Name: electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

המימון לפרויקט זה סופק על ידי מענק מהמכון Neuroscience מלבורן (כדי PTG, PRJ & BVB).

כל ההליכים electroretinogram (ארג) בוצעו על פי הוראות הקוד המועצה למחקר רפואי ובריאות הלאומית האוסטרלית של תרגול על הטיפול בבעלי החיים ואושרו על-ידי ועדת האתיקה בעלי חיים מוסדיים- באוניברסיטת מלבורן.
1. מאגר הכנה
<ol><li>להכין את 10 x מאגר דגי זהב רינגר (1.25 מ' NaCl, 26 מ מ אשלגן כלורי, 25 מ מ CaCl<su...

<ol>
	<li>Roper, C., Tanguay, R. L., Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition). , 143-151 (2018).</li><li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats.">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158 (2016).</li><li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae.">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li><li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae.">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li><li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+(ERG)+Measurements+in+Larval+Zebrafish.">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina.">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li><li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases.">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li><li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development.">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li><li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram.">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003 (2017).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models &#38; mechanisms. , (2018).</li><li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency.">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night.">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li><li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates.">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li><li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish.">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li><li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina.">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li><li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials.">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li><li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram.">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li></ol>

המפרט פונקציונליים כגון ארג הפכו יותר ויותר חשוב בסוויטת הכלים המשמשים ללמוד דג זברה הזחל8,9,12,14. בשל גודל קטן של העין דג זברה זחל, זכוכית micropipettes כבר הסתגלו כמו הקלטה אלקטרודות ביותר שפורסמה בפרוטוקולים3,...

דג זברה (רזבורה rerio) הפך להיות בשימוש נרחב מודל חוליות גנטי, כולל לימודי הנורולוגיה חזותיים. הפופולריות הגוברת של מין זה ניתן לייחס יתרונות כולל נוחות של הנדסה גנטית, שנשמרת מאוד מערכת הראייה חוליות (נוירון סוגים, מורפולוגיה אנטומיים, הארגון וגנטיקה הבסיסית), פוריות גבוהה עלות נמוכה יותר של גידול לעומת מודלים בתרבית של1. Electroretinogram לא פולשנית (ארג) זמן שימש קלינית כדי להעריך את תפקיד הראייה האנושית, ואת בהגדרת מעבדה לכמת ראייה בטווח של מינים גדולים וקטנים, כולל מכרסמים ו-2,דג זברה זחל3 , 4 , 5. הרכיבים ארג שנותחה הנפוצים ביותר הם-גל ו b-גל, שמקורם photoreceptors אור חישה של הפרעה דו קוטבית interneurons, בהתאמה. דג זברה זחל, שכבות נפרדות ברשתית הנקבעים על-ידי 3 ימים לאחר ההפריה (dpf), המורפולוגיה של קונוס קולט אור מסוף synapses בוגרת לפני dpf 46,7. הפונקציה הרשתית החיצונית של דג זברה זחל וכך נוסדה לפני dpf 4, כלומר ארג הוא מדיד מגיל צעיר זה ואילך. בגלל מחזור ניסיוני קצר והמאפיינים תפוקה גבוהה של המודל, ארג הוחלה על זחל דג זברה להערכה תפקודית של המחלה מודלים, ניתוח ראיית צבע ופיתוח רשתית, לומדים מקצבים השעון הביולוגי חזותי בדיקות סמים8,9,10,11,12.
אולם, לגישות עבור דג זברה זחל ארג יש כמה מורכבויות זה עלול להקשות לאמץ. דג זברה זחל שפורסמו ארג הפרוטוקולים המשתמשים בדרך כלל micropipette הזכוכית מולאו נוזל מוליך ההקלטה אלקטרודה3,4,5,13, אשר דורשת micropipette באיכות גבוהה עצה3. ציוד מיוחד, כמו פולר micropipette ובמקרים מסוימים microforge, נדרשים לייצור שלהם. זה יכול להיות אתגר עבור מעבדות עם משאבים מוגבלים, מוביל עלויות נוספות גם כאשר בהתאמת זמינים קטנים בעלי חיים ארג מערכות למדידת תפקוד חזותי דג זברה זחל. גם כאשר החליק, קצה חד micropipette עלולה לגרום נזק פני השטח של העין זחל. בנוסף, מחזיקי micropipette מסחרי אלקטרופיזיולוגיה בנויים עם חוט כסף קבוע. אלה קבוע חוטים להפוך passivated לאחר השימוש החוזרות על עצמן, דרישת הרכישה של מחזיקי חדש המוביל עלויות תחזוקה מוגברת.
כאן נתאר שיטת ארג באמצעות אלקטרודה הקלטה בצורת חרוט ספוג-עצה, זה שימושי במיוחד בהתאמת הוקמה setups ארג קטן-חיה למדידות ארג דג זברה זחל. האלקטרודה מתבצע בקלות בעזרת ספוג דבק פלסטי (PVA) נפוץ בסדר חוט כסף ללא כל ציוד מיוחדים אחרים. הנתונים שלנו מראים כי אלקטרודה הרומן הזה הוא רגיש ולא אמין מספיק כדי להדגים התפתחות תפקודית של המעגלים העצביים רשתית בדג זברה זחל בין 4 ו-7 dpf. אלקטרודה חסכוני ומעשי ספוג-עצה זו עשויה להועיל לחוקרים הקמת מערכות ארג חדשות או שינוי קיימות מערכות קטנות-חיה, ללימודי דג זברה.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td>Filters the 10&#215; goldfish ringer&#39;s buffer for sterilizatio</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>DVR-5175</td>
			<td>With a 30G &#215; &#189;&#34; needle to add drops of saline to the electrode sponge tip to prevent drying and increased noisein the ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G &#215; &#189;&#34; needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*3013R</td>
			<td>For adding saline toteh sopnge tip electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioamplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML135</td>
			<td>For amplifying ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution&#160;</td>
			<td>King White</td>
			<td>9333441000973</td>
			<td>For an alternative method of sliver electrode chlorination. Active ingredient: 42 g/L sodium hypochlorite.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulation water bath</td>
			<td>Lauda-Ko&#776;nigshoffen</td>
			<td>MGW Lauda</td>
			<td>Used to make the water-heated platfrom.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode lead</td>
			<td>Grass Telefactor</td>
			<td>F-E2-30</td>
			<td>Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing dark adaptation and enclosing the Ganzfeld setup to improve signal-to-noise ratio.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfeld Bowl</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxeon LEDs</td>
			<td>Phillips Light Co.</td>
			<td></td>
			<td>For light stimulation twenty 5W and one 1W LEDs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>BS4 50-2625</td>
			<td>Holds the recording electrode during experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>version 2010</td>
			<td>Spreadsheet software for data analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisturizing eye gel</td>
			<td>GenTeal Gel</td>
			<td>9319099315560</td>
			<td>Used to cover zebrafish larvae during recordings to avoiding dehydration. Active ingredient: 0.3 % Hypromellose and 0.22 % carbomer 980.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Copan</td>
			<td>200C</td>
			<td>Used to caredully transfer larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab data acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td>Controls the LEDs to generate stimuli.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVA sponge</td>
			<td>MeiCheLe</td>
			<td>R-1675</td>
			<td>For the placement of larval zebrafish and making the cone-shaped electrode ti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Aaxis Pacific</td>
			<td>13317002</td>
			<td>For electroplating silver wire electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scope Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>version 3.7.6</td>
			<td>Simultaneously triggers the stimulus through the Powerlab system and collects data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver (fine round wire)</td>
			<td>A&#38;E metal</td>
			<td>0.3 mm</td>
			<td>Used to make recording and reference ERG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td>Used to shape and measure the cone-shaped sponge apex (with scale bar on eyepiece). Positioned in the Faraday cage for electrode placement.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine&#160;</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td>For anaethetizing larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-heated platform</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing the temperature of the sponge platform and the larval body during ERG recordings</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode

דג זברה (רזבורה rerio) משמשת כמודל חוליות מחקרים התפתחותיים, והוא מתאים במיוחד עבור המוח החזותית. למדידות פונקציונלי של ביצועים ויזואליים, electroretinography (ארג) היא שיטה לא פולשנית אידיאלי, אשר כבר מבוססת היטב במינים חוליות גבוה יותר. גישה זו הולך וגובר לבחינת בפונקציה חזותי דג זברה, כולל הזחל התפתחותי מוקדם. אולם, האלקטרודה ההקלטה הנפוץ ביותר עבור זחל דג זברה ארג לתאריך היא האלקטרודה micropipette זכוכית, אשר דורש ציוד מיוחד עבור ייצור שלה, מציגה את אתגר עבור מעבדות עם משאבים מוגבלים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול ארג דג זברה זחל באמצעות אלקטרודה בצורת חרוט ספוג-טיפ. האלקטרודה הרומן קל ייצור, ידית, חסכוני יותר, וסביר פחות נזק לעין זחל מאשר micropipette זכוכית. כמו שיטות ארג שפורסמו בעבר, בפרוטוקול הנוכחי יכול להעריך הפונקציה הרשתית החיצונית באמצעות קולט אור ותגובות תא דו-קוטבי, - ו b-גל, בהתאמה. הפרוטוקול יכול בבירור להמחיש את העידון של תפקיד הראייה במהלך הפיתוח המוקדם של הזחלים דג זברה, המשנה את השירות, רגישות, והאמינות של האלקטרודה הרומן. האלקטרודה פשוטה הוא שימושי במיוחד בעת הקמת מערכת ארג חדשה או שינוי הקיים קטן-חיה ארג מכשירי מדידה דג זברה, בסיוע חוקרים במדעי הנורולוגיה חזותי לשימוש של דג זברה דגם האורגניזם.

סעיף זה מספק תוצאות נציג למדידות ארג שנלקחו מדי יום 4 כדי 7 dpf. מ- 4 dpf, ארג תגובות להציג רכיבי ו- b-גלים חזקים, אשר נובעים photoreceptors של תאים דו-קוטביים, בהתאמה. כל גיל שנבדקו, משרעת של b-הגל גדל עם עוצמת האור (איור 2; איור 3). ראוי לציין, את הרגישות של הרשתית דג...

Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

הקלטת Electroretinogram דג זברה זחל באמצעות אלקטרודה ספוג-טיפ בצורת חרוט הרומן A

כאן, אנו מציגים פרוטוקול אשר מפשט את המדידה של אור electroretinogram עורר תגובות דג זברה זחל. אלקטרודה הרומן בצורת חרוט ספוג-עצה יכולים לעזור להפוך את המחקר של פיתוח ויזואלי בזחל דג זברה שימוש את electroretinogram ארג קל יותר להשיג עם תוצאות אמינות ועלות נמוכה יותר.

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

פרוטוקול זה מסייע לפשט את המדידות של אלקטרורטינוגרם או ERGs בזברה-דג זחל המספק קריאה תפקודית חשובה של התפתחות חזותית ומודלים של מחלות גנטיות. קצות ספוג רך של אלקטרודות הקלטה המשמשים בפרוטוקול זה קל לייצר באמצעות חומרים חסכוניים זמינים ונמנע נזק פוטנציאלי לעיני הזחל. האלקטרודה הרכה יותר עם קצה הספוג יכולה להקל על מדידות ERG חוזרות ונשנות של אותה עין.אנשים חדשים בהליך זה עלולים מתקשים לעבוד תחת התאורה האדומה העמומה המשמשת לאורך כל ההליך. אבל חשוב שההסתגלות האפלה תישמר. כדי להכין את האלקטרודה הקלטת ספוג בצורת חרוט, לחתוך את הקצה מתוך הרחבה עופרת אלקטרודה פלטינה ולהשתמש אזמל כדי להסיר 10 מילימטרים של ציפוי בידוד polytetrafluoethylene החיצוני מהקצה החדש של ההרחבה.חותכים חתיכה 40 מילימטר של חוט כסף בקוטר 0.3 מילימטר ולזרום את חוט הכסף עם החוט הפנימי חשוף כדי לחבר את החוט באופן מאובטח להוביל אלקטרודה. עטוף את המפרק עם סרט בידוד משאיר כ 15 מילימטר אורך של חוט כסף חשוף. חבר חוט נוסף למסוף השלילי של הסוללה וטבול את הקצה השני של החוט לתוך תמיסת מלח.לטבול את חוט כסף חשוף מלוחים רגיל ולחבר את הקצה השני לטרמינל החיובי של מקור זרם ישיר תשעה וולט. לאחר 60 שניות, מניחים את החוט על רקמה סופגת להתייבש. בינתיים, לחתוך 20 על ידי 20 מילימטר מרובע של ספוג אצטט פוליוויניל לתוך צורת חרוט להרוות את הספוג פעם אחת חוצץ של רינגר.תחת מיקרוסקופ אור עם סרגל קנה מידה על העין, להשתמש בלהב אזמל כדי לעצב את איפקס של הקונוס לקוטר של כ 40 מיקרומטר. מייבשים את הספוג בצורת חרוט על נייר טישו סופג עד שהוא מוצק. לפני החדרת חוט הכסף לתוך ספוג אצטט פוליוויניל מוצק מיובש בצורת חרוט דרך הבסיס של הקונוס, באמצעות סרט מסכה כדי לבודד כל מתכת חשופה עודפת כדי להפחית חפצים פוטו.ביום הניסוי, לטבול את האלקטרודה ספוג הטה לתוך החיץ של רינגר במשך 15 דקות כדי להרוות את הספוג באופן מלא. לפחות שמונה שעות לפני ההקלטות, מניחים לא יותר מ-20 זחלי זברה בצינור אחד של 15 מיליליטר ללא מכסה ועטופים בנייר אלומיניום באינקובטור כהה. בסוף הדגירה, יוצקים את דג הזברה החשוך לתוך צלחת פטרי תחת תאורה אדומה עמומה מדיודה פולטת אור.כדי להכין את פלטפורמת הספוג, לחתוך חתיכת ספוג אצטט פוליוויניל בערך שווה בעובי לעומק של צלחת פטרי 35 מילימטר, כך הספוג יתאים בנוחות בתוך המנה. בצע חתך קטן אנכית דרך קצה אחד של הספוג כדי להתאים את חוט הכסף של אלקטרודה התייחסות להשרות את הספוג בחוצץ של דג זהב רינג'ר עד הספוג הוא רווי. לאחר מכן מניחים את הספוג לתוך צלחת פטרי נקייה 35 מילימטר ולהשתמש במגבת נייר לספוג את הנוזל הנוסף עד שום פתרון מפריש מן הספוג בתגובה ללחוץ אצבע קלה.כדי למקם את החיה לניסוי, השתמש פיפטה פסטר שלושה מילימטר להעביר זחל הרדמה על ריבוע שלושה על שלושה סנטימטרים של מגבת נייר ולהשתמש מדפים כדי למקם את הריבוע על ספוג לח. בעזרת מברשת דקה ספוגה במאגר של רינגר, התאימו את מיקום הזחל כשעין אחת פונה כלפי מעלה והתרחקה מכל נוזל על המגבת מתחת לזחל. זיגוג גוף הזחל עם ג'ל עיניים לחות כדי לשמור על החיה hydrated לאורך הקלטת electroretinogram.ומ מניחים את המנה על פלטפורמה קטנה ומחוממת מים מול גירוי האור של קערת גנזפלד הממוקמת בתוך כלוב פאראדיי. הכנס את אלקטרודה התייחסות לתוך החתך שנעשה בספוג פלטפורמה. ולחבר אלקטרודה קרקעית שהושגה מסחרית לכלוב פאראדיי.חבר את האלקטרודה ההקלטה למחזיק אלקטרודה ולאבטח את המחזיק לזרוע הסטריאוטוקסית של מיקרומניפולטור. באמצעות פיפטה פסטר שלושה מילימטר, resaturate קצה הספוג של האלקטרודה עם טיפה אחת של הפתרון של רינגר ולמקם את המיקרוסקופ בכלוב פאראדיי מעל פלטפורמת האלקטרורטינוגרם. השתמש בקצה של רקמה סופגת כדי להסיר כל נוזל עודף מן קצה ספוג האלקטרודה מתחת למיקרוסקופ, למקם את האלקטרודה הפעילה, כך קצה הספוג נוגע בעדינות את פני הקרנית המרכזית של העין זברה זחל.לאחר מכן הזיזו את קערת גנץפלד לכיוון פלטפורמת הספוג ודאגו שהזחל מכוסה בקערה וסגרו את הכלוב כדי להפחית רעש אלקטרומגנטי חיצוני. הרגישות של רשתית זברה-דג הזחל להבזקי דימר עולה עם הגיל. כמו a-ו- b-גלים אינם מזוהים ב מידות נמוכות ממינוס 1.61 יומן candela השני למטר בריבוע בארבעה ימים לאחר הפריה בעוד אותות ברורים ניתנים לגילוי בגדלים אלה בזחלים הישנים.משרעת b-wave עולה במידה ניכרת בין ארבע לחמש לאחר ההפריה. בשבעה ימים, האות ב 2.48 יומן candela השני למ"ר הוא גדול יותר לעומת ימים חמש ושש לאחר הפריה. A-ו-b-גל פעמים משתמעות להיות מהיר יותר באופן משמעותי לאחר חמישה ימים לאחר ההפריה.בסך הכל, תוצאות אלה הפגינו התבגרות בתפקוד הרשתית zebrafish בין ארבעה לשבעה ימים לאחר ההפריה. כדי לבצע בהצלחה פרוטוקול זה חיוני כי ספוגים רוויים לחלוטין בנוזל אשר מסייע לשמור על המוליכות של האלקטרודה הקלטה ומוריד את רמות הרעש. אם הגל הוא עניין מיוחד, טיפולים תרופתיים ניתן ליישם כדי לחסום את רכיב b-wave ובכך לחשוף את הגל המלא.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

הדמיה חיה של אינטראקציות תא של מערכת חיסון המולדת וPreneoplastic שימוש מערכת ביטוי / כטב&quot;מ העין מתנהלת Gal4 בעור הזחל דג הזברה

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microbead השרשה בעובר דג הזברה

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

מעקב תאים דג הזברה GFP מהונדס שימוש במערכת photoconvertible PSmOrange

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

ניתוח<em&gt; In vivo</em&gt; נדידת תאים באמצעות השתלות תא והדמיה זמן לשגות עוברי דג הזברה

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

באמצעות תגובת מגע עוררת ו תנועת מבחנים להעריך שריר ביצועים ופונקציות של דג זברה

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

דיסקציה של רקמות הזחל דג הזברה האשכים

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

אינדוקציה של היפוקסיה צפרדע חיה דג הזברה עוברי

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

רומן חדש פאט שומן טכניקת השתלת לדמיין את כלי השיט הדור של כלי הדם בתאי גזע אנדותל

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

הקמתה של הזחל דג זברה כמודל חיה כדי Investigate Trypanosoma cruzi תנועתיות Vivo ב

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

מדמיין את המוח המתפתח בחיים דגים באמצעות הברקשת וזמן-הדמיה קונמיקוד

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...