Name: high-resolution imaging of nuclear dynamics in live cells under uniaxial tensile strain
Uploaded: 2019-06-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain at JoVE.com

Alle forfattere anerkender taknemmeligt finansieringsstøtte fra den nationale forskningsfond i Singapore gennem Singapore-MIT Alliance for Research and Technology (SMART) BioSystems og Micromechanics (BioSyM) tværfaglige forskningsgruppe. Forfatterne Dr. Jagielska og Dr. van Vliet anerkender også taknemmeligt støtte og støtte fra saks-Kavanaugh Foundation. Forfatterne takker William Ong og Dr. Sing Yian chew fra Nanyang Technological University, Singapore, for at give rotte oligodendrocyt progenitorceller for nogle eksperimenter, der er beskrevet i dette arbejde, og forfatterne takke Dr. G. V. Shivashankar fra Mechanobiology Institute, National University of Singapore, Singapore, med henblik på diskussioner om udsving i nukleare områder.

1. design af enkelt-godt Polydimethylsiloxan skimmelsvamp til høj opløsning Imaging
Bemærk: formen til fremstilling af Polydimethylsiloxan plader er designet med følgende funktioner til at muliggøre billeddannelse med en 100x olie fordybelse linse og en korrekt pasform i Custom-Build stamme enhed (figur 1a, B).
<ol><li>Hold de samlede plade dimensioner således, at det passer i klemmerne af stammen enhed. Bemærk: her er...

<ol>
	<li>Bray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+tension+produced+by+nerve+cells+in+tissue+culture.">Mechanical tension produced by nerve cells in tissue culture.</a> Journal of Cell Science. 410, 391-410 (1979).</li><li>Bray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+growth+in+response+to+experimentally+applied+mechanical+tension.">Axonal growth in response to experimentally applied mechanical tension.</a> Developmental Biology. 389, (1983).</li><li>Van Essen, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tension-based+theory+of+morphogenesis+and+compact+wiring+in+the+central+nervous+system.">A tension-based theory of morphogenesis and compact wiring in the central nervous system.</a> Nature. , (1997).</li><li>Smith, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretch+growth+of+integrated+axon+tracts:+Extremes+and+exploitations.">Stretch growth of integrated axon tracts: Extremes and exploitations.</a> Progress in Neurobiology. 89, 231-239 (2011).</li><li>Cullen, D. K., Simon, C. M., LaPlaca, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+rate-dependent+induction+of+reactive+astrogliosis+and+cell+death+in+three-dimensional+neuronal-astrocytic+co-cultures.">Strain rate-dependent induction of reactive astrogliosis and cell death in three-dimensional neuronal-astrocytic co-cultures.</a> Brain Research. , 103-115 (2011).</li><li>Fisher, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+correlates+of+axonal+swelling+in+chronic+multiple+sclerosis+brains.">Imaging correlates of axonal swelling in chronic multiple sclerosis brains.</a> Annals of Neurology. 2, 219-228 (2007).</li><li>Niki&#263;, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reversible+form+of+axon+damage+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+multiple+sclerosis.">A reversible form of axon damage in experimental autoimmune encephalomyelitis and multiple sclerosis.</a> Nature Medicine. 17, 495-500 (2011).</li><li>Payne, S. C., Bartlett, C. A., Harvey, A. R., Dunlop, S. A., Fitzgerald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+loss+during+chronic+secondary+degeneration+in+rat+optic+nerve.">Functional loss during chronic secondary degeneration in rat optic nerve.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53, (2018).</li><li>Zeiger, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Static+mechanical+strain+induces+capillary+endothelial+cell+cycle+re-entry+and+sprouting.">Static mechanical strain induces capillary endothelial cell cycle re-entry and sprouting.</a> Physical Biology. 13, 1-16 (2017).</li><li>Jagielska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+strain+promotes+oligodendrocyte+differentiation+by+global+changes+of+gene+expression.">Mechanical strain promotes oligodendrocyte differentiation by global changes of gene expression.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 93 (2017).</li><li>Pajerowski, J. D., Dahl, K. N., Zhong, F. L., Sammak, P. J., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+plasticity+of+the+nucleus+in+stem+cell+differentiation.">Physical plasticity of the nucleus in stem cell differentiation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1, 0 (2007).</li><li>Talwar, S., Kumar, A., Rao, M., Menon, G. I., Shivashankar, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlated+spatio-temporal+fluctuations+in+chromatin+compaction+states+characterize+stem+cells.">Correlated spatio-temporal fluctuations in chromatin compaction states characterize stem cells.</a> Biophysical Journal. 104, 553-564 (2013).</li><li>Makhija, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+strain+alters+cellular+and+nuclear+dynamics+at+early+stages+of+oligodendrocyte+differentiation.">Mechanical strain alters cellular and nuclear dynamics at early stages of oligodendrocyte differentiation.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 59 (2018).</li></ol>

En anordning er tidligere1 blevet konstrueret til anvendelse af ekstracellulær trækstyrke på vedklædige celler. Designet af polydimethylsiloxansubstratum i dette arbejde var tilstrækkeligt til biokemiske assays samt lavopløselige billeder af strakte celler. I dette arbejde, under stratum blev redesignet, og en ny Imaging konfiguration, der letter høj opløsning subcellulære levende celle Imaging blev introduceret. Fordelene ved dette system er talrige: det kan bygges in-Lab ved hjælp af e...

Celler og væv i kroppen er udsat for forskellige mekaniske stikord, herunder træk stammer. Men virkningerne af disse stikord på biologi neurale celler er endnu ikke blevet undersøgt udførligt og forstået fuldt ud. I det centrale nervesystem omfatter kilderne til mekanisk belastning udviklings vækst1,2,3,4, fysiologiske processer såsom bøjning af rygmarv, blod og cerebrospinalvæske pulsation, og patologiske tilstande såsom traumer, Axon hævelse, glia ardannelse, eller tumorvækst5,6,7,8. Det er værd at undersøge, hvordan trækstyrke påvirker differentieringen af oligodendrocytter og den efterfølgende myelination af axoner, som er en kritisk proces i det hvirveldyr centrale nervesystem. Ved hjælp af en specialdesignet stamme enhed og elastomer flerhulsplader plader, tidligere værker9,10 har vist, at statisk uniaksial stamme kan øge oligodendrocyt differentiering via globale ændringer i genekspression 10. for at opnå yderligere forståelse af mekanismerne for belastnings mekanismetransduktion i disse celler, skal det foregående forsøgs apparat redesignet som beskrevet her for at muliggøre højopløsnings fluorescens-afbildning af nuklear dynamik i levende celler under pres. Specifikt er en enkelt-brønd Polydimethylsiloxan plade udviklet, og billedbehandlings konfigurationen er redesignet til at give mulighed for time-lapse Imaging af levende celler under belastning ved hjælp af en 100x olie fordybelse linse. For at eliminere de negative optiske virkninger af Polydimethylsiloxan i lysvejen, er cellerne ikke gennem Polydimethylsiloxan-pladen, men i omvendt position, gennem dækglasset, der dækker celle rummet. Ved hjælp af denne nye Imaging design, hundredvis af høj opløsning time-lapse film registreres, af individuelle cellekerner i intakt vedstående celler, hvor kromatin er mærket ved tagging Histon H2B til grøn fluorescerende protein. Disse film viser, at træk stamme inducerer ændringer i kromatin struktur og dynamik, der er i overensstemmelse med progression af oligodendrocyt differentiering.
Levende celle afbildning under påført belastning er teknisk udfordrende og kræver et enheds design, der er kompatibelt med mikroskop systemet. Det brugerdefinerede design, der beskrives her, udgør et billigt alternativ til kommercielle løsninger. Dens dimensioner gør det muligt at installere på mikroskop stadier og levende celle Imaging ved høj rumlig opløsning under anvendt stamme. Billedbehandlings opsætningen er designet til at lette levende celle billeder ved hjælp af en 100x olie fordybelse linse med den højeste klarhed, gennem dækglasset, ikke gennem lag af Polydimethylsiloxan plade, som ellers nedsætter billedkvaliteten og er almindelig i de fleste billedbehandlings opsætninger under belastning. Enheden, med en monteret plade, der indeholder celler, kan også opbevares let i inkubator. Denne enhed er designet til at anvende uniaksial stamme til substrater, der letter vedklædelig cellekultur og opretholder en stabil og ensartet stamme over flere dage. Opsætningen, der beskrives her, kan bruges til højopløselig billedbehandling af forskellige vedhæng ende celletyper under belastning, hvilket gør den anvendelig på mekanisotransduktion undersøgelser inden for mange områder af celle mekaniobiologi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Primary cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Primary Oligodendrocyte Progenitor Cells isolated from Neonatal Rats 
			were provided by Dr. S. Y. Chew&#39;s lab at Nanyang Technological University</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high&#160; glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11996-065-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070-063-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF</td>
			<td>Prospec</td>
			<td>CYT-608-50ug</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGF</td>
			<td>Prospec</td>
			<td>CYT-776-10ug</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media Stock components</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9418-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8783-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5780-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Selenite</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5261-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-iodothyronine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6397-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroxine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1775-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Holo-Transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T0665-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I9278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mold and PDMS plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDMS - Dow Corning Sylgard 184</td>
			<td>Ellsworth</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mold - Liquid Plastic</td>
			<td>Smooth-On</td>
			<td>Smooth Cast 310 - Trail Size</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Substrate Coatings</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>poly-D-lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6407-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1141-2MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histone staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellLigt H2B-GFP BacMam</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>C10594</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surface functionalization</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APTES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A3648-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BS3</td>
			<td>Covachem</td>
			<td>13306-100mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer pH 8.0</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J63578-AK-250ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell detachment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A1110501-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-resolution imaging of nuclear dynamics in live cells under uniaxial tensile strain

Ekstracellulær mekanisk stamme er kendt for at fremkalde celle fænotypiske reaktioner og har fysiologiske relevans i flere vævs systemer. For at indfange effekten af anvendt ekstracellulær træk stamme på cellepopulationer in vitro via biokemiske assays, en anordning er tidligere blevet designet, som kan være fremstillet enkelt og er lille nok til at passe inde væv kultur inkubatorer, samt på toppen af mikroskop stadier. Det tidligere design af Polydimethylsiloxan substrat tillod imidlertid ikke subcellulær billeddannelse i høj opløsning via olie-nedsænkning mål. Dette arbejde beskriver en redesignet geometri af Polydimethylsiloxan substrat og en tilpasset Imaging setup, der tilsammen kan lette høj opløsning subcellulær billeddannelse af levende celler, mens under anvendt belastning. Denne substrat kan bruges med den samme, tidligere designede enhed og dermed har de samme fordele som anført ovenfor, ud over at tillade høj opløsning optisk billedbehandling. Udformningen af Polydimethylsiloxan substrat kan forbedres ved at indarbejde et gitter, som vil lette sporing af samme celle før og efter anvendelsen af stammen. Repræsentative resultater viser høj opløsning tidsforskudt billeddannelse af optælling mærkede kerner i anstrengte celler fanget ved hjælp af den metode, der er beskrevet her. Disse nukleare dynamik data giver indsigt i den mekanisme, som anvendes trækstyrke stamme fremmer differentiering af oligodendrocyte progenitorceller.

Nylige arbejde med henblik på at undersøge effekten af trækstyrke på oligodendrocytter10 viste, at en 10% uniaksial trækstyrke fremmer differentieringen af oligodendrocyt stamceller ved globale ændringer i genekspression. Mekanismen bag disse ændringer i genekspression kan være probed via billeddannelse af subcellulære parametre, såsom cytoskelet struktur, transkription faktor lokalisering, nuklear dynamik, og kromatin organisation. Men den tidligere geom...

Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain at JoVE.com

High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain

High-Resolution Imaging af nuklear dynamik i levende celler under Uniaxial træk stamme

Ved hjælp af en tidligere designet enhed til at anvende mekanisk belastning til vedklædnings celler, dette papir beskriver en redesignet substrat geometri og et tilpasset apparat til høj opløsning enkelt celle billedbehandling af anstrengte celler med en 100x olie fordybelse mål.

Extracellular mechanical strain is known to elicit cell phenotypic responses and has physiological relevance in several tissue systems. To capture the ...

Vi har tidligere designet en anordning til at anvende mekanisk belastning på klæbende celler. I det nuværende arbejde har vi redesignet substratumets geometri og tilpasset opsætningen til billeddannelse i høj opløsning af disse stammeceller. Den største fordel ved dette celle-stretching system er, at det giver en høj opløsning subcellulære billeddannelse på 100x af stammen celler.Demonstration af substratum fabrikation vil være Vicki, en forskningsassistent fra mit laboratorium. Begynd med at designe en enkelt brønd polydimethylsiloxan skimmel ved at følge med i den medfølgende tekstprotokol. Dernæst blandes 20 dele af en polydimethylsiloxan base med en del hærdningsmiddel i en engangskop.Når blandet, placere polydimethylsiloxan mix i et vakuum de-gasser på 0,8 bar i 30 minutter for at fjerne boblerne fra blandingen. Hæld derefter polydimethylsiloxan blandingen i formen og skålen. Fjern eventuelle yderligere bobler på dette tidspunkt ved at afgasning det igen på 0,8 bar vakuum i 30 minutter.Når afgasning er færdig, bag prøverne ved 80 grader Celsius på et nivelleringsbord i to timer. Dernæst forsigtigt fjerne prøverne fra ovnen og lad dem køle ned til stuetemperatur. Skær kanterne med en klinge og forsigtigt skrælle den hærdede polydimethylsiloxan.På 150 millimeter diameter polydimethylsiloxan, tegne en to centimeter med to centimeter gitter med en markør. Inden for hver firkant, tegne en centimeter med en centimeter kvadrat, efterlader en margen på 0,5 centimeter på alle sider. Brug en klinge til forsigtigt at skære langs linjerne og opnå firkantede rum.Dernæst rense prøverne ved at inkubere dem i 100% acetone i fire timer, 100% ethanol i yderligere fire timer, og derefter i autoklaveret vand i fire timer. Placer de rensede prøver på paraffin film backing paper inde i en 150 millimeter diameter plastskål og tør prøven i en 80 grader Celsius ovn i fire timer. Når du er færdig, forsegle retterne med paraffin film og gemme dem i et kølerum indtil videre brug.Forbered stamcelle celler og suspendere dem i spredning medium. Frø disse celler med en massetæthed på 35.000 celler pr. kvadratcentimeter på PDL-belagte plastoverflader. Sænker mængden af spredningsmediet til tre milliliter pr. ti centimeter kvadratisk overfladeareal.En lavere mængde medier kan føre til celleklumpning, som skyldes overfladespændingskræfter, mens en større mængde medier i retterne kan få mediet til at smitte af. På den tredje dag efter såning, høste cellerne og tælle dem ved hjælp af en hæmocytometer. Derefter frø 35, 000 celler pr polydimethylsiloxan plade med 700 mikroliter af spredning medium.Dernæst tilsættes en plasmic konstruktion til mærkning af cellens histone H2B komplekser med grønt fluorescerende protein ved at følge producentens anvisninger. Efter 24 timer monteres polydimethylsiloxanprøverne med celler, der skal strækkes på uniaxial stammeanordningen. Skift derefter mediet i alle prøver til differentieringsmediet.Mål den utrænede cellerumslængde, og drej fasemikrometerskruen for at øge cellerummets længde med den ønskede belastning. Lad de strakte og ustrakte polydimethylsiloxanprøver blive i inkubatoren ved 37 grader Celsius, indtil de er billeddannelse. Forbered mikroskopskuvøsen til levende billeddannelse ved at indstille inkubatortemperaturen til 37 grader Celsius.Dernæst bringe en 100x olie nedsænkning mål til den centrale position, da målet turnit ikke vil være tilgængelig senere. Når målet er på plads, skrues målet af og skrues det sammen med en objektiv ring, så målet kan bringes tættere på cellerne. Derefter tilføje en dråbe olie til målet.Ved hjælp af en specialtrykt holder skal holderen belægges med vakuumfedt i periferien af vinduet, og der sættes en glasdæksling af tal uden tykkelse på holderens øverste overflade. Tape plast vinduet på mikroskop scenen. Dernæst skrue en Z oversættelse fase på mikroskop scenen og flytte den til den øverste Z position.Fjern 500 mikroliter af mediet fra den strakte polydimethylsiloxan plade, der skal afbildes, og tilsæt dette medium på glasdækslæbet i det hvide plastvindue. Brug derefter et par sterile pincet til omhyggeligt at frigøre det firkantede rum fra polydimethylsiloxan pladen. Hold belastningsanordningen i opretstående stilling, så cellerne vender opad, over det hvide plastvindue, og inverter forsigtigt belastningsanordningen, så eventuelle ekstra medium falder direkte i midten af glasdækslæbet med cellerne nedad.Placer den nederste del af belastningsenheden på Z-oversættelsesfasen ved hjælp af dobbeltsidet tape for at holde den på plads. Mens man ser gennem okularet under lyse-felt, meget langsomt bringe stammen enheden ned og flytte målet op for at fokusere på cellerne. Udfør dette fokustrin langsomt, skiftevis mellem sænkning af Z oversættelsesfasen og forhøjelse af målet.Hvis Z oversættelse fase sænker for meget, cellerne kunne komprimere og dermed dø. Hvis vi hæver målet for højt, kan det bryde glasdækslædet og få mediet til at lække. Scan polydimethylsiloxan plade i X og Y retninger for at finde en celle, der har en fluorescerende kerne, ved hjælp af epiflorescens ved 488 nanometer excitation.Sørg også for, at cellen har en passende morfologi, når man ser på prøven under lys-felt. Optag store eller åbne hulbilleder af kernen med 488 nanometer af bølgelængde excitation og af cellen med lyse felt excitation på 30-sekunders intervaller pr ramme for en samlet varighed på mindst 30 minutter. Den nydesignede geometri af polydimethylsiloxan substratum og billeddannelse setup vist i denne video minimerer afstanden mellem cellerne og målet.Dette muliggør time-lapse-billeddannelse af fluorescerende mærkede cellekerner ved hjælp af et 100x olienedsækningsmål. For at måle de nukleare udsving, første plot det nukleare område versus tid. Derefter skal du afstyre dataene ved hjælp af en tredje ordens polynomial.Og endelig afbilde resterende udsving og beregne standardafvigelsen for de resterende udsving. De nukleare udsving i oligodendrocytægenitorcellerne efter kemisk induktion af differentiering med og uden en trækstamme på 10 % viser, at ved kemisk induktion alene viste amplituden af nukleare udsving et betydeligt fald ved 48 timer, men ikke efter 24 timer. På den anden side viste kemisk induktion sammen med en 10% trækspænding et betydeligt fald ved 24 timer, som forblev konstant uden yderligere reduktion ved 48 timer.Det vigtigste at huske er, at arbejdsafstanden for det valgte mål skal være lig med eller større end dybden af cellerummet plus tykkelsen af dækslæden. Substratet kan redesignes til at indeholde et gitter, som ville lette billeddannelse den samme celle før og efter anvendelse af stamme, da en før og efter type datasæt reducerer støj, der kommer fra eksperimentelle fejl. Ved hjælp af denne billeddannelse setup, mange subcellulære fænomener i klæbende levende celler, såsom protein lokalisering eller dynamik af cellulære komponenter, kan afbildes inden for få sekunder efter anvendelse af den mekaniske stamme.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

Many biological and clinical studies require the longitudinal study and analysis of morphology and function with cellular level resolution.  ...

High Resolution 3D Imaging of Ex-Vivo Biological Samples by Micro CT

High Resolution 3D Imaging of Ex-Vivo Biological Samples by Micro CT

Non-destructive volume visualization can be achieved only by tomographic techniques, of which the most efficient is the x-ray micro computerized ...

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

Live-cell imaging at migrere celler, der udtrykker fluorescens-mærkede Proteiner i en tre-dimensionel Matrix

Traditionally, cell migration has been studied on two-dimensional, stiff plastic surfaces. However, during important biological processes such as wound ...

Continuous High-resolution Microscopic Observation of Replicative Aging in Budding Yeast

Kontinuerlig høj opløsning Mikroskopisk Observation af Replikativ Aging i Spirende Gær

We demonstrate the use of a simple microfluidic setup, in which single budding yeast cells can be tracked throughout their entire lifespan. The ...

Magnetically-Assisted Remote Controlled Microcatheter Tip Deflection under Magnetic Resonance Imaging

Magnetisk Assisted Fjernstyret mikrokateteret Tip Nedbøjning under Magnetic Resonance Imaging

X-ray fluoroscopy-guided  endovascular procedures have several significant limitations, including  difficult catheter navigation and use of ionizing ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

Høj opløsning Spatiotemporal Analyse af receptor Dynamics ved Single-molekyle fluorescensmikroskopi

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

Fra Hurtig fluorescensimagografi til molekylær diffusion lov om levende cellemembraner i en kommerciel mikroskop

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Preparation of Mica Supported Lipid Bilayers for High Resolution Optical Microscopy Imaging

Udarbejdelse af Mica Understøttet lipiddobbeltlagenes for High Resolution optisk mikroskopi Imaging

Supported lipid bilayers (SLBs) are widely used as a model for studying membrane properties (phase separation, clustering, dynamics) and its interaction ...

Live Cell Imaging during Mechanical Stretch

Live-Cell Imaging under Mechanical Stretch

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in ...

Initial Evaluation of Antibody-conjugates Modified with Viral-derived Peptides for Increasing Cellular Accumulation and Improving Tumor Targeting

Indledende vurdering af antistof-konjugater modificeret med Viral-afledte peptider til at øge cellulære ophobning og forbedring af Tumor målretning

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used ...