Name: generation of 3-d collagen-based hydrogels to analyze axonal growth and behavior during nervous system development
Uploaded: 2019-06-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of 3-D Collagen-based Hydrogels to Analyze Axonal Growth and Behavior During Nervous System Development at JoVE.com

Forfatterne takker Tom Yohannan for den redaktionelle rådgivning og M. Segura-Feliu for den tekniske assistance. Dette arbejde blev finansieret af CERCA-programmet og af Kommissionen for universiteter og forskning i afdelingen for innovation, universiteter og virksomhedsledelse i Generalitat de Catalunya (SGR2017-648). Dette arbejde blev finansieret af det spanske ministerium for forskning, innovation og Universitet (MEICO) gennem BFU2015-67777-R og og RTI2018-099773-B-100, det spanske prion-netværk (PRIONET Spain AGL2017-90665-REDT) og Institut Carlos III, CIBERNED ( PRY-2018-2).

Alle dyreforsøg blev udført i henhold til retningslinjerne og protokollerne fra den etiske komité for dyreforsøg (CEEA) ved universitetet i Barcelona, og protokollen om anvendelse af gnavere i denne undersøgelse blev revideret og godkendt af CEEA i Universitetet i Barcelona (CEEA'S godkendelse #276/16 og 141/15).
1. rensning af Rottehale kollagen
<ol><li>Saml voksne Sprague-Dawley rottehaler (8-9 uger gamle) efter at have ofret dyret efter etiske retningslinjer og skyl i 95% ethanol. Pl...

<ol>
	<li>Ram&#243;n y Cajal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Les nouvelles id&#233;es sur la structure du syst&#232;me nerveux chez l'homme et chez les vert&#233;br&#233;s. , (1894).</li><li>Ram&#243;n y Cajal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nuevo concepto de la histolog&#237;a de los centros nerviosos. , (1893).</li><li>Marin, O., Valiente, M., Ge, X., Tsai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guiding+neuronal+cell+migrations.">Guiding neuronal cell migrations.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2 (2), 001834 (2010).</li><li>Tessier-Lavigne, M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+biology+of+axon+guidance.">The molecular biology of axon guidance.</a> Science. 274 (5290), 1123-1133 (1996).</li><li>Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+axon+guidance.">Molecular mechanisms of axon guidance.</a> Science. 298 (5600), 1959-1964 (2002).</li><li>Kolodkin, A. L., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+molecules+of+neuronal+wiring:+a+primer.">Mechanisms and molecules of neuronal wiring: a primer.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 3 (6), 001727 (2011).</li><li>Rosentreter, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+retinal+ganglion+cell+axons+to+striped+linear+gradients+of+repellent+guidance+molecules.">Response of retinal ganglion cell axons to striped linear gradients of repellent guidance molecules.</a> Journal of Neurobiology. 37 (4), 541-562 (1998).</li><li>Knoll, B., Weinl, C., Nordheim, A., Bonhoeffer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stripe+assay+to+examine+axonal+guidance+and+cell+migration.">Stripe assay to examine axonal guidance and cell migration.</a> Nature Protocols. 2 (5), 1216-1224 (2007).</li><li>von Philipsborn, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+cone+navigation+in+substrate-bound+ephrin+gradients.">Growth cone navigation in substrate-bound ephrin gradients.</a> Development. 133 (13), 2487-2495 (2006).</li><li>Chen, H., He, Z., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+guidance+mechanisms:+semaphorins+as+simultaneous+repellents+and+anti-repellents.">Axon guidance mechanisms: semaphorins as simultaneous repellents and anti-repellents.</a> Nature Neuroscience. 1 (6), 436-439 (1998).</li><li>Jessell, T. M., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development.+The+decade+of+the+developing+brain.">Development. The decade of the developing brain.</a> Current Opinion in Neurobiology. 10 (5), 599-611 (2000).</li><li>Serafini, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+netrins+define+a+family+of+axon+outgrowth-promoting+proteins+homologous+to+C.+elegans+UNC-6.">The netrins define a family of axon outgrowth-promoting proteins homologous to C. elegans UNC-6.</a> Cell. 78 (3), 409-424 (1994).</li><li>Charron, F., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+brain+wiring+functions+for+classical+morphogens:+a+role+as+graded+positional+cues+in+axon+guidance.">Novel brain wiring functions for classical morphogens: a role as graded positional cues in axon guidance.</a> Development. 132 (10), 2251-2262 (2005).</li><li>Fournier, M. F., Sauser, R., Ambrosi, D., Meister, J. J., Verkhovsky, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+transmission+in+migrating+cells.">Force transmission in migrating cells.</a> Journal of Cell Biology. 188 (2), 287-297 (2010).</li><li>Dent, E. W., Gertler, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoskeletal+dynamics+and+transport+in+growth+cone+motility+and+axon+guidance.">Cytoskeletal dynamics and transport in growth cone motility and axon guidance.</a> Neuron. 40 (2), 209-227 (2003).</li><li>Lowery, L. A., Van Vactor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+trip+of+the+tip:+understanding+the+growth+cone+machinery.">The trip of the tip: understanding the growth cone machinery.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 10 (5), 332-343 (2009).</li><li>Castellani, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Protocols for Neuronal Cell Culture. , (2001).</li><li>Gahwiler, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+monolayer+cultures+of+nervous+tissue.">Organotypic monolayer cultures of nervous tissue.</a> Journal of Neuroscience Methods. 4 (4), 329-342 (1981).</li><li>Bornstein, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituted+rattail+collagen+used+as+substrate+for+tissue+cultures+on+coverslips+in+Maximow+slides+and+roller+tubes.">Reconstituted rattail collagen used as substrate for tissue cultures on coverslips in Maximow slides and roller tubes.</a> Laboratory Investigation. 7 (2), 134-137 (1958).</li><li>Billings-Gagliardi, S., Wolf, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+examining+organotypic+CNS+cultures+with+Nomarski+optics.">A simple method for examining organotypic CNS cultures with Nomarski optics.</a> In Vitro. 13 (6), 371-377 (1977).</li><li>Bell, E., Ivarsson, B., Merrill, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+tissue-like+structure+by+contraction+of+collagen+lattices+by+human+fibroblasts+of+different+proliferative+potential+in+vitro.">Production of a tissue-like structure by contraction of collagen lattices by human fibroblasts of different proliferative potential in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Science. 76 (3), 1274-1278 (1979).</li><li>Lumsden, A. G., Davies, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Earliest+sensory+nerve+fibres+are+guided+to+peripheral+targets+by+attractants+other+than+nerve+growth+factor.">Earliest sensory nerve fibres are guided to peripheral targets by attractants other than nerve growth factor.</a> Nature. 306 (5945), 786-788 (1983).</li><li>Chedotal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semaphorins+III+and+IV+repel+hippocampal+axons+via+two+distinct+receptors.">Semaphorins III and IV repel hippocampal axons via two distinct receptors.</a> Development. 125 (21), 4313-4323 (1998).</li><li>Kennedy, T. E., Serafini, T., de la Torre, J. R., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Netrins+are+diffusible+chemotropic+factors+for+commissural+axons+in+the+embryonic+spinal+cord.">Netrins are diffusible chemotropic factors for commissural axons in the embryonic spinal cord.</a> Cell. 78 (3), 425-435 (1994).</li><li>Klein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eph/ephrin+signaling+in+morphogenesis,+neural+development+and+plasticity.">Eph/ephrin signaling in morphogenesis, neural development and plasticity.</a> Current Opinion in Cell Biology. 16 (5), 580-589 (2004).</li><li>Wang, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+purification+of+a+mammalian+slit+protein+as+a+positive+regulator+of+sensory+axon+elongation+and+branching.">Biochemical purification of a mammalian slit protein as a positive regulator of sensory axon elongation and branching.</a> Cell. 96 (6), 771-784 (1999).</li><li>Emonard, H., Grimaud, J. A., Nusgens, B., Lapiere, C. M., Foidart, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituted+basement-membrane+matrix+modulates+fibroblast+activities+in+vitro.">Reconstituted basement-membrane matrix modulates fibroblast activities in vitro.</a> Journal of Cell Physiology. 133 (1), 95-102 (1987).</li><li>Knapp, D. M., Helou, E. F., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fibrin+or+collagen+gel+assay+for+tissue+cell+chemotaxis:+assessment+of+fibroblast+chemotaxis+to+GRGDSP.">A fibrin or collagen gel assay for tissue cell chemotaxis: assessment of fibroblast chemotaxis to GRGDSP.</a> Experimental Cell Research. 247 (2), 543-553 (1999).</li><li>Kapur, T. A., Shoichet, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immobilized+concentration+gradients+of+nerve+growth+factor+guide+neurite+outgrowth.">Immobilized concentration gradients of nerve growth factor guide neurite outgrowth.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 68 (2), 235-243 (2004).</li><li>Torres-Espin, A., Santos, D., Gonzalez-Perez, F., del Valle, J., Navarro, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurite-J:+an+image-J+plug-in+for+axonal+growth+analysis+in+organotypic+cultures.">Neurite-J: an image-J plug-in for axonal growth analysis in organotypic cultures.</a> Journal of Neuroscience Methods. 236, 26-39 (2014).</li><li>Balestrini, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+biology+of+decellularized+lung+matrix:+Implications+of+species+mismatch+in+regenerative+medicine.">Comparative biology of decellularized lung matrix: Implications of species mismatch in regenerative medicine.</a> Biomaterials. 102, 220-230 (2016).</li><li>Qian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+Analysis+of+the+Digestion+of+Bovine+Type+I+Collagen+Telopeptides+with+Porcine+Pepsin.">Kinetic Analysis of the Digestion of Bovine Type I Collagen Telopeptides with Porcine Pepsin.</a> Journal of Food Science. 81 (1), 27-34 (2016).</li><li>Eyre, D. R., Weis, M., Hudson, D. M., Wu, J. J., Kim, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+3-hydroxyproline+(3Hyp)-rich+motif+marks+the+triple-helical+C+terminus+of+tendon+type+I+collagen.">A novel 3-hydroxyproline (3Hyp)-rich motif marks the triple-helical C terminus of tendon type I collagen.</a> Journal of Biological Chemistry. 286 (10), 7732-7736 (2011).</li><li>Garnotel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+blood+monocytes+interact+with+type+I+collagen+through+alpha+x+beta+2+integrin+(CD11c-CD18,+gp150-95).">Human blood monocytes interact with type I collagen through alpha x beta 2 integrin (CD11c-CD18, gp150-95).</a> Journal of Immunology. 164 (11), 5928-5934 (2000).</li><li>Montolio, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+semaphorin+3A+inhibitor+blocks+axonal+chemorepulsion+and+enhances+axon+regeneration.">A semaphorin 3A inhibitor blocks axonal chemorepulsion and enhances axon regeneration.</a> Chemistry and Biology. 16 (7), 691-701 (2009).</li><li>Garcia-Gareta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen+gels+and+the+'Bornstein+legacy':+from+a+substrate+for+tissue+culture+to+cell+culture+systems+and+biomaterials+for+tissue+regeneration.">Collagen gels and the 'Bornstein legacy': from a substrate for tissue culture to cell culture systems and biomaterials for tissue regeneration.</a> Experimental Dermatology. 23 (7), 473-474 (2014).</li></ol>

Væksten i udvikling af axoner er primært invasive og omfatter ECM nedbrydning og Remodeling. Ved hjælp af den procedure, der præsenteres her, kan forskerne få en homogen 3-D matrix dannet af den naturlige type I kollagen, hvor axoner (eller celler) kan reagere på en kemisk gradient udskilles af genetisk modificerede celler, som de gør in vivo. Forskellige axonal respons på gradienter af attraktive eller hæmmende stikord (protein, lipider, etc.) kan let sammenlignes med specifik kontrol (mock transficeret celler)...

Neuronal axons, der ender i axonal vækst kegler, migrere lange afstande gennem den ekstracellulære matrix (ECM) af embryonet over specifikke veje til at nå deres passende mål. Vækst keglen er den distale del af Axon, og det er specialiseret til at fornemme det fysiske og molekylære miljø i cellen1,2. Fra et Molekylær synspunkt, vækst kegler er styret af mindst fire forskellige molekylære mekanismer: kontakt attraktion, Chemoattraction, kontakt Repulsion, og chemorepulsion udløst af forskellige axonal Guidance stikord3,4 , 5 ) i , 6. kontakt-medierede processer kan delvist overvåges i todimensionale (2D) kulturer på mikro-mønstrede substrater (f. eks med striber7,8 eller pletter9 , der indeholder molekyler). Dog kan axoner navigere til deres mål på en ikke-difpulsiv måde ved at registrere flere attraktive og frastødende molekyler fra guidepost celler i miljøet4,5,10. Her beskriver vi en nem metode til 3-D kultur for at kontrollere, om et udskilt molekyle inducerer chemorepulsive eller chemoattraktive effekter på udvikling af axoner.
De tidligste undersøgelser havde til formål at bestemme virkningerne af Axon-vejlednings signaler, der anvendes i tredimensionale (3-D) matricer til at generere gradienter, der simulerer in vivo-forhold11,12. Denne fremgangsmåde har sammen med in vivo-eksperimenter gjort det muligt at identificere fire hoved familier med vejlednings signaler: netrins, slidser, semaphoriner og ephrins4,5,6. Disse molekylære signaler og andre faktorer13 er integreret af de voksende axoner, der udløser dynamikken i vedhæftnings komplekser og transducere mekaniske kræfter via cytoskelettet14,15,16. For at generere molekylære gradienter i 3D-kulturer for axonal navigation, brugte banebrydende forskere plasma koagulerings substrater17, som også blev anvendt til organiske udsnitspræparater18. Men, i 1958, en ny protokol til at generere 3-D kollagen silicagelrogeler blev rapporteret til at studere med maximow ́s enheder19, en kultur platform, der anvendes i flere undersøgelser egnet til mikroskopiske observationer20. En anden pioner undersøgelse rapporterede kollagen gel som et værktøj til at indlejre humane fibroblaster for at studere differentieringen af fibroblaster til myofibroblaster i sårhelings processer21. Parallelt hermed anvendte Lumsden og Davies kollagen fra kvæg dermis til at analysere den formodede effekt af nerve vækstfaktoren (NGF) på retningslinjerne for sensoriske nervefibre22. Med udviklingen af nye kultur platforme (f. eks. multi-Well-plader) fra forskellige virksomheder og laboratorier, blev kollagen kulturer tilpasset disse nye anordninger6,23,24,25 ,26. Parallelt hermed blev et ekstrakt af ECM materiale afledt af Engelbreth-Holm-Swarm tumor cellelinje gjort kommercielt tilgængelig for at udvide disse undersøgelser27.
For nylig er flere protokoller blevet udviklet til at generere molekylære gradienter med formodede roller i Axon vejledning ved hjælp af 3-D silicagelrogeler (f. eks kollagen, fibrin, etc.) 28. Alternativt kan kandidat molekylet immobiliseres ved forskellige koncentrationer i en porøs matrix (f. eks ngf29) eller genereres ved dyrkning i en lille region af 3-D hydrogel celle aggregater udskilning af molekylet til at generere en radial gradient4,23,24,25,26. Den sidste mulighed vil blive forklaret i denne protokol.
Den procedure, der præsenteres her er en nem, hurtig og meget reproducerbar metode baseret på analyse af axonal vækst i 3-D hydrogel kulturer af den embryonale musehjerne. I sammenligning med andre metoder, er protokollen velegnet til ikke-uddannede forskere og kan være fuldt udviklet efter en kort uddannelse (1-2 uger). I denne protokol, vi først isolere kollagen fra voksne rottehaler til yderligere at generere 3-D matricer, hvor genetisk modificerede celle aggregater er kultiveret foran den embryonale neuronal væv. Disse celle aggregater danner radiale kemiske gradienter af et kandidat molekyle, som fremkalder et respons for de voksende axoner. Endelig kan vurderingen af molekylets virkninger på voksende axoner let udføres ved hjælp af en fasekontrast mikroskopi eller alternativt immunocytokemiske metoder.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1176px;" width="1176">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:455px;">Material</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">3,3&#8242;-Diaminobenzidine tetrahydrochloride 10 mg tablets (DAB)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D5905</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Adult Sprague-Dawley rats (8 to 9 weeks old)&#160;</td>
			<td>Criffa-Credo, Lyon, France</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Avidin-biotin-peroxidase complex (ABC)</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>PK-4000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">B27 serum-free supplement 50x&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17504-044</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bicinchoninic acid (BCA) protein assay kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">cDNA plasmid vectors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">COS1 cell lines</td>
			<td>ATTC</td>
			<td>CRL-1570</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>16325</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">D-(+)-glucose (45% solution in water) for complete Neurobasal medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8769</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">D-MEM (Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium 1x ) for COS1 culture medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>41966-029</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">Dulbecco&#8217;s phosphate buffered saline 10x (without Ca2+ and Mg2+) (D-PBS) for cultures</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>14200</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">Ethanol&#160;</td>
			<td>merck</td>
			<td>108543</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Ethylenediaminetetraacetic acid dihydrate disodium salt (EDTA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E5134</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Fluorescence mounting media (e.g., Fluoromount-G or similar)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences (EMS)</td>
			<td>17984-25</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Gelatin powder&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G1890</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Glacial acetic acid (Panreac, cat. no. 211008)</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>211008</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">Hank&#8217;s balanced salt solution&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>24020083</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Heat-inactivated foetal bovine serum&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10108-165</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Heat-inactivated horse serum&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>26050-088</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Hydrogen peroxide (H2O2, 32 to 33% in water)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>316989</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-glutamine 200 mM solution (100x) for complete Neurobasal and COS1 medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-024</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lipofectamine 2000 Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668-019</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">Mice pregnant female (embryonic day 12.5 to 16.5; E12.5-16.5)&#160;</td>
			<td>Criffa-Credo, Lyon, France</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Modified Minimum Essential Medium Eagle (MEM)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11012-044</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Monoclonal antibody against class III &#946;-tubulin (clone TUJ-1)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>801201</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-2 supplement 100x&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17502-048</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neurobasal medium&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>21103049</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1,040,051,000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/streptomycin solution 100x&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15140-22</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffered saline 10x (PBS) for immunocytochemistry</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9624</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Secondary antibody: biotinylated horse anti-mouse&#160;</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>BA-2000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Serum-free medium (Opti-MEM)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11058-021</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium azide&#160;</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>162712</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium bicarbonate solution 7.5%&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25080-094</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile culture grade H2O&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>W3500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TritonTM X-100&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X100</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trizma base&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1503</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA (Trypsin (0.05% (wt/vol) with EDTA (1x)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25300-054</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:455px;">Equipment</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 large and 1 small curved scissors for dissection&#160;</td>
			<td>Fine tools Instruments or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5-ml conical centrifuge tubes&#160;</td>
			<td>Eppendorf or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15-ml conical centrifuge tubes&#160;</td>
			<td>Corning or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2 haemostats&#160;&#160;</td>
			<td>Fine tools Instruments or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2 small straight dissecting scissors</td>
			<td>Fine tools Instruments or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200-ml centrifuge tubes for centrifugation</td>
			<td>Nalgene or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">200-ml sterile glass conical flasks</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-litre glass beaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4- and 6-well culture plates&#160;</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>176740 and 140675</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Automatic pipette pumps and disposable 10 ml and 25 ml filter-containing sterile plastic pipettes.</td>
			<td colspan="2">Gilson, Brand, Eppendorf or similar&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Automatic pipettes, sterile filter tips and current sterile tips&#160;</td>
			<td>Gilson, Eppendorf or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bench top microcentrifuge with angle fixed rotor&#160;</td>
			<td colspan="2">Eppendorf, Beckman Coulter or similar</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bench top refrigerated centrifuge with swing-bucket rotor (with 1.5, 15 and 50 ml tube adaptors)</td>
			<td colspan="2">Eppendorf, Beckman Coulter or similar</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture incubator at 37 &#186;C, 5% CO2 and 95% air</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dialysis tubing cellulose membrane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D9402</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dialysis tubing closures&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z37101-7</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable glass pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting microscope with dark field optics&#160;</td>
			<td>Olympus SZ51 or similar&#160;</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;">High-speed refrigerated Beckman Coulter centrifuge or similar with angle fixed rotor</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminar flow hood</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large 100-mm, 60-mm and small 35-mm &#216; cell culture dishes&#160;</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>&#160;150679 , 150288 and 150318, respectively</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnetic stirrer and magnetic spin bars</td>
			<td>IKA or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">McIlwain tissue chopper</td>
			<td>Mickle Laboratory Engineering</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">One pair of fine straight forceps and one pair of curved forceps&#160;</td>
			<td>Fine tools Instruments or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades for the tissue chopper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpels (number 15 and 11)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Two pairs of fine spatulas for transferring collagen and tissue pieces</td>
			<td>Fine tools Instruments or similar</td>
			<td></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of 3-d collagen-based hydrogels to analyze axonal growth and behavior during nervous system development

Denne protokol bruger naturlige type I kollagen til at generere tredimensionale (3-D) hydrogel til overvågning og analyse af axonal vækst. Protokollen er centreret om dyrkning af små stykker af embryonale eller tidlige postnatale gnaver hjerner inde i en 3-D hydrogel dannet af Rottehale Tendon-afledt type I kollagen med specifik porøsitet. Vævs brikker dyrkes inde i hydrogel og konfronteres med specifikke hjerne fragmenter eller genetisk modificerede celle aggregater for at producere og udskille molekyler, der egner sig til at skabe en gradient inde i den porøse matrix. Trinene i denne protokol er enkle og reproducerbare, men omfatter kritiske skridt, der skal overvejes nøje under dens udvikling. Desuden kan adfærden af voksende axoner overvåges og analyseres direkte ved hjælp af et fase-kontrast mikroskop eller mono/multiphoton fluorescens mikroskop efter fiksering af immunocytokemiske metoder.

Her præsenterer vi en alment tilgængelig metode til at studere axonal vækst i 3-D hydrogel kollagen kulturer af embryonale muse nervesystem. Til dette formål isolerede vi kollagen fra voksne rottehaler til at generere 3-D matricer, hvor vi dyrkede genetisk modificerede celle aggregater udtrykker Netrin-1 eller Sema3E konfronteret med embryonale neuronal væv (f. eks CA region i hippocampus). Disse celle aggregater dannede en radialt distribueret gradient af kandidat molekylet inde i kollagen matrix. Til sidst, for at...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of 3-D Collagen-based Hydrogels to Analyze Axonal Growth and Behavior During Nervous System Development at JoVE.com

Generation of 3-D Collagen-based Hydrogels to Analyze Axonal Growth and Behavior During Nervous System Development

Her giver vi en metode til at analysere adfærden af voksende axoner i 3D-matricer, der efterligner deres naturlige udvikling.

Generation af 3-D kollagen-baserede Hydrogels til at analysere Axonal vækst og adfærd under nervesystemet udvikling

This protocol uses natural type I collagen to generate three-dimensional (3-D) hydrogel for monitoring and analyzing the axonal growth. The protocol is ...

Denne metode er nyttig til at analysere den rolle, som nogle molekyler i aksonal vejledning og neuronal migration under neuro systemudvikling. Den største fordel ved denne teknik er, at analysen af resultaterne er hurtig og enkel og kræver ikke kompleks software, hvilket ville indebære en masse uddannelse for forskere. Demonstration af proceduren vil være Mirian Segura-Feliu, en tekniker fra vores laboratorium og mig selv.Til at begynde plade 200, 000 COS-1 celler i 35 millimeter petriskåle og inkubere med komplet kultur medium i en celle kultur inkubator for at læse 70 til 80% sammenløb natten over. Den følgende dag, at transfect COS-1 celler med DNA kodning kandidaten molekyle ved hjælp liposom baseret transfection metode. Første blandes 250 mikroliter serumfrit medium og et til 2 mikrogram DNA i et 1,5 milliliter centrifugerør og inkuberes ved stuetemperatur i fem minutter.For at forberede et liposomalt rør tilsættes 240 mikroliter af det serumfrie medium og 10 mikroliter liposomal transfektionsreagens, og der inkuberes ved stuetemperatur i fem minutter. Efter inkubation, tilsæt indholdet af DNA-røret til lipsomal røret. Bland og inkuber forsigtigt ved stuetemperatur i 15 minutter.Udskift mediet på de dyrkede celler med 1,5 milliliter serumfrit medium. Tilsæt DNA liposomer blandingen langsomt og slip klogt til cellerne. Inkuberes i kuldioxidcellekulturskuvøsen i tre timer.Efter afsluttet inkubation erstattes mediet med det komplette kulturmedium og inkuberes natten over i inkubatoren. Den følgende dag skylles cellerne med 0,1 molar Dulbeccos PBS. Tilsæt 800 mikroliter trypsin EDTA pr hver skål og inkubere i fem til 15 minutter i kuldioxid inkubatoren.Opsaml fritliggende celler med to milliliter komplet kulturmedium i et 15 millilitercentrifugerør, og der tilsættes 10 milliliter af samme medium. Centrifuge cellerne ved fire grader celsius ved 130 gange g i fem minutter. Fjern supernatanten, og bevar den pellet, der indeholder COS-1 celler på is.Efter tilberedning af kollagen arbejder blanding, tilsæt 100 til 150 mikroliter af kollagen blandingen til pellet af de transficerede celler og bland forsigtigt ved pipettering op og ned. Spred 45 til 50 mikroliter af kollagen celle pellet blanding på en 35 millimeter petriskål til at danne et ensartet bånd af kollagen celler, cirka en til 1,5 centimeter lang. Anbring skålen i inkubatoren ved 37 grader celsius og 5% kuldioxid, indtil geleringen er observeret.Forbered en anden strimmel, der indeholder kontrolceller i en anden kulturskål, og placer den i kuvøsen. Når geleringen er færdig, tilsættes tre til fire milliliter på 37 grader celsius opvarmet COS-1 komplet kulturmedium til hver skål, der indeholder de gelerede kollagencellestrimler, og læg dem i inkubatoren. Brug en fin skalpel eller en væv chopper til at skære kollagen celle strimler til at generere små firkantede stykker, 400 til 500 mikrometer i længden.Overfør alle sektioner fra samme transfektionstilstand til en petriskål, der indeholder tre til 3,5 milliliter neuronale kulturmedier. Kontroller under et dissekerende mikroskop kvaliteten af stykkerne og læg retterne i kuvøsen. Brug saks til at skære embryon horn på embryonale dag 16,5 fra bughulen af en ofret gravid kvindelig rotte og læg dem i en stor petriskål indeholdende kold HBSSg buffer.Placer skålen i laminar flow hætte og bruge lige kraftbecer til at udtrække embryoner og læg dem i en ny skål, der indeholder koldt HBBSg. Med små stænt, fjerne huden, og derefter med buede og lige stæcener, omhyggeligt dissekere hjernen og sted i en skål, der indeholder kolde HBSSg. Under en dissekerende mikroskop, ved hjælp af en skalpel eller en fin saks, skære hjernen i halve langs midterlinjen for at adskille begge halvkugler.Derefter fjerne diencephalon og med fine stæcener, fjerne meninges og blodkar fra hjernen stykker. Brug 100% ethanol til at rengøre alle dele af vævshakkeren, især PTFE-skærepladen og barberbladet, og hold vævshakkeren i laminar-fluxhætten under UV-belysning i 15 minutter. Overfør hvert vævsstykke til vævshakkets skæreplade.Når vævet er hakket, overføres stykkerne fra de 35 millimeter petriskåle fyldt med tre til fire milliliter komplet NCM. Ved hjælp af fine wolfram nåle, afslutte væv dissektion i komplet NCM. Kontroller kvaliteten af de opnåede skiver under dissekerende mikroskop, og sørg for, at lagene er klart identificerbare i det mørke felt optik og dissekere regionen af interesse med wolfram nåle.Hold de gode kvalitet stykker i komplet NCM medium i kuldioxid inkubator. Visuel demonstration er afgørende i de trin i forbindelse med forberedelsen af co-kulturer, som letter ordene til at forstå processen. Placer flere sterile fire godt kultur plader i laminar flow hætte og forberede en kollagen arbejder blanding som tidligere.Tilsæt 15 til 20 mikroliter af hydrogel blandingen i bunden af hver brønd til at producere en cirkulær kollagen base. Anbring opvasken i inkubatoren, indtil der er observeret en fuldstændig gelering. Og tjek kvaliteten af den gelerede kollagen.Med en pipette, overføre et lille stykke COS-1 celle aggregat på hydrogel base, derefter bruge en pipette til at placere et væv stykke på samme base, tæt på det stykke celler samlet i en afstand af en explant størrelse. Efter at have forberedt en ny arbejdsgruppe kollagen blanding på is, forsigtigt pipette 15 til 20 mikroliter af denne nye blanding til at dække explant og cellen aggregat, hvilket gør en sandwich som hydrogel kultur. Brug en fin wolfram nål til at omlægge den explant, så det vender ud over cellen samlet på 500 til 600 mikrometer.Pladen returneres til inkubatoren, indtil geleringen er observeret, og derefter tilsættes 0,5 milliliter komplet NCM suppleret med 2% B27 supplement og holde kulturer i 36 til 48 timer i inkubatoren. Når hippocampal axoner blev konfronteret med Netrin-1, de voksede fortrinsvis mod kilden til Netrin-1, hvilket indikerer, at Netrin-1 fungerer som en kemo attraktivt molekyle for disse axoner. I kontrol tilstand, eller mock transfektion, alle axoner voksede radialt, uden nogen retningsbestemt præference.Når hippocampal axoner blev konfronteret med Sema3E udskiller celler, de fleste af dem voksede modsatte af cellen aggregat, hvilket indikerer, at Sema3E fungerer som en kemo frastødende molekyle for disse axoner. Denne skematiske repræsentation af den aksonale respons- og kvantificeringsmetode viser, at axonerne under kontrolforhold blev ligeligt fordelt i både proksimale og distale kvadranter, vist med radial udvækst. Dette indikerede et proksimalt distalt eller PD-forhold på en.Når explants viste øget antal axoner i den proksimale kvadrant i forhold til den distale, hvilket indikerer kemo attraktion, PD forholdet var større end én. Når antallet af axoner var højere i den distale kvadrant end i den proksimale, hvilket indikerer kemo frastødning, PD forholdet var mindre end én. Efter denne metode, forskere kan få vigtige oplysninger om den rolle, som nogle molekyler under neuronal udvikling, som giver os mulighed for at etablere et udgangspunkt for yderligere at udforske funktionerne.Selv om denne teknik er nyttig i neuronal udvikling, da dette er, det kunne også anvendes i farmakologisk screening, angiogenese, og væv engineering som strategier.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Scalable Fluidic Injector Arrays for Viral Targeting of Intact 3-D Brain Circuits

Our understanding of neural circuits--how they mediate the computations that subserve sensation, thought, emotion, and action, and how they are corrupted ...

Cryopreservation of Cortical Tissue Blocks for the Generation of Highly Enriched Neuronal Cultures

In this study, we outline a standardized protocol for the successful cryopreservation and thawing of cortical brain tissue blocks to generate highly ...

Mechanical Manipulation of Neurons to Control Axonal Development

Cell manipulations and extension of neuronal axons can be accomplished with calibrated glass micro-fibers capable of measuring and applying forces in the ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Direkte Intraventrikulær Delivery of Drugs til Rodent centrale nervesystem

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Designing and Implementing Nervous System Simulations on LEGO Robots

Design og implementering af Nervesystemet Simuleringer på LEGO robotter

We present a method to use the commercially available LEGO Mindstorms NXT robotics platform to test systems level neuroscience hypotheses. The first step ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo optogenetic Stimulering af Rodent centralnervesystemet

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Real-time Imaging of Axonal Transport of Quantum Dot-labeled BDNF in Primary Neurons

Real-time Imaging af axonal Transport af Quantum Dot-mærket BDNF i Primary neuroner

BDNF plays an important role in several facets of neuronal survival, differentiation, and function. Structural and functional deficits in axons are ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

Det olfaktoriske system som en model til at studere axonal vækstmønstre og morfologi<em&gt; In Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

3-D Imaging and Analysis of Neurons Infected In Vivo with Toxoplasma gondii

3-D Imaging and Analysis of Neurons Infected In Vivo with Toxoplasma gondii

3-D Imaging og analyse af neuroner Inficerede<em&gt; In Vivo</em&gt; Med<em&gt; Toxoplasma gondii</em

Toxoplasma gondii is an obligate, intracellular parasite with a broad host range, including humans and rodents. In both humans and rodents, Toxoplasma ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Brug Linear Agarose Kanaler til at studere<em&gt; Drosophila</em&gt; Larve Crawling Behavior

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...