Name: preparation and application of a new bacterial biosensor for the presumptive detection of gunshot residue
Uploaded: 2019-05-09T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Application of a New Bacterial Biosensor for the Presumptive Detection of Gunshot Residue at JoVE.com

Gli autori desiderano riconoscere gli studenti della Longwood University in BIOL 324 (genetica) e gli studenti di CHEM 403 (Advanced Chemical Laboratory problem solving) che sono stati coinvolti nella preparazione iniziale e nel collaudo dei biosensori antimonio e piombo. L'idea di MicRoboCop è stata concepita presso il workshop GCAT SynBIO (Summer 2014), finanziato dalla NSF e dall'Howard Hughes Medical Institute e ospitato dall'Università del Maryland Contea di Baltimora. Gli autori riconoscono anche i finanziamenti ricevuti dal Cook-Cole College delle arti e delle scienze di Longwood University e dal GCAT SynBio Alumni Grant.

Nota: viene presentata la sintesi di E. coli che esprime RFP.
1. preparazione del DNA plasmide da E. coli
<ol><li>Scongelare e . coli contenente un plasmide con un gene RFP e un gene di resistenza all'ampicillina e far crescere le piastre di agar e . coli on Luria brodo (lb) contenenti 100 μg/ml di ampicillina a 37 ° c per 24 ore. Ad esempio, utilizzare il plasmide J10060 dal registro delle parti biologiche standard utilizzate per la biologia sintetica (...

<ol>
	<li>Eschner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#34;The+Story+of+the+Real+Canary+in+the+Coal+Mine.&#34;.">&#34;The Story of the Real Canary in the Coal Mine.&#34;.</a> The Smithsonian Magazine. , (2016).</li><li>Roda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+chemical+luminescence-based+biosensors:+A+critical+review.">Progress in chemical luminescence-based biosensors: A critical review.</a> Biosensors &#38; Bioelectronics. 76, 164-179 (2016).</li><li>He, W., Yuan, S., Zhong, W. H., Siddikee, M. A., Dai, C. 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Modifiche e risoluzione dei problemi
L'esperimento descritto nella tabella 4 può essere modificato in qualsiasi modo appropriato ai sensori che sono stati progettati. L'aspetto più importante di un sensore chimico è quello di valutarne la sensibilità e la specificità. È utile garantire che un'ampia gamma di concentrazioni dell'analita venga analizzata per determinare l'utile intervallo analitico del sensore. Vale anche la pena di determinare un livello m...

Un biosensore è qualsiasi dispositivo analitico che utilizza componenti biologici (come proteine, acidi nucleici o interi organismi) che producono una risposta che può essere utilizzata per il rilevamento di una sostanza chimica o di un analita. Ad esempio, l'industria mineraria del carbone ha utilizzato un biosensore per gran parte del 20° secolo per rilevare la presenza di gas minerari tossici: il canarino nella miniera di carbone1. La risposta dell'organismo biologico (canarino) (morte o angoscia) ad un analita chimico (monossido di carbonio) è stata osservata dai minatori al fine di proteggere i lavoratori. In un esempio più moderno e sofisticato, i batteri possono essere alterati utilizzando tecniche di biologia sintetica per rispondere alla presenza di un determinato analita chimico esibendo una risposta specifica, come l'espressione di una proteina fluorescente.
La biologia sintetica è un termine generico che si riferisce alla costruzione di dispositivi biologici e sistemi che non esistono naturalmente, o la riprogettazione di sistemi biologici esistenti per uno scopo specifico2. La biologia sintetica si distingue dall'ingegneria genetica da una metodologia standard e dall'esistenza di parti standardizzate (elementi genetici di biologia sintetica standard) che possono essere utilizzati per sintetizzare dispositivi e sistemi. Una parte viene introdotta nel genoma di un dispositivo, un organismo come un batterio, per esprimere un certo tratto che servirà come indicazione di funzione. Ad esempio, in molti dispositivi sintetici, l'espressione di una proteina fluorescente viene introdotta in un singolo organismo cellato come proteina reporter. È possibile combinare più dispositivi in un sistema. I Geniti di microrganismi come i batteri sono facili da manipolare in questo modo. Numerosi esempi di biosensori specifici per una vasta gamma di analiti chimici sono stati riportati in letteratura negli ultimi dieci anni,3,4.
In questo lavoro, il sistema MicRoboCop è presentato come un esempio di un biosensore progettato utilizzando tecniche di biologia sintetica con nuove applicazioni in chimica forense e ambientale. MicRoboCop è un sistema di tre dispositivi separati che, quando combinati, permetteranno a Escherichia coli di esprimere la proteina fluorescente rossa (RFP) in presenza di residui di arma da fuoco (GSR) che sono stati raccolti dalle mani di una persona o da una superficie. Ciascuno dei tre dispositivi risponde a uno specifico analita chimico che è noto per essere un componente di GSR5. I tre analiti a cui il sistema risponde sono I. 2, 4, 6-trinitrotoluene (TNT) e i relativi composti, II. piombo (sotto forma di ioni di piombo), e III. antimonio (anche sotto forma di ioni).
GSR è costituito da molte sostanze chimiche diverse, ma i tre di solito utilizzati per identificare un residuo come GSR sono bario, piombo, e antimonio5. Il test probatorio standard per l'identificazione di GSR consiste nell'utilizzare la microscopia elettronica a scansione (SEM) con fluorescenza a raggi X a dispersione di energia (EDX)5. SEM-EDX consente agli analisti di identificare la morfologia unica e i componenti elementali di GSR. Attualmente, ci sono pochi ampiamente utilizzati test presuntivi binari disponibili. Un test presuntivo recentemente pubblicato utilizza la spettroscopia di mobilità ionica (IMS), che è un'apparecchiatura specializzata che potrebbe non essere disponibile in molti laboratori6. Ci sono anche alcuni test di colore "spot" che possono essere utilizzati, anche se sono tipicamente utilizzati per la determinazione della distanza o per l'identificazione GSR su fori di proiettile e ferite5. Inoltre, c'è stata una certa attenzione limitata nella letteratura per i test elettrochimici per GSR che impiegano l'analisi voltammetrica, che ha il vantaggio di essere potenzialmente in campo portatile, o anodico stripping voltammetria, che è un estremamente Metodo sensibile per gli elementi metallici7. Nella letteratura dei biosensori progettati specificamente allo scopo di rilevare la GSR è molto poca menzione, anche se alcuni biosensori per altre applicazioni forensi sono stati pubblicati8.
Gli elementi biologici per ogni dispositivo nel sistema MicRoboCop, e la costruzione del plasmide, sono illustrati in Figura 1. La freccia curva in Figura 1B rappresenta la regione promotrice che viene attivata in presenza dell'analita, l'ovale è il sito di legame ribosomiale che permette la traduzione della proteina reporter, la scatola grigia etichettata RFP è il gene che esprime il rosso proteina fluorescente, e l'ottagione rosso è il sito di terminazione della trascrizione. Tutti e tre i dispositivi saranno utilizzati insieme come un sistema per rilevare GSR. Ogni dispositivo con un promotore specifico (SbRFP, PbRFP e TNT-RFP) sarà incubato con il campione che viene testato e la fluorescenza di RFP sarà misurata. La RFP sarà espressa solo se l'analita chimico appropriato è presente e attiva la regione promotrice. Tre dispositivi che rispondono ad alcune delle sostanze chimiche presenti in GSR sono stati progettati e sono presentati in questo lavoro.
I promotori utilizzati nei tre dispositivi microbocop sono un promotore sensibile all'arsenico e all'antimonio , sbrfp9,10, un promotore sensibile al piombo, pbrfp11,12 e un promotore sensibile al TNT, TNT-RFP 13. poiché una ricerca in letteratura non ha rivelato alcun promotore progettato per rispondere al bario, il promotore di TNT è stato selezionato invece poiché questo promotore è sensibile a una serie di composti strutturalmente correlati (in particolare, 2, 4-dinitrotoluene e dinitrobenzene) che sono noti per essere una parte dei composti organici lasciati alle spalle in GSR. Questo promotore è stato utilizzato con successo per rilevare in modo specifico quantità minute di TNT e di 2, 4-dinitrotoluene (2, 4-DNT) nelle miniere di terra sepolte13. Utilizzando i tre dispositivi insieme come un sistema, un test positivo per GSR produrrà fluorescenza in tutti e tre i dispositivi. Un segnale di fluorescenza in uno o due dispositivi indicherà un'altra fonte ambientale dell'analita (s) o nel caso del promotore di TNT, l'attivazione da parte di un composto che non è un composto organico lasciato alle spalle in GSR. Utilizzando tutti e tre i dispositivi insieme, la possibilità di un risultato falso positivo a causa di fonti ambientali è minimizzata. Le munizioni prive di piombo, che stanno guadagnando popolarità, rappresentano ancora solo il 5% delle vendite di munizioni negli Stati Uniti; quindi, risultati falsi negativi a causa dell'assenza di piombo può essere una possibilità, ma c'è ancora utilità in un sensore che utilizza il piombo come un marcatore per GSR14. Oltre a questa specifica applicazione forense, ogni dispositivo può essere utilizzato separatamente per individuare i contaminanti ambientali.
I protocolli presentati includono le tecniche di biologia sintetica utilizzate per creare i dispositivi (batteri del sensore) e le tecniche analitiche per controllare la funzione dei dispositivi e analizzare i segnali di fluorescenza ottenuti. Il protocollo include anche la raccolta di prove forensi sotto forma di pulizia a mano per raccogliere GSR dalle mani di un sospetto o di un tampone per raccogliere GSR da una superficie. I risultati del dispositivo con sensore di piombo sono presentati come risultati di esempio, insieme a una dimostrazione di un test positivo per GSR utilizzando un involucro cartuccia esaurito.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,3-dinitrobenzene, 97%</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>D194255-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,4-dinitrotoluene, 97%</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>101397-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1423-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1760-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antimony, Reference Standard Solution (1000ppm &#177;1%/Certified)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SA450-100</td>
			<td>Standard in dilute HNO3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cut Smart Buffer</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>B7204S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duplex Buffer</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td>11-01-03-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EcoRI-HF Restriction Enzyme</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>R3101S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, HPLC grade, denatured</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC611050040</td>
			<td>Solvents do not need to be HPLC grade, ACS or reagent grade will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eurofins Genomics SimpleSeq DNA Sequencing Kits</td>
			<td>Eurofins Genomics</td>
			<td>SimpleSeq Kit Standard</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forward primer for colony PCR</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td></td>
			<td>5&#8217;- GCCGCTTGAATTCGTCATATAT-3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forward primer for DNA sequencing</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td></td>
			<td>5&#8217;- GTAAAACGACGGCCAGTG-3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IBI Science High Speed Plasmid Mini-kit</td>
			<td>IBI Scientific</td>
			<td>IB47101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth, Miller</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1426-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead, Reference Standard Solution (1000ppm &#177;1%/Certified)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SL21-100</td>
			<td>Standard in dilute HNO3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LeadOff Disposable Cleaning and Decon Wipes</td>
			<td>Hygenall</td>
			<td>45NRCN</td>
			<td>Sold in canisters or individually wrapped, any alcohol based wipe will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol, HPLC grade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A452-4</td>
			<td>Solvents do not need to be HPLC grade, ACS or reagent grade will work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEB 5-alpha Competent E. coli cells</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>C2987I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NheI-HF Restriction Enzyme</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>R3131S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease free water</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>B1500S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OneTaq 2X Master Mix with Standard Buffer</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>M0482S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmids from the registry of standard biological parts used for synthetic biology</td>
			<td>Registry of Standard Biological Parts</td>
			<td></td>
			<td>http://parts.igem.org/Main_Page</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Promoter Sequences</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td></td>
			<td>Sb promoter: 5&#8217;-GCATGAATTCAGTCAT 
			ATATGTTTTTGACTTATCCGCTTCGAAGAGAG 
			AGACACTACCTGCAACAATCGCTAGCGCAT-3&#8217; 3&#8217;-CGTACTTAAGCTCACTATATACAAAAACT 
			GAATAGGCGAAGCTTCTCTCTCTGTGATGGAC 
			GTTGTTAGCGATCGCGTA-5&#8217; 
			Pb promoter: 5&#8217;-GCATGAATTCGTCTTG 
			ACTCTATAGTAACTAAGGGTGTATAATCGGCA 
			ACGCGAGCTAGCGCAT-3&#8217; 3&#8217;-CGTACTTAAGCAGAACTGAGATATCATTG 
			ATCTCCCACATCTTAGCCGTTGCGCTGCGATCGCGTA-5&#8217; 
			TNT promoter: 5&#8217;GCATTCTAGATCAATT 
			TATTTGAACAAGGCGGTCAATTCTCTTCGATT 
			TTATCTCTCGTAAAAAAACGTGATACTCATCA 
			CATCGACGAAACAACGTCACTTATACAAAAAT 
			CACCTGCGAGAGATTAATTGAATTCGCAT3&#8217; 3&#8217;CGTAAGATCTAGTTAAATAAACTTGTTCCG 
			CCAGTTAAGAGAAGCTAAAATAGAGAGCATTT 
			TTTTGCACTATGAGTAGTGTAGCTGCTTTGTT 
			GCAGTGAATATGTTTTTAGTGGACGCTCTCTA 
			ATTAACTTAAGCGTA5&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reverse primer for colony PCR</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td></td>
			<td>5&#8217;- GCCGCTTGAATTCGTCTAGACT- 3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reverse primer for DNA sequencing</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td></td>
			<td>5&#8217;- GGAAACAGCTATGACCATG-3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA Ligase</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>M0202S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and application of a new bacterial biosensor for the presumptive detection of gunshot residue

MicRoboCop è un biosensore che è stato progettato per un'applicazione unica nella chimica forense. MicRoboCop è un sistema costituito da tre dispositivi che, se utilizzati insieme, possono indicare la presenza di residui di arma da fuoco (GSR) producendo un segnale di fluorescenza in presenza di tre analiti chiave (antimonio, piombo e componenti organici di GSR). Il protocollo descrive la sintesi dei biosensori che utilizzano Escherichia coli (e. coli) e i metodi di chimica analitica utilizzati per valutare la selettività e la sensibilità dei sensori. Il funzionamento del sistema è dimostrato utilizzando GSR raccolti dall'interno di un involucro cartuccia esaurito. Una volta preparati, i biosensori possono essere conservati fino a quando necessario e possono essere utilizzati come test per questi analiti chiave. Una risposta positiva da tutti e tre gli analiti fornisce un test positivo presuntivo per GSR, mentre ogni singolo dispositivo ha applicazioni per rilevare gli analiti in altri campioni (ad esempio, un rivelatore per la contaminazione del piombo nell'acqua potabile). La limitazione principale del sistema è il tempo necessario per un segnale positivo; lavoro futuro può comportare lo studio di diversi organismi per ottimizzare il tempo di risposta.

Gli spettri di fluorescenza per la variante RFP utilizzata in questo lavoro sono illustrati nella Figura 2. Questi dati sono dal dispositivo PbRFP in quanto rispondono al piombo e al dispositivo TNT-RFP in quanto rispondono a due analiti, 2, 4-DNT e 1, 3-DNB. Questa figura mostra lo spettro di un controllo negativo (nessun analita aggiunto), e gli spettri a due diversi livelli di analita aggiunto. Il segnale di fluorescenza massimo per la variante RFP utilizzata è stato ...

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Preparation and Application of a New Bacterial Biosensor for the Presumptive Detection of Gunshot Residue

Un protocollo è presentato utilizzando tecniche di biologia sintetica per sintetizzare una serie di biosensori batterici per l'analisi dei residui di arma da fuoco, e per testare il funzionamento dei dispositivi per il loro uso previsto utilizzando la spettroscopia a fluorescenza.

Preparazione e applicazione di un nuovo biosensore batterico per il rilevamento presuntivo di residui di arma da fuoco

MicRoboCop is a biosensor that has been designed for a unique application in forensic chemistry. MicRoboCop is a system made up of three devices that, ...

Questo protocollo descrive la preparazione e l'analisi di un biosensore unico che è stato progettato per rilevare i componenti chimici dei residui di colpi d'arma da fuoco. L'uso di biosensori per applicazioni forensi è unico. Rappresenta un'alternativa a basso costo, semplice da usare alla strumentazione altamente specializzata tipicamente utilizzata nei laboratori forensi.I metodi di biologia sintetica descritti possono essere utilizzati per qualsiasi sistema che utilizza parti standard di biologia sintetica. L'analisi chimica descritta è applicabile a qualsiasi biosensore che esprima proteine fluorescenti rosse. A dimostrare la procedura saranno Andrea Soles ed Elle Richardson, studenti universitari della Longwood University.Per iniziare questa procedura, aggiungere dieci microlitri del DNA plasmide J10060 precedentemente isolato a un tubo di microcentrifugo. Aggiungere otto microlitri di acqua e un microlitri di ciascuno degli enzimi EcoRI e NHEL pre-miscelati con un microlitro di tampone. Per il DNA promotore, aggiungere dieci microlitri di sequenze di DNA del promotore ricotto a un tubo di microcentrifugo fresco.Aggiungere otto microlitri di acqua e un microlitri di ciascuno degli enzimi EcoRI e NHEL pre-miscelati con un microlitro di tampone. Utilizzando una pipetta impostata su dieci microlitri, pipettare delicatamente i campioni su e giù per mescolare. Incubare i campioni a 37 gradi Celsius per 30 minuti.Quindi, riscaldare e attivo gli enzimi a 80 gradi Celsius per cinque minuti. Conservare il DNA digerito in un congelatore fino a quando non è pronto per procedere. In primo luogo, utilizzare il DNA plasmide e promotore precedentemente digerito per impostare la reazione in un tubo di microcetrifugo sul ghiaccio, come delineato nella tabella uno del protocollo di testo.Assicurarsi di aggiungere il T4 DNA Ligase per ultimo. Pipettare su e giù delicatamente per mescolare la reazione e centrifugare brevemente. Incubare a temperatura ambiente per dieci minuti.Quindi, riscaldare e attivare a 65 gradi Celsius per dieci minuti. Eseguire la trasformazione come descritto nel protocollo di testo. In primo luogo, impostare le miscele di reazione per PCR come indicato nella tabella due del protocollo di testo.Pipettare delicatamente su e giù per mescolare le reazioni. Usando una punta di pipetta gialla, raschiare una colonia dell'E.coli trasformato. Trasferire uno scorrimento di questo E.coli su una nuova piastra di agar LB-ampicillina che è stata sesata, quindi inserire la punta della pipetta nel tubo PCR.Agitare la punta della pipetta per mescolare l'E.Coli con il mix PCR. Ripeti questo processo altre tre volte per ulteriori colonie. Quindi, caricare i tubi PCR in una macchina PCR e iniziare il termociclismo come descritto nella tabella tre del protocollo di testo.Per iniziare etichettare il numero appropriato di tubi di coltura sterile come indicato nella tabella quattro del protocollo di testo. Aggiungere due millilitri del brodo di coltura preparato ad ogni tubo. Aggiungere la soluzione stock di anilite ai tubi come indicato nella tabella quattro.Quindi, posizionare i tappi a scatto sui tubi di coltura in modo che siano allentati per consentire il flusso d'aria nel tubo. Vortice ogni tubo di coltura. Successivamente, posizionare i tubi in un'incubatrice di scuotimento a 37 gradi Celsius e a 220 giri/min per almeno 24 ore.In primo luogo, utilizzare una salvietta a base di etanolo progettata per rimuovere il piombo per pulire tutte le superfici delle mani, anche tra le dita. Conservare le salviette in un sacchetto sigillabile opportunamente etichettato fino all'analisi. Utilizzare una salvietta a base alcolica per pulire eventuali superfici di grandi dimensioni da testare.Utilizzare uno scambio di cotone inumidito con etanolo per pulire eventuali piccole superfici da testare. Indossando guanti puliti e usando forbici che sono state pulite con alcol, tagliare una sezione che è a circa un centimetro quadrato dal centro della salvietta. Quindi, posizionare il pezzo tagliato di salvietta, o batuffolo di cotone, direttamente in un tubo di coltura contenente due millilitri dei batteri del sensore e assicurarsi che sia completamente immerso nel brodo.Preparare lo spettrometro per raccogliere la sottomissione fluorescente alla lunghezza d'onda appropriata per la variante RFP, con una lunghezza d'onda di eccitazione di 500 nanometri. Quindi, utilizzare un miscelatore a vortice per scuotere i tubi. Trasferire con cura ogni supernatante in una cuvetta a basso volume e raccogliere l'intensità di emissione.Utilizzando un miscelatore a vortice, agitare i tubi. Trasferire 200 microlitri del brodo in un pozzo nella piastra del pozzo. Registrare quali campioni sono andati in ogni pozzo di questa piastra.Impostare il flourometro per raccogliere l'intensità di emissione alla lunghezza d'onda appropriata per la variante RFP. Gli spettri di fluorescenza per una variante RFP rappresentativa mostrano sia il controllo negativo che gli spettri a due diversi livelli di anilite aggiunti. Il segnale fluorescente massimo per la variante RFP utilizzata in questo lavoro è osservato a 575 nanometri.Vengono raccolti dati rappresentativi per lo stesso insieme di soluzioni, sia dallo spettrometro portatile che dal fluorometro. C'è una tendenza generale della fluorescenza che aumenta con l'aumentare della concentrazione di anilite. Vale la pena notare che ad alte concentrazioni, superiori a circa 800 parti per miliardo per il sensore di piombo, la risposta diminuisce a causa della tossicità del piombo a una concentrazione così elevata.L'analisi dei campioni di tampone di etanolo dall'interno di un involucro a cartuccia di calibro 40 spento fornisce la prova dei risultati principali. I risultati positivi di ciascuno dei tre batteri del sensore indicano un test positivo per i residui di colpi d'arma da fuoco. I biosensori preparati in questo protocollo possono anche essere utilizzati individualmente per rilevare la contaminazione in campioni alimentari, idrici o ambientali.Questa tecnica apre la strada ai ricercatori per sviluppare biosensori utilizzando tecniche standard di biologia sintetica per una varietà di diversi aniliti chimici. I dispositivi di protezione individuale devono essere indossati e gli analisti devono lavarsi le mani e disinfettare le superfici dopo la manipolazione di E.coli. I rifiuti devono essere autoclavati e tutti i rifiuti contenenti metalli pesanti devono essere trattati di conseguenza.

Research

JoVE Journal

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