Name: electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00
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자금이 프로젝트에 대 한 제공 했다 교부 금에 의해 멜버른 신경 과학 연구소에서 (PTG, PRJ & BVB)에.

모든 electroretinogram (에) 절차 동물의 사용 그리고 배려에 대 한 호주 국민 건강 및 의료 연구 위원회 코드의 규정에 따라 수행 했다와 기관 동물 윤리 위원회에 의해 승인 된 멜버른의 대학입니다.
1. 버퍼 준비
<ol><li>준비 하는 금붕어 벨의 버퍼 (1.25 M NaCl, KCl 26mm, 25mm CaCl2, 10 m m MgCl2, 100 mM 포도 당, 100 mM HEPES) x 10 역삼 투 (RO) 물을 사용 하 여. PH 7.8에 버퍼를 조정...

<ol>
	<li>Roper, C., Tanguay, R. L., Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition). , 143-151 (2018).</li><li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats.">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158 (2016).</li><li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae.">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li><li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae.">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li><li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+(ERG)+Measurements+in+Larval+Zebrafish.">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina.">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li><li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases.">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li><li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development.">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li><li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram.">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003 (2017).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models &#38; mechanisms. , (2018).</li><li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency.">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night.">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li><li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates.">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li><li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish.">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li><li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina.">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li><li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials.">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li><li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram.">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li></ol>

에 르 그 같은 기능 해독 애벌레 zebrafish8,9,,1214를 공부 하는 데 사용 하는 도구 제품군에 점점 더 중요 한 되 고 있습니다. 작은 크기로 인해 애벌레 zebrafish 눈의, 유리 micropipettes 전극 가장 게시 프로토콜3,4,5,,<sup cl...

제 브라 (Danio rerio) 시각적인 신경 과학의 연구를 포함 하 여 널리 유전 척추 모델 되고있다. 이 종족의 증가 인기 유전자 조작, 높은 보존된 척추 영상 시스템 (신경, 해부학 적 형태와 조직, 형식과 기본 유전학), 높은 통치의 용이성 등 장점을 표시 될 수 있습니다. 그리고 축산 포유류 모델1에 비해 저렴 한 비용. 비-침략 적 electroretinogram (에) 오래 사용 되었습니다 임상 인간의 시각 기능을 평가 하 고 비전의 크고 작은 설치류 등 애벌레 zebrafish2,3 범위에서 계량을 실험실 속 , 4 , 5. 가장 일반적으로 분석된에 구성 요소는 a 파와 b 파, 빛 감지 대뇌와 바이 폴라 수에서 발생 하는 각각. 애벌레 zebrafish, 망막에 뚜렷한 레이어 3 일 후 수정 (dpf)에 의해 설립 되 고 터미널 포토 리셉터 콘의 형태학 synapses 4 dpf6,7전에 성숙. 애벌레 zebrafish의 외부 망막 기능 따라서 4 dpf는 르 그 이후이 이른 나이에서 측정 가능한 것을 의미 하기 전에 설정 됩니다. 짧은 실험 주기 모델의 높은 처리량 속성 때문에 르 그에 적용 된 애벌레 zebrafish 질환 모델의 기능 평가 위한 컬러 비전 및 망막 개발 분석, 시각적 circadian 리듬 공부 그리고8,,910,,1112마약 테스트.
그러나, 애벌레 zebrafish에 대 한 현재 접근에 채택 하기 어렵게 만들 수 있는 몇 가지 복잡 한 있다. 일반적으로 기록 전극3,,45,13, 고품질 micropipette 필요로 하로 전도성 액체로 채워진 유리 제 micropipette를 사용 하 여 게시 된 애벌레 zebrafish에 프로토콜 팁3. 특수 장비, micropipette 끌어당기는 등 및 microforge, 어떤 경우에는 그들의 제조에 대 한 필요 합니다. 이 한정 된 자원 가진 실험실에 대 한 도전이 될 수 있습니다 그리고 애벌레 zebrafish 시각적 기능의 측정을 위해 사용할 수 있는 작은 동물에 시스템에 적응 하는 경우에 추가 비용을 리드. 부드럽게 하는 경우에 날카로운 micropipette 팁 애벌레 눈의 표면을 손상 수 있습니다. 또한, 전기 생리학에 대 한 상업 micropipette 홀더 고정된 실버 와이어로 구성 됩니다. 이러한 전선 고정 증가 유지 보수 비용을 선도 하는 새로운 소유자의 구입을 요구 하는 반복 사용 후 패 된다.
여기는 원뿔 모양의 스폰지 팁 기록 전극, 애벌레 zebrafish에 측정에 대 한 설립된 작은 동물에 설정을 적응에 특히 유용 합니다을 사용 하 여 르 그 방법에 설명 합니다. 전극 일반적인 폴 리 비닐 아세테이트 (PVA) 스폰지 및 기타 특수 장비 없이 괜 찮 실버 와이어를 사용 하 여 쉽게 이루어집니다. 우리의 데이터는이 새로운 전극 민감하고 안정적 4와 7 dpf 사이 애벌레 zebrafish에 망막 신경 회로의 기능 개발을 설명 하는 보여준다. 이 경제적이 고 실용적인 스폰지 팁 전극 연구원 새로운 르 그 시스템을 구축 또는 기존 작은 동물 시스템, zebrafish 연구에 대 한 수정에 유용할 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td>Filters the 10&#215; goldfish ringer&#39;s buffer for sterilizatio</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>DVR-5175</td>
			<td>With a 30G &#215; &#189;&#34; needle to add drops of saline to the electrode sponge tip to prevent drying and increased noisein the ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G &#215; &#189;&#34; needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*3013R</td>
			<td>For adding saline toteh sopnge tip electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioamplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML135</td>
			<td>For amplifying ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution&#160;</td>
			<td>King White</td>
			<td>9333441000973</td>
			<td>For an alternative method of sliver electrode chlorination. Active ingredient: 42 g/L sodium hypochlorite.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulation water bath</td>
			<td>Lauda-Ko&#776;nigshoffen</td>
			<td>MGW Lauda</td>
			<td>Used to make the water-heated platfrom.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode lead</td>
			<td>Grass Telefactor</td>
			<td>F-E2-30</td>
			<td>Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing dark adaptation and enclosing the Ganzfeld setup to improve signal-to-noise ratio.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfeld Bowl</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxeon LEDs</td>
			<td>Phillips Light Co.</td>
			<td></td>
			<td>For light stimulation twenty 5W and one 1W LEDs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>BS4 50-2625</td>
			<td>Holds the recording electrode during experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>version 2010</td>
			<td>Spreadsheet software for data analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisturizing eye gel</td>
			<td>GenTeal Gel</td>
			<td>9319099315560</td>
			<td>Used to cover zebrafish larvae during recordings to avoiding dehydration. Active ingredient: 0.3 % Hypromellose and 0.22 % carbomer 980.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Copan</td>
			<td>200C</td>
			<td>Used to caredully transfer larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab data acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td>Controls the LEDs to generate stimuli.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVA sponge</td>
			<td>MeiCheLe</td>
			<td>R-1675</td>
			<td>For the placement of larval zebrafish and making the cone-shaped electrode ti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Aaxis Pacific</td>
			<td>13317002</td>
			<td>For electroplating silver wire electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scope Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>version 3.7.6</td>
			<td>Simultaneously triggers the stimulus through the Powerlab system and collects data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver (fine round wire)</td>
			<td>A&#38;E metal</td>
			<td>0.3 mm</td>
			<td>Used to make recording and reference ERG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td>Used to shape and measure the cone-shaped sponge apex (with scale bar on eyepiece). Positioned in the Faraday cage for electrode placement.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine&#160;</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td>For anaethetizing larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-heated platform</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing the temperature of the sponge platform and the larval body during ERG recordings</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode

제 브라 (Danio rerio) 발달 연구에서 척추 모형으로 일반적으로 사용 되 고 특히 시각적인 신경 과학에 대 한 적합 합니다. 비주얼 퍼포먼스의 기능 측정, electroretinography (에) 더 높은 척 추가 있는 종에서 잘 설립 되었습니다 이상적인 비-침략 적 방법입니다. 이 접근은 점점 zebrafish, 초기 단계에서 발달 애벌레 포함에 시각적 기능을 검토를 위해 사용 되 고 있습니다. 그러나, 애벌레 zebrafish에 날짜에 대 한 가장 일반적으로 사용 되 기록 전극 유리 제 micropipette 전극 제조, 한정 된 자원을 가진 실험실에 대 한 과제를 제시에 대 한 특수 장비를 필요로 하는. 여기, 선물이 애벌레 zebrafish에 프로토콜 사용 하 여 원뿔 모양의 스폰지 팁 전극. 새로운 전극 제조 및 핸들, 더 경제적이 고 유리 제 micropipette 보다 애벌레 눈 손상 가능성이 쉽습니다. 이전에 게시에 방법 처럼 현재 프로토콜 각각 포토 리셉터와 양극 세포 응답, a-와 b-파도를 통해 외부 망막 기능을 평가할 수 있습니다. 프로토콜은 zebrafish 애벌레, 지원 유틸리티, 감도, 및 새로운 전극의 신뢰성의 초기 개발을 통해 시각적 기능의 상세를 설명 명확 하 게 수 있습니다. 단순화 된 전극 새로운 르 그 시스템 구축 또는 기존 작은 동물에 장치는 제 브라를 사용 하 여 시각적인 신경 과학 연구자를 돕고 zebrafish 측정에 대 한 수정 모델 유기 체 때 특히 유용 하다.

이 섹션에 측정 한 매일 4에서 7 dpf에 대 한 대표적인 결과를 제공 합니다. 4 dpf에 응답 강력한 a-와 b-파 구성 요소, 각각 대뇌와 양극 세포에서 발생 하는 표시. 각 나이에 테스트, b 파의 진폭 증가 빛의 강도 (그림 2; 그림 3). 특히, 나 이와 함께 증가 하는 주차 섬광에 애벌레 zebrafish 망막의 감도. A-와 b-웨이브 명확한 신호 했다 더 오래 된 ...

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Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

스폰지 팁 전극 A 소설 원추형을 사용 하 여 애벌레 Zebrafish에 기록 하는 Electroretinogram

여기, 선물이 애벌레 zebrafish에서 빛 갖는 electroretinogram 응답의 측정을 간소화 하는 프로토콜. 소설 원뿔 모양의 스폰지 팁 전극에 electroretinogram를 사용 하 여 신뢰할 수 있는 결과 낮은 비용으로 달성 하기 쉽게 하는 애벌레 zebrafish에 시각적 개발의 연구를 만들기 위해 도울 수 있다.

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

이 프로토콜은 시각 발달 및 유전 질환 모델의 중요한 기능 적 판독을 제공하는 애벌레 얼룩말피에서 전기 전세 사진 또는 ERGs의 측정을 단순화하는 데 도움이됩니다. 이 프로토콜에 사용되는 전극을 기록하는 부드러운 스폰지 팁은 경제적이고 쉽게 사용할 수있는 재료를 사용하여 제조하기 쉽고 애벌레 눈에 잠재적 인 손상을 방지할 수 있습니다. 부드러운 스폰지 팁 전극은 동일한 눈의 반복된 ERG 측정을 용이하게 할 수 있습니다.이 절차에 새로운 개인은 절차 전반에 걸쳐 사용되는 희미한 빨간색 조명 아래에서 작업하기가 어려울 수 있습니다. 그러나 어두운 적응을 유지하는 것이 중요합니다. 원뿔 모양의 스폰지 기록 전극을 준비하기 위해 백금 전극 납 연장에서 끝을 자르고 메스를 사용하여 확장의 새로운 끝에서 외부 폴리테트라플루오로틸렌 절연 코팅의 10 밀리미터를 제거합니다.직경 0.3mm의 실버 와이어의 40밀리미터 조각을 자르고 노출된 내부 와이어로 실버 와이어를 결합하여 전극 리드에 와이어를 단단히 부착합니다. 약 15mm 길이의 실버 와이어를 노출시키는 절연 테이프로 조인트를 감싸는 다. 다른 와이어를 배터리의 음수 단말에 연결하고 와이어의 다른 끝을 식염수에 담급다.노출된 실버 와이어를 일반 식염수에 담그고 다른 쪽 끝을 9볼트 직류 소스의 양단에 연결합니다. 60초 후, 흡수성 조직에 와이어를 놓아 건조시다. 그 동안, 폴리 비닐 아세테이트 스폰지의 20 ~ 20 밀리미터 사각형을 원뿔 모양으로 자르고 한 번 링거의 버퍼에 스폰지를 포화.접안렌즈에 스케일 바가 있는 가벼운 현미경아래에서 메스 블레이드를 사용하여 콘의 정점을 약 40 마이크로미터 직경으로 형성합니다. 원뿔 모양의 스폰지를 흡수성 티슈 페이퍼에 공기 건조시고 단단할 때까지 닦습니다. 실버 와이어를 말린 고체 원뿔 모양의 폴리 비닐 아세테이트 스폰지에 삽입하기 전에, 마스크 테이프를 사용하여 과도한 노출된 금속을 절연하여 광전지 유물을 감소시킵니다.실험 당일, 스폰지 팁 전극을 링거의 버퍼에 15분 간 담그어 스폰지를 완전히 포화시합니다. 녹음 하기 최소 8 시간 전에 뚜껑없이 하나의 15 밀리리터 튜브에 20 마리 이상의 얼룩말 애벌레를 놓고 어두운 인큐베이터에 알루미늄 호일에 싸여 있습니다. 인큐베이션이 끝나면, 광방출 다이오드의 희미한 붉은 조명 아래, 어두운 색으로 조정된 제브라피쉬를 페트리 접시에 붓습니다.스폰지 플랫폼을 준비하려면, 스폰지가 접시 내에서 잘 맞도록 두께가 35mm 페트리 접시의 깊이와 거의 동일한 폴리 비닐 아세테이트 스폰지 조각을 잘라. 스폰지의 한쪽 끝을 수직으로 잘라 서 참조 전극의 실버 와이어를 수용 하 고 스폰지포화 될 때까지 금붕어 링거의 버퍼에 스폰지를 담그십시오. 그런 다음 스폰지를 깨끗한 35mm 페트리 접시에 넣고 종이 타월을 사용하여 가벼운 손가락 프레스에 대한 응답으로 스폰지에서 용액이 발산되지 않도록 여분의 액체를 흡수합니다.실험을 위해 동물을 배치하려면 3mm 파스퇴르 파이펫을 사용하여 마취된 유충을 3센티미터 의 종이 타월 사각형에 옮기고 집게를 사용하여 모이스펀지에 사각형을 놓습니다. 링거의 버퍼에 담근 미세한 브러시를 사용하여 애벌레 아래 수건에 있는 액체에서 한쪽 눈을 위쪽으로 향하여 애벌레의 위치를 조정합니다. 전하계 기록 전반에 걸쳐 수분을 공급하는 동물용 젤로 애벌레 본체에 유약.그리고 패라데이 케이지 안에 위치한 간즈펠트 그릇 의 빛 자극 앞에 작고 가열된 플랫폼에 접시를 놓습니다. 플랫폼 스폰지에서 만든 절단에 기준 전극을 삽입합니다. 그리고 상업적으로 획득한 접지 전극을 패러데이 케이지에 연결합니다.전극 을 전극 홀더에 부착하고 마이크로 조작기의 스테레오 탁스 암에 홀더를 고정합니다. 3mm 파스퇴르 파이펫을 사용하여 링거 용액 한 방울로 전극의 스폰지 끝을 분해하고 패러데이 케이지의 현미경을 전자 전세판 플랫폼 위에 배치합니다. 흡수 조직의 끝을 사용하여 전극 스폰지 팁과 현미경 아래에 과도한 액체를 제거하고, 스폰지 팁이 애벌레 얼룩말 눈의 중앙 각막 표면에 부드럽게 닿도록 활성 전극을 배치합니다.그런 다음 간즈펠트 그릇을 스폰지 플랫폼쪽으로 이동하여 애벌레가 그릇에 덮여 있고 케이지를 닫아 불필요한 전자기 소음을 줄입니다. 희미하게 깜박이는 애벌레 얼룩말 망막의 감도는 나이가 들면서 증가합니다. a-파는 4일 후 수정 후 에서 제곱된 미터당 마이너스 1.61 로그 칸델라 초보다 낮은 강도에서 인식할 수 없으므로 오래된 애벌레의 이러한 강도에서 명확한 신호를 감지할 수 있습니다.b-wave 진폭은 4에서 5번 의 후 수정 사이에 현저하게 증가합니다. 7일 시점에서 미터당 2.48로그 칸델라 초당 2.48로 신호가 5일과 6일 후 수정에 비해 더 큽습니다. A-와 b-wave 암시적 시간은 5일 후 수정 후 훨씬 빨라집니다.전반적으로, 이러한 결과 4 ~7 일 후 수정 후 제브라피시 망막 기능에 성숙을 보여주는. 이 프로토콜을 성공적으로 수행하려면 스폰지가 유체로 완전히 포화되어 기록 전극의 전도도를 유지하고 소음 수준을 낮추는 것이 중요합니다. 파도가 특히 관심이 있는 경우, 약리학적 치료가 적용되어 b-wave 성분을 차단하여 전체 파도를 노출시킬 수 있다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

애벌레 Zebrafish의 피부에 유도 GAL4 / UAS 식 시스템을 사용하여 선천성 면역과 종양 전 세포 상호 작용의 라이브 영상

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

연구

발생학

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Zebrafish의 배아에 주입 마이크로 비드

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Photoconvertible PSmOrange 시스템을 사용하여 GFP 유전자 변형 Zebrafish의 세포를 추적

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

분석<em&gt; 생체</em&gt; 셀 마이그레이션 Zebrafish의 배아에서 세포 이식 및 시간 경과 이미징을 사용하여

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

터치 유발 대응 및 로코 분석 실험을 사용하여 Zebrafish의 근육의 성능 및 기능을 평가하기 위해

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Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

애벌레 Zebrafish의 생식소 조직의 해부

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

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Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

혈관 내피 줄기 세포의 혈관 생성을 시각화하기위한 유방 팻 패드 이식 기술

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Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

조사 Trypanosoma cruzi 운동 비보 를 동물 모델로 서 애벌레 Zebrafish의 설립

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

무지개와 타임랩스 공초점 이미징을 사용하여 살아있는 제브라피시의 뇌 발달 시각화

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...