Name: electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Financiering voor dit project werd verstrekt door een subsidie van het Instituut van de neurowetenschappen Melbourne (aan PTG, PRJ & BVB).

Alle electroretinogram (ERG) procedures werden uitgevoerd volgens de bepalingen van de Australische nationale gezondheids- en medische Onderzoeksraad gedragscode voor de verzorging en het gebruik van dieren en goedgekeurd door het Comité van de institutionele dierenethiek op de Universiteit van Melbourne.
1. buffer voorbereiding
<ol><li>Voorbereiden van de 10 x goudvis Ringer's buffer (1,25 M NaCl, 26 mM KCl, 25 mm CaCl2, 10 mM MgCl2, glucose 100 mM, 100 mM HEPES) met ...

<ol>
	<li>Roper, C., Tanguay, R. L., Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition). , 143-151 (2018).</li><li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats.">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158 (2016).</li><li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae.">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li><li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae.">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li><li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+(ERG)+Measurements+in+Larval+Zebrafish.">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina.">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li><li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases.">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li><li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development.">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li><li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram.">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003 (2017).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models &#38; mechanisms. , (2018).</li><li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency.">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night.">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li><li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates.">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li><li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish.">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li><li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina.">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li><li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials.">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li><li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram.">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li></ol>

Functionele uitlezingen zoals de ERG zijn steeds belangrijker in de suite van tools gebruikt bij het bestuderen van larvale zebrafish8,,9,,12,14geworden. Als gevolg van de geringe omvang van het larvale zebrafish oog, zijn glas micropipetten aangepast als de opname van elektroden in de meest gepubliceerde protocollen3,4,<sup ...

De zebravissen (Danio rerio) is een veel gebruikte genetische gewervelde model, met inbegrip van studies van de visuele neurowetenschappen geworden. De toenemende populariteit van deze soort kan worden toegeschreven aan voordelen waaronder gemak van genetische manipulatie, de zeer geconserveerde gewervelde visuele systeem (neuron typen, anatomische morfologie en organisatie en onderliggende genetica), de hoge vruchtbaarheid en lagere kosten van de veehouderij in vergelijking met zoogdieren modellen1. De niet-invasieve electroretinogram (ERG) heeft al lange tijd gebruikt klinisch te beoordelen van menselijke visuele functie, en in het laboratorium-omgeving te kwantificeren visie op een aantal grote en kleine soorten waaronder knaagdieren en larvale zebrafish2,3 , 4 , 5. de meest voorkomende geanalyseerde ERG componenten zijn de a-Golf en b-Golf, afkomstig uit de researchdieren licht-sensing en bipolaire interneuronen, respectievelijk. In larvale zebrafish, verschillende lagen in de retina zijn opgericht door 3 dagen na bevruchting (dpf) en de morfologie van de fotoreceptor kegel terminal synapses volwassen vóór 4 dpf6,7. Buitenste retinale functie van larvale zebrafish wordt aldus vastgesteld vóór 4 dpf, wat betekent dat de ERG meetbare vanaf deze jonge leeftijd vanaf is. Vanwege de korte experimentele cyclus en de eigenschappen van de hoog-productie van het model, heeft de ERG vereffend larvale zebrafish voor functionele beoordeling van ziekte modellen, kleur visie en retinale ontwikkeling analyseren, bestuderen van visuele circadiane ritmen en8,9,10,11,12testen van drugs.
Huidige benaderingen voor larvale zebrafish ERG heeft echter enkele complexiteiten die kunnen maken het moeilijker om te nemen. Gepubliceerde larvale zebrafish ERG protocollen gebruiken meestal een glas micropipet gevuld met geleidende vloeistof als de opname elektrode3,4,5,13, waarvoor een micropipet van hoge kwaliteit Tip3. Gespecialiseerde apparatuur, zoals een micropipet trekker en in sommige gevallen een microforge, zijn vereist voor de fabricage ervan. Dit kan een uitdaging voor laboratoria met beperkte middelen en leidt tot extra kosten, zelfs bij de aanpassing van de beschikbare kleine dierlijke ERG systemen voor het meten van de visuele functie larvale zebrafish. Zelfs wanneer gladgestreken, kan de scherpe micropipet tip schade aan het oppervlak van de larvale oog. Bovendien, worden commerciële micropipet houders voor electrofysiologie geconstrueerd met een vaste zilveren draad. Deze vaste draden worden gepassiveerd na herhaald gebruik, waarbij de aankoop van nieuwe houders leidt tot hogere onderhoudskosten.
Hier beschrijven we een ERG-methode met behulp van een kegelvormige spons-tip opname-elektrode, dat is met name handig voor de aanpassing van de gevestigde kleine-dier ERG setups voor larvale zebrafish ERG metingen. De elektrode wordt gemakkelijk gemaakt met behulp van gemeenschappelijke polyvinylacetaat (PVA) spons en fijn zilver draad zonder andere gespecialiseerde apparatuur. Onze gegevens blijkt dat deze roman elektrode is gevoelig en betrouwbaar genoeg is om aan te tonen van de functionele ontwikkeling van retinale neurale circuits in larvale zebrafish tussen 4 en 7 dpf. Deze economische en praktische spons-tip-elektrode kan nuttig zijn voor onderzoekers tot de oprichting van nieuwe ERG systemen of het wijzigen van bestaande systemen van de kleine dieren, voor zebrafish studies.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td>Filters the 10&#215; goldfish ringer&#39;s buffer for sterilizatio</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>DVR-5175</td>
			<td>With a 30G &#215; &#189;&#34; needle to add drops of saline to the electrode sponge tip to prevent drying and increased noisein the ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G &#215; &#189;&#34; needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*3013R</td>
			<td>For adding saline toteh sopnge tip electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioamplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML135</td>
			<td>For amplifying ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution&#160;</td>
			<td>King White</td>
			<td>9333441000973</td>
			<td>For an alternative method of sliver electrode chlorination. Active ingredient: 42 g/L sodium hypochlorite.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulation water bath</td>
			<td>Lauda-Ko&#776;nigshoffen</td>
			<td>MGW Lauda</td>
			<td>Used to make the water-heated platfrom.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode lead</td>
			<td>Grass Telefactor</td>
			<td>F-E2-30</td>
			<td>Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing dark adaptation and enclosing the Ganzfeld setup to improve signal-to-noise ratio.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfeld Bowl</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxeon LEDs</td>
			<td>Phillips Light Co.</td>
			<td></td>
			<td>For light stimulation twenty 5W and one 1W LEDs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>BS4 50-2625</td>
			<td>Holds the recording electrode during experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>version 2010</td>
			<td>Spreadsheet software for data analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisturizing eye gel</td>
			<td>GenTeal Gel</td>
			<td>9319099315560</td>
			<td>Used to cover zebrafish larvae during recordings to avoiding dehydration. Active ingredient: 0.3 % Hypromellose and 0.22 % carbomer 980.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Copan</td>
			<td>200C</td>
			<td>Used to caredully transfer larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab data acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td>Controls the LEDs to generate stimuli.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVA sponge</td>
			<td>MeiCheLe</td>
			<td>R-1675</td>
			<td>For the placement of larval zebrafish and making the cone-shaped electrode ti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Aaxis Pacific</td>
			<td>13317002</td>
			<td>For electroplating silver wire electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scope Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>version 3.7.6</td>
			<td>Simultaneously triggers the stimulus through the Powerlab system and collects data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver (fine round wire)</td>
			<td>A&#38;E metal</td>
			<td>0.3 mm</td>
			<td>Used to make recording and reference ERG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td>Used to shape and measure the cone-shaped sponge apex (with scale bar on eyepiece). Positioned in the Faraday cage for electrode placement.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine&#160;</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td>For anaethetizing larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-heated platform</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing the temperature of the sponge platform and the larval body during ERG recordings</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode

De zebravissen (Danio rerio) wordt vaak gebruikt als een gewervelde model in developmental studies en is bijzonder geschikt voor visuele neurowetenschappen. Voor functionele metingen van visuele prestaties is electroretinography (ERG) een ideale niet-invasieve methode, die goed ingeburgerd in hogere gewervelde dieren is. Deze aanpak wordt steeds vaker gebruikt voor de behandeling van de visuele functie in zebrafish, met inbegrip van tijdens de vroege developmental larvale stadia. De meest gebruikte opname-elektrode voor larvale zebrafish ERG tot op heden is echter de glazen micropipet-elektrode, die gespecialiseerde apparatuur voor de productie vereist, het presenteren van een uitdaging voor laboratoria met beperkte middelen. Hier presenteren we een larvale zebrafish ERG protocol met behulp van een elektrode kegelvormige spons-tip. De roman elektrode is gemakkelijker te vervaardigen en handvat, zuiniger, en minder kans op schade van het larvale oog dan de glazen micropipet. Zoals eerder gepubliceerde ERG methoden, kan het huidige protocol buitenste retinale functie via fotoreceptor en de antwoorden van de bipolaire cel, de a - en b-Golf, respectievelijk beoordelen. Het protocol kan illustreren de verfijning van de visuele functie gedurende de vroege ontwikkeling van het larven van de zebravis, ter ondersteuning van het hulpprogramma, gevoeligheid en betrouwbaarheid van de roman elektrode. De vereenvoudigde elektrode is vooral handig wanneer tot oprichting van een nieuw systeem van de ERG of het wijzigen van bestaande kleine-dier ERG apparaat voor meting van de zebravis, medeplichtigheid aan onderzoekers in de visuele neurowetenschappen te gebruiken van de zebravis model organisme.

Deze sectie bevat representatieve resultaten voor ERG metingen dagelijks van 4 tot 7 dpf. Vanaf 4 dpf Toon ERG reacties robuuste componenten van de a - en b-Golf, die uit researchdieren en bipolaire cellen, respectievelijk voortvloeien. Op elke leeftijd getest, de amplitude van het b-wave verhoogd met lichte intensiteit (Figuur 2; Figuur 3). Met name de gevoeligheid van het netvlies van de larvale zebrafish aan dimmer flitsen verhoogd met de ...

Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Electroretinogram opname in larvale Zebrafish met behulp van A roman kegel-vormig spons-tip elektrode

Hier presenteren we een protocol dat de meting van lichte evoked electroretinogram reacties van larvale zebrafish vereenvoudigt. Een roman kegelvormige spons-tip-elektrode kan helpen om de studie van visuele ontwikkeling in larvale zebrafish met behulp van de electroretinogram ERG gemakkelijker te bereiken met betrouwbare resultaten en lagere kosten.

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Dit protocol helpt bij het vereenvoudigen van de metingen van elektroretinogrammen of ERG's in larve zebravissen die een belangrijke functionele uitlezing van visuele ontwikkeling en genetische ziektemodellen biedt. De zachte spons tips van het opnemen van elektroden gebruikt in dit protocol is gemakkelijk te vervaardigen met behulp van economische en direct beschikbare materialen en voorkomt mogelijke schade aan de larve ogen. De zachtere spons-getipte elektrode kan herhaalde ERG-metingen van hetzelfde oog vergemakkelijken.Personen die nieuw zijn in deze procedure kan het moeilijk vinden om te werken onder de schemerige rode verlichting die wordt gebruikt tijdens de procedure. Maar het is belangrijk dat de duistere aanpassing wordt gehandhaafd. Om de kegelvormige spons opnameelektrode voor te bereiden, snijd het einde van een platina elektrode loodextensie en gebruik een scalpel om 10 millimeter van de buitenste polytetrafluorethyleen isolatie coating te verwijderen uit het nieuwe uiteinde van de uitbreiding.Snijd een stuk van 40 millimeter van een zilverdraad met een diameter van 0,3 millimeter en verwekt de zilverdraad met de blootgestelde binnendraad om de draad stevig aan het elektrodelood te bevestigen. Bekapsel het gewricht met isolerende tape waardoor een ongeveer 15 millimeter lengte van zilverdraad blootgesteld. Sluit een andere draad aan op de negatieve terminal van de batterij en dompel het andere uiteinde van de draad onder in de zoutoplossing.Dompel de blootgestelde zilverdraad onder in normale zoutoplossing en sluit het andere uiteinde aan op de positieve terminal van een negen volt gelijkstroombron. Na 60 seconden, plaats de draad op absorberend weefsel te drogen. Snijd ondertussen een 20 bij 20 millimeter vierkant polyvinylacetaat spons in een kegelvorm en verzadig de spons in één keer de buffer van Ringer.Onder een lichtmicroscoop met een schaalbalk op het oculair, gebruik een scalpelblad om de top van de kegel vorm te geven aan een diameter van ongeveer 40 micrometer. Droog de kegelvormige spons op absorberend tissuepapier aan de lucht tot het vast is. Voordat u de zilverdraad in de gedroogde vaste kegelvormige polyvinylacetaat spons door de basis van de kegel, met behulp van plakband om overtollig blootgesteld metaal te isoleren om fotovoltaïsche artefacten te verminderen.Op de dag van het experiment dompel je de spons-getipte elektrode gedurende 15 minuten onder in de buffer van Ringer om de spons volledig te verzadigen. Plaats ten minste acht uur voor de opnames niet meer dan 20 zebravislarven in een enkele buis van 15 milliliter zonder deksel en verpakt in aluminiumfolie in een donkere couveuse. Giet aan het einde van de incubatie de donker aangepaste zebravis in een petrischaaltje onder schemerige rode verlichting van een lichtgevende diode.Ter voorbereiding van de spons platform, snijd een stuk van polyvinyl acetaat spons ongeveer gelijk in dikte tot de diepte van een 35 millimeter petrischaal, zodat de spons zal goed passen in de schotel. Maak een kleine verticaal gesneden door een uiteinde van de spons om de zilveren draad van de referentie-elektrode tegemoet te komen en geniet van de spons in de buffer van de goudvis Ringer totdat de spons verzadigd is. Plaats vervolgens de spons in een schone 35 millimeter petrischaal en gebruik een papieren handdoek om de extra vloeistof te absorberen totdat er geen oplossing uit de spons straalt in reactie op een lichte vingerdruk.Om het dier voor het experiment te positioneren, gebruikt u een Drie millimeter Pasteur pipet om een verdoofde larve over te brengen op een drie bij drie centimeter vierkante papieren handdoek en gebruik tangen om het vierkant op de bevochtigde spons te plaatsen. Met behulp van een fijne borstel gedrenkt in de buffer van Ringer, pas de positie van de larve met een oog naar boven en uit de buurt van een vloeistof op de handdoek onder de larve. Glazuur het larvenlichaam met hydraterende ooggel om het dier gehydrateerd te houden tijdens de elektroretinogram opname.En plaats de schotel op een klein, met water verwarmd platform voor de Ganzfeld kom licht stimulus gelegen in een Kooi van Faraday. Plaats de referentieelektrode in de snede gemaakt in de platformspons. En sluit een commercieel verkregen grondelektrode aan op de Kooi van Faraday.Bevestig de opnameelektrode aan een elektrodehouder en bevestig de houder aan de stereotaxic-arm van een micromanipulator. Met behulp van een drie millimeter Pasteur pipet, resaturate de spons tip van de elektrode met een druppel van de oplossing ringer's en plaats de microscoop in de Kooi Van Faraday over het elektroretinogram platform. Gebruik de punt van een absorberend weefsel om overtollige vloeistof te verwijderen uit de elektrode spons tip en onder de microscoop, plaats de actieve elektrode, zodat de spons tip zachtjes raakt het centrale hoornvlies oppervlak van de larve zebravis oog.Verplaats vervolgens de Ganzfeldkom naar het sponsplatform en zorg ervoor dat de larve bedekt is met de kom en sluit de kooi om vreemd elektromagnetische ruis te verminderen. De gevoeligheid van het larvende zebravisvlies voor dimmerflitsen neemt toe met de leeftijd. Aangezien de a- en b-golven niet herkenbaar zijn bij intensiteiten lager dan min 1,61 log candela seconde per vierkante meter bij vier dagen na bevruchting, terwijl duidelijke signalen detecteerbaar zijn bij deze intensiteiten in de oudere larven.De b-golf amplitude neemt aanzienlijk toe tussen vier en vijf na de bevruchting. Op zeven dagen, het signaal op 2,48 log candela seconde per vierkante meter is groter in vergelijking met dagen vijf en zes na bevruchting. A-en b-wave impliciete tijden worden aanzienlijk sneller na vijf dagen na de bevruchting.Met over het algemeen, deze resultaten tonen een rijping in zebravis retinale functie tussen vier tot zeven dagen na de bevruchting. Om dit protocol succesvol uit te voeren is het van cruciaal belang dat sponzen volledig verzadigd zijn met vloeistof die helpt de geleidbaarheid van de opnameelektrode te behouden en de geluidsniveaus verlaagt. Als de a-golf van bijzonder belang is, kunnen farmacologische behandelingen worden toegepast om de b-golfcomponent te blokkeren, waardoor de volledige a-golf wordt blootgelegd.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging van aangeboren immuunsysteem en preneoplastische cel interacties Met behulp van een Inducible Gal4 / UAS Expression System in larvale zebravis Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microkraal Implantatie in de zebravis embryo

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Het bijhouden van cellen in GFP-transgene zebravis Met behulp van de photoconvertible PSmOrange System

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

analyseren<em&gt; In Vivo</em&gt; Cell Migratie behulp Cell Transplantaties en Time-lapse Imaging in zebravis embryo&#39;s

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Met behulp van Touch-opgeroepen Response en Locomotion Testen om Muscle Prestaties en functie in zebravis Assess

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Dissectie van larvale zebravis Gonadale Tissue

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Inductie van hypoxie in levende kikker en zebravis embryo&#39;s

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Een nieuwe Mammary Fat Pad Transplantation Technique om de Vessel Generation van Vasculaire Endotheliale Stamcellen te visualiseren

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Oprichting van larvale zebravis als Model van een dier te onderzoeken Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

Visualiseren van de zich ontwikkelende hersenen in levende zebravissen met behulp van Brainbow en Time-lapse Confocalimaging

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...