Name: electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Finansiering for prosjektet ble levert av en bevilgning fra Melbourne nevrovitenskap Institute (til PTG, PRJ & BVB).

Alle electroretinogram (ERG) prosedyrer ble utført i henhold til bestemmelsene i den australske National Health and Medical Research Council anbefaling for omsorg og bruk av dyr og ble godkjent av institusjonelle dyreetikk på den Universitetet i Melbourne.
1. buffer forberedelse
<ol><li>Forberede 10 x gullfisk Ringer i bufferen (1,25 M NaCl, 26 mM KCl, 25 mm CaCl2, 10 mM MgCl2, 100 mM glukose, 100 mM HEPES) bruke omvendt osmose (RO) vann. Juster buffer til pH 7,8 og s...

<ol>
	<li>Roper, C., Tanguay, R. L., Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition). , 143-151 (2018).</li><li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats.">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158 (2016).</li><li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae.">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li><li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae.">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li><li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+(ERG)+Measurements+in+Larval+Zebrafish.">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina.">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li><li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases.">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li><li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development.">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li><li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram.">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003 (2017).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models &#38; mechanisms. , (2018).</li><li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency.">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night.">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li><li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates.">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li><li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish.">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li><li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina.">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li><li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials.">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li><li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram.">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li></ol>

Funksjonell readouts som ERG har blitt stadig viktigere i suite av verktøy som brukes til å studere larver sebrafisk8,9,12,14. På grunn av den lille størrelsen på larver sebrafisk øyet, har glass Mikropipetter blitt tilpasset som spiller inn elektrodene i mest publiserte protokoller3,4,5,</s...

Sebrafisk (Danio rerio) har blitt en brukte genetisk virveldyr modellen, inkludert studier av visuelle neurosciences. Den økende populariteten til denne arten kan tilskrives fordeler inkludert enkel genetisk manipulasjon, høyt konservert virveldyr visuelle systemet (Nevron typer, anatomisk morfologi og organisasjon og underliggende genetikk), høy fruktbarhet og lavere kostnader rettsgrunnlag sammenlignet pattedyr modeller1. Den ikke-invasiv electroretinogram (ERG) har lenge vært brukt klinisk å vurdere menneskelige visuelle funksjon, og i laboratorium innstillingen å kvantifisere visjon i en rekke små og store arter inkludert gnagere og larver sebrafisk2,3 , 4 , 5. oftest analysert ERG komponentene er en bølge og b-bølge, som stammer fra lys-sensing fotoreseptorer og bipolar interneurons, henholdsvis. I larver sebrafisk, forskjellige lag i netthinnen er etablert av 3 dager etter befruktning (dpf) og morfologi av photoreceptor membran terminal synapser modne før 4 dpf6,7. Ytre retinal funksjon av larver sebrafisk er dermed etablert før 4 dpf, betyr at ERG er målbare fra denne tidlig alder og utover. På grunn av korte eksperimentelle syklusen og egenskapene høy gjennomstrømming for modellen, har ERG blitt brukt til larver sebrafisk funksjonelle vurdering av sykdom modeller, analysere fargen syn og retinal utvikling, studere visuelle døgnrytme og testing narkotika8,9,10,11,12.
Gjeldende metoder for larver sebrafisk ERG har imidlertid noen kompleksiteten som kan gjøre det vanskeligere å adoptere. Publisert larver sebrafisk ERG protokoller bruker vanligvis glass brønnene fylt med ledende væske som opptak elektrode3,4,5,13, som krever høy kvalitet brønnene tips3. Spesialisert utstyr, som en brønnene avtrekker og i noen tilfeller en microforge, kreves for TVer. Dette kan være en utfordring for laboratorier med begrensede ressurser og fører til ekstra kostnader selv når tilpasse tilgjengelige liten dyr ERG systemer for måling av larver sebrafisk visuelle funksjon. Selv når glattet kan skarpe brønnene spissen skade overflaten av larver øyet. I tillegg, er kommersiell brønnene holdere for elektrofysiologi bygget med en fast sølv wire. Disse faste ledninger bli paddivert etter repeterende bruk krever kjøp av nye fører til økt vedlikeholdskostnader.
Her beskriver vi en ERG metoden ved hjelp av en kjegle-formet svamp-tip opptak elektrode, som er spesielt nyttig for å tilpasse etablerte liten-dyr ERG oppsett for larver sebrafisk ERG målinger. Elektroden gjøres enkelt ved hjelp av vanlige polyvinylacetat (PVA) svamp og fint sølv wire uten andre spesialiserte utstyr. Våre data viser at denne romanen elektrode sensitiv og pålitelig nok å demonstrere funksjonelle utviklingen av netthinnen nevrale kretser i larver sebrafisk mellom 4 og 7 dpf. Dette økonomisk og praktisk svamp-tip elektrode kan være nyttig for forskerne å etablere nye ERG systemer eller endre eksisterende liten-dyr systemer for sebrafisk studier.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td>Filters the 10&#215; goldfish ringer&#39;s buffer for sterilizatio</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>DVR-5175</td>
			<td>With a 30G &#215; &#189;&#34; needle to add drops of saline to the electrode sponge tip to prevent drying and increased noisein the ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G &#215; &#189;&#34; needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*3013R</td>
			<td>For adding saline toteh sopnge tip electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioamplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML135</td>
			<td>For amplifying ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution&#160;</td>
			<td>King White</td>
			<td>9333441000973</td>
			<td>For an alternative method of sliver electrode chlorination. Active ingredient: 42 g/L sodium hypochlorite.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulation water bath</td>
			<td>Lauda-Ko&#776;nigshoffen</td>
			<td>MGW Lauda</td>
			<td>Used to make the water-heated platfrom.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode lead</td>
			<td>Grass Telefactor</td>
			<td>F-E2-30</td>
			<td>Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing dark adaptation and enclosing the Ganzfeld setup to improve signal-to-noise ratio.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfeld Bowl</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxeon LEDs</td>
			<td>Phillips Light Co.</td>
			<td></td>
			<td>For light stimulation twenty 5W and one 1W LEDs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>BS4 50-2625</td>
			<td>Holds the recording electrode during experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>version 2010</td>
			<td>Spreadsheet software for data analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisturizing eye gel</td>
			<td>GenTeal Gel</td>
			<td>9319099315560</td>
			<td>Used to cover zebrafish larvae during recordings to avoiding dehydration. Active ingredient: 0.3 % Hypromellose and 0.22 % carbomer 980.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Copan</td>
			<td>200C</td>
			<td>Used to caredully transfer larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab data acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td>Controls the LEDs to generate stimuli.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVA sponge</td>
			<td>MeiCheLe</td>
			<td>R-1675</td>
			<td>For the placement of larval zebrafish and making the cone-shaped electrode ti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Aaxis Pacific</td>
			<td>13317002</td>
			<td>For electroplating silver wire electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scope Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>version 3.7.6</td>
			<td>Simultaneously triggers the stimulus through the Powerlab system and collects data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver (fine round wire)</td>
			<td>A&#38;E metal</td>
			<td>0.3 mm</td>
			<td>Used to make recording and reference ERG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td>Used to shape and measure the cone-shaped sponge apex (with scale bar on eyepiece). Positioned in the Faraday cage for electrode placement.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine&#160;</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td>For anaethetizing larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-heated platform</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing the temperature of the sponge platform and the larval body during ERG recordings</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode

Sebrafisk (Danio rerio) brukes ofte som virveldyr modell i utviklingsmessige studier og er spesielt egnet for visuell nevrovitenskap. For funksjonelle målinger av visuell ytelse er electroretinography (ERG) en ideell ikke-invasiv metode, som er godt etablert i høyere virveldyr arter. Denne fremgangsmåten brukes stadig mer for å undersøke funksjonen visuelle i sebrafisk, inkludert under de tidlige utviklingsmessige larver stadiene. Den mest brukte opptak elektroden for larver sebrafisk ERG hittil er imidlertid glass brønnene elektroden, som krever spesialisert utstyr for fremstillingen, presentere en utfordring for laboratorier med begrensede ressurser. Her presenterer vi en larver sebrafisk ERG protokollen bruker en kjegle-formet svamp-tip elektrode. Romanen elektroden er lettere å produksjon og håndtak, mer økonomisk, og mindre sannsynlig å skade larver øyet enn glass brønnene. Som tidligere publiserte ERG metoder, kan gjeldende protokollen vurdere ytre netthinnefunksjon gjennom photoreceptor og bipolar celle svar, a - og b-bølgen, henholdsvis. Protokollen kan tydelig illustrere avgrensningen av visuelle funksjon i den tidlige utviklingen av sebrafisk larvene, støtter det verktøyet, følsomhet og pålitelig romanen elektroden. Forenklet elektroden er spesielt nyttig når etablere et nytt ERG system eller endre eksisterende liten-dyr ERG apparater for sebrafisk måling, hjelpe forskere i visuelle neurosciences bruke sebrafisk modell organisme.

Denne delen gir ERG målinger tatt daglig fra 4 til 7 dpf representant resultater. Fra 4 dpf viser ERG svar robust a - og b-bølge komponenter, som oppstår fra fotoreseptorer og bipolar celler, henholdsvis. I hver alder testet, amplituden til b-bølge økt med lav intensitet (figur 2; Figur 3). Spesielt følsomheten av larver sebrafisk netthinnen til dimmer blinker økt med alderen. A - og b-bølgen var ikke gjenkjennelig på intensiteter la...

Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Electroretinogram opptak i larver sebrafisk bruker A Novel koniske svamp-tip elektrode

Her presenterer vi en protokoll som forenkler måling av lys vakte electroretinogram svar fra larver sebrafisk. En roman koniske svamp-tip elektrode kan bidra til å gjøre studiet av visuell utvikling i larver sebrafisk bruker electroretinogram ERG lettere å oppnå med pålitelige resultater og lavere kostnader.

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Denne protokollen bidrar til å forenkle målinger av elektroretinogrammer eller ERGs i larval sebrafisk som gir en viktig funksjonell avlesning av visuell utvikling og genetiske sykdomsmodeller. De myke svampspissene for å registrere elektroder som brukes i denne protokollen er enkle å produsere ved hjelp av økonomiske og lett tilgjengelige materialer og unngår potensiell skade på larveøynene. Den mykere svamp-tipped elektroden kan lette gjentatte ERG-målinger av samme øye.Personer som er nye i denne prosedyren, kan finne det vanskelig å arbeide under den svake røde belysningen som brukes gjennom hele prosedyren. Men det er viktig at mørk tilpasning opprettholdes. For å forberede den kjegleformede svampopptakselektroden, kutt enden fra en platinaelektrodeledningsforlengelse og bruk en skalpell til å fjerne 10 millimeter av det ytre polytetrafluoroetylenisolasjonsbelegget fra den nye enden av utvidelsen.Klipp en 40 millimeter stykke av en 0,3 millimeter diameter sølvtråd og sammenflette sølvtråden med den eksponerte indre ledningen for å feste ledningen sikkert til elektrodeledningen. Innkapslet skjøten med isolerende tape som etterlater en ca 15 millimeter lengde av sølvtråd eksponert. Koble en annen ledning til den negative terminalen på batteriet og senk den andre enden av ledningen ned i saltvannet.Dypp den eksponerte sølvtråden i normal saltvann og koble den andre enden til den positive terminalen til en ni volts direktestrømkilde. Etter 60 sekunder, plasser ledningen på absorberende vev for å tørke. I mellomtiden, kutt en 20 med 20 millimeter kvadrat av polyvinylacetat svamp i en kjegle form og mette svampen i en gang Ringer buffer.Under et lett mikroskop med en skalastang på okularet, bruk et skalpellblad for å forme toppen av kjeglen til en ca. 40 mikrometerdiameter. Lufttørk den kjegleformede svampen på absorberende vevspapir til den er fast. Før du setter den sølvtråden inn i den tørkede solide kjegleformede polyvinylacetatsvampen gjennom bunnen av kjeglen, ved hjelp av masketape for å isolere overflødig eksponert metall for å redusere fotovoltaiske gjenstander.På dagen for eksperimentet, dypp svamp-tippet elektroden i Ringers buffer i 15 minutter for å mette svampen helt. Minst åtte timer før opptakene, legg ikke mer enn 20 sebrafisk larver i et enkelt 15 milliliter rør uten lokk og innpakket i aluminiumsfolie i en mørk inkubator. På slutten av inkubasjonen, hell den mørktilpassede sebrafisken i en petriskål under svak rød belysning fra en lysdiode.For å forberede svampplattformen, kutt et stykke polyvinylacetat svamp omtrent lik i tykkelse til dybden av en 35 millimeter petriskål slik at svampen vil passe tett i parabolen. Lag et lite kutt vertikalt gjennom den ene enden av svampen for å imøtekomme sølvtråden til referanseelektroden og suge svampen i gullfiskens ringerbuffer til svampen er mettet. Legg deretter svampen i en ren 35 millimeter petriskål og bruk et papirhåndkle til å absorbere den ekstra væsken til ingen løsning utstråler fra svampen som svar på et lett fingertrykk.For å plassere dyret for eksperimentet, bruk en tre millimeter Pasteur pipette for å overføre en bedøvet larve på en tre og tre centimeter kvadrat papirhåndkle og bruk tang til å plassere firkanten på den fuktede svampen. Bruk en fin børste gjennomvåt i Ringers buffer, juster larvens posisjon med ett øye vendt oppover og bort fra væske på håndkleet under larven. Glaser larvalkroppen med fuktighetsgivende øyegel for å holde dyret hydrert gjennom elektroretinogramopptaket.Og legg fatet på en liten, vannoppvarmet plattform foran Ganzfeld bolle lys stimulans som ligger inne i en Faraday bur. Sett referanseelektroden inn i snittet som er laget i plattformsvampen. Og koble en kommersielt innhentet jordelektrode til Faraday-buret.Fest opptakselektroden til en elektrodeholder og fest holderen til den stereotaksiske armen til en mikromanipulator. Bruk en tre millimeter Pasteur pipette til å resaturate svampspissen av elektroden med en dråpe Ringers løsning og plassere mikroskopet i Faraday-buret over elektroretinogramplattformen. Bruk spissen av et absorberende vev for å fjerne overflødig væske fra elektrodesvampspissen og under mikroskopet, plasser den aktive elektroden slik at svampspissen forsiktig berører den sentrale hornhinnens overflate av larval sebrafiskøyet.Deretter flytter Duddfeld bolle mot svampplattformen, og vær forsiktig med at larven er dekket av bollen og lukker buret for å redusere overflødig elektromagnetisk støy. Følsomheten til larval sebrafisk netthinnen til dimmer blinker øker med alderen. Siden a-og b-bølgene ikke er gjenkjennelige ved intensiteter lavere enn minus 1,61 logg candela andre per meter kvadrert på fire dager etter befruktning mens klare signaler er påviselige ved disse intensitetene i de eldre larver.B-bølge amplituden øker markert mellom fire og fem etter befruktning. På syv dager, signalet på 2,48 logg candela andre per meter kvadrert er større sammenlignet med dag fem og seks etter befruktning. A-og b-bølge implisitte tider blir betydelig raskere etter fem dager etter befruktning.Med samlet, disse resultatene viser en modning i sebrafisk retinal funksjon mellom fire til syv dager etter befruktning. For å kunne utføre denne protokollen er det avgjørende at svamper er fullt mettet med væske som bidrar til å opprettholde ledningsevnen til opptakelektroden og senker støynivået. Hvis a-bølgen er av spesiell interesse, kan farmakologiske behandlinger brukes til å blokkere b-bølgekomponenten og dermed utsette hele a-bølgen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging av medfødte immun og preneoplastiske Cell Interaksjoner Bruke en induserbar Gal4 / UAS Expression System i Larvesebrafisk Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Mikro Implantasjon i sebrafisk Embryo

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Sporing celler i GFP-transgene Sebrafisk Bruke Photoconvertible PSmOrange System

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyserer<em&gt; I Vivo</em&gt; Cell Migration bruker Cell transplantasjoner og Time-lapse Imaging in Sebrafisk embryo

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Ved hjelp av Touch-fremkalt respons og locomotion Analyser for å vurdere muskel ytelse og funksjon i Sebrafisk

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Disseksjon av Larve Sebrafisk Gonadale Tissue

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induksjon av hypoksi i levende frosk og sebrafiskembryoer

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

En ny mammarfettpute-transplantasjonsteknikk for å visualisere fartøygenerering av vaskulære endotelceller

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Etablering av larver sebrafisk som et dyr-modellen for å undersøke Trypanosoma cruzi motilitet I Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

Visualisere den utviklende hjernen i levende sebrafisk ved hjelp av Brainbow og Time-lapse Confocal Imaging

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...