Name: imaging calcium dynamics in subpopulations of mouse pancreatic islet cells
Uploaded: 2019-11-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells at JoVE.com

[آه] كان مستلمه من مرض السكري [اوك] دكتوراه [ستثنتشيب], [ايف] كان ساندت ب ال [اوكسون-ويلس] ثقة برنامج تدريب, [ايت] يمسك [ااكسفورد] [بيومديكل] [رسرش] مجلس دكتوراه زمالة.

وقد وضعت جميع الطرق الموصوفة هنا وفقا لقانون المملكة المتحدة للحيوانات (الإجراءات العلمية) (1986) والمبادئ التوجيهية الاخلاقيه لجامعه أكسفورد.
1. عزل الفئران البنكرياس الجزر
<ol><li>اعداد الثقافة المتوسطة وحل العزلة.<ol>
<li>تشكل الثقافة المتوسطة: RMPI1640 (انظر جدول المواد) ،...

<ol>
	<li>Elayat, A. A., el-Naggar, M. M., Tahir, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunocytochemical+and+morphometric+study+of+the+rat+pancreatic+islets.">An immunocytochemical and morphometric study of the rat pancreatic islets.</a> Journal of Anatomy. 186, 629 (1995).</li><li>Cabrera, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unique+cytoarchitecture+of+human+pancreatic+islets+has+implications+for+islet+cell+function.">The unique cytoarchitecture of human pancreatic islets has implications for islet cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (7), 2334-2339 (2006).</li><li>Brereton, M. F., Vergari, E., Zhang, Q., Clark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-,+delta-and+PP-cells:+are+they+the+architectural+cornerstones+of+islet+structure+and+co-ordination.">Alpha-, delta-and PP-cells: are they the architectural cornerstones of islet structure and co-ordination.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 63 (8), 575-591 (2015).</li><li>F&#230;rch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+is+accompanied+by+increased+fasting+glucagon+and+delayed+glucagon+suppression+in+individuals+with+normal+and+impaired+glucose+regulation.">Insulin resistance is accompanied by increased fasting glucagon and delayed glucagon suppression in individuals with normal and impaired glucose regulation.</a> Diabetes. 65 (11), 3473-3481 (2016).</li><li>Dabrowski, M., Tarasov, A., Ashcroft, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+architecture+of+the+ATP-binding+site+of+the+KATP+channel+subunit+Kir6+2.">Mapping the architecture of the ATP-binding site of the KATP channel subunit Kir6 2.</a> The Journal of Physiology. 557 (2), 347-354 (2004).</li><li>Liu, Y. J., Vieira, E., Gylfe, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+store-operated+mechanism+determines+the+activity+of+the+electrically+excitable+glucagon-secreting+pancreatic+alpha-cell.">A store-operated mechanism determines the activity of the electrically excitable glucagon-secreting pancreatic alpha-cell.</a> Cell Calcium. 35 (4), 357-365 (2004).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca+2++probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca 2+ probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137 (2001).</li><li>Nagai, T., Sawano, A., Park, E. S., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circularly+permuted+green+fluorescent+proteins+engineered+to+sense+Ca2.">Circularly permuted green fluorescent proteins engineered to sense Ca2.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 98 (6), 3197-3202 (2001).</li><li>Broussard, G. J., Liang, R., Tian, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+activity+in+neural+circuits+with+genetically+encoded+indicators.">Monitoring activity in neural circuits with genetically encoded indicators.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 7, 97 (2014).</li><li>Akerboom, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+GCaMP+calcium+indicator+for+neural+activity+imaging.">Optimization of a GCaMP calcium indicator for neural activity imaging.</a> Journal of Neuroscience. 32 (40), 13819-13840 (2012).</li><li>Rodriguez, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growing+and+glowing+toolbox+of+fluorescent+and+photoactive+proteins.">The growing and glowing toolbox of fluorescent and photoactive proteins.</a> Trends in Biochemical Sciences. 42 (2), 111-129 (2017).</li><li>Tarasov, A. I., Rutter, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in enzymology. 542, 289-311 (2014).</li><li>Tarasov, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency-dependent+mitochondrial+Ca(2+)+accumulation+regulates+ATP+synthesis+in+pancreatic+&#946;+cells.">Frequency-dependent mitochondrial Ca(2+) accumulation regulates ATP synthesis in pancreatic &#946; cells.</a> Pflugers Archiv: European Journal of Physiology. 465 (4), 543-554 (2013).</li><li>Smith, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Ca2++indicators+directly+inhibit+the+Na,+K-ATPase+and+disrupt+cellular+functions.">Fluorescent Ca2+ indicators directly inhibit the Na, K-ATPase and disrupt cellular functions.</a> Science Signal. 11 (515), 2039 (2018).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca2++indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators.</a> Science. 333 (6051), 1888-1891 (2011).</li><li>Dana, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+red+protein+calcium+indicators+for+imaging+neural+activity.">Sensitive red protein calcium indicators for imaging neural activity.</a> Elife. 5, 12727 (2016).</li><li>Theis, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarking+Spike+Rate+Inference+in+Population+Calcium+Imaging.">Benchmarking Spike Rate Inference in Population Calcium Imaging.</a> Neuron. 90 (3), 471-482 (2016).</li><li>Hamilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenaline+Stimulates+Glucagon+Secretion+by+Tpc2-Dependent+Ca(2+)+Mobilization+From+Acidic+Stores+in+Pancreatic+alpha-Cells.">Adrenaline Stimulates Glucagon Secretion by Tpc2-Dependent Ca(2+) Mobilization From Acidic Stores in Pancreatic alpha-Cells.</a> Diabetes. 67 (6), 1128-1139 (2018).</li><li>Adriaenssens, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic+profiling+of+pancreatic+alpha,+beta+and+delta+cell+populations+identifies+delta+cells+as+a+principal+target+for+ghrelin+in+mouse+islets.">Transcriptomic profiling of pancreatic alpha, beta and delta cell populations identifies delta cells as a principal target for ghrelin in mouse islets.</a> Diabetologia. 59 (10), 2156-2165 (2016).</li><li>DiGruccio, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+alpha,+beta+and+delta+cell+transcriptomes+reveal+that+ghrelin+selectively+activates+delta+cells+and+promotes+somatostatin+release+from+pancreatic+islets.">Comprehensive alpha, beta and delta cell transcriptomes reveal that ghrelin selectively activates delta cells and promotes somatostatin release from pancreatic islets.</a> Molecular Metabolism. 5 (7), 449-458 (2016).</li><li>Mourao, M., Satin, L., Schnell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+experimental+design+to+estimate+statistically+significant+periods+of+oscillations+in+time+course+data.">Optimal experimental design to estimate statistically significant periods of oscillations in time course data.</a> PloS One. 9 (4), 93826 (2014).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).</li><li>Cabrera, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+is+a+positive+autocrine+signal+for+glucagon+release.">Glutamate is a positive autocrine signal for glucagon release.</a> Cell Metabolism. 7 (6), 545-554 (2008).</li><li>Thevenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyramid+approach+to+subpixel+registration+based+on+intensity.">A pyramid approach to subpixel registration based on intensity.</a> IEEE Transactions on Image Processing. 7 (1), 27-41 (1998).</li><li>Tarasov, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+real-time+hormone+release+kinetics+via+high-content+3-D+imaging+of+compensatory+endocytosis.">Monitoring real-time hormone release kinetics via high-content 3-D imaging of compensatory endocytosis.</a> Lab on a Chip. 18 (18), 2838-2848 (2018).</li><li>Knudsen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+Glucagon+Secretion+by+Hyperglycemia-Induced+Sodium-Dependent+Reduction+of+ATP+Production.">Dysregulation of Glucagon Secretion by Hyperglycemia-Induced Sodium-Dependent Reduction of ATP Production.</a> Cell Metabolism. , (2018).</li><li>Adam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fumarate+hydratase+deletion+in+pancreatic+&#946;+cells+leads+to+progressive+diabetes.">Fumarate hydratase deletion in pancreatic &#946; cells leads to progressive diabetes.</a> Cell Reports. 20 (13), 3135-3148 (2017).</li><li>Wills, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistical+approaches+and+software+for+clustering+islet+cell+functional+heterogeneity.">Statistical approaches and software for clustering islet cell functional heterogeneity.</a> Islets. 8 (2), 48-56 (2016).</li><li>Berggren, P. O., Ostenson, C. G., Petersson, B., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+divergent+glucose+effects+on+calcium+metabolism+in+pancreatic+beta-+and+alpha+2-cells.">Evidence for divergent glucose effects on calcium metabolism in pancreatic beta- and alpha 2-cells.</a> Endocrinology. 105 (6), 1463-1468 (1979).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> The Journal of Biological Chemistry. 260 (6), 3440-3450 (1985).</li><li>Longo, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+cytosolic+free+Ca2+,+oxygen+consumption,+and+insulin+secretion+in+glucose-stimulated+rat+pancreatic+islets.">Oscillations in cytosolic free Ca2+, oxygen consumption, and insulin secretion in glucose-stimulated rat pancreatic islets.</a> The Journal of Biological Chemistry. 266 (14), 9314-9319 (1991).</li><li>Johansson, H., Gylfe, E., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+raises+cytoplasmic+calcium+in+pancreatic+alpha+2-cells+by+mobilizing+calcium+incorporated+in+response+to+glucose.">Cyclic AMP raises cytoplasmic calcium in pancreatic alpha 2-cells by mobilizing calcium incorporated in response to glucose.</a> Cell Calcium. 10 (4), 205-211 (1989).</li><li>Grapengiesser, E., Gylfe, E., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+types+of+cytoplasmic+Ca2++oscillations+in+stimulated+pancreatic+&#946;-cells.">Three types of cytoplasmic Ca2+ oscillations in stimulated pancreatic &#946;-cells.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 268 (1), 404-407 (1989).</li><li>Okamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cytosolic+Ca2++in+impaired+sensitivity+to+glucose+of+rat+pancreatic+islets+exposed+to+high+glucose+in+vitro.">Role of cytosolic Ca2+ in impaired sensitivity to glucose of rat pancreatic islets exposed to high glucose in vitro.</a> Diabetes. 41 (12), 1555-1561 (1992).</li><li>Gilon, P., Henquin, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+membrane+potential+changes+on+cytoplasmic+Ca2++concentration+in+an+electrically+excitable+cell,+the+insulin-secreting+pancreatic+B-cell.">Influence of membrane potential changes on cytoplasmic Ca2+ concentration in an electrically excitable cell, the insulin-secreting pancreatic B-cell.</a> The Journal of Biological Chemistry. 267 (29), 20713-20720 (1992).</li><li>Valdeolmillos, M., Nadal, A., Soria, B., Garcia-Sancho, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+digital+image+analysis+of+glucose-induced+[Ca2+]i+oscillations+in+mouse+pancreatic+islets+of+Langerhans.">Fluorescence digital image analysis of glucose-induced [Ca2+]i oscillations in mouse pancreatic islets of Langerhans.</a> Diabetes. 42 (8), 1210-1214 (1993).</li><li>Cheng, H., Lederer, W. J., Cannell, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sparks:+elementary+events+underlying+excitation-contraction+coupling+in+heart+muscle.">Calcium sparks: elementary events underlying excitation-contraction coupling in heart muscle.</a> Science. 262 (5134), 740-744 (1993).</li><li>Stout, A. L., Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evanescent+field+excitation+of+fluorescence+by+epi-illumination+microscopy.">Evanescent field excitation of fluorescence by epi-illumination microscopy.</a> Applied Optics. 28 (24), 5237-5242 (1989).</li><li>Stozer, A., Dolensek, J., Rupnik, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-stimulated+calcium+dynamics+in+islets+of+Langerhans+in+acute+mouse+pancreas+tissue+slices.">Glucose-stimulated calcium dynamics in islets of Langerhans in acute mouse pancreas tissue slices.</a> PloS One. 8 (1), 54638 (2013).</li><li>Tian, G., Sandler, S., Gylfe, E., Tengholm, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-+and+hormone-induced+cAMP+oscillations+in+alpha-+and+beta-cells+within+intact+pancreatic+islets.">Glucose- and hormone-induced cAMP oscillations in alpha- and beta-cells within intact pancreatic islets.</a> Diabetes. 60 (5), 1535-1543 (2011).</li><li>Benninger, R. K., Zhang, M., Head, W. S., Satin, L. S., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction+coupling+and+calcium+waves+in+the+pancreatic+islet.">Gap junction coupling and calcium waves in the pancreatic islet.</a> Biophysical Journal. 95 (11), 5048-5061 (2008).</li><li>van Gurp, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequential+intravital+imaging+reveals+in+vivo+dynamics+of+pancreatic+tissue+transplanted+under+the+kidney+capsule+in+mice.">Sequential intravital imaging reveals in vivo dynamics of pancreatic tissue transplanted under the kidney capsule in mice.</a> Diabetologia. 59 (11), 2387-2392 (2016).</li></ol>

هناك ثلاث مراحل في البروتوكول التي هي حاسمه للنجاح الشامل. الحقن الناجح لانزيم Liberase في القناة الصفراوية يحدد ليس فقط النجاح الكمي لاجراء العزل ولكن أيضا يؤثر علي نوعيه الجزر المعزولة. قد يؤدي البانكريتا غير المتضخمة إلى عدم وجود بعض الاستجابات الايضيه الهامه في الجزر المنعزلة. ثانيا ، ان ...

والغرض من هذه الطريقة هو صوره التغييرات في الوقت الحقيقي في تركيز الكالسيوم السيتووليك ([Ca2 +]cyt) في السكان الفرعيين الصغرى من خلايا جزيرة البنكرياس. وهذا يسمح الكشف عن أليات التي تحكم إفراز هرمون في هذه الخلايا, الكشف عن تفاصيل حول الحديث المتقاطع بين أنواع الخلايا المختلفة و, يحتمل, إدخال البعد الشعبي في صوره أكبر من الإشارات جزيرة.
تتكون الجزر من عده أنواع من الخلايا. الاضافه إلى الخلايا الأكثر شهره لإفراز الانسولين ، هناك ما لا يقل عن اثنين من السكان الفرعيين الذين هم أيضا حاسمه في تنظيم الجلوكوز في الدم3. خلايا α (التي تشكل حوالي 17 ٪ من خلايا الجزيرة) تفرز جلوكاجون عندما يحصل الجلوكوز في الدم منخفضه جدا ، والتي إشارات للإفراج عن الجلوكوز في مجري الدماء من مستودعات في الكبد. مستويات جلوكاجون المفرطة (فرط جلوغلوجوميا) وضعف السيطرة علي جلوكاجون-الإفراج مرافقه (و, من الناحية الفنية, يمكن ان تسهم) حاله ما قبل السكري من ضعف حساسية الانسولين4. خلايا δ (حوالي 2 ٪) تفرز السوماتوستاتين استجابه لارتفاع الجلوكوز. هذا الهرمون الببتيد في كل مكان من المرجح ان تكون موجودة في تركيزات عاليه في محيط α-و β-الخلايا داخل الجزر, التي لديها قويه Gi مستقبلات بوساطة تاثير المخفف علي كل من جلوكاجون وإفراز الانسولين.
تتشارك خلايا α وخلايا δ جزءا كبيرا من آلات استشعار الجلوكوز مع أقاربها المقربين ، الخلايا β. جميع أنواع الخلايا الثلاثة مجهزه بقنااتK + الحساسة من ATP ، والمستشعرات الايضيه المفصلة5 التي تتحكم في إمكانات غشاء البلازما لهذه الخلايا المثيرة. في الوقت نفسه ، يتم تنظيم إفراز الانسولين ، السوماتوستاتين والجلوكاجون بشكل مختلف عن طريق الجلوكوز. التصوير من Ca2 + ديناميات في اثنين من السكان الفرعيين ثانويه من الخلايا جزيرة يمكن لذلك ان توفر نظره ثاقبه في الكلام المتقاطع بين الجلوكوز في الدم والإخراج سيكريتوري جزيرة.
وسرعان ما تبعت المحاولات المبكرة لرصد استثاره الخلايا α و δ باستخدام التصحيح المشبك الكهربائية بواسطة التصوير من Ca2 + في واحد α-وخلايا δ. تم التحقق من هويه الخلايا في هذه التجارب عن طريق تلطيخ اللاحقة مع المضادة جلوكاجون أو مضادات السوماتوستاتين الأضداد. وكثيرا ما أعيقت هذه الجهود من خلال العثور علي ان خلايا جزيرة تتصرف بشكل مختلف جدا داخل الجزيرة وكخلايا واحده. علي الرغم من ان β-الخلايا قد يبدو ان المحسنين الرئيسيين للترتيب جزيرة (نظرا للاغلبيه الساحقة التي تكمن وراء اقترانها الكهربائية القوية) ، كان التناقض الرئيسي ، من المستغرب ، وجدت في خلايا α. داخل الجزيرة السليمة ، يتم تنشيط هذه الخلايا باستمرار وباستمرار في انخفاض الجلوكوز ، والذي هو صحيح فقط لحوالي 7 ٪ من واحد فرقت α-خلايا6. ولذلك يعتقد ان الإبلاغ عن نشاط خلايا α و δ داخل الجزر السليمة يمثل تقريبا تقريبيا للظروف المجرية.
بشكل عام ، هناك طريقتان للإبلاغ عن Ca2 + dynamics علي وجه التحديد من الفئات الفرعية للخلايا α أو δ: (1) التعبير عن مستشعر ca2 + المرمز وراثيا عن طريق مروج محدد بالانسجه أو (2) باستخدام مركبات العلامة. النهج السابق أكثر اناقه يضيف ميزه كبيره من التصوير 3D صحيح التالي دراسة توزيع الخلايا داخل الجزيرة. ومع ذلك لا يمكن تطبيقه علي المواد جزيرة الإنسان سليمه. ومن الشواغل المحتملة الأخرى "التسرب" من المروج ، ولا سيما عندما يكون التمايز بين الخلايا β/α أو استجابه الخلية α لارتفاع نسبه الجلوكوز في مكانها. ويمكن استخدام هذا النهج الأخير مع الانسجه المعزولة الطازجة بما في ذلك عينات الإنسان أو الجزر المستزرعة. البيانات, ومع ذلك, يتم جمعها فقط من الطبقة الطرفية من الخلايا جزيرة, كما تسليم جزيء صبغ/علامة في طبقات أعمق دون تغيير العمارة جزيرة هو التحدي. والميزة غير المتوقعة للنهج الأخير هي التوافق مع وضع التصوير الواسع النطاق ، الذي يسمح بزيادة التجارب إلى التصوير المتزامن لعشرات أو مئات الجزر الكبيرة (اي آلاف إلى عشرات آلاف من الخلايا).
الكالسيوم هو في الجسم الفيفو باستخدام المشفرة وراثيا gcamp7 (أو بيريكام8) أجهزه الاستشعار الاسره ، والتي هي المتغيرات من البروتين الفلوري الأخضر المتحول دائريا (gcamp) تنصهر في كالموديولين بروتين ملزم الكالسيوم وتسلسله المستهدف ، M13 جزء من سلسله ميوسين الخفيفة كيناز7،9. Gcampsات لديها ممتازة اشاره إلى الضوضاء نسب في نطاق نانومولار Ca2 + تركيزات وعاليه 2-الفوتون المقطع العرضي ، مما يجعلها الخيار المثالي للعمل في الجسم الخارجي10،11. الجانب الصعب من استخدام أجهزه الاستشعار المؤتلف هو تسليمها إلى الخلايا. التعبير المغاير يتطلب استخدام ناقل الفيروسية ومتعددة الساعات السابقة الجسم الوسيط ، الذي يثير في كثير من الأحيان مخاوف بشان امكانيه أزاله التمايز أو تدهور وظائف الخلية. علي الرغم من ان نماذج الماوس التي تم هندستها مسبقا للتعبير عن GCaMP معالجه هذه المشكلة ، فانها تضيف تحديات جديده من خلال زيادة الوقت الرصاص بشكل كبير والحد من العمل إلى نموذج غير البشرية. حساسية عاليه جدا للتغيرات من الحموضة داخل الخلايا هو الجانب السلبي آخر من أجهزه الاستشعار القائمة علي البروتين12، وهو ، ومع ذلك ، اقل من مشكله لاستشعار إشارات التذبذب ، مثل Ca2 +.
الاستفادة من الاصباغ يمكن تتبع (مثل الأخضر الفلورسنت Fluo4) هو انها يمكن تحميلها في الانسجه المعزولة الطازجة في غضون ساعة تقريبا. ويمكن التنبؤ بان الاصباغ اليمكن تتبعه لها نسب اقل من الاشاره إلى الضجيج و (الكثير) من الثبات الضوئي اقل من نظرائها المؤتلف. لا يمكننا تاكيد13 تقارير سميه الاصباغ يمكن تتبع14، ومع ذلك ، صبغ الحمولة الزائدة مشكله متكررة.
الأحمر المؤتلف Ca2 + أجهزه الاستشعار علي أساس التحول الدائري وقد تطورت بسرعة منذ 201115، وأحدث التطورات الاخيره تقدم منافسه قويه ل gcamps16 للتصوير الانسجه ، نظرا لعمق اعلي من تغلغل الضوء الأحمر. يمكن استخدام الاصباغ يمكن تتبع الحمراء المتاحة تجاريا بشكل موثوق للتصوير أحاديه الخلية ولكن ، علي مستوي الانسجه ، لا يمكن ان تتنافس جيدا مع النظير الأخضر.
ويبدو ان هناك القليل جدا من خيار تكنولوجيا التصوير للتجارب في الانسجه حيث يصبح الضوء خارج التركيز مشكله حرجه. ويوفر النظام المحوري حلا مقبولا للخلية الواحدة عن طريق إلغاء الضوء الخارج عن التركيز مع اي هدف علي الشبكة المذكورة أعلاه 0.3 (لحاله GCaMP6) أو 0.8 (صبغه يمكن تتبع). بمعني تقني ، يمكن استخدام المجهر البؤري التقليدي للتصوير المتزامن ل [Ca2 +]cyt من المئات (gcamp) أو عشرات الجزر (يمكن تتبع صبغ). البديل الواقعي الوحيد للوضع البؤري في حاله التعبير ثلاثي الابعاد لجهاز الاستشعار في الانسجه هو ربما المجهر الضوئي.
الأمور مختلفه قليلا عن الحالة عندما يتم التعبير عن جهاز الاستشعار في الطبقة الطرفية من الخلايا داخل الانسجه جزيرة. لأجهزه الاستشعار المؤتلف مشرق التي لديها نمط التعبير حيه داخل الخلايا ، وذلك باستخدام وضع التصوير حقل واسع مع الهدف منخفضه NA قد توفر نوعيه كافيه ومكافاه الباحث مع زيادة كبيره في مجال مجال الرؤية ، التالي الانتاجيه. ويوفر النظام الواسع النطاق استبانه مكانيه أكثر فقرا ، نظرا لعدم إلغاء الضوء الخارج عن التركيز ؛ التالي ، فان الانسجه التصويرية ذات الأهداف العالية (العمق المنخفض للحقل) اقل من المعلومات ، حيث ان اشاره الخلية الواحدة ملوثه بشده من قبل الخلايا المجاورة. التلوث هو أصغر بكثير لأهداف منخفضه NA (عمق عاليه من الميدان).
ومع ذلك ، هناك مهام ، والتي الانتاجيه العالية و/أو معدل أخذ العينات تصبح ميزه حاسمه. [α-] و [δ-سل] يبدي تغاير جوهريه, اي يخلق طلب لحجم عال عينه ان يكشف المساهمة من ال [سوببوبولايشن]. التصوير في الحقول الواسعة سريع وأكثر حساسية ، مع النطاق الصناعي الكبير لتصوير النظام في المئات (GCaMP) أو عشرات (Fluo4) من الجزر الصغيرة في نفس نسبه الاشاره إلى الضوضاء كالتجارب المحورية علي عشره أو جزيرة واحده ، علي التوالي. هذا الاختلاف في الانتاجيه يجعل نظام واسع النطاق المفيد للتصوير الشعبي مع دقه خليه واحده ، والتي يمكن ان تكون حاسمه خاصه بالنسبة للسكان الفرعيين الصغيرة مثل الخلية δ واحد. المثل ، فان محاولات أعاده بناء النشاط الكهربائي من Ca2 + ارتفاع17 ستستفيد من معدل أخذ العينات الأعلى الذي يوفره وضع التصوير الميداني الواسع. وفي الوقت نفسه ، تتطلب عده مشاكل "متخصصة" مثل نشاط خلايا α البنكرياس عند تحفيز السكان الفرعيين المسيطرين علي الخلايا β ، استخدام النظام المركزي. والعامل الذي يؤثر علي القرار نحو الوضع البؤري هو وجود اشاره ملوثه كبيره من السكان الفرعيين في الخلية β.
علي الرغم من ان استخدام الأجسام المضادة الخاصة بالهرمونات للتحقق من هويه الخلايا بعد تجارب التصوير لا يزال خيارا ، يمكن تحديد الفئات الفرعية للخلايا الثانوية باستخدام مركبات العلامات الوظيفية ،مثل الأدرينالين و جريلين التي أظهرت انها تحفز بشكل انتقائي Ca2 + dynamics
ويهدف تحليل بيانات التصوير بالفواصل الزمنيه إلى توفير معلومات تتجاوز الصيدلة التافهة ، مثل التجانس الشعبي والترابط والتفاعل بين الإشارات المختلفة. تقليديا ، يتم تحليل بيانات التصوير وكثافة مقابل الوقت وتطبيعها إلى فلوري الاولي (F/F0). وكثيرا ما تكون هناك حاجه إلى تصحيح خط الأساس ، وذلك بسبب تبييض اشاره فلوكوفيري أو التلوث بالتغيرات في الفلورية أو الحموضة (التي عاده ما تكون مستحثه بمستويات ميليمولار من الجلوكوز12). Ca2 + يمكن تحليل البيانات في العديد من الطرق المختلفة ، ولكن ثلاثه اتجاات رئيسيه هي لقياس التغيرات في وتيره الارتفاع ، وكسر الهضبة ، أو المنطقة تحت المنحني ، محسوبة مقابل الوقت. وقد وجدنا ان النهج الأخير مفيد ، وخاصه في تطبيقه علي البيانات المنسقة التي أخذت في النقص الشديد. والميزة التي يمتاز بها مقياس pAUC هي حساسيته لكل من التغيرات في تردد الاشاره والسعه ، بينما يتطلب حساب التردد عددا كبيرا من الذبذبات21، وهو أمر يصعب تحقيقه باستخدام التصوير التقليدي. والعامل المقيد لتحليل الفقراء هو حساسيته العالية للتغيرات الاساسيه.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:779px;" width="779">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:216px;">40x/1.3 objective</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:216px;">Axiovert 200 microscope</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">emission</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:216px;">Excitation</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-&#1040;ldrich</td>
			<td style="width:119px;">F7524-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fluo4</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">&#160; F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">GCaMP6f, in (human type 5) adenoviral vector</td>
			<td style="width:277px;">Vector Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">1910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hanks&#39; solution&#160;</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Liberase</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-&#1040;ldrich</td>
			<td style="width:119px;">5401020001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">penicillin/streptomycin</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RPMI medium</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">61870044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Zeiss LSM510-META confocal system</td>
			<td style="width:277px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging calcium dynamics in subpopulations of mouse pancreatic islet cells

هرمونات جزيرة البنكرياس تنظم التوازن الجلوكوز في الدم. التغيرات في الجلوكوز في الدم تحفز تذبذبات الكالسيوم السيتووليك في خلايا جزيرة البنكرياس التي تؤدي إلى إفراز ثلاثه هرمونات رئيسيه: الانسولين (من الخلايا β) ، جلوكاجون (α-الخلايا) و سوماتوستاتين (خلايا δ). β-الخلايا ، التي تشكل غالبيه خلايا جزيرة ويتم بالاقتران كهربائيا إلى بعضها البعض ، والاستجابة لتحفيز الجلوكوز ككيان واحد. الاستثارة من ال [سوببوبولايشن] ثانويه, [الف-سل] و [δ-سل] (يجعل فوق حوالي 20% (30%) و 4 في المائة (10 في المائة) من مجموع القوارض1 (الإنسان2) جزيرة أرقام الخلية ، علي التوالي) اقل قابليه للتنبؤ التالي فهي ذات اهميه خاصه.
يتم تسليم أجهزه استشعار الكالسيوم في الطبقة الطرفية من الخلايا داخل جزيرة معزولة. ثم الجزيرة أو مجموعه من الجزر التي يتم تعبئتها والذين يستخدمون المجهر الفلوري. ويكون اختيار طريقه التصوير بين الانتاجيه العالية (المجال الواسع) والدقة المكانية الأفضل (التركيز البؤري). تقليديا ، يستخدم المجهر الضوئي بالليزر لتصوير الانسجه ، كما انه يوفر أفضل فصل للاشاره بين الخلايا المجاورة. [ويد-فيلد] نظامه يستطيع كنت استعملت أيضا, ان ال يلوث اشاره من ال يسيطر الالسكان من [β-سل] يكون قللت.
وبمجرد ان يتم تسجيل ديناميات الكالسيوم استجابه لمحفزات محدده ، يتم التعبير عن البيانات في شكل عددي ككثافة مضان مقابل الوقت ، وتطبيع إلى الفلورية الاوليه وتصحيح خط الأساس ، لأزاله الآثار المرتبطة بتبييض فلوروفوري. وتحسب التغيرات في التردد الحاد أو المنطقة الجزئية تحت المنحني (pAUC) مقابل الوقت ، لقياس الآثار الملحوظة. pAUC هو أكثر حساسية وقويه جدا في حين ان التردد الشائك يوفر المزيد من المعلومات حول اليه زيادة الكالسيوم.
يمكن تحديد الفئات الفرعية للخلايا الصغرى باستخدام الاستجابات الوظيفية لمركبات العلامات ، مثل الأدرينالين و ghrelin ، التي تحفز التغيرات في الكالسيوم السيتووليك في عدد محدد من السكان في خلايا الجزيرة.

الجزر تحميل بشكل جيد إلى حد ما مع الاصباغ يمكن تتبع (الشكل 1ا) ، ما لم يتاثر تكوين الدهون من الغشاء (علي سبيل المثال ، عن طريق التعرض المزمن للأحماض الدهنية). الفيروس الأنفي البشري نوع 5 (Ad5) ناقلات يستهدف أيضا جميع الخلايا جزيرة (الشكل 1ب). قد ت...

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells at JoVE.com

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

هنا ، نقدم بروتوكولا للتصوير وقياس ديناميات الكالسيوم في الخلايا غير المتجانسة السكان ، مثل خلايا جزيرة البنكرياس. يتم تسليم الصحفيين الفلورسنت إلى الطبقة الطرفية من الخلايا داخل الجزيرة ، والتي يتم بعد ذلك التعبئة والتصوير ، ويتم اجراء تحليل لكل خليه من ديناميات كثافة الفلورية.

تصوير ديناميات الكالسيوم في السكان الفرعيين من خلايا الفئران جزيرة البنكرياس

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

البروتوكول يسمح وظيفة معزولة سريعة من مجموعات فرعية صغيرة من الخلايا داخل الجزر البنكرياسية من Langerhans. وتشمل مزايا هذه التقنية الطبيعة في الوقت الحقيقي والقوة الإحصائية العالية، وبالتالي قابلية التكاثر العالية للبيانات المكتسبة. لشل حركة الجزر للتصوير، قم بتجميع غرفة تصوير لمجهر مقلوب ووضع زلة غلاف زجاجي داخل الغرفة.تأكد من أن واجهة الغرفة الزجاجية هي ماء وتأكد من أن زلة الغطاء في متناول الهدف المجهر. المقبل، وقطع 20 من 20 ملليمتر المربعات من شبكة غرامة الخشنة واستخدام 45-50 قطعة ميكرومتر من الشريط لزجة سميكة لإنشاء جدارين المسافة على قطعة من شبكة غرامة. غمر الشبكة الخشنة والوزن في طبق بيتري 35 ملليمتر من محلول التصوير ، ووضع الشبكة الدقيقة تحت مجهر تشريح.بدوره شبكة غرامة مع الجدران الفضاء رأسا على عقب والفواصل التي تواجه صعودا. واستخدام ماصة p20 لنقل العديد من الجزر بين الفواصل اثنين. باستخدام watchmakers'ملقط، وضع شبكة رأسا على عقب داخل غرفة التصوير من المجهر المقلوب بحيث تواجه الفواصل إلى أسفل للجلوس مباشرة على زلة غطاء الغرفة، محاصرة الجزر بين الفواصل والشبكة في منتصف زلة الغطاء.الحرص على أن شبكة هو رطب بشكل جيد دون أن تحتوي على كميات مفرطة من الحل الذي من شأنه أن يثير الحركة الجانبي للعينة. ثم ضع الشبكة الخشنة والوزن فوق الشبكة الدقيقة في الغرفة ، وأضف حل التصوير إلى الغرفة. وبمجرد أن يتم شلّ الجزر، حدد وضع التصوير والهدف على المجهر المقلوب ووضع الغرفة مع الجزر على مرحلة المجهر التي يتم التحكم فيها بدرجة الحرارة.بعد تحديد الضخ، ضع التدفق الداخلي أقل من التدفق الخارجي داخل الغرفة، ويحدد تدفق التدفق إلى الخارج ليكون أكبر من تدفق التدفق إلى الداخل. تأكد من أن التدفق الخارجي له الحد الأدنى من الاتصال مع الحل بحيث يزيل الحل في قطرات صغيرة متتابعة متعددة، مع تجنب الفواصل الزمنية الطويلة لإزالة الحل المستمر. بعد ذلك، ابدأ الضخ مع محلول التصوير الذي يحتوي على ثلاثة جلوكوز ملليمولار، وحدد مسار الضوء والفلاتر لتصوير الفلوروفوريس الخضراء.ثم تشغيل التصوير الحي لإعداد المعلمات التصوير وضبط طريقة العرض لالتقاط الجزر ذات الأهمية. لتحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء للصورة، ضبط شدة ضوء الإثارة، ووقت التعرض، وbinning، وضمان أن إعدادات تسمح تصور متميز لكل خلية داخل الجزر في الحد الأدنى من شدة الضوء ممكن والتعرض. ثم صورة الجزر في 0.1 إلى خمسة هيرتز ، والتحقق من نوعية البيانات المكتسبة كما يتم التقاطها.عندما يكون نشاط الخلية ألفا يمكن اكتشافه، استخدم مخططًا عبر الإنترنت لديناميات الإشارة داخل برنامج الاستحواذ قدر الإمكان وأضف الأدرينالين أو الغلوتامات في محلول الحمام لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق. سيتم ملاحظة قفزة سريعة في الكالسيوم تليها تباطؤ أو إلغاء ذبذبات الخلايا ألفا. بعد ذلك، إضافة غريلين، الذي تم الإبلاغ عنه مؤخرا لتنشيط خلايا الدلتا بشكل انتقائي.وسوف يلاحظ حدوث زيادة سريعة في الكالسيوم في مجموعة فرعية صغيرة من خلايا الجزير. ثم أضف 10 ملليمولار الجلوكوز. وسوف يلاحظ وجود استجابة متذبذبة منسقة في الخلية الفرعية لخلايا بيتا.لاحظ أيضاً استجابات الخلايا التي تم تنشيطها سابقاً بواسطة الأدرينالين أو الغلوتامات والغريلين. بعد حفظ الصور، استيراد البيانات إلى برنامج تحليل البيانات المناسبة وتطبيع البيانات كثافة الفلوريسين الخام إلى القيمة الأولية للفلوريسنس. إذا كانت مجموعة بيانات كثافة الفلورانس المتغيرة من الخلية إلى الخلية لا تزال كبيرة، قم بتعريف منطقة تحكم لنطاق الوقت الذي تم خلاله تطبيق حل التحكم.إذا كانت منطقة التحكم تحتوي على إشارة غير متذبذبة واضحة، افترض أن كثافة الفلوريسين عادت إلى خط الأساس بعد كل تطبيق من حل التحكم. لتصحيح بيانات الفاصل الزمني لكل خلية، قم بتقسيم البيانات إلى أجزاء مفصولة بالنقاط التي تمت بها إضافة حل التحكم وتطبيق التصحيح الخطي على كل قطعة. إذا كان نطاق التحكم تذبذبات واضحة أو عوامل إضافية موجودة، استخدم خوارزمية اكتشاف الارتفاع.لقياس وتيرة طفرات الكالسيوم والاستجابة لإضافة من ناهضين والخصوم، وتقسيم التسجيل إلى فترات زمنية متساوية، عد المسامير داخل الفاصل الزمني، وتطبيع إلى مدة الفاصل الزمني لحساب الوقت من وتيرة جزئية. بدلاً من ذلك، تعيين عتبة وحساب كسر الهضبة لكل من الفواصل الزمنية. يشير الكسر إلى النسبة المئوية للوقت ضمن الفاصل الزمني الذي استغرقته الخلية في حالة الحماس.أو حساب المساحة الجزئية تحت المنحنى لكل من الفواصل الزمنية. ما لم يتأثر تكوين الدهون في الغشاء ، فإن الجزر الصغيرة تحمل بشكل جيد مع الأصباغ الاستوائية. الفيروس الغدي البشري من النوع 5 ناقلات أيضا بنجاح يستهدف الخلايا الجزيرة.يمكن الكشف عن ارتفاع الكالسيوم في خلايا ألفا بسهولة عند مستويات منخفضة من الجلوكوز، وهناك ارتباط عالي بين الخلايا إلى الخلية بين النشاط عند انخفاض الجلوكوز والاستجابة للأدرينالين والغلوتامات. ينشط غريلين بعض الخلايا المتجاوبة مع الأدرينالين عند انخفاض مستوى الجلوكوز، ولكن ليس له تأثير على ديناميات الكالسيوم في معظم الخلايا التي يتم تنشيطها عن طريق انخفاض الجلوكوز. عند تحليلها من حيث التردد الجزئي، الأدرينالين أو الخلايا المحفزة غريلين عرض زيادة كبيرة في ظل ظروف كل شيء أو لا شيء، على الرغم من أن التغييرات الشاملة بين ارتفاع القاعدية وتأثير الأدرينالين هي خفية.في المقابل، المنطقة الجزئية تحت المنحنى حساسة للتغيرات التي أدخلها الأدرينالين في جميع الخلايا حتى عندما يكون النشاط القاعدي مرتفعًا. تأكد من أن جميع الشبكات على اتصال مع حل التصوير والحرص على وضع الأنسجة كثيفة بشكل معقول لتجنب فقاعات الهواء. ويمكن توسيع هذه الطريقة لتشمل الذكاء الاصطناعي للتمييز بين أنواع الخلايا.يمكن استبدال العلامات الدوائية بتقنية التعرف على الأنماط ، مما يقلل من وقت التسجيل.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

فأري عزل جزيرة البنكرياس

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

الإنسان عزل جزيرة البنكرياس : الجزء الأول : الهضم ومجموعة من الأنسجة البنكرياس

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Measuring Near Plasma Membrane and Global Intracellular Calcium Dynamics in Astrocytes

قياس الأدنى غشاء البلازما والعالمية حيوية الكالسيوم بين الخلايا في الخلايا النجمية

The brain contains glial cells.  Astrocytes, a type of glial cell, have long been known to provide a passive supportive role to neurons. However, ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

الإنسان عزل جزيرة البنكرياس : الجزء الثاني : تنقية الثقافة والإنسان من الفشوت

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

في الجسم الحي التصوير والعلاجات العلاجية في الفأر نموذج مثلي من سرطان المبيض

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

وهناك طريقة للماوس البنكرياس جزيرة العزلة وبين الخلايا المخيم تقدير

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

إعداد خلايا البنكرياس عنيبية لغرض التصوير الكالسيوم، القياسات إصابة الخلية، وعدوى الفيروسة الغدانية

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

العزلة والثقافة من الماوس الأساسي خلايا البنكرياس عنيبية

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

عالية الدقة التصوير الوقت الفاصل بين وتحليل الآلي للأنيبيب حيوية في المعيشة السري الإنسان خلايا الوريد غشائي

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...