Name: electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Finansieringen af dette projekt blev leveret af et tilskud fra Melbourne Neuroscience Institute (til PTG, PRJ & BVB).

Alle electroretinogram (ERG), der blev udført efter bestemmelserne i den australske National sundhed og Medical Research Council adfærdskodeks for pasning og brug af dyr og blev godkendt af den institutionelle Dyreetik på den University of Melbourne.
1. buffer forberedelse
<ol><li>Forberede 10 x guldfisk ringelyden bufferen (1,25 M NaCl, 26 mM KCl, 25 mm CaCl2, 10 mM MgCl2, 100 mM glukose, 100 mM HEPES) ved hjælp af omvendt osmose (RO) vand. Justere buffer til pH 7,...

<ol>
	<li>Roper, C., Tanguay, R. L., Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition). , 143-151 (2018).</li><li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats.">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158 (2016).</li><li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae.">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li><li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae.">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li><li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+(ERG)+Measurements+in+Larval+Zebrafish.">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina.">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li><li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases.">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li><li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development.">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li><li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram.">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003 (2017).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models &#38; mechanisms. , (2018).</li><li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency.">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night.">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li><li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates.">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li><li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish.">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li><li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina.">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li><li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials.">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li><li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram.">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li></ol>

Funktionelle udlæsninger som ERG er blevet stadig vigtigere i suite af værktøjer, der anvendes til at studere larve zebrafisk8,9,12,14. På grund af den lille størrelse af larve zebrafisk øjet er glas Mikropipetter blevet tilpasset som optagelse elektroder i mest publicerede protokoller3,4,5,...

Zebrafisk (Danio rerio) er blevet en udbredt genetiske hvirveldyr model, herunder undersøgelser af de visuelle neurovidenskab. Den stigende popularitet af denne art kan tilskrives fordele, herunder brugervenlighed genmanipulation, stærkt bevarede hvirveldyr visuelle system (neuron typer, anatomiske morfologi og organisation og underliggende genetik), høj frugtbarhed og lavere udgifter til dyrehold i forhold til pattedyr modeller1. Den ikke-invasiv electroretinogram (ERG) har længe været anvendt klinisk til at vurdere menneskets visuelle funktion, og i laboratoriet indstilling til at kvantificere vision i en række store og små arter herunder gnavere og larver zebrafisk2,3 , 4 , 5. de oftest analyseres ERG komponenter er en bølge og b-bølge, stammer fra den oplyse-sensing fotoreceptorer og bipolær interneurons, henholdsvis. I larver zebrafisk, adskilte lag i nethinden er etableret af 3 dage efter befrugtningen (dpf) og morfologi af fotoreceptor kegle terminal synapser modne før 4 dpf6,7. Ydre retinal funktion af larve zebrafisk er således etableret før 4 dpf, hvilket betyder, at ERG er målelige fra denne tidlige alder og fremefter. På grund af den korte eksperimentelle cyklus og høj overførselshastighed egenskaber af modellen, har ERG udlignet larve zebrafisk for funktionel vurdering af sygdomsmodeller, analysere farve vision og retinal udvikling, studere visuelle døgnrytmen og test narkotika8,9,10,11,12.
Men nuværende strategier for larver zebrafisk ERG har nogle kompleksiteter, som kan gøre det sværere at vedtage. Offentliggjorte larve zebrafisk ERG protokoller bruger normalt en glas mikropipette fyldt med ledende væske som den optagelse elektrode3,4,5,13, der kræver en høj kvalitet mikropipette Tip3. Specialiseret udstyr, såsom en mikropipette aftrækker og i nogle tilfælde en microforge, der kræves til deres fremstilling. Dette kan være en udfordring for laboratorier med begrænsede ressourcer og medfører ekstra omkostninger selv når tilpasning tilgængelige små dyr ERG systemer til måling af larve zebrafisk visuel funktion. Selv når glattede, kan skarpe mikropipette tip beskadige larve øjets overflade. Derudover er kommercielle mikropipette holdere til Elektrofysiologi konstrueret med en fast sølvtråd. Disse faste ledninger blive passivated efter gentagen brug, som kræver køb af nye indehavere fører til øgede vedligeholdelsesudgifter.
Her beskriver vi et ERG-metoden ved hjælp af en kegle-formede svamp-tip optagelse elektrode, der er særligt nyttig for at tilpasse etablerede små-dyrs ERG opsætninger for larver zebrafisk ERG målinger. Elektroden er let lavet ved hjælp af fælles polyvinylacetat (PVA) svamp og fine sølvtråd uden nogen andre specialiseret udstyr. Vores data viser, at denne roman elektrode er følsomme og pålidelige nok til at påvise funktionelle udviklingen af retinale neurale kredsløb i larve zebrafisk mellem 4 og 7 dpf. Denne økonomisk og praktisk svamp-tip elektrode kan være nyttigt at forskere om oprettelse af nye ERG systemer eller ændre eksisterende små-animalsk systemer, for zebrafisk undersøgelser.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td>Filters the 10&#215; goldfish ringer&#39;s buffer for sterilizatio</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>DVR-5175</td>
			<td>With a 30G &#215; &#189;&#34; needle to add drops of saline to the electrode sponge tip to prevent drying and increased noisein the ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G &#215; &#189;&#34; needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*3013R</td>
			<td>For adding saline toteh sopnge tip electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioamplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML135</td>
			<td>For amplifying ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution&#160;</td>
			<td>King White</td>
			<td>9333441000973</td>
			<td>For an alternative method of sliver electrode chlorination. Active ingredient: 42 g/L sodium hypochlorite.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulation water bath</td>
			<td>Lauda-Ko&#776;nigshoffen</td>
			<td>MGW Lauda</td>
			<td>Used to make the water-heated platfrom.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode lead</td>
			<td>Grass Telefactor</td>
			<td>F-E2-30</td>
			<td>Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing dark adaptation and enclosing the Ganzfeld setup to improve signal-to-noise ratio.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfeld Bowl</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxeon LEDs</td>
			<td>Phillips Light Co.</td>
			<td></td>
			<td>For light stimulation twenty 5W and one 1W LEDs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>BS4 50-2625</td>
			<td>Holds the recording electrode during experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>version 2010</td>
			<td>Spreadsheet software for data analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisturizing eye gel</td>
			<td>GenTeal Gel</td>
			<td>9319099315560</td>
			<td>Used to cover zebrafish larvae during recordings to avoiding dehydration. Active ingredient: 0.3 % Hypromellose and 0.22 % carbomer 980.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Copan</td>
			<td>200C</td>
			<td>Used to caredully transfer larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab data acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td>Controls the LEDs to generate stimuli.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVA sponge</td>
			<td>MeiCheLe</td>
			<td>R-1675</td>
			<td>For the placement of larval zebrafish and making the cone-shaped electrode ti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Aaxis Pacific</td>
			<td>13317002</td>
			<td>For electroplating silver wire electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scope Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>version 3.7.6</td>
			<td>Simultaneously triggers the stimulus through the Powerlab system and collects data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver (fine round wire)</td>
			<td>A&#38;E metal</td>
			<td>0.3 mm</td>
			<td>Used to make recording and reference ERG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td>Used to shape and measure the cone-shaped sponge apex (with scale bar on eyepiece). Positioned in the Faraday cage for electrode placement.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine&#160;</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td>For anaethetizing larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-heated platform</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing the temperature of the sponge platform and the larval body during ERG recordings</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode

Zebrafisk (Danio rerio) er almindeligt anvendt som en hvirveldyr model i udviklingsmæssige undersøgelser og er især velegnet til visuelle neurovidenskab. For funktionelle målinger af visuel ydeevne er electroretinography (ERG) en ideel non-invasiv metode, som har været veletablerede i højere vertebrater. Denne tilgang er i stigende grad anvendes til at undersøge den visuelle funktion i zebrafisk, herunder under den tidlige larve udviklingsstadier. Den hyppigst anvendte optagelse elektrode til larve zebrafisk ERG til dato er imidlertid glas mikropipette elektrode, som kræver specialudstyr til dens fremstilling, præsentere en udfordring for laboratorier med begrænsede ressourcer. Her præsenterer vi en larve zebrafisk ERG protokollen ved hjælp af en kegle-formede svamp-tip elektrode. Roman elektroden er lettere at fremstilling og håndtag, mere økonomisk og mindre tilbøjelige til at skade larve øjet end glas mikropipette. Ligesom tidligere udgivne ERG 's metoder, kan den nuværende protokol vurdere ydre retinal funktion gennem fotoreceptor og bipolar celle svar, a - og b-bølgen, henholdsvis. Protokollen kan klart illustrere forfinelse af visuelle funktion i hele den tidlige udvikling af zebrafisk larver, støtte til nytte, følsomhed og pålidelighed af de nye elektrode. Den forenklede elektrode er især nyttig, når oprettelse af en ny ERG system eller ændre eksisterende små-dyrs ERG apparater til måling af zebrafisk, medvirken forskere i de visuelle neurovidenskab bruge zebrafisk model organisme.

Dette afsnit indeholder repræsentative resultater for ERG målinger taget dagligt fra 4 til 7 dpf. Fra 4 dpf Vis ERG 's svar robust a - og b-bølge komponenter, som opstår fra fotoreceptorer og bipolar celler, henholdsvis. I hver alder testet, b-bølge amplitude steg med lysintensiteten (figur 2; Figur 3). Navnlig, følsomheden af larve zebrafisk nethinden til lysdæmper blinker øges med alderen. A - og b-bølgen var ikke genkendelige ved ...

Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Electroretinogram optagelse i larve zebrafisk ved hjælp af en roman kegle-formede svamp-tip elektrode

Vi præsenterer her, en protokol, der forenkler måling af lys evoked electroretinogram svar fra larve zebrafisk. En roman kegle-formede svamp-tip elektrode kan bidrage til at gøre studiet af visuelle udvikling i larve zebrafisk bruger electroretinogram ERG lettere at opnå med pålidelige resultater og lavere omkostninger.

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Denne protokol hjælper med at forenkle målinger af elektroretinogrammer eller ERGs i larve zebrafisk, som giver en vigtig funktionel udlæsning af visuel udvikling og genetiske sygdom modeller. Den bløde svamp tips af registrering elektroder, der anvendes i denne protokol er let at fremstille ved hjælp af økonomiske og let tilgængelige materialer og undgår potentielle skader på larve øjne. Den blødere svampe-tippet elektrode kan lette gentagne ERG målinger af samme øje.Personer nye til denne procedure kan finde det vanskeligt at arbejde under den dunkle røde belysning, der bruges under hele proceduren. Men det er vigtigt, at mørk tilpasning opretholdes. For at forberede den kegleformede svamp optagelse elektrode, skæres enden fra en platin elektrode bly forlængelse og bruge en skalpel til at fjerne 10 millimeter af den ydre polytetrafluorethylen isolering belægning fra den nye ende af forlængelsen.Skær en 40 millimeter stykke af en 0,3 millimeter diameter sølvtråd og sammenfød sølvtråden med den udsatte indertråd for sikkert at fastgøre ledningen til elektrodeledningen. Encase fælles med isolerende tape efterlader en ca 15 millimeter længde af sølv wire udsat. Tilslut en anden ledning til batteriets negative terminal, og neddyb den anden ende af ledningen ned i saltvandet.Den udsatte sølvtråd nedsænkes i normal saltvand, og den anden ende forbindes med den positive terminal på en ni volt jævnstrømskilde. Efter 60 sekunder, placere ledningen på absorberende væv til tørre. I mellemtiden skæres en 20 x 20 millimeter kvadrat af polyvinylacetat svamp i en kegle form og mætte svampen i en gang Ringer's buffer.Under et let mikroskop med en skala bar på okularet, skal du bruge en skalpel klinge til at forme spidsen af keglen til en ca 40 mikrometer diameter. Lufttørre den kegleformede svamp på absorberende silkepapir, indtil det er fast. Før du indsætter sølvtråden i den tørrede faste kegleformede polyvinylacetatsvamp gennem bunden af keglen, ved hjælp af masketape for at isolere overskydende eksponeret metal for at reducere solcelleartefakter.På eksperimentets dag nedsænkes den svampespidsede elektrode i Ringes buffer i 15 minutter for at mætte svampen helt. Mindst otte timer før optagelserne, sted ikke mere end 20 zebrafisk larver i en enkelt 15 milliliter rør uden låg og pakket ind i aluminiumsfolie i en mørk kuvøse. I slutningen af inkubationen hældes den mørk tilpassede zebrafisk i en petriskål under dæmpet rød belysning fra en lysdiode.For at forberede svampen platform, skære et stykke polyvinyl acetat svamp nogenlunde lig med tykkelsen til dybden af en 35 millimeter petriskål, således at svampen vil passe stramt i skålen. Lav et lille snit lodret gennem den ene ende af svampen for at imødekomme sølvtråden på referenceelektroden og nyd svampen i guldfisk Ringers buffer, indtil svampen er mættet. Derefter placere svampen i en ren 35 millimeter petriskål og bruge en køkkenrulle til at absorbere den ekstra væske, indtil ingen opløsning udstråler fra svampen som reaktion på en let finger tryk.For at placere dyret til forsøget, skal du bruge en tre millimeter Pasteur pipette til at overføre en bedøvet larve på en tre gange tre centimeter kvadrat af køkkenrulle og bruge kraftbefæstet til at placere pladsen på den fugtede svamp. Ved hjælp af en fin børste dyppet i Ringer's buffer, justere placeringen af larverne med det ene øje vender opad og væk fra enhver væske på håndklæde under larven. Glaser larvekroppen med fugtgivende øjengel for at holde dyret hydreret under hele elektroretinogramoptagelsen.Og læg skålen på en lille, vandopvarmet platform foran Ganzfeld skålen lys stimulus beliggende inde i en Faraday bur. Sæt referenceelektroden i det snit, der er lavet i platformssvampen. Og forbinde en kommercielt fremstillet jordelektrode til Faraday buret.Fastgør optageelektroden til en elektrodeholder, og fastgør holderen til en mikromanipulators stereotaxiske arm. Ved hjælp af en tre millimeter Pasteur pipette, sumætte svampen spidsen af elektroden med en dråbe af Ringer's opløsning og placere mikroskopet i Faraday buret over elektroretinogram platform. Brug spidsen af et absorberende væv til at fjerne overskydende væske fra elektrodesvampspidsen og under mikroskopet, og placer den aktive elektrode, så svampespidsen forsigtigt rører den centrale hornhindeoverflade af larve zebrafiskøjet.Flyt derefter Ganzfeld skålen mod svampeplatformen, idet du skal passe på, at larven er dækket af skålen, og luk buret for at reducere ekstra elektromagnetisk støj. Følsomheden af larve zebrafisk retina til lysdæmper blinker stiger med alderen. Da a-og b-bølgerne ikke kan genkendes ved intensiteter lavere end minus 1,61 log candela sekund per meter kvadreret på fire dage efter befrugtning, mens klare signaler kan påvises ved disse intensiteter i de ældre larver.B-bølge amplitude stiger markant mellem fire og fem efter befrugtning. På syv dage, signalet på 2,48 log candela sekund per meter kvadreret er større i forhold til dag fem og seks efter befrugtning. A-og b-bølge implicitte tider bliver betydeligt hurtigere efter fem dage efter befrugtning.Med samlet, disse resultater viser en modning i zebrafisk retinale funktion mellem fire til syv dage efter befrugtning. For at kunne udføre denne protokol er det afgørende, at svampe er fuldt mættet med væske, som hjælper med at opretholde ledningsevne af optagelsen elektrode og sænker støjniveauet. Hvis a-bølge er af særlig interesse, farmakologiske behandlinger kan anvendes til at blokere b-bølge komponent og dermed udsætte den fulde a-bølge.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging af medfødte immunsystem og præneoplastiske celleinteraktioner Brug en inducerbar Gal4 / UAS Expression System i Larve Zebrafisk Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Mikroperle Implantation i Zebrafisk Embryo

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Sporing Celler i GFP-transgene zebrafisk Brug af Photoconvertible PSmOrange System

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyserer<em&gt; In vivo</em&gt; Cell Migration hjælp Cell transplantationer og Time-lapse Imaging i zebrafisk embryoner

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Brug Touch-fremkaldt reaktion og Locomotion Analyser til Vurdere Muskel Ydeevne og funktion i zebrafisk

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Dissektion af Larver zebrafisk gonadale Tissue

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induktion af hypoxi i levende frø og zebrafiskembryoner

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

En ny mammedisk fedtpudstransplantationsteknik til visualisering af fartøjsgenerering af vaskulære endotelceller

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Etablering af larve zebrafisk som en dyr Model til at undersøge Trypanosoma cruzi motilitet In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

Visualisere den udviklende hjerne i levende zebrafisk ved hjælp af Brainbow og Time-lapse Konfokal Imaging

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...