，其次是项目数。其他信息是物品的颜色、垃圾的数量、食道、胃和肠道中不同的垃圾事件。每个垃圾类别的事件对于研究和影响分析非常有用。该协议的第一个重要结果是根据视觉特征将海洋垃圾物品分为七类。由塑料颗粒和颗粒组成的工业塑料：IND PLA。塑料袋、农业板材或塑料箔等板材：使用 SHE。线样材料，包括绳索、灯丝或幽灵渔具：使用THR。泡沫塑料作为聚酯和泡沫或泡沫软橡胶：USE FOA。碎片或硬塑料制品：使用 FRA。任何其他塑料物品，包括弹性，密集的橡胶，气球件：USE POTH。所有非塑料海洋垃圾，如烟头，报纸，垃圾和硬污染物：其他。两类，不归类为海洋垃圾是海龟的自然饮食的遗骸：FOO，以及任何不被确认为海龟猎物的天然物品，如石头、木头或石匠：NFO。此图显示了海洋垃圾类别干质量的代表性结果，其中像薄片的塑料是最丰富的类别。大塑料袋是LDMA摄入物品的一部分。考虑到项目数量，这个数字也显示了类似的结果。下表显示了六个不同区域的垃圾干质量分析结果示例，这些结果对于根据欧盟 MSFD 的要求设置阈值非常有用。报告的平均数是使用所有被检查的个人计算的，包括样本，没有摄入海洋垃圾。根据我们的示例，区域 5 表示最清晰的区域，此区域的数据可用于设置使用两个建议方案达到的阈值。在50100只海龟的样本中，在GI中含有0.5克或更多塑料的海龟应该少于25%。在50100只海龟的样本中，含有比GI中食物更多的塑料克的海龟应该少于32%。根据该示例，区域 5 作为最清晰的区域，可以表示其他人要达到的值。成员国应根据与该值的整个距离显著缩短来决定阈值。

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