Name: high-resolution imaging of nuclear dynamics in live cells under uniaxial tensile strain
Uploaded: 2019-06-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain at JoVE.com

Alle forfatterne takknemlig erkjenner finansiering støtte fra National Research Foundation i Singapore gjennom Singapore-MIT Alliance for forskning og teknologi (SMART) BioSystems og Mikromekanikk (BioSyM) tverrfaglig forskergruppe. Forfattere Dr. Jagielska og Dr. Van Vliet også takknemlig erkjenner finansiering og støtte fra saks-Kavanaugh Foundation. Forfatterne takker William Ong og Dr. Sing Yian chew fra Nanyang Technological University, Singapore, for å gi rotte oligodendrocyte stamceller for noen eksperimenter beskrevet i dette arbeidet, og forfatterne takker Dr. G. V. Shivashankar fra Mechanobiology Institute, University of Singapore, Singapore, for diskusjon om kjernefysiske område svingninger.

1. design av single-godt Polydimethylsiloxan mold for høyoppløselig bildebehandling
Merk: formen for produksjon av Polydimethylsiloxan plater er utformet med følgende funksjoner for å muliggjøre bildebehandling med en 100, olje nedsenking linse og en riktig passform i den tilpassede bygge belastningen heten (figur 1a, B).
<ol><li>Hold den totale plate dimensjoner slik at den passer i klemmer av belastningen enheten. Merk...

<ol>
	<li>Bray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+tension+produced+by+nerve+cells+in+tissue+culture.">Mechanical tension produced by nerve cells in tissue culture.</a> Journal of Cell Science. 410, 391-410 (1979).</li><li>Bray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+growth+in+response+to+experimentally+applied+mechanical+tension.">Axonal growth in response to experimentally applied mechanical tension.</a> Developmental Biology. 389, (1983).</li><li>Van Essen, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tension-based+theory+of+morphogenesis+and+compact+wiring+in+the+central+nervous+system.">A tension-based theory of morphogenesis and compact wiring in the central nervous system.</a> Nature. , (1997).</li><li>Smith, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretch+growth+of+integrated+axon+tracts:+Extremes+and+exploitations.">Stretch growth of integrated axon tracts: Extremes and exploitations.</a> Progress in Neurobiology. 89, 231-239 (2011).</li><li>Cullen, D. K., Simon, C. M., LaPlaca, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+rate-dependent+induction+of+reactive+astrogliosis+and+cell+death+in+three-dimensional+neuronal-astrocytic+co-cultures.">Strain rate-dependent induction of reactive astrogliosis and cell death in three-dimensional neuronal-astrocytic co-cultures.</a> Brain Research. , 103-115 (2011).</li><li>Fisher, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+correlates+of+axonal+swelling+in+chronic+multiple+sclerosis+brains.">Imaging correlates of axonal swelling in chronic multiple sclerosis brains.</a> Annals of Neurology. 2, 219-228 (2007).</li><li>Niki&#263;, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reversible+form+of+axon+damage+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+multiple+sclerosis.">A reversible form of axon damage in experimental autoimmune encephalomyelitis and multiple sclerosis.</a> Nature Medicine. 17, 495-500 (2011).</li><li>Payne, S. C., Bartlett, C. A., Harvey, A. R., Dunlop, S. A., Fitzgerald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+loss+during+chronic+secondary+degeneration+in+rat+optic+nerve.">Functional loss during chronic secondary degeneration in rat optic nerve.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53, (2018).</li><li>Zeiger, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Static+mechanical+strain+induces+capillary+endothelial+cell+cycle+re-entry+and+sprouting.">Static mechanical strain induces capillary endothelial cell cycle re-entry and sprouting.</a> Physical Biology. 13, 1-16 (2017).</li><li>Jagielska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+strain+promotes+oligodendrocyte+differentiation+by+global+changes+of+gene+expression.">Mechanical strain promotes oligodendrocyte differentiation by global changes of gene expression.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 93 (2017).</li><li>Pajerowski, J. D., Dahl, K. N., Zhong, F. L., Sammak, P. J., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+plasticity+of+the+nucleus+in+stem+cell+differentiation.">Physical plasticity of the nucleus in stem cell differentiation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1, 0 (2007).</li><li>Talwar, S., Kumar, A., Rao, M., Menon, G. I., Shivashankar, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlated+spatio-temporal+fluctuations+in+chromatin+compaction+states+characterize+stem+cells.">Correlated spatio-temporal fluctuations in chromatin compaction states characterize stem cells.</a> Biophysical Journal. 104, 553-564 (2013).</li><li>Makhija, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+strain+alters+cellular+and+nuclear+dynamics+at+early+stages+of+oligodendrocyte+differentiation.">Mechanical strain alters cellular and nuclear dynamics at early stages of oligodendrocyte differentiation.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 59 (2018).</li></ol>

En enhet har tidligere1 blitt designet for anvendelse av ekstracellulære strekk belastning på tilhenger celler. Utformingen av Polydimethylsiloxan undergrunnen i dette arbeidet var tilstrekkelig for biokjemiske analyser, samt lav oppløsning Imaging av strukket celler. I dette arbeidet, undergrunnen ble redesignet, og en roman Imaging konfigurasjon som forenkler høyoppløselig subcellulære Live celle Imaging ble innført. Fordelene med dette systemet er mange: det kan bygges i laboratoriet ved...

Celler og vev i kroppen er utsatt for ulike mekaniske signaler, inkludert strekk stammer. Men effekten av disse signalene på biologi av nevrale celler ennå ikke er studert grundig og forstått fullt. I det sentrale nervesystemet er kilder til mekanisk belastning inkludert utviklings vekst1,2,3,4, fysiologiske prosesser som for eksempel ryggmargen bøying, blod og spinalvæske pulsering, og patologiske tilstander som traumer, axon hevelse, gliacellene arrdannelse, eller tumor vekst5,6,7,8. Det er verdt å undersøke hvordan strekk belastningen påvirker differensiering av oligodendrocytes og den påfølgende myelination av axons, som er en kritisk prosess i virveldyr sentralnervesystemet. Ved hjelp av en spesialdesignet strekk enhet og elastomer multiwell plater, tidligere arbeider9,10 har vist at statisk uniaxial belastning kan øke oligodendrocyte differensiering via globale endringer i genuttrykk 10. for å få ytterligere forståelse av mekanismene for strekk mechanotransduction i disse cellene, må det tidligere eksperimentelle apparatet være redesignet som beskrevet her, for å muliggjøre høyoppløselig fluorescens avbildning av kjernefysisk dynamikk i levende celler under belastning. Nærmere bestemt, en enkelt-brønn Polydimethylsiloxan plate er utviklet, og Imaging konfigurasjonen er redesignet for å tillate tid-lapse Imaging av levende celler under belastning ved hjelp av en 100% olje nedsenking linse. For å eliminere de negative optiske effektene av Polydimethylsiloxan i lys veien, blir cellene avbildet ikke gjennom Polydimethylsiloxan platen, men i den omvendte posisjonen, gjennom dekkglasset som dekker celle rommet. Ved hjelp av denne nye Imaging design, hundrevis av høy oppløsning time-lapse filmer er registrert, av individuelle cellekjerner innenfor intakt tilhenger celler, der kromatin er merket med merking histone H2B til grønt fluorescerende protein. Disse filmene viser at strekk belastningen induserer endringer i kromatin struktur og dynamikk som er i samsvar med progresjon av oligodendrocyte differensiering.
Live celle avbildning under anvendt belastning er teknisk utfordrende og krever en enhetsutforming som er kompatibel med mikroskop systemet. Den tilpassede designen er beskrevet her presenterer et billig alternativ til kommersielle løsninger. Dens dimensjoner aktivere sin installasjon på mikroskop stadier og live celle Imaging ved høy romlig oppløsning under anvendt belastning. Bildebehandlings oppsettet er utformet for å muliggjøre levende celle bilde ved hjelp av en 100% olje nedsenking linse med den høyeste klarhet, gjennom dekselet glass, ikke gjennom laget av Polydimethylsiloxan plate som ellers reduserer bildekvaliteten og er vanlig i de fleste Bildeoppsett under belastning. Enheten, med en montert plate som inneholder celler, kan også lagres lett i inkubator. Denne enheten er utformet for å påføre uniaxial belastning på substrata som letter tilhenger cellekultur og opprettholder en stabil og ensartet belastning over flere dager. Oppsettet som er beskrevet her kan brukes for høyoppløselig bildebehandling av ulike tilhenger celletyper under belastning, noe som gjør det aktuelt å mechanotransduction studier i mange felt av celle mechanobiology.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Primary cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Primary Oligodendrocyte Progenitor Cells isolated from Neonatal Rats 
			were provided by Dr. S. Y. Chew&#39;s lab at Nanyang Technological University</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high&#160; glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11996-065-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070-063-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF</td>
			<td>Prospec</td>
			<td>CYT-608-50ug</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGF</td>
			<td>Prospec</td>
			<td>CYT-776-10ug</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media Stock components</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9418-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8783-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5780-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Selenite</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5261-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-iodothyronine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6397-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroxine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1775-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Holo-Transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T0665-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I9278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mold and PDMS plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDMS - Dow Corning Sylgard 184</td>
			<td>Ellsworth</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mold - Liquid Plastic</td>
			<td>Smooth-On</td>
			<td>Smooth Cast 310 - Trail Size</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Substrate Coatings</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>poly-D-lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6407-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1141-2MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histone staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellLigt H2B-GFP BacMam</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>C10594</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surface functionalization</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APTES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A3648-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BS3</td>
			<td>Covachem</td>
			<td>13306-100mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer pH 8.0</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J63578-AK-250ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell detachment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A1110501-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-resolution imaging of nuclear dynamics in live cells under uniaxial tensile strain

Ekstracellulære mekaniske belastninger er kjent for å lokke fram celle fenotypiske svar og har fysiologisk relevans i flere vev systemer. For å fange effekten av anvendt ekstracellulære strekk belastning på celle populasjoner i vitro via biokjemiske analyser, en enhet har tidligere blitt utformet som kan fabrikkert enkelt og er liten nok til å passe inn i vev kultur inkubatorer, så vel som på toppen av mikroskop etappene. Den tidligere utformingen av Polydimethylsiloxan-undergrunnen tillot imidlertid ikke høyoppløsnings subcellulære avbildning via olje-nedsenking mål. Dette arbeidet beskriver en redesignet geometri av Polydimethylsiloxan undergrunnen og en tilpasset Imaging oppsett som sammen kan forenkle høyoppløselig subcellulære avbildning av levende celler under anvendt belastning. Denne undergrunnen kan brukes med den samme, tidligere utformede enheten, og har derfor de samme fordelene som nevnt ovenfor, i tillegg til å tillate optisk bildebehandling med høy oppløsning. Utformingen av Polydimethylsiloxan undergrunnen kan forbedres ved å innlemme et rutenett som vil lette å spore den samme cellen før og etter påføring av belastningen. Representative resultater demonstrere høyoppløselig time-lapse Imaging av fluorescensmerkete merket kjerner innenfor anstrengt celler tatt ved hjelp av metoden beskrevet her. Disse kjernefysiske dynamikk data gir innsikt i mekanismen som brukes strekk belastning fremmer differensiering av oligodendrocyte stamceller.

Nyere arbeid med sikte på å undersøke effekten av strekk belastningen på oligodendrocytes10 viste at en 10% uniaxial strekk belastning fremmer differensiering av oligodendrocyte stamceller ved globale endringer i genuttrykk. Mekanismen bak disse endre inne gen gjengivelsen kan analysert via det tenkelig av subcellulære parameterene, som det cytoskeleton struktur, transkripsjon faktoren lokaliseringen, atomer dynamikk, og kromatin organisasjon. Den forrige geom...

Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain at JoVE.com

High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain

Høyoppløselig bilde av Nuclear Dynamics i levende celler under Uniaxial strekk belastning

Ved hjelp av en tidligere konstruert enhet for å bruke mekanisk belastning på tilhenger celler, beskriver dette papiret en redesignet undergrunnen geometri og et tilpasset apparat for høyoppløselig enkelt celle bilde av anstrengte celler med en 100-og olje nedsenking objektiv.

Extracellular mechanical strain is known to elicit cell phenotypic responses and has physiological relevance in several tissue systems. To capture the ...

Vi har tidligere designet en enhet for å bruke mekanisk belastning på tilslutningsceller. I det nåværende arbeidet har vi redesignet geometrien til substratet og tilpasset oppsettet for høyoppløselig avbildning av disse stammecellene. Den største fordelen med dette cellestrekksystemet er at det gir en høyoppløselig subcellulær bildebehandling ved 100x av stammecellene.Demonstrerte substratum fabrikasjonen vil være Vicki, en forskningsassistent fra laboratoriet mitt. Begynn med å designe en enkeltbrønn polydimetylsiloxane mold ved å følge med i den medfølgende tekstprotokollen. Bland deretter 20 deler av en polydimetylsiloxanebase med en del herdingsmiddel i en engangskopp.Når den er blandet, legg polydimetylsiloxaneblandingen i en vakuumdegasser på 0,8 bar i 30 minutter for å fjerne boblene fra blandingen. Hell deretter polydimetylsiloxaneblandingen i formen og parabolen. Fjern eventuelle ekstra bobler på dette stadiet ved å de-gassing det igjen på 0,8 bar vakuum i 30 minutter.Når avgassing er fullført, bake prøvene på 80 grader Celsius på et utjevningsbord i to timer. Deretter fjerner du prøvene forsiktig fra ovnen og lar dem avkjøles til romtemperatur. Klipp kantene med et blad og skrell forsiktig ut det herdede polydimetylsiloxane.På 150 millimeter diameter polydimetylsiloxane, tegne en to centimeter med to centimeter rutenett med en markør. Innenfor hver firkant, tegn en centimeter med en centimeter kvadrat, og etterlater en margin på 0,5 centimeter på alle sider. Bruk et blad til å forsiktig kutte langs linjene og få firkantede rom.Deretter rengjør prøvene ved å inkubere dem i 100% aceton i fire timer, 100% etanol i ytterligere fire timer, og deretter i autoklavet vann i fire timer. Plasser de rengjorte prøvene på parafinfilmbaksidepapir inne i en plastfat med 150 millimeter diameter og tørk prøven i en 80 graders Celsius-ovn i fire timer. Når du er ferdig, forsegler du oppvasken med parafinfilm og oppbevar dem i et kaldt rom til videre bruk.Forbered stamceller og suspender dem i spredningsmedium. Seed disse cellene med en tetthet på 35 000 celler per kvadratcentimeter på PDL-belagte plastoverflater. Juster volumet av spredningsmediet til tre milliliter per ti centimeter kvadrert av overflateareal.Et lavere volum av medier kan føre til celleklumping, som følge av overflatespenningskrefter, mens et høyere volum av medier i oppvasken kan føre til at mediene søler over. På den tredje dagen etter såing høster du cellene og teller dem ved hjelp av et hemocytometer. Deretter frø 35, 000 celler per polydimetylsiloxane plate med 700 mikroliter av spredning medium.Deretter legger du til en plasmisk konstruksjon for å merke cellens histone H2B-komplekser med grønt fluorescerende protein ved å følge produsentens instruksjoner. Etter 24 timer monterer du polydimetylsiloxane prøvene med celler som skal strekkes på enaksial belastningsenheten. Deretter endrer du mediet i alle prøver til differensieringsmedium.Mål den utrente celleromlengden og vri på trinnmikrometerskruen for å øke celleromlengden med ønsket belastning. La de strukket og ustrekkede polydimetylsiloxane prøvene i inkubatoren ved 37 grader Celsius til avbildning. Forbered mikroskopinkubatoren for levende bildebehandling ved å sette inkubatortemperaturen til 37 grader Celsius.Deretter bringe en 100x olje nedsenking mål til den sentrale posisjonen, som målet turndet vil ikke være tilgjengelig senere. Når du er i posisjon, skru av målet og skru det tilbake sammen med en objektiv ring, slik at målet kan bringes nærmere cellene. Deretter legger du til en dråpe olje til målet.Bruk en spesialtrykt holder til å belegge holderen med vakuumfett i periferien av vinduet og plassere en glassdeksler med null tykkelse på den øverste overflaten av holderen. Tape plastvinduet på mikroskopstadiet. Deretter skrur du et Z-oversettelsestrinn på mikroskopstadiet og flytter det til den øverste Z-posisjonen.Fjern 500 mikroliter av mediet fra den strukket polydimetylsiloxaneplaten som skal avbildes, og legg dette mediet på glassdeksleppet i det hvite plastvinduet. Deretter bruker du et par sterile pinsett til å forsiktig løsne det firkantede rommet fra polydimetylsiloxaneplaten. Hold belastningsenheten i oppreist stilling slik at cellene vender opp, over det hvite plastvinduet og forsiktig inverter belastningsenheten, slik som å la et ekstra medium falle direkte midt i glassdeksleglasset med cellene vendt ned.Plasser den nederste delen av belastningsenheten på Z-oversettelsesstadiet ved hjelp av dobbeltsidig tape for å holde den på plass. Mens du ser gjennom okularet under lyst felt, veldig sakte bringe belastningen enheten ned og flytte målet opp for å fokusere på cellene. Utfør dette fokustrinnet sakte, vekslende mellom å senke Z-oversettelsesstadiet og heving av målet.Hvis Z oversettelsesstadiet senker for mye, kan cellene komprimere og dermed dø. Hvis vi hever målet for høyt, kan det bryte glassdeksleglasset og få mediet til å lekke. Skann polydimetylsiloxaneplaten i X- og Y-retninger for å finne en celle som har en fluorescerende kjerne, ved hjelp av epiflorescens ved 488 nanometer eksitasjon.Kontroller også at cellen har en passende morfologi når du ser på prøven under lyst felt. Ta opp bredfelts- eller åpne pinhole-bilder av kjernen med 488 nanometer bølgelengde eksitasjon og av cellen med bright-field eksitasjon med 30-sekunders intervaller per ramme i en total varighet på minst 30 minutter. Den redesignede geometrien til polydimetylsiloxane-substratet og bildeoppsettet som vises i denne videoen, minimerer avstanden mellom cellene og målet.Dette gjør det mulig å avbilde lysstoffstoffet ved hjelp av et 100x oljenedsenkingsmål. For å måle atomsvingningene, først plotte atomområdet versus tid. Deretter detrend dataene ved hjelp av en tredje-ordre polynom.Og til slutt, plotte restsvingninger og beregne standardavvik for de gjenværende svingningene. De kjernefysiske svingningene i oligodendrocyttstamtamcellene, etter kjemisk induksjon av differensiering med og uten en 10% strekkbelastning, viser at med kjemisk induksjon alene viste amplituden av kjernefysiske svingninger en betydelig reduksjon ved 48 timer, men ikke ved 24 timer. På den annen side viste kjemisk induksjon sammen med en 10% strekkbelastning en betydelig reduksjon ved 24 timer, noe som forble konstant uten ytterligere reduksjon ved 48 timer.Det viktigste å huske er at arbeidsavstanden til det valgte målet skal være lik eller større enn dybden av cellerommet pluss tykkelsen på dekkslippen. Substratet kan redesignes for å innlemme et rutenett, noe som vil lette avbildning av samme celle før og etter påføring av belastning, siden en før og etter type datasett reduserer støyen som kommer fra eksperimentell feil. Ved hjelp av dette bildeoppsettet kan mange subcellulære fenomener i tilhørende levende celler, for eksempel protein lokalisering eller dynamikk av cellulære komponenter, avbildes i løpet av sekunder etter bruk av den mekaniske belastningen.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

Many biological and clinical studies require the longitudinal study and analysis of morphology and function with cellular level resolution.  ...

High Resolution 3D Imaging of Ex-Vivo Biological Samples by Micro CT

High Resolution 3D Imaging of Ex-Vivo Biological Samples by Micro CT

Non-destructive volume visualization can be achieved only by tomographic techniques, of which the most efficient is the x-ray micro computerized ...

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

Live-cell Imaging of Migrering cellene uttrykker fluorescensmerket-merket Proteiner i en tredimensjonal Matrix

Traditionally, cell migration has been studied on two-dimensional, stiff plastic surfaces. However, during important biological processes such as wound ...

Continuous High-resolution Microscopic Observation of Replicative Aging in Budding Yeast

Kontinuerlig høy oppløsning Mikroskopisk Observasjon av replicative Aldring i Spirende Gjær

We demonstrate the use of a simple microfluidic setup, in which single budding yeast cells can be tracked throughout their entire lifespan. The ...

Magnetically-Assisted Remote Controlled Microcatheter Tip Deflection under Magnetic Resonance Imaging

Magnetisk pasning Remote Controlled Microcatheter Tips Deflection etter Magnetic Resonance Imaging

X-ray fluoroscopy-guided  endovascular procedures have several significant limitations, including  difficult catheter navigation and use of ionizing ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

Høyoppløselig Spatiotemporal Analyse av Receptor Dynamics av ​​Single-molekyl fluorescens mikroskopi

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

Fra Fast Fluorescens Imaging til Molecular Diffusion Lov om Aktive cellemembraner i et kommersielt mikroskop

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Preparation of Mica Supported Lipid Bilayers for High Resolution Optical Microscopy Imaging

Utarbeidelse av Mica Støttet Lipid bilayers for High Resolution Optical Mikros Imaging

Supported lipid bilayers (SLBs) are widely used as a model for studying membrane properties (phase separation, clustering, dynamics) and its interaction ...

Live Cell Imaging during Mechanical Stretch

Live-Cell Imaging under Mekanisk Stretch

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in ...

Initial Evaluation of Antibody-conjugates Modified with Viral-derived Peptides for Increasing Cellular Accumulation and Improving Tumor Targeting

Innledende vurdering av antistoff-conjugates endret med Viral-avledet peptider for øke mobilnettet akkumulering og forbedre svulst målretting

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used ...