Name: electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode
Uploaded: 2019-03-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Bu proje için finansman bir grant tarafından Melbourne nörolojik Bilimler Enstitüsü'nden (FTG, PRJ & BVB) sağlandı.

Tüm electroretinogram (ERG) yordamlar uygulama bakım için Avustralya Ulusal Sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi kuralları hükümleri ve hayvanların kullanımı göre yapıldı ve kurumsal hayvan Etik Komitesi tarafından kabul edildi Melbourne Üniversitesi.
1. arabellek hazırlık
<ol><li>Japon balığı zil'ın arabellek (1.25 M NaCl, 26 mM KCl, 25 mm CaCl2, 10 mM MgCl2, 100 mM glikoz, 100 mM HEPES) x 10 hazırlamak Ters Ozmos (RO) su kullanarak. PH 7.8 arabe...

<ol>
	<li>Roper, C., Tanguay, R. L., Slikker, W., Paule, M. G., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Developmental Neurotoxicology (Second Edition). , 143-151 (2018).</li><li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats.">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. , e54158 (2016).</li><li>Chrispell, J. D., Rebrik, T. I., Weiss, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+analysis+of+the+visual+response+in+zebrafish+larvae.">Electroretinogram analysis of the visual response in zebrafish larvae.</a> Journal of visualized expriment: JoVE. (97), (2015).</li><li>Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganzfeld+ERG+in+zebrafish+larvae.">Ganzfeld ERG in zebrafish larvae.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 57-68 (2002).</li><li>Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroretinogram+(ERG)+Measurements+in+Larval+Zebrafish.">Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+and+functionality+at+the+cone+terminal+of+the+developing+zebrafish+retina.">Synaptic plasticity and functionality at the cone terminal of the developing zebrafish retina.</a> Developmental Neurobiololgy. 56 (3), 222-236 (2003).</li><li>Gestri, G., Link, B. A., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+visual+system+of+zebrafish+and+its+use+to+model+human+ocular+diseases.">The visual system of zebrafish and its use to model human ocular diseases.</a> Developmental Neurobiololgy. 72 (3), 302-327 (2012).</li><li>Saszik, S., Bilotta, J., Givin, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERG+assessment+of+zebrafish+retinal+development.">ERG assessment of zebrafish retinal development.</a> Visual Neuroscience. 16 (5), 881-888 (1999).</li><li>Niklaus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+accumulation+in+zebrafish+eyes+leads+to+augmented+amplitudes+in+the+electroretinogram.">Cocaine accumulation in zebrafish eyes leads to augmented amplitudes in the electroretinogram.</a> Matters. 3 (6), e201703000003 (2017).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R. F., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+ERG.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic ERG.</a> Disease models &#38; mechanisms. , (2018).</li><li>Kakiuchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+in+electroretinogram+as+an+early+marker+of+visual+abnormalities+in+vitamin+A+deficiency.">Oscillatory potentials in electroretinogram as an early marker of visual abnormalities in vitamin A deficiency.</a> Molecular medicine reports. 11 (2), 995-1003 (2015).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+larvae+lose+vision+at+night.">Zebrafish larvae lose vision at night.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li><li>Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+device+for+non-invasive+electroretinography+in+small+aquatic+vertebrates.">An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates.</a> Journal of Neuroscience Methods. 135 (1-2), 205-210 (2004).</li><li>Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+contributions+to+the+electroretinogram+of+the+dark-adapted+developing+zebrafish.">Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 222 (4), 564-570 (2001).</li><li>Cameron, M. A., Barnard, A. R., Lucas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electroretinogram+as+a+method+for+studying+circadian+rhythms+in+the+mammalian+retina.">The electroretinogram as a method for studying circadian rhythms in the mammalian retina.</a> Journal of genetics. 87 (5), 459-466 (2008).</li><li>Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+modelling+of+oscillatory+potentials.">Extraction and modelling of oscillatory potentials.</a> Documenta Ophthalmologica. 104 (1), 17-36 (2002).</li><li>Bui, B. V., Fortune, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ganglion+cell+contributions+to+the+rat+full-field+electroretinogram.">Ganglion cell contributions to the rat full-field electroretinogram.</a> The Journal of Physiology. 555 (1), 153-173 (2004).</li></ol>

ERG gibi fonksiyonel sonuçlar larva Zebra balığı8,9,12,14eğitim için kullanılan araçlar dizisi içinde giderek daha önemli hale gelmiştir. Larva Zebra balığı göz küçük boyutu nedeniyle, cam MİKROPİPETLER en yayımlanmış protokolleri3,4,5,8,</...

Zebra balığı (Danio rerio) görsel Nöroloji çalışmaları da dahil olmak üzere bir çok kullanılan genetik omurgalı modeli haline geldi. Bu tür artan popülaritesi genetik manipülasyon, son derece korunmuş omurgalı görsel sistem (nöron tipleri, anatomik morfoloji ve organizasyon ve altta yatan genetik), yüksek verimlilik kolaylığı dahil avantajları için bağlanabilir ve Hayvancılık memeli modelleri1' e göre daha az maliyeti. Non-invaziv electroretinogram (ERG) uzun klinik olarak insan görsel işlevi, değerlendirmek için kullanılmıştır ve vizyon irili ufaklı tür dahil kemirgen ve larva Zebra balığı2,3 dizi ölçmek için laboratuvar ortamında , 4 , 5. en sık analiz ERG dalga a ve b-dalga, photoreceptors ışık algılama ve bipolar interneurons, sırasıyla kaynaklanan bileşenleridir. Larva Zebra balığı, retina farklı katmanlarda 3 gün sonrası döllenme (dpf) tarafından kurulur ve terminal photoreceptor koni morfolojisi olgun önce 4 dpf6,7synapses. Larva Zebra balığı dış retina işlevi böylece 4 dpf ERG bu erken yaşlarında itibaren ölçülebilir anlamına gelir, daha önce kuruldu. Kısa deneysel döngüsü ve modelinin yüksek üretilen iş özellikleri nedeniyle, ERG hastalık modelleri, işlev değerlendirmesi larva Zebra balığı için uygulanmış olan renk vizyon ve retina geliştirme analiz, görsel sirkadiyen ritim eğitimi ve test uyuşturucu8,9,10,11,12.
Ancak, larva Zebra balığı için geçerli yaklaşımlar ERG benimsemeye zorlaştırmak bazı karmaşıklıklar var. Yayımlanmış larva Zebra balığı ERG protokolleri yaygın olarak yüksek kaliteli micropipette gerektiren kayıt elektrodu3,4,5,13, iletken sıvı ile dolu bir cam micropipette kullanın İpucu3. Özel ekipman, micropipette çekici gibi ve bir microforge, bazı durumlarda, kendi üretimi için gereklidir. Bu laboratuvarlar sınırlı kaynaklara sahip için bir meydan okuma olabilir ve ek bir ücret için bile kullanılabilir küçük hayvan ERG sistemleri larva Zebra balığı görsel işlev ölçüm için adapte ne zaman açar. Ne zaman bile düzeltti, keskin micropipette ipucu larva göz yüzeyine zarar verebilir. Ayrıca, ticari micropipette sahipleri Elektrofizyoloji için sabit bir gümüş tel ile inşa edilir. Bunlar teller sabit artan bakım ücreti için önde gelen yeni sahipleri satın gerektiren tekrarlayan kullanımdan sonra düzgünleştirilecek olmak.
Burada kurulan küçük hayvan ERG kurulumları larva Zebra balığı ERG ölçümler için uyarlamak için yararlıdır bir koni şeklindeki sünger-ipucu kayıt elektrodu, kullanarak bir ERG yöntemi açıklanmaktadır. Elektrot kolayca ortak polivinil asetat (PVA) sünger ve diğer özel ekipman olmadan ince gümüş tel kullanılarak yapılır. Bizim veri bu roman elektrot hassas ve 4 ve 7 dpf arasında larva Zebra balığı retina sinir devreleri fonksiyonel gelişimi göstermek için güvenilir olduğunu gösteriyor. Bu ekonomik ve pratik sünger-uç elektrot Yeni ERG sistemleri oluşturma veya varolan küçük hayvan sistemleri, Zebra balığı Etütler değiştirme araştırmacılar için yararlı olabilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Millex GP</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td>Filters the 10&#215; goldfish ringer&#39;s buffer for sterilizatio</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-mL syringe</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>DVR-5175</td>
			<td>With a 30G &#215; &#189;&#34; needle to add drops of saline to the electrode sponge tip to prevent drying and increased noisein the ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G &#215; &#189;&#34; needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN*3013R</td>
			<td>For adding saline toteh sopnge tip electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioamplifier</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML135</td>
			<td>For amplifying ERG signals.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach solution&#160;</td>
			<td>King White</td>
			<td>9333441000973</td>
			<td>For an alternative method of sliver electrode chlorination. Active ingredient: 42 g/L sodium hypochlorite.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulation water bath</td>
			<td>Lauda-Ko&#776;nigshoffen</td>
			<td>MGW Lauda</td>
			<td>Used to make the water-heated platfrom.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode lead</td>
			<td>Grass Telefactor</td>
			<td>F-E2-30</td>
			<td>Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday Cage</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing dark adaptation and enclosing the Ganzfeld setup to improve signal-to-noise ratio.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ganzfeld Bowl</td>
			<td>Photometric Solution International&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luxeon LEDs</td>
			<td>Phillips Light Co.</td>
			<td></td>
			<td>For light stimulation twenty 5W and one 1W LEDs.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>BS4 50-2625</td>
			<td>Holds the recording electrode during experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>version 2010</td>
			<td>Spreadsheet software for data analysis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moisturizing eye gel</td>
			<td>GenTeal Gel</td>
			<td>9319099315560</td>
			<td>Used to cover zebrafish larvae during recordings to avoiding dehydration. Active ingredient: 0.3 % Hypromellose and 0.22 % carbomer 980.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Copan</td>
			<td>200C</td>
			<td>Used to caredully transfer larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab data acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML785</td>
			<td>Controls the LEDs to generate stimuli.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVA sponge</td>
			<td>MeiCheLe</td>
			<td>R-1675</td>
			<td>For the placement of larval zebrafish and making the cone-shaped electrode ti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Aaxis Pacific</td>
			<td>13317002</td>
			<td>For electroplating silver wire electrode.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scope Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>version 3.7.6</td>
			<td>Simultaneously triggers the stimulus through the Powerlab system and collects data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver (fine round wire)</td>
			<td>A&#38;E metal</td>
			<td>0.3 mm</td>
			<td>Used to make recording and reference ERG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td>Used to shape and measure the cone-shaped sponge apex (with scale bar on eyepiece). Positioned in the Faraday cage for electrode placement.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine&#160;</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>E10521-50G</td>
			<td>For anaethetizing larval zebrafish.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-heated platform</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
			<td>For maintianing the temperature of the sponge platform and the larval body during ERG recordings</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electroretinogram recording in larval zebrafish using a novel cone-shaped sponge-tip electrode

Zebra balığı (Danio rerio) yaygın gelişimsel çalışmalarda omurgalı bir model olarak kullanılır ve görsel Nöroloji için özellikle uygundur. İşlevsel görsel performans ölçülerini daha yüksek omurgalı türler iyi kurulmuş oldu ideal bir non-invaziv yöntem electroretinography (ERG) dir. Bu yaklaşım giderek Zebra balığı, erken gelişimsel larva evrelerinde de dahil olmak üzere görsel işlevinde incelenmesi için kullanılıyor. Larva Zebra balığı ERG bugüne için en sık kullanılan kayıt elektrot laboratuarlar için bir meydan okuma ile sınırlı kaynakları sunan kendi üretimi için özel ekipman gerektirir cam micropipette elektrot be. Burada, bir koni şeklindeki sünger-uç elektrot kullanan bir larva Zebra balığı ERG Protokolü mevcut. Roman elektrot üretimi ve kolu, daha ekonomik ve daha az daha cam micropipette larva göz zarar olasılığı için daha kolay olur. Daha önce yayımlanmış ERG yöntemleri gibi geçerli protokol dış retina işlevini, photoreceptor ve bipolar hücre yanıtları, a ve b-dalga, anılan sıraya göre değerlendirebilirsiniz. Protokol açıkça Zebra balığı larva, yardımcı programı, duyarlılık ve roman elektrot güvenilirliğini destekleyen erken gelişimi boyunca görsel işlevi arıtma göstermek. Yeni ERG sistemi kurulması veya varolan küçük hayvan ERG cihazları, Zebra balığı ölçüm, araştırmacılar görsel Nöroloji içinde Zebra balığı kullanmak için yardım için değiştirme model organizma Basitleştirilmiş elektrot özellikle yararlıdır.

Bu bölüm için her gün için 7 dpf 4'ten alınan ERG ölçümlere temsilcisi sonuçları sağlar. 4 dpf ERG yanıt-e doğru photoreceptors ve iki kutuplu hücreler, sırasıyla kaynaklanan sağlam bir - ve b-dalga bileşenleri gösterir. Test her yaşta b dalgasının genliği hafif şiddette (Şekil 2; arttı. Şekil 3). Özellikle, yaşla birlikte artan dimmer yanıp söner için larva Zebra balığı retina duyarlılığını. NET sinya...

Watch this Scientific Journal Video about Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode at JoVE.com

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Larva A roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot kullanarak Zebra balığı Electroretinogram kayıt

Burada, larva Zebra balığı ışık çatışmaya electroretinogram tepkiler ölçüm kolaylaştırır bir iletişim kuralı mevcut. Bir roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot larva Zebra balığı electroretinogram ERG güvenilir sonuçlar ve daha düşük maliyet ile elde etmek için daha kolay kullanılmasını görsel geliştirme çalışma yapmak yardımcı olabilir.

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...

Bu protokol, görsel gelişim ve genetik hastalık modellerinin önemli bir fonksiyonel okumasını sağlayan larva zebra balıklarında elektroretinogram veya ERG ölçümlerinin basitleştirilmesine yardımcı olur. Bu protokolde kullanılan elektrotların kayıt yumuşak sünger uçları ekonomik ve hazır malzemeler kullanılarak üretilmesi kolaydır ve larva gözlerde potansiyel hasar dan önler. Yumuşak sünger uçlu elektrot aynı gözün tekrarlanan ERG ölçümlerini kolaylaştırabilir.Bu yordamın yeni bireyleri, yordam boyunca kullanılan loş kırmızı ışık altında çalışmakta zorlanabilir. Ama karanlık adaptasyonun sürdürülmesi önemlidir. Koni şeklindeki sünger kayıt elektrodu hazırlamak için, platin elektrot kurşun uzantısı ndan ucunu kesin ve dış politetrafloroetilen yalıtım kaplamasının 10 milimetrelik kısmını uzatmanın yeni ucundan çıkarmak için neşter kullanın.0,3 milimetre çapında gümüş telden 40 milimetrelik bir parça kesin ve elektrot kurşununa teli güvenli bir şekilde takmak için gümüş teli açığa çıkan iç telle birleştirin. Yaklaşık 15 milimetre uzunluğunda gümüş tel maruz bırakarak yalıtım bandı ile ortak kaplı. Başka bir kabloyu pilin negatif terminaline bağlayın ve kablonun diğer ucunu tuzlu suya daldırın.Maruz kalan gümüş teli normal tuzlu ya daldırın ve diğer ucunu dokuz voltluk doğru akım kaynağının pozitif terminaline bağlayın. 60 saniye sonra, kuruması için emici doku üzerine tel yerleştirin. Bu arada, bir koni şekli içine polivinil asetat sünger 20 tarafından 20 milimetre kare kesilmiş ve bir kez Ringer tampon sünger doygunluk.Mercek üzerinde kireç çubuğu olan bir ışık mikroskobu altında, koninin apeksini yaklaşık 40 mikrometre çapa kadar şekillendirmek için neşter bıçağı kullanın. Katı olana kadar emici mendil kağıt üzerinde koni şeklindeki süngeri hava kurutun. Kurutulmuş katı koni şeklindepolivinil asetat sünger içine gümüş tel eklemeden önce konin tabanı ile, fotovoltaik eserler azaltmak için herhangi bir aşırı maruz metal izole etmek için maske bant kullanarak.Deney günü, süngeri tam olarak doygunhale getirmek için sünger uçlu elektrotu Ringer'ın tamponuna 15 dakika batırın. Kayıtlardan en az sekiz saat önce, tek bir 15 mililitrelik tüpe kapaksız ve koyu renkli bir kuvözde alüminyum folyoya sarılmış en fazla 20 zebra balığı larvası yerleştirin. Kuluçka nın sonunda, koyu adapte olmuş zebra balığını, ışık yayan bir diyottan loş kırmızı ışıklandırma altında bir petri kabına dökün.Sünger platformu hazırlamak için, sünger çanak içinde rahatça uyacak şekilde 35 milimetre petri çanak derinliğine kabaca eşit polivinil asetat sünger bir parça kesti. Referans elektrotun gümüş tel karşılamak için sünger bir ucundan dikey küçük bir kesim yapmak ve sünger doymuş olana kadar japon balığı Ringer tampon sünger ıslatın. Sonra temiz bir 35 milimetre petri kabına sünger yerleştirin ve hafif bir parmak basın yanıt olarak hiçbir çözüm sünger sızan kadar ekstra sıvı emmek için bir kağıt havlu kullanın.Deney için hayvanı konumlandırmak için, anestezili bir larvayı üç santimetre kare kağıt havluya aktarmak için üç milimetrelik Pasteur pipeti kullanın ve kareyi nemli süngerin üzerine yerleştirmek için forseps kullanın. Ringer'ın tamponuna batırılmış ince bir fırça kullanarak, larvanın konumunu bir gözü yukarı bakacak şekilde ve larvanın altındaki havludaki herhangi bir sıvıdan uzağa doğru ayarlayın. Hayvan elektroretinogram kayıt boyunca sulu tutmak için nemlendirici göz jeli ile larva vücut sır.Ve bir Faraday kafes içinde bulunan Ganzfeld kase ışık uyarıcı önünde küçük, su ısıtmalı platform üzerinde çanak yerleştirin. Referans elektrot'u platform süngerinde yapılan kesime takın. Ve ticari olarak elde edilmiş bir yer elektrotünü Faraday kafesine bağlayın.Kayıt elektrotunu bir elektrot tutucuya takın ve tutucuyu bir mikromanipülatörün stereotaksik koluna sabitlayın. Üç milimetrelik Pasteur pipeti kullanarak elektrotun sünger ucunu bir damla Ringer çözeltisi ile yeniden doygunlaştırın ve mikroskobu Faraday kafesindeki elektroretinogram platformunun üzerine yerleştirin. Elektrot sünger ucundan herhangi bir fazla sıvı kaldırmak için bir emici doku ucu kullanın ve mikroskop altında, sünger ucu yavaşça larva zebrabalığı gözünün merkezi kornea yüzeyine dokunur şekilde aktif elektrot konumlandırın.Daha sonra Ganzfeld kabını sünger platformuna doğru hareket ettirin ve larvanın kasenin üzerini kapladığını ve gereksiz elektromanyetik gürültüyü azaltmak için kafesi kapatın. Larva zebra balığı retinasının sönük yanıp söner duyarlılığı yaşla birlikte artar. A-ve b-dalgaları döllenme sonrası dört gün sonra metre başına eksi 1,61 log kandela saniye daha düşük yoğunluklarda tanınabilir değildir net sinyaller eski larvalarda bu yoğunluklarda tespit edilir.B dalgası genliği döllenme sonrası dört ila beş arasında belirgin bir şekilde artar. Yedi gün, metre kare başına 2,48 günlük kandela saniye sinyal gün beş ve altı post fertilizasyon ile karşılaştırıldığında daha büyüktür. A-ve b-dalgası örtük kez beş gün sonra döllenme sonrası önemli ölçüde daha hızlı olur.Genel olarak, bu sonuçlar dört ila yedi gün post-fertilizasyon arasında zebrabalığı retina fonksiyonu nda bir olgunlaşma gösteren. Bu protokolü başarıyla gerçekleştirmek için süngerlerin, kayıt elektrotunun iletkenliğini korumaya yardımcı olan ve gürültü seviyelerini düşüren sıvıyla tamamen doymuş olması önemlidir. A-dalga özellikle ilgi ise, farmakolojik tedaviler b-dalga bileşeni böylece tam a-dalga açığa engellemek için uygulanabilir.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Larva Zebra balığı Skin bir İndüklenebilir Gal4 / UAS İfade Sisteminin Kullanılması doğuştan gelen bağışıklık ve preneoplastik Hücre Etkileşimleri Canlı Görüntüleme

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Zebra balığı Embriyo microbead İmplantasyonu

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Tracking Cells in GFP-transgenic Zebrafish Using the Photoconvertible PSmOrange System

Photoconvertible PSmOrange Sistemi kullanılarak GFP transgenik zebrafish hücreleri izleme

The rapid development of transparent zebrafish embryos (Danio rerio) in combination with fluorescent labelings of cells and tissues allows visualizing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analiz<em&gt; İn Vivo</em&gt; Hücre Göç Zebra balığı Embriyolar hücre nakli ve Time-lapse Görüntüleme kullanılarak

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Dokunmatik uyarılmış Yanıt ve Hareket Deneyleri kullanarak Zebra balığı kas Performans ve fonksiyonunu değerlendirmek için

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Larva Zebra balığı Gonadal Doku Diseksiyon

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Kurbağa ve Zebra balığı Embriyolarında Hipoksinin İndüklenmesi

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Vasküler Endotelyal Kök Hücrelerin Damar Oluşumunu Görselleştirmek İçin Yeni Bir Göğüs Göğsü Transplantasyon Tekniği

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Kuruluş, larva Zebra balığı bir hayvan modeli araştırmak Trypanosoma cruzi hareketliliği In Vivo olarak

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Visualizing the Developing Brain in Living Zebrafish using Brainbow and Time-lapse Confocal Imaging

Brainbow ve Time-lapse Konfokal Görüntüleme kullanarak Yaşayan Zebrabalıklarında Gelişen Beyni Görselleştirme

Development of the vertebrate nervous system requires a precise coordination of complex cellular behaviors and interactions. The use of high resolution in ...