Name: electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

التمويل لهذا المشروع قدمت بمنحه من معهد علم الأعصاب ملبورن (إلى PTG، PRJ و BVB).

جميع اليكتروريتينوجرام (ERG) إجراءات أجريت وفقا لأحكام القانون الوطني الأسترالي للصحة ومجلس البحوث الطبية في الممارسة لرعاية واستخدام الحيوانات ووافقت عليها لجنة الأخلاقيات المؤسسية الحيوان في جامعة ملبورن.
1. إعداد المخزن المؤقت
<ol><li>إعداد 10 × المخزن المؤقت ذهبية المسابق...

<ol>
	<li>Roper, C., Tanguay, R. L., Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition). , 143-151 (2018).</li><li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats.">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158 (2016).</li><li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae.">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li><li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae.">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li><li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+(ERG)+Measurements+in+Larval+Zebrafish.">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina.">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li><li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases.">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li><li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development.">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li><li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram.">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003 (2017).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models &#38; mechanisms. , (2018).</li><li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency.">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night.">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li><li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates.">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li><li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish.">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li><li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina.">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li><li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials.">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li><li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram.">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li></ol>

قراءات فنية مثل أرج أصبحت متزايدة الأهمية في الجناح للأدوات المستخدمة في دراسة الزرد اليرقات8،9،،من1214. نظراً لصغر حجم العين الزرد اليرقات، تكيفت ميكروبيبيتيس الزجاج كتسجيل كهربائي في نشر معظم البروتوكولات3</...

وقد أصبح الزرد (دانيو rerio) نموذج فقاريات وراثية مستخدمة على نطاق واسع، بما في ذلك الدراسات المتعلقة بعلوم الأعصاب البصرية. ازدياد شعبية من هذا النوع يمكن أن يعزى إلى المزايا بما في ذلك سهولة التلاعب بالجينات، عاليا يحافظ النظام المرئي الفقاريات (أنواع الخلايا العصبية ومورفولوجية تشريحية والمنظمة، وعلم الوراثة الكامنة)، وخصوبة عالية وانخفاض تكاليف تربية مقارنة بنماذج الثدييات1. اليكتروريتينوجرام غير الغازية (ERG) منذ فترة طويلة تستخدم سريرياً لتقييم دالة visual البشرية، وفي إنشاء مختبر التحديد الكمي للرؤية في مجموعة من الأنواع الكبيرة والصغيرة بما فيها القوارض واليرقات الزرد2،3 , 4 , 5-مكونات أرج تحليل الأكثر شيوعاً هي موجه والموجه ب، التي تنشأ من استشعار الضوء photoreceptors وإينتيرنيورونس بين القطبين، على التوالي. في الزرد اليرقات، تنشأ طبقات متميزة في الشبكية قبل 3 أيام بعد الإخصاب (إدارة الشرطة الاتحادية) ومورفولوجية المخروط مستقبله المحطة الطرفية synapses ناضجة قبل6،إدارة الشرطة الاتحادية 47. وبالتالي إنشاء وظيفة الشبكية الخارجي من الزرد اليرقات قبل 4 إدارة الشرطة الاتحادية، مما يعني أن أرج قابل للقياس من هذا العمر المبكر فصاعدا. بسبب دورة تجريبية قصيرة وخصائص الطراز الفائق، طبق أرج على الزرد اليرقات للتقييم الوظيفي لنماذج المرض، وتحليل التنمية لون الرؤية والشبكية، ودراسة البصرية circadian إيقاعات واختبار المخدرات8،،من910،،من1112.
بيد أن النهج الحالي لليرقات الزرد أرج له بعض التعقيدات التي قد تجعل من الصعب على اعتماد. الزرد اليرقات المنشورة أرج البروتوكولات تستخدم بشكل شائع ميكروبيبيتي زجاج مليئة بسائل موصل كتسجيل القطب3،4،5،13، الأمر الذي يتطلب من ميكروبيبيتي عالية الجودة تلميح3. معدات متخصصة، مثل ساحبة ميكروبيبيتي، وفي بعض الحالات ميكروفورجي، مطلوبة من أجل تصنيعها. وهذا يمكن أن يشكل تحديا للمختبرات ذات الموارد المحدودة، ويؤدي إلى تكاليف إضافية حتى عند تكييف النظم أرج الحيوانات الصغيرة المتاحة لقياس دالة visual الزرد اليرقات. وحتى عندما ممهدة، نصيحة ميكروبيبيتي حادة يمكن أن تلحق الضرر سطح العين اليرقات. بالإضافة إلى ذلك، يتم بناء أصحاب ميكروبيبيتي التجارية للكهربية بسلك فضة ثابتة. تصبح هذه ثابتة أسلاك تخمل بعد الاستخدام المتكرر، التي تتطلب شراء أصحاب جديدة مما يؤدي إلى زيادة تكاليف الصيانة.
هنا يصف لنا أسلوب أرج استخدام قطب تسجيل نصيحة الأسفنج على شكل مخروط، التي مفيدة بشكل خاص لتكييف الأجهزة أرج الحيوانات الصغيرة المنشأة للقياسات أرج الزرد اليرقات. الكهربائي بسهولة باستخدام المشتركة اسيتات البولي فينيل (PVA) الأسفنج والأسلاك الفضية الجميلة دون أي معدات متخصصة أخرى. البيانات المتوفرة لدينا تظهر أن هذا القطب رواية حساسة ويمكن الاعتماد عليها ما يكفي لإثبات التنمية الوظيفية للدوائر العصبية الشبكية في الزرد اليرقات بين 4 و 7 في إدارة الشرطة الاتحادية. هذا القطب نصيحة الأسفنج اقتصادا والعملية قد تكون مفيدة للباحثين وضع نظم جديدة لارج أو تعديل النظم القائمة في الحيوانات الصغيرة، للدراسات الزرد.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td>Filters the 10&#215; goldfish ringer&#39;s buffer for sterilizatio</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>DVR-5175</td>
			<td>With a 30G &#215; &#189;&#34; needle to add drops of saline to the electrode sponge tip to prevent drying and increased noisein the ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G &#215; &#189;&#34; needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*3013R</td>
			<td>For adding saline toteh sopnge tip electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioamplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML135</td>
			<td>For amplifying ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution&#160;</td>
			<td>King White</td>
			<td>9333441000973</td>
			<td>For an alternative method of sliver electrode chlorination. Active ingredient: 42 g/L sodium hypochlorite.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulation water bath</td>
			<td>Lauda-Ko&#776;nigshoffen</td>
			<td>MGW Lauda</td>
			<td>Used to make the water-heated platfrom.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode lead</td>
			<td>Grass Telefactor</td>
			<td>F-E2-30</td>
			<td>Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing dark adaptation and enclosing the Ganzfeld setup to improve signal-to-noise ratio.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfeld Bowl</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxeon LEDs</td>
			<td>Phillips Light Co.</td>
			<td></td>
			<td>For light stimulation twenty 5W and one 1W LEDs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>BS4 50-2625</td>
			<td>Holds the recording electrode during experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>version 2010</td>
			<td>Spreadsheet software for data analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisturizing eye gel</td>
			<td>GenTeal Gel</td>
			<td>9319099315560</td>
			<td>Used to cover zebrafish larvae during recordings to avoiding dehydration. Active ingredient: 0.3 % Hypromellose and 0.22 % carbomer 980.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Copan</td>
			<td>200C</td>
			<td>Used to caredully transfer larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab data acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td>Controls the LEDs to generate stimuli.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVA sponge</td>
			<td>MeiCheLe</td>
			<td>R-1675</td>
			<td>For the placement of larval zebrafish and making the cone-shaped electrode ti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Aaxis Pacific</td>
			<td>13317002</td>
			<td>For electroplating silver wire electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scope Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>version 3.7.6</td>
			<td>Simultaneously triggers the stimulus through the Powerlab system and collects data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver (fine round wire)</td>
			<td>A&#38;E metal</td>
			<td>0.3 mm</td>
			<td>Used to make recording and reference ERG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td>Used to shape and measure the cone-shaped sponge apex (with scale bar on eyepiece). Positioned in the Faraday cage for electrode placement.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine&#160;</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td>For anaethetizing larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-heated platform</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing the temperature of the sponge platform and the larval body during ERG recordings</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode

الزرد (دانيو rerio) يستخدم عادة كنموذج فقاريات في الدراسات الإنمائية، وهو مناسبة خاصة لعلم الأعصاب البصرية. للقياسات الوظيفية للأداء البصري، اليكتروريتينوجرافي (ERG) هو أسلوب غير الغازية مثالية، التي ظلت راسخة في الأنواع الفقارية أعلى. يتزايد استخدام هذا النهج لدراسة الدالة البصرية في الزرد، بما في ذلك أثناء مرحلة اليرقات المبكر. بيد أن مسرى التسجيل الأكثر استخداماً لليرقات الزرد أرج حتى الآن هو مسرى ميكروبيبيتي الزجاج، الأمر الذي يتطلب معدات متخصصة لصناعتها، يقدم تحديا للمختبرات ذات الموارد المحدودة. نقدم هنا، بروتوكول أرج الزرد يرقات باستخدام قطب نصيحة الأسفنج على شكل مخروط. مسرى الرواية أسهل لتصنيع والتعامل، أكثر اقتصادا، وأقل احتمالاً لتلف العين اليرقات من ميكروبيبيتي الزجاج. مثل أساليب أرج المنشورة سابقا، يمكن تقييم البروتوكول الحالي وظيفة الشبكية الخارجي عن طريق مستقبله واستجابات الخلية القطبين،-وب-موجه، على التوالي. البروتوكول يمكن أن تبين بوضوح صقل الدالة البصرية في جميع أنحاء التطور المبكر لليرقات الزرد، تدعم الأداة المساعدة وحساسية، وموثوقية مسرى الرواية. قطب كهربائي تبسيط مفيد بشكل خاص عند إنشاء نظام جديد لارج أو تعديل جهاز أرج الحيوانات الصغيرة الموجودة لقياس الزرد، ومساعدة الباحثين في علوم الأعصاب البصرية استخدامها في الزرد نموذج الكائن.

يوفر هذا القسم نتائج تمثيلية لارج القياسات تؤخذ يوميا من 4 إلى 7 إدارة الشرطة الاتحادية. من 4 إدارة الشرطة الاتحادية، تظهر الردود أرج قوية موجه وب المكونات، التي تنشأ من photoreceptors وخلايا ثنائية القطب، على التوالي. زيادة السعة ب-الموجه في سن كل اختبار، مع شدة الضوء (<strong class="xfig...

Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

تسجيل اليكتروريتينوجرام في "الزرد اليرقات" استخدام القطب نصيحة الأسفنج على شكل مخروط رواية A

نقدم هنا، بروتوكول أن يبسط قياس الاستجابات اليكتروريتينوجرام مقولة الخفيفة من الزرد اليرقات. يمكن أن تساعد مسرى رواية على شكل مخروط الأسفنج-تلميح جعل دراسة التنمية البصرية في الزرد اليرقات باستخدام اليكتروريتينوجرام أرج أسهل تحقيقا مع نتائج موثوق بها، وانخفاض التكلفة.

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

يساعد هذا البروتوكول على تبسيط قياسات الرسوم الكهربائية أو ERGs في حمار وحشي يرقات مما يوفر قراءة وظيفية هامة للتنمية البصرية ونماذج الأمراض الوراثية. نصائح الإسفنج الناعمة لتسجيل الأقطاب الكهربائية المستخدمة في هذا البروتوكول من السهل تصنيعها باستخدام المواد الاقتصادية والمتاحة بسهولة وتجنب الأضرار المحتملة للعيون اليرقات. يمكن أن يسهل القطب الإسفنجي الأكثر ليونة قياسات ERG المتكررة للعين نفسها.قد يجد الأفراد الجدد لهذا الإجراء صعوبة في العمل تحت الإضاءة الحمراء الخافتة المستخدمة طوال العملية. ولكن من المهم الحفاظ على التكيف المظلم. لإعداد قطب تسجيل الإسفنج على شكل مخروط ، قم بقطع النهاية من امتداد الرصاص القطب البلاتيني واستخدام مشرط لإزالة 10 ملليمترات من طلاء العزل الخارجي للبوليتيترافلورو إيثيلين من النهاية الجديدة للتمديد.قطع قطعة 40 ملليمتر من 0.3 ملليمتر قطرها الأسلاك الفضية وربط السلك الفضي مع الأسلاك الداخلية المكشوفة لإرفاق السلك بأمان إلى الرصاص القطب. اغلف المفصل بشريط عازل تاركاً طول 15 ملليمتر من السلك الفضي مكشوفاً. توصيل سلك آخر إلى الطرفية السلبية للبطارية وتزج الطرف الآخر من السلك في المالحة.غمر السلك الفضي المكشوف في محلول ملحي عادي وتوصيل الطرف الآخر إلى الطرف الموجب لمصدر تيار مباشر من فولت تسعة. بعد 60 ثانية، ضع السلك على الأنسجة الماصة لتجف. في غضون ذلك، قطع 20 في 20 ملليمتر مربع من الاسفنج خلات البولي فينيل في شكل مخروط وتشبع الاسفنج في وقت واحد العازلة رينجر.تحت مجهر خفيف مع شريط مقياس على العدسة، استخدم شفرة مشرط لتشكيل قمة المخروط إلى ما يقرب من 40 ميكرومتر القطر. الهواء الجافة الإسفنج مخروط على شكل ورقة الأنسجة الماصة حتى أنها صلبة. قبل إدخال السلك الفضي في الإسفنج المخروط المخروط المجفف على شكل خلات البولي فينيل من خلال قاعدة المخروط ، وذلك باستخدام شريط القناع لعزل أي معدن مكشوف زائد للحد من التحف الضوئية.في يوم التجربة، غمر القطب الإسفنجي في المخزن المؤقت لرينجر لمدة 15 دقيقة لتشبع الإسفنجة بالكامل. قبل ثماني ساعات على الأقل من التسجيلات ، لا تضع أكثر من 20 يرقة حمار وحشي في أنبوب واحد 15 ملليلتر بدون غطاء وملفوفة في رقائق الألومنيوم في حاضنة مظلمة. في نهاية الحضانة، صب حمار وحشي داكن تكييفها في طبق بتري تحت الإضاءة الحمراء الخافتة من الصمام الثنائي الباعث للضوء.لإعداد منصة الإسفنج، وقطع قطعة من الإسفنج خلات البولي فينيل يساوي تقريبا في سمك إلى عمق طبق بتري 35 ملليمتر بحيث الإسفنج سوف تناسب بشكل مريح داخل الطبق. جعل قطع صغيرة عموديا من خلال نهاية واحدة من الاسفنج لاستيعاب السلك الفضي من القطب المرجعي ونقع الاسفنج في المخزن المؤقت لرينجر السمك الذهبي حتى مشبعة الاسفنج. ثم ضع الاسفنج في طبق بتري نظيف 35 ملليمتر واستخدم منشفة ورقية لامتصاص السائل الزائد حتى لا ينضح أي حل من الاسفنج استجابة لضغطة الاصبع الخفيفة.لوضع الحيوان للتجربة ، استخدم ماصة باستور ثلاثة ملليمترات لنقل يرقة تخدير على ثلاثة في ثلاثة سنتيمترات مربعة من المنشفة الورقية واستخدام ملقط لوضع المربع على الإسفنج الرطب. باستخدام فرشاة دقيقة غارقة في المخزن المؤقت لرينجر ، قم بضبط موضع اليرقة مع وجود عين واحدة تواجه صعودًا وبعيدًا عن أي سائل على المنشفة تحت اليرقة. اصقل جسم اليرقات بجل العين المرطب للحفاظ على رطوبة الحيوان طوال تسجيل الرسم الكهربائي.ووضع الطبق على منصة صغيرة ساخنة بالماء أمام حافز ضوء وعاء غانزفيلد الموجود داخل قفص فاراداي. أدخل القطب المرجعي في القطع المصنوع في الإسفنج المنصة. وربط قطب أرضي تم الحصول عليه تجارياً بقفص فاراداي.إرفاق القطب تسجيل إلى حامل القطب وتأمين حامل إلى ذراع stereotaxic من ميكرومانيبولاتور. باستخدام ماصة باستور ثلاثة ملليمترات، إعادة التشبع غيض من الاسفنج من القطب مع قطرة واحدة من الحل رينجر ووضع المجهر في قفص فاراداي على منصة electroretinogram. استخدام غيض من نسيج ماصة لإزالة أي سائل الزائدة من طرف الاسفنج القطب وتحت المجهر، ووضع القطب النشط بحيث تلميح الاسفنج يمس بلطف سطح القرنية المركزية للعين اليرقات حمار وحشي.ثم حرك وعاء Ganzfeld نحو منصة الإسفنج مع الحرص على أن اليرقة مغطاة بالوعاء وإغلاق القفص للحد من الضوضاء الكهرومغناطيسية الدخيلة. تزداد حساسية شبكية العين اليرقات الحمار الوحشي إلى ومضات باهتة مع التقدم في السن. بما أن الموجات a-و b لا يمكن التعرف عليها عند كثافة أقل من سالب 1.61 log candela second لكل متر مربع في أربعة أيام بعد الإخصاب بينما يمكن اكتشاف إشارات واضحة عند هذه الكثافة في اليرقات القديمة.وتزداد سعة الموجات ب زيادة ملحوظة بين أربعة وخمسة بعد الإخصاب. في سبعة أيام، إشارة في 2.48 سجل كانديلا الثانية لكل متر مربع أكبر مقارنة مع الأيام خمسة وستة بعد الإخصاب. A-وb-موجة مرات الضمنية تصبح أسرع بكثير بعد خمسة أيام بعد الإخصاب.مع عموما, هذه النتائج التي تثبت النضج في وظيفة شبكية العين حمار وحشي بين أربعة إلى سبعة أيام بعد الإخصاب. لتنفيذ هذا البروتوكول بنجاح من الأهمية بمكان أن الإسفنج مشبعة تماما مع السوائل التي تساعد على الحفاظ على الموصلية من القطب تسجيل وخفض مستويات الضوضاء. إذا كانت الموجة ذات أهمية خاصة ، يمكن تطبيق العلاجات الدوائية لمنع مكون الموجة B وبالتالي تعريض الموجة الكاملة.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

تصوير لايف الفطرية المناعي والتفاعلات سابق للورم الخلية باستخدام نظام التعبير / UAS محرض GAL4 في اليرقات الزرد الجلد

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microbead زرع الأجنة الزرد

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

تتبع الخلايا في الزرد-GFP المعدلة وراثيا باستخدام نظام Photoconvertible PSmOrange

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

تحليل<em&gt; في فيفو</em&gt; الهجرة الخلية باستخدام الزرع خلية والتصوير الوقت الفاصل في الزرد الأجنة

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

عن طريق الاستجابة أثار اللمس والحركة فحوصات لتقييم أداء العضلات وظيفة في الزرد

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

تشريح اليرقات الزرد الغدد التناسلية الأنسجة

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

تحريض نقص الأكسجة في الضفدع الحي والأجنة الزرد

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

تقنية زرع الثدي الثديية الرواية جديدة لتصور الجيل سفينة من الخلايا الجذعية البطانية الأوعية الدموية

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

إنشاء الزرد اليرقات "نموذج الحيوان" للتحقيق مثقبيه الكروزية حركية في فيفو

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

تصور الدماغ النامية في سمك الحمار الوحشي المعيشة باستخدام Brainbow والوقت الفاصل Confocal التصوير

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...