Name: high-resolution imaging of nuclear dynamics in live cells under uniaxial tensile strain
Uploaded: 2019-06-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain at JoVE.com

Alla författare tacksamt erkänner finansiering stöd från National Research Foundation i Singapore genom Singapore-MIT Alliance för forskning och teknik (SMART) bio Systems och Micromekanik (BioSyM) tvärvetenskaplig forskar grupp. Författarna Dr. Jagielska och Dr van Vliet också tacksamt erkänna finansiering och stöd från Saks-Kavanaugh stiftelsen. Författarna tackar William Ong och Dr Sing Yian Chew från Nanyang Technological University, Singapore, för att ge råtta oligodendrocyte progenitorceller för vissa experiment som beskrivs i detta arbete, och författarna tackar Dr G. V. Shivashankar från Mechanobiology Institute, National University of Singapore, Singapore, för diskussioner om fluktuationer i kärn krafts området.

1. design av enkel-och Polydimetylsiloxan mögel för hög upplöst avbildning
Anmärkning: formen för tillverkning av Polydimetylsiloxan plattor är utformad med följande funktioner för att möjliggöra avbildning med en 100x olja nedsänkning objektiv och en korrekt pass form i den anpassade bygga stam enhet (figur 1a, B).
<ol><li>Håll den totala plattan dimensioner så att den passar i klämmorna på stammen anordningen.<...

<ol>
	<li>Bray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+tension+produced+by+nerve+cells+in+tissue+culture.">Mechanical tension produced by nerve cells in tissue culture.</a> Journal of Cell Science. 410, 391-410 (1979).</li><li>Bray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+growth+in+response+to+experimentally+applied+mechanical+tension.">Axonal growth in response to experimentally applied mechanical tension.</a> Developmental Biology. 389, (1983).</li><li>Van Essen, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tension-based+theory+of+morphogenesis+and+compact+wiring+in+the+central+nervous+system.">A tension-based theory of morphogenesis and compact wiring in the central nervous system.</a> Nature. , (1997).</li><li>Smith, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretch+growth+of+integrated+axon+tracts:+Extremes+and+exploitations.">Stretch growth of integrated axon tracts: Extremes and exploitations.</a> Progress in Neurobiology. 89, 231-239 (2011).</li><li>Cullen, D. K., Simon, C. M., LaPlaca, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain+rate-dependent+induction+of+reactive+astrogliosis+and+cell+death+in+three-dimensional+neuronal-astrocytic+co-cultures.">Strain rate-dependent induction of reactive astrogliosis and cell death in three-dimensional neuronal-astrocytic co-cultures.</a> Brain Research. , 103-115 (2011).</li><li>Fisher, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+correlates+of+axonal+swelling+in+chronic+multiple+sclerosis+brains.">Imaging correlates of axonal swelling in chronic multiple sclerosis brains.</a> Annals of Neurology. 2, 219-228 (2007).</li><li>Niki&#263;, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reversible+form+of+axon+damage+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+multiple+sclerosis.">A reversible form of axon damage in experimental autoimmune encephalomyelitis and multiple sclerosis.</a> Nature Medicine. 17, 495-500 (2011).</li><li>Payne, S. C., Bartlett, C. A., Harvey, A. R., Dunlop, S. A., Fitzgerald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+loss+during+chronic+secondary+degeneration+in+rat+optic+nerve.">Functional loss during chronic secondary degeneration in rat optic nerve.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53, (2018).</li><li>Zeiger, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Static+mechanical+strain+induces+capillary+endothelial+cell+cycle+re-entry+and+sprouting.">Static mechanical strain induces capillary endothelial cell cycle re-entry and sprouting.</a> Physical Biology. 13, 1-16 (2017).</li><li>Jagielska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+strain+promotes+oligodendrocyte+differentiation+by+global+changes+of+gene+expression.">Mechanical strain promotes oligodendrocyte differentiation by global changes of gene expression.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 93 (2017).</li><li>Pajerowski, J. D., Dahl, K. N., Zhong, F. L., Sammak, P. J., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+plasticity+of+the+nucleus+in+stem+cell+differentiation.">Physical plasticity of the nucleus in stem cell differentiation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1, 0 (2007).</li><li>Talwar, S., Kumar, A., Rao, M., Menon, G. I., Shivashankar, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlated+spatio-temporal+fluctuations+in+chromatin+compaction+states+characterize+stem+cells.">Correlated spatio-temporal fluctuations in chromatin compaction states characterize stem cells.</a> Biophysical Journal. 104, 553-564 (2013).</li><li>Makhija, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+strain+alters+cellular+and+nuclear+dynamics+at+early+stages+of+oligodendrocyte+differentiation.">Mechanical strain alters cellular and nuclear dynamics at early stages of oligodendrocyte differentiation.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 59 (2018).</li></ol>

En enhet har tidigare1 utformats för applicering av extracellulär drag belastning på anhängare celler. Utformningen av polydimetylsiloxanunderlaget i detta arbete var tillräckligt för biokemiska analyser, liksom lågupplösta bilder av utsträckta celler. I detta arbete har under stratum omformats, och en ny avbildning konfiguration som underlättar hög upplöst subcellulär levande cell Imaging infördes. Fördelarna med detta system är många: det kan byggas in-Lab med hjälp av enkla ko...

Celler och vävnader i kroppen utsätts för olika mekaniska LED trådar, inklusive drag stammar. Emellertid, effekterna av dessa signaler på biologi neurala celler har ännu inte studerats utförligt och förstås fullt ut. I centrala nerv systemet, källor av mekanisk stam inkluderar utvecklings tillväxt1,2,3,4, fysiologiska processer såsom ryggmärgs böjning, blod och cerebrospinalvätska Pulsation, och patologiska tillstånd såsom trauma, Axon svullnad, gliaceller ärr bildning, eller tumör tillväxt5,6,7,8. Det är värt att undersöka hur drag hållfasthet påverkar differentieringen av oligodendrocyter och den efterföljande myelinisering av axoner, vilket är en kritisk process i ryggradsdjur centrala nerv systemet. Med hjälp av en specialdesignad stam enhet och elastomer multispot-plattor har tidigare arbeten9,10 visat att statisk enaxial stam kan öka oligodendrocytdifferentiering genom globala förändringar i gen uttryck 10. för att ytterligare förstå mekanismerna för stammechanotransduktion i dessa celler, måste den tidigare experimentella apparaten omformas enligt beskrivningen här, för att möjliggöra hög upplöst fluorescensavbildning av nukleär dynamik i levande celler under stam. Specifikt, en enda brunn Polydimetylsiloxan plattan är utvecklad, och Imaging konfigurationen är omgjorda för att möjliggöra tid-lapse Imaging av levande celler under stam med hjälp av en 100x olja nedsänkning lins. För att eliminera de negativa optiska effekterna av Polydimetylsiloxan i ljuset vägen, celler avbildas inte genom Polydimetylsiloxan plattan, men i omvänd position, genom täckglaset som täcker cell utrymmet. Med hjälp av denna nya Imaging design, hundratals högupplösta time-lapse filmer spelas in, av enskilda cell kärnor inom intakt anhängare celler, där kromatin är märkt med märkning Histon H2B till grönt fluorescerande protein. Dessa filmer visar att drag hållfasthet inducerar förändringar i kromatin struktur och dynamik som är förenliga med utvecklingen av oligodendrocyte differentiering.
Live cell Imaging under tillämpad stam är tekniskt utmanande och kräver en anordning design som är kompatibel med Mikroskop systemet. Den anpassade designen som beskrivs här utgör ett billigt alternativ till kommersiella lösningar. Dess dimensioner möjliggör dess installation på Mikroskop stadier och levande cell avbildning vid hög rumslig upplösning under tillämpad stam. Den Imaging setup är utformad för att under lätta levande cell Imaging med en 100x olja nedsänkning lins med högsta klarhet, genom täckglaset, inte genom skiktet av Polydimetylsiloxan plattan som annars minskar bild kvaliteten och är vanligt i de flesta bild uppställningar under belastning. Enheten, med en monterad platta som innehåller celler, kan också enkelt förvaras i inkubator. Denna enhet är utformad för att tillämpa enaxiell stam till substrat som underlättar vid häftande cell kultur och bibehålla en stabil och enhetlig belastning under flera dagar. Den inställning som beskrivs här kan användas för hög upplöst avbildning av olika anhängare cell typer under stam, vilket gör den tillämplig på mechanotransduction studier inom många områden av cellmechanobiology.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Primary cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Primary Oligodendrocyte Progenitor Cells isolated from Neonatal Rats 
			were provided by Dr. S. Y. Chew&#39;s lab at Nanyang Technological University</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high&#160; glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11996-065-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070-063-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGF</td>
			<td>Prospec</td>
			<td>CYT-608-50ug</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGF</td>
			<td>Prospec</td>
			<td>CYT-776-10ug</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Media Stock components</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9418-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8783-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5780-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Selenite</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5261-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-iodothyronine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6397-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thyroxine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1775-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Holo-Transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T0665-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I9278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mold and PDMS plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDMS - Dow Corning Sylgard 184</td>
			<td>Ellsworth</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mold - Liquid Plastic</td>
			<td>Smooth-On</td>
			<td>Smooth Cast 310 - Trail Size</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Substrate Coatings</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>poly-D-lysine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6407-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1141-2MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histone staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellLigt H2B-GFP BacMam</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>C10594</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surface functionalization</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APTES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A3648-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BS3</td>
			<td>Covachem</td>
			<td>13306-100mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer pH 8.0</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J63578-AK-250ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell detachment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A1110501-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-resolution imaging of nuclear dynamics in live cells under uniaxial tensile strain

Extracellulär mekanisk stam är känd för att framkalla cell fenotypisk respons och har fysiologisk relevans i flera vävnads system. För att fånga effekten av tillämpad extracellulär drag belastning på cell populationer in vitro via biokemiska analyser, har en enhet tidigare utformats som kan tillverkas enkelt och är tillräckligt liten för att passa inuti vävnad kultur inkubatorer, samt ovanpå och Mikroskop stadier. Emellertid, den tidigare utformningen av Polydimetylsiloxan underlaget tillät inte hög upplöst subcellulär avbildning via oljeimmersion mål. Detta arbete beskriver en omdesignad geometri av Polydimetylsiloxan underlaget och en anpassad avbildning inställning som tillsammans kan under lätta hög upplöst subcellulär avbildning av levande celler under tillämpad stam. Denna underlaget kan användas med samma, tidigare konstruerade enheten och därmed har samma fördelar som anges ovan, förutom att tillåta hög upplöst optisk avbildning. Utformningen av Polydimetylsiloxan underlaget kan förbättras genom att införliva ett rutnät som kommer att under lätta spårning av samma cell före och efter applicering av stam. Representativa resultat visar hög upplöst time-lapse Imaging av fluorescensmarkerade märkta kärnor inom ansträngda celler fångas med hjälp av den metod som beskrivs här. Dessa nukleära dynamik data ger insikter i mekanismen genom vilken tillämpade drag hållfasthet främjar differentiering av oligodendrocyte stamceller.

Senaste arbetet med att undersöka effekten av drag belastning på oligodendrocyter10 visade att en 10% enaxiell drag hållfasthet främjar differentiering av oligodendrocyte stamceller genom globala förändringar i gen uttryck. Mekanismen bakom dessa förändringar i gen uttryck kan probed via avbildning av subcellulära parametrar, såsom cytoskelettet struktur, transkription faktor lokalisering, nukleär dynamik, och kromatin organisation. Emellertid, den tidig...

Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain at JoVE.com

High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain

Hög upplöst avbildning av Kärndynamik i levande celler under Enaxiell drag belastning

Med hjälp av en tidigare utformad enhet för att tillämpa mekanisk påfrestning på anhängare celler, beskriver detta papper en omdesignad underlaget geometri och en anpassad apparat för hög upplöst Single-cell Imaging av ansträngda celler med en 100x olja nedsänkning mål.

Extracellular mechanical strain is known to elicit cell phenotypic responses and has physiological relevance in several tissue systems. To capture the ...

Vi har tidigare utformat en anordning för att applicera mekanisk stam på vidhäftande celler. I det nuvarande arbetet har vi gjort om substratums geometri och anpassat uppställningen för högupplöst avbildning av dessa stamceller. Den största fördelen med detta cell-stretching system är att det ger en högupplöst subcellulär avbildning vid 100x av stammen celler.Demonstrera substratum tillverkning kommer att Vicki, en forskningsassistent från mitt labb. Börja med att utforma en enda-väl polydimetylsiloxan mögel genom att följa med i den medföljande textprotokoll. Blanda därefter 20 delar av en polydimetylsiloxanbas med en del härdningsmedel i en engångskopp.När de har blandat, placera polydimetylsiloxan mix i ett vakuum de-gasser på 0,8 bar i 30 minuter för att ta bort bubblorna från mixen. Häll sedan polydimetylsiloxan blanda i formen och skålen. Ta bort eventuella ytterligare bubblor i detta skede genom att avgasa den igen vid 0,8 bar vakuum i 30 minuter.När avgasningen är klar, baka proverna i 80 grader Celsius på ett utjämningsbord i två timmar. Därefter försiktigt bort proverna från ugnen och låt dem svalna till rumstemperatur. Skär kanterna med ett blad och skala försiktigt ut den härdade polydimetylsiloxan.På 150 millimeter diameter polydimetylsiloxan, rita en två centimeter med två centimeter rutnät med en markör. Inom varje ruta, rita en centimeter med en centimeter kvadrat, lämnar en marginal på 0,5 centimeter på alla sidor. Använd ett blad för att försiktigt skära längs linjerna och få fyrkantiga fack.Därefter rengör du proverna genom att inkubera dem i 100%aceton i fyra timmar, 100%etanol i ytterligare fyra timmar, och sedan i autoklaverat vatten i fyra timmar. Placera de rengjorda proverna på paraffinfilmundertappningspapper inuti en plastskål med 150 millimeters diameter och torka provet i en 80 graders Celsius-ugn i fyra timmar. När du är klar, försegla disken med paraffin film och förvara dem i ett kallt rum tills vidare användning.Förbered stamceller och suspendera dem i proliferationsmedium. Utsäde dessa celler vid en densitet av 35, 000 celler per kvadratcentimeter på PDL-belagd plast ytor. Justera volymen av proliferationsmediet till tre milliliter per tio centimeter i kvadrat av yta.En lägre medievolym kan leda till cellklumpning, som uppstår på grund av ytspänningskrafter, medan en högre volym av media i disken kan få media att spilla över. På den tredje dagen efter sådd, skörda cellerna och räkna dem med hjälp av en hemocytometer. Sedan, frö 35, 000 celler per polydimetylsiloxan platta med 700 mikroliter av spridning medium.Lägg sedan till en plasmic konstruktion för att märka cellens histon H2B-komplex med grönt fluorescerande protein genom att följa tillverkarens instruktioner. Efter 24 timmar montera polydimetylsiloxanproverna med celler som ska sträckas på enheten för uniaxiala påfrestningar. Sedan, ändra mediet i alla prover till differentiering medium.Mät den otränade cellfackets längd och vrid stegmikrometerskruven för att öka cellfackets längd med önskad mängd stam. Lämna de sträckta och osträckta polydimetylsiloxanproverna i inkubatorn vid 37 grader Celsius tills avbildningen. Förbered mikroskopinkubatorn för liveavbildning genom att ställa inkubatortemperaturen till 37 grader Celsius.Därefter, ta en 100x oljebad mål till den centrala positionen, eftersom den objektiva turnit inte kommer att vara tillgänglig senare. Väl i läge, skruva loss målsättningen och skruva ihop det igen med en objektiv ring, så att målet kan föras närmare cellerna. Tillsätt sedan en droppe olja till målet.Med hjälp av en egentryckt hållare, täck hållaren med vakuumfett i fönsterets periferi och placera ett antal noll tjockleksglasöverdrag på hållarens översta yta. Tejpa fast plastfönstret på mikroskopstadiet. Därefter skruva en Z översättning skede på mikroskopet scenen och flytta den till den översta Z-position.Ta bort 500 mikroliter av mediet från den utsträckta polydimetylsiloxanplattan som ska avbildas, och lägg till detta medium på glasöverdrag i det vita plastfönstret. Använd sedan ett par sterila pincett för att försiktigt lossa det fyrkantiga facket från polydimetylsiloxanplattan. Håll stamanordningen i upprätt läge så att cellerna är vända uppåt, ovanför det vita plastfönstret och vänd försiktigt på stamanordningen, så att eventuella extra medium sjunker direkt i mitten av glasöverdrag med cellerna nedåtvända.Placera den nedre delen av sila enheten på Z översättning skede med dubbelsidig tejp för att hålla den på plats. Medan du tittar genom okularet under bright-field, mycket långsamt få stammen enheten ner och flytta målet upp för att fokusera på cellerna. Utför detta fokuseringssteg långsamt, alternerande mellan sänkning av Z-översättningsstadiet och höjning av målsättningen.Om Z översättningsstadiet sänker för mycket, cellerna kunde komprimera och därmed dö. Om vi höjer målet för högt, kan det bryta glaset täck och orsaka mediet att läcka. Skanna polydimetylsiloxanplattan i X- och Y-riktningar för att hitta en cell som har en fluorescerande kärna, med hjälp av epiflorescence vid 488 nanometers excitation.Se också till att cellen har en lämplig morfologi när man tittar på provet under bright-field. Spela in bilder med bredfälts- eller öppet hål av kärnan med 488 nanometer våglängdsexcitation och av cellen med ljusfältsexcitation med 30-sekundersintervall per bildruta under en sammanlagd varaktighet av minst 30 minuter. Den omgjorda geometrin hos substratum för polydimetylsiloxan och avbildningsupplägget som visas i den här videon minimerar avståndet mellan cellerna och målsättningen.Detta möjliggör time-lapse imaging av fluorescerande märkt cellkärnor med hjälp av en 100x olja nedsänkning mål. För att mäta de nukleära fluktuationerna, rita först kärnområdet kontra tiden. Sedan detrend data med hjälp av en tredje ordningens polynom.Och slutligen, rita resterande fluktuationer och beräkna standardavvikelse av de restfluktuationer. De nukleära fluktuationer av oligodendrocyte stamceller, efter kemisk induktion av differentiering med och utan en 10%drag stam, visar att med kemisk induktion ensam, amplituden av nukleära fluktuationer visade en betydande minskning på 48 timmar, men inte vid 24 timmar. Å andra sidan visade kemisk induktion tillsammans med en 10%dragbelastning en signifikant minskning vid 24 timmar, som förblev konstant utan ytterligare minskning vid 48 timmar.Det viktigaste att komma ihåg är att arbetsavståndet för det valda målet ska vara lika med eller större än cellutrymmets djup plus täckstjockleken. Substratum kan omformas för att införliva ett rutnät, vilket skulle underlätta bildbehandling samma cell före och efter tillämpning av stam, eftersom en före och efter typ av datauppsättning minskar bullret som kommer från experimentella fel. Med hjälp av denna bildframställning kan många subcellulära fenomen inom vidhäftande levande celler, såsom proteinlokalisering eller dynamik hos cellulära komponenter, avbildas inom några sekunder efter att de använt den mekaniska stammen.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

Högupplöst Fiberoptiska Microendoscopy för På plats Cellular Imaging

Many biological and clinical studies require the longitudinal study and analysis of morphology and function with cellular level resolution.  ...

High Resolution 3D Imaging of Ex-Vivo Biological Samples by Micro CT

High Resolution 3D Imaging of Ex-Vivo Biological Samples by Micro CT

Hög upplösning 3D-avbildning av Ex vivo Biological Samples av Micro CT

Non-destructive volume visualization can be achieved only by tomographic techniques, of which the most efficient is the x-ray micro computerized ...

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

Live-cell imaging att migrera celler som uttrycker fluorescerande-taggade proteiner i en tredimensionell matris

Traditionally, cell migration has been studied on two-dimensional, stiff plastic surfaces. However, during important biological processes such as wound ...

Continuous High-resolution Microscopic Observation of Replicative Aging in Budding Yeast

Kontinuerlig Högupplöst mikroskopisk observation av Replikativ Aging i knoppande jäst

We demonstrate the use of a simple microfluidic setup, in which single budding yeast cells can be tracked throughout their entire lifespan. The ...

Magnetically-Assisted Remote Controlled Microcatheter Tip Deflection under Magnetic Resonance Imaging

Magnetiskt Assisted Remote Controlled mikrokateter Tips Nedböjning under Magnetic Resonance Imaging

X-ray fluoroscopy-guided  endovascular procedures have several significant limitations, including  difficult catheter navigation and use of ionizing ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

Högupplöst Spatiotemporal Analys av Receptor Dynamics av ​​Single-molekyl fluorescensmikroskopi

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

Från Snabb fluorescens avbildning till molekylär diffusion lagen om Live cellmembran i en kommersiell mikroskop

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Preparation of Mica Supported Lipid Bilayers for High Resolution Optical Microscopy Imaging

Beredning av Mica stöds lipidbiskikten för högupplöst optisk mikroskopi Imaging

Supported lipid bilayers (SLBs) are widely used as a model for studying membrane properties (phase separation, clustering, dynamics) and its interaction ...

Live Cell Imaging during Mechanical Stretch

Levande cell imaging under mekanisk Stretch

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in ...

Initial Evaluation of Antibody-conjugates Modified with Viral-derived Peptides for Increasing Cellular Accumulation and Improving Tumor Targeting

Första utvärdering av antikropp-konjugat modifierad med Viral-derived peptider för att öka cellulära ackumulering och förbättra tumör inriktning

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used ...