Name: electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Finansiering för projektet tillhandahölls av ett bidrag från Melbourne neurovetenskap Institute (till PTG, PRJ & BVBEN).

Alla electroretinogram (ERG) förfaranden utfördes enligt bestämmelserna i den australiensiska nationella hälso- och medicinska forskningsrådet uppförandekoden för vård och användning av djur och godkändes av utskottet för institutionella djuretik på den University of Melbourne.
1. buffert förberedelse
<ol><li>Förbereda 10 x guldfisk Ringers buffert (1,25 M NaCl, 26 mM KCl, 25 mm CaCl2, 10 mM MgCl2, 100 mM glukos, 100 mM HEPES) använder omvänd osmos (RO)....

<ol>
	<li>Roper, C., Tanguay, R. L., Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition). , 143-151 (2018).</li><li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats.">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158 (2016).</li><li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae.">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li><li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae.">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li><li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+(ERG)+Measurements+in+Larval+Zebrafish.">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina.">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li><li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases.">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li><li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development.">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li><li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram.">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003 (2017).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models &#38; mechanisms. , (2018).</li><li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency.">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night.">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li><li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates.">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li><li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish.">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li><li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina.">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li><li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials.">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li><li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram.">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li></ol>

Funktionsavläsningar såsom ERG har blivit allt viktigare i sviten av verktyg som används för att studera larval Zebrafiskar8,9,12,14. På grund av den lilla storleken av larval Zebrafiskar ögat har glas Mikropipetter anpassats som spelar in elektroder i mest publicerade protokoll3,4,5,<...

Zebrafiskar (Danio rerio) har blivit en allmänt använd genetiska ryggradsdjur modell, inklusive studier av de visuella neurovetenskaperna. Den ökande populariteten av denna art kan tillskrivas fördelar inklusive användarvänlighet genmanipulation, mycket ryggradsdjur visuella systemet (neuron typer, anatomiska morfologi och organisation och underliggande genetik), hög fruktsamhet och lägre kostnader för djurhållning jämfört med däggdjur modeller1. Den icke-invasiva electroretinogram (ERG) har länge använts kliniskt bedöma mänskliga synfunktion, och i inställningen laboratorium för att kvantifiera vision i en rad stora och små arter, inklusive gnagare och larver Zebrafiskar2,3 , 4 , 5. de vanligaste analyserade ERG-komponenterna är en våg och b-våg, med ursprung från ljus-sensing fotoreceptorer och bipolär interneuroner, respektive. I larval Zebrafiskar, distinkta lager i näthinnan bildas av 3 dagar efter befruktning (dpf) och morfologi av ljusmätare konen terminal synapses mogna innan 4 dpf6,7. Yttre näthinnans funktion av larval Zebrafiskar är således fastställas förrän 4 dpf, vilket innebär att ERG är mätbara från denna tidiga ålder och framåt. På grund av den korta experimentella cykeln och egenskaperna hög genomströmning av modellen, har ERG tillämpats larval Zebrafiskar för funktionell bedömning av sjukdomsmodeller, analysera färg vision och retinal utveckling, studera visuella dygnsrytm och testa droger8,9,10,11,12.
Men nuvarande metoder för larval Zebrafiskar ERG har några komplexitet som kan göra det svårare att anta. Publicerade larval Zebrafiskar ERG protokoll använder ofta en glas mikropipett fylld med elektriskt ledande vätska som den inspelning elektroden3,4,5,13, vilket kräver en hög kvalitet mikropipett Tips3. Specialutrustning, såsom en mikropipett avdragare och i vissa fall en microforge, som krävs för deras tillverkning. Detta kan vara en utmaning för laboratorier med begränsade resurser och leder till extra kostnader även när anpassning finns små djur ERG system för mätning av larval Zebrafiskar visuell funktion. Även när utjämnad, kan skarpa mikropipett spetsen skada ytan av larval ögat. Dessutom är kommersiella mikropipett hållare för elektrofysiologi konstruerade med en fast silver tråd. Dessa fasta ledningar bli passiviseras efter upprepad användning, som kräver inköp av ny innehavare leder till ökade underhållskostnader.
Här beskriver vi en ERG metod med en konformad sponge-tip inspelning elektrod, som är särskilt användbart för att anpassa etablerade små-djur ERG uppställningar för larval Zebrafiskar ERG mätningar. Elektroden görs enkelt med hjälp av gemensamma polyvinylacetat (PVA) svamp och fina silver tråd utan annan specialiserad utrustning. Våra data visar att denna roman elektrod är känsliga och tillräckligt tillförlitlig för att påvisa funktionell utveckling av retinal neurala kretsar i larval Zebrafiskar mellan 4 och 7 dpf. Denna ekonomiska och praktiska sponge-tip elektroden kan vara användbar för forskare att inrätta nya system för ERG eller ändra befintliga system för små djur, för Zebrafiskar studier.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td>Filters the 10&#215; goldfish ringer&#39;s buffer for sterilizatio</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>DVR-5175</td>
			<td>With a 30G &#215; &#189;&#34; needle to add drops of saline to the electrode sponge tip to prevent drying and increased noisein the ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G &#215; &#189;&#34; needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*3013R</td>
			<td>For adding saline toteh sopnge tip electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioamplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML135</td>
			<td>For amplifying ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution&#160;</td>
			<td>King White</td>
			<td>9333441000973</td>
			<td>For an alternative method of sliver electrode chlorination. Active ingredient: 42 g/L sodium hypochlorite.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulation water bath</td>
			<td>Lauda-Ko&#776;nigshoffen</td>
			<td>MGW Lauda</td>
			<td>Used to make the water-heated platfrom.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode lead</td>
			<td>Grass Telefactor</td>
			<td>F-E2-30</td>
			<td>Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing dark adaptation and enclosing the Ganzfeld setup to improve signal-to-noise ratio.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfeld Bowl</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxeon LEDs</td>
			<td>Phillips Light Co.</td>
			<td></td>
			<td>For light stimulation twenty 5W and one 1W LEDs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>BS4 50-2625</td>
			<td>Holds the recording electrode during experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>version 2010</td>
			<td>Spreadsheet software for data analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisturizing eye gel</td>
			<td>GenTeal Gel</td>
			<td>9319099315560</td>
			<td>Used to cover zebrafish larvae during recordings to avoiding dehydration. Active ingredient: 0.3 % Hypromellose and 0.22 % carbomer 980.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Copan</td>
			<td>200C</td>
			<td>Used to caredully transfer larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab data acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td>Controls the LEDs to generate stimuli.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVA sponge</td>
			<td>MeiCheLe</td>
			<td>R-1675</td>
			<td>For the placement of larval zebrafish and making the cone-shaped electrode ti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Aaxis Pacific</td>
			<td>13317002</td>
			<td>For electroplating silver wire electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scope Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>version 3.7.6</td>
			<td>Simultaneously triggers the stimulus through the Powerlab system and collects data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver (fine round wire)</td>
			<td>A&#38;E metal</td>
			<td>0.3 mm</td>
			<td>Used to make recording and reference ERG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td>Used to shape and measure the cone-shaped sponge apex (with scale bar on eyepiece). Positioned in the Faraday cage for electrode placement.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine&#160;</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td>For anaethetizing larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-heated platform</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing the temperature of the sponge platform and the larval body during ERG recordings</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode

Zebrafiskar (Danio rerio) används ofta som ryggradsdjur modell i utvecklande studier och är särskilt lämplig för visuell neurovetenskap. För funktionella mätningar av visuell prestanda är elektroretinografi (ERG) en idealisk icke-invasiv metod, som har varit väl etablerat i högre ryggradsdjur. Detta tillvägagångssätt används allt oftare för att undersöka funktionen Visuell i Zebrafiskar, inklusive under de tidiga utvecklingsstadierna larver. Den vanligaste inspelning elektroden för larval Zebrafiskar ERG hittills är dock glas mikropipett elektroden, som kräver specialutrustning för dess tillverkning, presentera en utmaning för laboratorier med begränsade resurser. Här presenterar vi en larval Zebrafiskar ERG-protokollet använder en konformad sponge-tip elektrod. Romanen elektroden är lättare att tillverkning och handtag, mer ekonomisk, och mindre benägna att skada larval ögat än glas mikropipett. Som tidigare publicerade ERG metoder, kan det nuvarande protokollet bedöma yttre näthinnans funktion genom ljusmätare och bipolär cell svaren, a - och b-vågen, respektive. Protokollet kan tydligt illustrera förfining av visuell funktion under hela den tidiga utvecklingen av zebrafisk larver, stödja den nytta, känslighet och tillförlitlighet av romanen elektroden. Förenklade elektroden är särskilt användbart när om inrättande av ett nytt system för ERG eller ändra befintliga små-djur ERG apparater för Zebrafiskar mätning, medhjälp forskare i de visuella neurovetenskaperna att använda Zebrafiskar modellerar organism.

Detta avsnitt ger representativa resultat för ERG mätningar tas dagligen från 4 till 7 dpf. Från 4 dpf visar ERG Svaren robust a - och b-wave-komponenter, som uppstår från fotoreceptorer och bipolära celler, respektive. Vid varje ålder testade, amplituden av b-vågen ökat med ljusintensitet (figur 2; Figur 3). Särskilt, känslighet larval Zebrafiskar näthinnan till dimmer blinkar ökade med åldern. Den a - och b-vågen var inte ig...

Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Electroretinogram inspelning i Larval Zebrafiskar använder A roman konformade Sponge-tip elektrod

Här presenterar vi ett protokoll som förenklar mätning av ljus evoked electroretinogram svar från larval Zebrafiskar. En roman konformade sponge-tip elektrod kan bidra till att göra studier av visuell utveckling i larval Zebrafiskar använder electroretinogram ERG lättare att uppnå med tillförlitliga resultat och lägre kostnader.

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Detta protokoll hjälper till att förenkla mätningarna av elektroretinogram eller ERGs i larv zebrafish som ger en viktig funktionell avläsning av visuell utveckling och genetiska sjukdomsmodeller. De mjuka svampspetsarna för att registrera elektroder som används i detta protokoll är lätta att tillverka med hjälp av ekonomiska och lättillgängliga material och undviker potentiella skador på larvögonen. Den mjukare svampspetsade elektroden kan underlätta upprepade ERG-mätningar av samma öga.Individer som är nya i detta förfarande kan ha svårt att arbeta under den dunkla röda belysningen som används under hela förfarandet. Men det är viktigt att mörk anpassning upprätthålls. För att förbereda den konformade svampen inspelning elektrod, skär änden från en platina elektrod bly förlängning och använda en skalpell för att avlägsna 10 millimeter av den yttre polytetrafluoreten isolering beläggning från den nya änden av förlängningen.Skär en 40 millimeters bit av en 0,3 millimeter diameter silvertråd och locka silvertråden med den exponerade inre tråden för att säkert fästa tråden i elektrodledningen. Inneslut fogen med isolerande tejp lämnar en cirka 15 millimeters längd av silvertråd exponeras. Anslut en annan tråd till batteriets minuspol och sänk ner den andra änden av ledningen i saltlösningen.Sänk ned den exponerade silvertråden i normal saltlösning och anslut den andra änden till den positiva terminalen hos en likströmskälla på nio volt. Efter 60 sekunder, placera tråden på absorberande vävnad för att torka. Under tiden skär en 20 gånger 20 millimeter kvadrat polyvinylacetat svamp i en kon form och mätta svampen i en gång Ringer buffert.Använd ett skalpellblad under ett ljusmikroskop med en skalkstång på okularet för att forma konens spets till en ca 40 mikrometerdiameterdiameter. Lufttorka den konformade svampen på absorberande silkespapper tills det är fast. Innan du sätter in silvertråden i den torkade fasta konformade polyvinylacetatsvampen genom konens bas, med hjälp av masktejp för att isolera eventuellt överskott exponerad metall för att reducera solceller.På dagen för experimentet, fördjupa svamp-tippade elektrod i Ringer buffert i 15 minuter för att helt mätta svampen. Minst åtta timmar före inspelningarna, placera inte mer än 20 zebrafish larver i en enda 15 milliliter tub utan lock och insvept i aluminiumfolie i en mörk inkubator. I slutet av inkubationen, häll den mörkanpassade zebrafisken i en petriskål under dimröd belysning från en ljusavgivande diod.För att förbereda svampplattformen, skär en bit polyvinylacetat svamp ungefär lika i tjocklek till djupet av en 35 millimeter petriskål så att svampen kommer att passa tätt i skålen. Gör ett litet snitt vertikalt genom svampens ena ände för att rymma referenselektrodens silvertråd och blötlägg svampen i guldfisken Ringers buffert tills svampen är mättad. Placera sedan svampen i en ren 35 millimeters petriskål och använd en pappershandduk för att absorbera den extra vätskan tills ingen lösning utstrålar från svampen som svar på en lätt fingerpress.För att placera djuret för experimentet, använd en tre millimeter Pasteur pipetten för att överföra en sövd larv på en tre med tre centimeter kvadrat av pappershandduk och använda tövråkningar för att placera torget på den fuktade svampen. Med hjälp av en fin borste indränkt i Ringers buffert, justera larvens position med ett öga uppåt och bort från vätska på handduken under larven. Glasera larvkroppen med återfuktande ögongel för att hålla djuret hydratiskt under hela elektroretinograminspelningen.Och placera skålen på en liten, vattenuppvärmd plattform framför Ganzfeld skålen ljus stimulans ligger inuti en Faraday bur. Sätt in referenselektroden i det snitt som gjorts i plattformssvampen. Och anslut en kommersiellt erhållen jordelektrod till Faraday-buren.Fäst inspelningselektroden på en elektrodhållare och fäst hållaren på en mikromanipulators stereotaxiska arm. Med hjälp av en tre millimeters Pasteurpipett, återturtera svampspetsen på elektroden med en droppe Av Ringers lösning och placera mikroskopet i Faraday-buren över elektroretinogramplattformen. Använd spetsen på en absorberande vävnad för att avlägsna eventuell överflödig vätska från elektrodsvampspetsen och under mikroskopet, placera den aktiva elektroden så att svampspetsen försiktigt vidrör den centrala hornhinnans yta på larvsvampöga.Flytta sedan Ganzfeld skålen mot svampen plattformen var noga med att larven är täckt av skålen och stänga buren för att minska främmande elektromagnetiskt brus. Känsligheten hos larven zebrafish näthinnan till dimmer blinkar ökar med åldern. Eftersom a-och b-vågorna inte är igenkännliga vid intensiteter lägre än minus 1,61 log candela sekund per meter i kvadrat vid fyra dagar efter befruktning medan tydliga signaler är detekterbara vid dessa intensiteter i de äldre larverna.B-vågsamplituden ökar markant mellan fyra och fem efter befruktning. Vid sju dagar, signalen på 2,48 log candela sekund per meter i kvadrat är större jämfört med dagar fem och sex efter befruktning. A-och b-wave implicit gånger blir betydligt snabbare efter fem dagar efter befruktning.Med övergripande, dessa resultat visar en mognad i zebrafish näthinnans funktion mellan fyra till sju dagar efter befruktning. För att framgångsrikt utföra detta protokoll är det viktigt att svampar är helt mättade med vätska som hjälper till att upprätthålla konduktiviteten hos inspelningselektroden och sänker ljudnivåerna. Om a-vågen är av särskilt intresse, kan farmakologiska behandlingar tillämpas för att blockera b-wave komponenten därmed utsätta full a-våg.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live avbildning av medfödda immun och preneoplastiska Cell interaktioner Använda en Inducerbar Gal4 / UAS Expression System i Larvzebrafish Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microbead Implantation i zebrafisk embryot

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Spåra celler i GFP-transgen zebrafisk Använda Photoconvertible PSmOrange System

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

analysera<em&gt; In Vivo</em&gt; Cell Migration använder Cell Transplantationer och Time-lapse avbildning i Zebrafish embryon

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Användning av anslags-framkallat svar och Locomotion Analyser för att bedöma muskel prestanda och funktion i Zebrafish

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Dissekering av Larvernas Zebrafish gonadal Tissue

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induktion av hypoxi i levande groda och zebrafiskembryon

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

En ny mammografisk feta padtransplantationsteknik för att visualisera fartygsgenerering av vaskulära endotelceller

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Etablering av Larval zebrafiskar som ett djur-modell för att undersöka Trypanosoma cruzi motilitet I Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

Visualisera utveckla hjärnan i levande zebrafisk med Brainbow och Time-lapse Confocal Imaging

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...