Name: imaging calcium dynamics in subpopulations of mouse pancreatic islet cells
Uploaded: 2019-11-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells at JoVE.com

AH was de ontvanger van een diabetes UK PhD studentship, EV werd gesteund door het OXION-Wellcome Trust trainingsprogramma, AIT held een Oxford biomedische Onderzoeksraad Postdoctoral Fellowship.

Alle hier beschreven methoden zijn ontwikkeld in overeenstemming met de wet op de dieren (wetenschappelijke procedures) van het Verenigd Koninkrijk (1986) en de ethische richtlijnen van de Universiteit van Oxford.
1. Isoleer muizen pancreas eilandjes
<ol><li>Bereid het kweekmedium en de isolatie oplossing voor.<ol>
<li>Make-up van de cultuurmedium: RMPI1640 (Zie tabel van de materialen), aangevuld met 10% van foetaal kalf serum, 100 eenheden/ml penicillaire, 100 μg/ml strep...

<ol>
	<li>Elayat, A. A., el-Naggar, M. M., Tahir, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunocytochemical+and+morphometric+study+of+the+rat+pancreatic+islets.">An immunocytochemical and morphometric study of the rat pancreatic islets.</a> Journal of Anatomy. 186, 629 (1995).</li><li>Cabrera, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unique+cytoarchitecture+of+human+pancreatic+islets+has+implications+for+islet+cell+function.">The unique cytoarchitecture of human pancreatic islets has implications for islet cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (7), 2334-2339 (2006).</li><li>Brereton, M. F., Vergari, E., Zhang, Q., Clark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-,+delta-and+PP-cells:+are+they+the+architectural+cornerstones+of+islet+structure+and+co-ordination.">Alpha-, delta-and PP-cells: are they the architectural cornerstones of islet structure and co-ordination.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 63 (8), 575-591 (2015).</li><li>F&#230;rch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+is+accompanied+by+increased+fasting+glucagon+and+delayed+glucagon+suppression+in+individuals+with+normal+and+impaired+glucose+regulation.">Insulin resistance is accompanied by increased fasting glucagon and delayed glucagon suppression in individuals with normal and impaired glucose regulation.</a> Diabetes. 65 (11), 3473-3481 (2016).</li><li>Dabrowski, M., Tarasov, A., Ashcroft, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+architecture+of+the+ATP-binding+site+of+the+KATP+channel+subunit+Kir6+2.">Mapping the architecture of the ATP-binding site of the KATP channel subunit Kir6 2.</a> The Journal of Physiology. 557 (2), 347-354 (2004).</li><li>Liu, Y. J., Vieira, E., Gylfe, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+store-operated+mechanism+determines+the+activity+of+the+electrically+excitable+glucagon-secreting+pancreatic+alpha-cell.">A store-operated mechanism determines the activity of the electrically excitable glucagon-secreting pancreatic alpha-cell.</a> Cell Calcium. 35 (4), 357-365 (2004).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca+2++probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca 2+ probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137 (2001).</li><li>Nagai, T., Sawano, A., Park, E. S., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circularly+permuted+green+fluorescent+proteins+engineered+to+sense+Ca2.">Circularly permuted green fluorescent proteins engineered to sense Ca2.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 98 (6), 3197-3202 (2001).</li><li>Broussard, G. J., Liang, R., Tian, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+activity+in+neural+circuits+with+genetically+encoded+indicators.">Monitoring activity in neural circuits with genetically encoded indicators.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 7, 97 (2014).</li><li>Akerboom, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+GCaMP+calcium+indicator+for+neural+activity+imaging.">Optimization of a GCaMP calcium indicator for neural activity imaging.</a> Journal of Neuroscience. 32 (40), 13819-13840 (2012).</li><li>Rodriguez, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growing+and+glowing+toolbox+of+fluorescent+and+photoactive+proteins.">The growing and glowing toolbox of fluorescent and photoactive proteins.</a> Trends in Biochemical Sciences. 42 (2), 111-129 (2017).</li><li>Tarasov, A. I., Rutter, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in enzymology. 542, 289-311 (2014).</li><li>Tarasov, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency-dependent+mitochondrial+Ca(2+)+accumulation+regulates+ATP+synthesis+in+pancreatic+&#946;+cells.">Frequency-dependent mitochondrial Ca(2+) accumulation regulates ATP synthesis in pancreatic &#946; cells.</a> Pflugers Archiv: European Journal of Physiology. 465 (4), 543-554 (2013).</li><li>Smith, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Ca2++indicators+directly+inhibit+the+Na,+K-ATPase+and+disrupt+cellular+functions.">Fluorescent Ca2+ indicators directly inhibit the Na, K-ATPase and disrupt cellular functions.</a> Science Signal. 11 (515), 2039 (2018).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca2++indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators.</a> Science. 333 (6051), 1888-1891 (2011).</li><li>Dana, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+red+protein+calcium+indicators+for+imaging+neural+activity.">Sensitive red protein calcium indicators for imaging neural activity.</a> Elife. 5, 12727 (2016).</li><li>Theis, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarking+Spike+Rate+Inference+in+Population+Calcium+Imaging.">Benchmarking Spike Rate Inference in Population Calcium Imaging.</a> Neuron. 90 (3), 471-482 (2016).</li><li>Hamilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenaline+Stimulates+Glucagon+Secretion+by+Tpc2-Dependent+Ca(2+)+Mobilization+From+Acidic+Stores+in+Pancreatic+alpha-Cells.">Adrenaline Stimulates Glucagon Secretion by Tpc2-Dependent Ca(2+) Mobilization From Acidic Stores in Pancreatic alpha-Cells.</a> Diabetes. 67 (6), 1128-1139 (2018).</li><li>Adriaenssens, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic+profiling+of+pancreatic+alpha,+beta+and+delta+cell+populations+identifies+delta+cells+as+a+principal+target+for+ghrelin+in+mouse+islets.">Transcriptomic profiling of pancreatic alpha, beta and delta cell populations identifies delta cells as a principal target for ghrelin in mouse islets.</a> Diabetologia. 59 (10), 2156-2165 (2016).</li><li>DiGruccio, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+alpha,+beta+and+delta+cell+transcriptomes+reveal+that+ghrelin+selectively+activates+delta+cells+and+promotes+somatostatin+release+from+pancreatic+islets.">Comprehensive alpha, beta and delta cell transcriptomes reveal that ghrelin selectively activates delta cells and promotes somatostatin release from pancreatic islets.</a> Molecular Metabolism. 5 (7), 449-458 (2016).</li><li>Mourao, M., Satin, L., Schnell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+experimental+design+to+estimate+statistically+significant+periods+of+oscillations+in+time+course+data.">Optimal experimental design to estimate statistically significant periods of oscillations in time course data.</a> PloS One. 9 (4), 93826 (2014).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).</li><li>Cabrera, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+is+a+positive+autocrine+signal+for+glucagon+release.">Glutamate is a positive autocrine signal for glucagon release.</a> Cell Metabolism. 7 (6), 545-554 (2008).</li><li>Thevenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyramid+approach+to+subpixel+registration+based+on+intensity.">A pyramid approach to subpixel registration based on intensity.</a> IEEE Transactions on Image Processing. 7 (1), 27-41 (1998).</li><li>Tarasov, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+real-time+hormone+release+kinetics+via+high-content+3-D+imaging+of+compensatory+endocytosis.">Monitoring real-time hormone release kinetics via high-content 3-D imaging of compensatory endocytosis.</a> Lab on a Chip. 18 (18), 2838-2848 (2018).</li><li>Knudsen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+Glucagon+Secretion+by+Hyperglycemia-Induced+Sodium-Dependent+Reduction+of+ATP+Production.">Dysregulation of Glucagon Secretion by Hyperglycemia-Induced Sodium-Dependent Reduction of ATP Production.</a> Cell Metabolism. , (2018).</li><li>Adam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fumarate+hydratase+deletion+in+pancreatic+&#946;+cells+leads+to+progressive+diabetes.">Fumarate hydratase deletion in pancreatic &#946; cells leads to progressive diabetes.</a> Cell Reports. 20 (13), 3135-3148 (2017).</li><li>Wills, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistical+approaches+and+software+for+clustering+islet+cell+functional+heterogeneity.">Statistical approaches and software for clustering islet cell functional heterogeneity.</a> Islets. 8 (2), 48-56 (2016).</li><li>Berggren, P. O., Ostenson, C. G., Petersson, B., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+divergent+glucose+effects+on+calcium+metabolism+in+pancreatic+beta-+and+alpha+2-cells.">Evidence for divergent glucose effects on calcium metabolism in pancreatic beta- and alpha 2-cells.</a> Endocrinology. 105 (6), 1463-1468 (1979).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> The Journal of Biological Chemistry. 260 (6), 3440-3450 (1985).</li><li>Longo, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+cytosolic+free+Ca2+,+oxygen+consumption,+and+insulin+secretion+in+glucose-stimulated+rat+pancreatic+islets.">Oscillations in cytosolic free Ca2+, oxygen consumption, and insulin secretion in glucose-stimulated rat pancreatic islets.</a> The Journal of Biological Chemistry. 266 (14), 9314-9319 (1991).</li><li>Johansson, H., Gylfe, E., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+raises+cytoplasmic+calcium+in+pancreatic+alpha+2-cells+by+mobilizing+calcium+incorporated+in+response+to+glucose.">Cyclic AMP raises cytoplasmic calcium in pancreatic alpha 2-cells by mobilizing calcium incorporated in response to glucose.</a> Cell Calcium. 10 (4), 205-211 (1989).</li><li>Grapengiesser, E., Gylfe, E., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+types+of+cytoplasmic+Ca2++oscillations+in+stimulated+pancreatic+&#946;-cells.">Three types of cytoplasmic Ca2+ oscillations in stimulated pancreatic &#946;-cells.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 268 (1), 404-407 (1989).</li><li>Okamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cytosolic+Ca2++in+impaired+sensitivity+to+glucose+of+rat+pancreatic+islets+exposed+to+high+glucose+in+vitro.">Role of cytosolic Ca2+ in impaired sensitivity to glucose of rat pancreatic islets exposed to high glucose in vitro.</a> Diabetes. 41 (12), 1555-1561 (1992).</li><li>Gilon, P., Henquin, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+membrane+potential+changes+on+cytoplasmic+Ca2++concentration+in+an+electrically+excitable+cell,+the+insulin-secreting+pancreatic+B-cell.">Influence of membrane potential changes on cytoplasmic Ca2+ concentration in an electrically excitable cell, the insulin-secreting pancreatic B-cell.</a> The Journal of Biological Chemistry. 267 (29), 20713-20720 (1992).</li><li>Valdeolmillos, M., Nadal, A., Soria, B., Garcia-Sancho, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+digital+image+analysis+of+glucose-induced+[Ca2+]i+oscillations+in+mouse+pancreatic+islets+of+Langerhans.">Fluorescence digital image analysis of glucose-induced [Ca2+]i oscillations in mouse pancreatic islets of Langerhans.</a> Diabetes. 42 (8), 1210-1214 (1993).</li><li>Cheng, H., Lederer, W. J., Cannell, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sparks:+elementary+events+underlying+excitation-contraction+coupling+in+heart+muscle.">Calcium sparks: elementary events underlying excitation-contraction coupling in heart muscle.</a> Science. 262 (5134), 740-744 (1993).</li><li>Stout, A. L., Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evanescent+field+excitation+of+fluorescence+by+epi-illumination+microscopy.">Evanescent field excitation of fluorescence by epi-illumination microscopy.</a> Applied Optics. 28 (24), 5237-5242 (1989).</li><li>Stozer, A., Dolensek, J., Rupnik, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-stimulated+calcium+dynamics+in+islets+of+Langerhans+in+acute+mouse+pancreas+tissue+slices.">Glucose-stimulated calcium dynamics in islets of Langerhans in acute mouse pancreas tissue slices.</a> PloS One. 8 (1), 54638 (2013).</li><li>Tian, G., Sandler, S., Gylfe, E., Tengholm, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-+and+hormone-induced+cAMP+oscillations+in+alpha-+and+beta-cells+within+intact+pancreatic+islets.">Glucose- and hormone-induced cAMP oscillations in alpha- and beta-cells within intact pancreatic islets.</a> Diabetes. 60 (5), 1535-1543 (2011).</li><li>Benninger, R. K., Zhang, M., Head, W. S., Satin, L. S., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction+coupling+and+calcium+waves+in+the+pancreatic+islet.">Gap junction coupling and calcium waves in the pancreatic islet.</a> Biophysical Journal. 95 (11), 5048-5061 (2008).</li><li>van Gurp, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequential+intravital+imaging+reveals+in+vivo+dynamics+of+pancreatic+tissue+transplanted+under+the+kidney+capsule+in+mice.">Sequential intravital imaging reveals in vivo dynamics of pancreatic tissue transplanted under the kidney capsule in mice.</a> Diabetologia. 59 (11), 2387-2392 (2016).</li></ol>

Er zijn drie fasen in het protocol die essentieel zijn voor het algehele succes. Succesvolle injectie van het Liberase-enzym in het galkanaal bepaalt niet alleen het kwantitatieve succes van de isolatie procedure, maar beïnvloedt ook de kwaliteit van de geïsoleerde eilandjes. Niet-opgeblazen pancreata kan resulteren in het ontbreken van een aantal belangrijke metabole reacties in de geïsoleerde eilandjes. Ten tweede definieert het laden van de kleurstof/de expressie van de sensor de signaal-ruis verhouding van de time...

Het doel van de methode is om real-time veranderingen in cytosolische calciumconcentratie ([CA2 +]CYT) in kleine subpopulaties van eiland cellen van de alvleesklier te beeld. Dit maakt het onthullen van de mechanismen voor de secretie van hormonen in deze cellen, onthullen details over de cross-talk tussen verschillende celtypen en, potentieel, de invoering van een populationeel dimensie in de grotere afbeelding van eilandje signalering.
Islets bestaan uit verschillende celtypen. Naast de meer bekende insuline-afscheidende β-cellen, zijn er ten minste twee subpopulaties die ook kritisch zijn in het reguleren van bloedglucose3. α-cellen (die ongeveer 17% van de eiland cellen vormen) scheiden glucagon wanneer bloedglucose te laag wordt, wat signalen voor het vrijkomen van glucose in de bloedbaan van depots in de lever. Overmatige glucagon spiegels (hyperglucagonemie) en verminderde controle van glucagon-afgifte begeleiden (en, technisch, kunnen bijdragen aan) de prediabetische aandoening van verminderde insulinegevoeligheid4. δ-cellen (ongeveer 2%) afscheiden Somatostatine in reactie op verhoging van de glucose. Dit alomtegenwoordige peptide hormoon is waarschijnlijk aanwezig bij hoge concentraties in de nabijheid van α-en β-cellen binnen eilandjes, die een sterke Gi receptor-gemedieerde verzachtende werking op zowel glucagon als insuline secretie heeft.
α-cellen en δ-cellen delen een groot deel van de glucose-sensing machines met hun naaste afstamming verwanten, β-cellen. Alle drie de cellen typen zijn uitgerust met ATP-gevoelige K+ kanalen, uitgebreide metabole sensoren5 die het potentieel van de plasma membraan van deze prikkelbaar cellen controleren. Tegelijkertijd wordt de secretie van insuline, Somatostatine en glucagon anders gereguleerd door glucose. Beeldvorming van CA2 + dynamiek in de twee kleine subpopulaties van eiland cellen kan daarom een inzicht geven in de cross-talk tussen bloedglucose en eilandje secretoire output.
Vroege pogingen om de prikkelbaarheid van α-en δ-cellen te monitoren met behulp van Patch-clamp elektrofysiologie werden al snel gevolgd door beeldvorming van CA2 + in enkelvoudige α-en δ-cellen. De identiteit van cellen in deze experimenten werd geverifieerd via een achteraf-kleuring met anti-glucagon-of anti-Somatostatine-antilichamen. Deze inspanningen werden vaak gehinderd door de bevinding dat de cellen van het eiland zich heel anders gedragen binnen het eilandje en als alleenstaande cellen. Hoewel β-cellen de belangrijkste weldoeners van de eiland regeling lijken te zijn (vanwege hun overweldigende meerderheid die ten grondslag ligt aan hun sterke elektrische koppeling), was de belangrijkste discrepantie verrassend in α-cellen te vinden. Binnen het ongeschonden eilandje worden deze cellen voortdurend en aanhoudend geactiveerd bij lage glucose, wat alleen geldt voor ongeveer 7% van de enkelvoudige verspreide α-cellen6. Het rapporteren van de activiteit van α-en δ-cellen binnen intacte eilandjes wordt daarom verondersteld een nauwere benadering van de in vivo omstandigheden te vormen.
Over het algemeen zijn er twee manieren om ca2 + Dynamics specifiek van de α-cel-of δ-celsubpopulaties te rapporteren: (i) een genetisch gecodeerde CA2 + -sensor uitdrukken via een Weefselspecifieke promotor of (II) het gebruik van marker verbindingen. De elegantere, vroegere aanpak voegt het aanzienlijke voordeel van echte 3D-beeldvorming toe en bestudeert daarom de celverdeling binnen het eilandje. Het kan echter niet worden toegepast voor intact menselijk eilandje materiaal. Een andere potentiële zorg is de "ledigheid" van de organisator, met name wanneer de β-/α-Celtransdifferentiatie of α-celrespons op hoge glucose is uitgevoerd. Deze laatste benadering kan worden gebruikt met vers geïsoleerd weefsel, waaronder menselijke monsters of gekweekte eilandjes. De gegevens worden echter uitsluitend verzameld van de perifere laag van eiland cellen, zoals het leveren van de kleurstof/marker molecuul in diepere lagen zonder wijziging van de Islet architectuur is uitdagend. Een onverwacht voordeel van deze laatste benadering is de compatibiliteit met Wide-Field Imaging mode, waardoor de experimenten kunnen worden geschaald naar gelijktijdige beeldvorming van tientallen of honderden eilandjes (d.w.z. duizenden tot tienduizenden cellen).
Calcium wordt in vivo met behulp van genetisch gecodeerde gcamp7 (of pericam8) familie sensoren, die varianten van circulair permutated groen fluorescerende eiwit (GFP) gesmolten aan de calcium-bindende proteïne Calmoduline en de doel volgorde, M13 fragment van myosin lichte keten kinase7,9. Gcamps hebben uitstekende signaal-ruis verhoudingen in het bereik van nanomolair CA2 + concentraties en een hoge 2-Fobe dwarsdoorsnede, wat ze een ideale keuze maakt voor in vivo werk10,11. Het uitdagende aspect van het gebruik van recombinant sensoren is hun levering in de cellen. Heterologeuze expressie vereist het gebruik van een virale vector en multi-hour ex vivo culturing, die vaak bezorgdheid oproept over mogelijke de-differentiatie of verslechtering van de celfuncties. Hoewel Muismodellen die zijn ontworpen om GCaMP te uiten dit probleem aanpakken, voegen ze nieuwe uitdagingen toe door de doorlooptijd substantieel te verhogen en het werk te beperken tot een niet-menselijk model. Zeer hoge gevoeligheid voor veranderingen van intracellulaire pH is een andere nadelige kant van eiwit-gebaseerde sensoren12, dat is echter minder een probleem voor sensing oscillerende signalen, zoals CA2 +.
Het voordeel van aftrap bare kleurstoffen (zoals groen fluorescerende Fluo4) is dat ze binnen ongeveer een uur in vers geïsoleerd weefsel kunnen worden geladen. Voorspelbare, te onderscheppen kleurstoffen hebben lagere signaal-ruis verhoudingen en (veel) lagere foto stabiliteit dan hun recombinante tegenhangers. We kunnen niet bevestigen13 de meldingen van toxiciteit van de te onderscheppen kleurstoffen14, echter, kleurstof overbelasting is een frequent probleem.
Rode recombinant CA2 + sensoren op basis van circulaire permutatie zijn snel in ontwikkeling sinds 201115, en de meest recente ontwikkelingen presenteren een sterke concurrentie voor gcamps16 voor weefsel beeldvorming, gezien een hogere diepte van penetratie van rood licht. In de handel verkrijgbare rode, te onderscheppen kleurstoffen kunnen betrouwbaar worden gebruikt voor eencellige beeldvorming, maar op weefselniveau kan het niet goed concurreren met de groene analogen.
Er is schijnbaar zeer weinig keuze van Imaging technologie voor experimenten in weefsel waar out-of-focus licht een kritisch probleem wordt. Het confocale systeem biedt aanvaardbare eencellige resolutie door annulering van het out-of-focus licht met enige doelstelling op de NA boven 0,3 (voor het geval van GCaMP6) of 0,8 (aftrap bare kleurstof). In technische zin kan een conventionele confocale Microscoop worden gebruikt voor gelijktijdige beeldvorming van [ca.2 +]CYT uit honderden (gcamp) of tientallen eilandjes (trappelijke kleurstof). Het enige realistische alternatief voor confocale modus in het geval van 3D-expressie van de sensor in weefsel is misschien licht-Sheet microscopie.
Dingen zijn iets anders voor het geval wanneer de sensor wordt uitgedrukt in de perifere laag van cellen in het eilandje weefsel. Voor heldere recombinant sensoren die een levendig intracellulaire expressie patroon hebben, kan het gebruik van een Wide-Field Imaging-modus met een lage-NA-doelstelling voldoende kwaliteit bieden en de onderzoeker belonen met een substantiële toename van het gezichtsveld en daarmee de Doorvoer. Een breed-veld systeem biedt een slechtere ruimtelijke resolutie, omdat het out-of-focus licht niet wordt geannuleerd; Daarom is Imaging weefsel met High-NA (lage scherptediepte) doelstellingen minder informatief, omdat het eencellige signaal sterk verontreinigd is door naburige cellen. De verontreiniging is veel kleiner voor de lage-NA (hoge scherptediepte) doelstellingen.
Er zijn echter taken waarvoor hoge doorvoer en/of samplingfrequentie een belangrijk voordeel worden. α-en δ-cellen vertonen een aanzienlijke heterogeniteit, die een vraag naar hoge steekproefgroottes creëert om de bijdrage van de subpopulaties te onthullen. Beeldvorming in brede velden is snel en gevoeliger, met een grote industriële schaal met een groot gezichtsveld voor het weergeven van honderden (GCaMP) of TENS (Fluo4) van eilandjes op dezelfde signaal-ruis verhouding als de confocale experimenten op tien of een enkel eilandje. Dit verschil in doorvoer maakt het Wide-Field-systeem voordelig voor populationele beeldvorming met een resolutie met één cel, wat vooral cruciaal kan zijn voor kleine subpopulaties zoals de δ-cel één. Evenzo, pogingen om elektrische activiteit te reconstrueren van CA2 + stekelige17 zou profiteren van de hogere samplefrequentie geboden door een Wide-veld Imaging mode. Tegelijkertijd vereisen verschillende "niche"-problemen zoals de activiteit van de alvleesklier α-cellen bij stimulatie van de dominante β-cel subpopulatie, het gebruik van een confocale systeem. Een factor die van invloed is op de beslissing naar de confocale modus is de aanwezigheid van een substantieel verontreinigend signaal van de β-cel subpopulatie.
Hoewel het gebruik van hormoonspecifieke antilichaam kleuring om de identiteit van de cellen te verifiëren na de Imaging-experimenten nog steeds een optie is, kunnen kleine celsubpopulaties worden geïdentificeerd met behulp van functionele marker verbindingen, zoals adrenaline en ghreline die werden aangetoond dat ze selectief de CA2 + -dynamiek in α-18 -en δ-cellen19,20, respectievelijk hebben gestimuleerd.
De analyse van time-lapse Imaging data is bedoeld om informatie te verschaffen die verder gaat dan triviale farmacologie, zoals populationele heterogeniteit, correlatie en interactie van verschillende signalen. Conventioneel worden Imaging gegevens geanalyseerd als intensiteit versus tijd en genormaliseerd naar de initiële fluorescentie (F/F0). Baseline correctie is vaak nodig, als gevolg van het bleken van het de signaal of verontreiniging door veranderingen in autofluorescentie of pH (meestal geïnduceerd door millimolaire spiegels van glucose12). CA2 + gegevens kunnen op veel verschillende manieren worden geanalyseerd, maar drie belangrijke trends zijn het meten van veranderingen in de Spike frequentie, de plateau breuk of het gebied onder de curve, berekend versus tijd. We vonden de laatste aanpak voordelig, vooral in toepassing op zwaar ondergesamplede confocale gegevens. Het voordeel van de pAUC metriek is de gevoeligheid voor beide veranderingen in signaalfrequentie en amplitude, terwijl het berekenen van de frequentie vereist een aanzienlijk aantal oscillaties21, dat is moeilijk te bereiken met behulp van conventionele beeldvorming. De beperkende factor van de pAUC-analyse is de hoge gevoeligheid voor Baseline veranderingen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:779px;" width="779">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:216px;">40x/1.3 objective</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:216px;">Axiovert 200 microscope</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">emission</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:216px;">Excitation</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-&#1040;ldrich</td>
			<td style="width:119px;">F7524-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fluo4</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">&#160; F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">GCaMP6f, in (human type 5) adenoviral vector</td>
			<td style="width:277px;">Vector Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">1910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hanks&#39; solution&#160;</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Liberase</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-&#1040;ldrich</td>
			<td style="width:119px;">5401020001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">penicillin/streptomycin</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RPMI medium</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">61870044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Zeiss LSM510-META confocal system</td>
			<td style="width:277px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging calcium dynamics in subpopulations of mouse pancreatic islet cells

Pancreatic Islet hormonen reguleren bloedglucose homeostase. Veranderingen in bloedglucose induceren oscillaties van cytosolische calcium in de cellen van de eiland alvleesklier die leiden tot afscheiding van drie belangrijke hormonen: insuline (uit β-cellen), glucagon (α-cellen) en Somatostatine (δ-cellen). β-cellen, die de meerderheid van de eiland cellen vormen en elektrisch aan elkaar zijn gekoppeld, reageren als één enkele entiteit op de glucose stimulus. De prikkelbaarheid van de kleine subpopulaties, α-cellen en δ-cellen (die ongeveer 20% (30%) en 4% (10%) van de totale celaantallen van knaagdieren1 (menselijk2) is minder voorspelbaar en daarom van bijzonder belang.
Calcium sensoren worden geleverd in de perifere laag van cellen binnen het geïsoleerde eilandje. Het eilandje of een groep eilandjes wordt vervolgens geïmmobiliseerd en afgebeeld met behulp van een fluorescentiemicroscoop. De keuze van de Imaging-modus is tussen een hogere doorvoer (breed veld) en een betere ruimtelijke resolutie (confocale). Conventioneel, laser scanning confocale microscopie wordt gebruikt voorbeeld vormende weefsel, als het biedt de beste scheiding van het signaal tussen de naburige cellen. Een breed-veld systeem kan ook worden gebruikt, als het contaminerende signaal van de dominante populatie van β-cellen wordt geminimaliseerd.
Zodra de calcium dynamiek in reactie op specifieke prikkels is geregistreerd, worden de gegevens uitgedrukt in numerieke vorm als fluorescentie intensiteit versus tijd, genormaliseerd naar de initiële fluorescentie en baseline-gecorrigeerd, om de effecten te verwijderen die verband houden met het bleken van de de. Veranderingen in de Spike frequentie of gedeeltelijke oppervlakte onder de curve (pAUC) worden berekend versus tijd, om de waargenomen effecten te kwantificeren. pauc is gevoeliger en behoorlijk robuust, terwijl de stekelige frequentie meer informatie biedt over het mechanisme van calcium toename.
Secundaire subpopulaties van cellen kunnen worden geïdentificeerd met behulp van functionele reacties op markerings verbindingen, zoals adrenaline en ghrelin, die veranderingen in cytosolische calcium veroorzaken in een specifieke populatie van eiland cellen.

Islets kunnen vrij goed worden geladen met de te onderscheppen kleurstoffen (Figuur 1A), tenzij de lipide samenstelling van het membraan is aangetast (bijv. door chronische blootstelling aan vetzuren). De menselijke adenovirus type 5 (Ad5) vector is ook gericht op alle eiland cellen (Figuur 1B). Er kunnen zich problemen voordoen wanneer meer dan één recombinant sensor in dezelfde cel wordt uitgedrukt. Bovendien zijn eilandjes ...

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells at JoVE.com

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Hier presenteren we een protocol voorbeeld vorming en kwantificeren van de calcium dynamica in heterogene celpopulaties, zoals de eiland cellen van de alvleesklier. Fluorescerende verslaggevers worden geleverd in de perifere laag van cellen binnen het eilandje, die vervolgens wordt geïmmobiliseerd en imaged, en per-cel analyse van de dynamiek van de intensiteit van de fluorescentie wordt uitgevoerd.

Imaging calcium dynamica in subpopulaties van muizen pancreatic eilandje cellen

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

Het protocol maakt een snelle geïsoleerde functie van kleine subpopulaties van cellen binnen pancreaseilandjes van Langerhans mogelijk. De voordelen van deze techniek omvatten de real-time aard en een hoog statistisch vermogen, en dus een hoge reproduceerbaarheid, van de verkregen gegevens. Om de eilandjes voor beeldvorming te immobiliseren, monteer je een beeldkamer voor een omgekeerde microscoop en plaats je een glazen afdekbrief in de kamer.Zorg ervoor dat de glazen kamerinterface waterdicht is en bevestig dat de afdeksel zich binnen het bereik van de microscoopdoelstelling bevindt. Snijd vervolgens 20 bij 20 millimeter vierkanten fijn en grof gaas en gebruik 45 tot 50 micrometer stukjes dikke plakband om twee afstandswanden te creëren op een stuk fijn gaas. Dompel het grove gaas en een gewicht onder in een petrischaaltje van 35 millimeter met beeldvormingsoplossing en leg het fijne gaas onder een ontledenmicroscoop.Draai het fijne gaas met de spacer muren ondersteboven en de afstandhouders naar boven gericht. En gebruik een p20 pipet om verschillende eilandjes over te brengen tussen de twee afstandhouders. Met behulp van de tang'forceps, plaats het gaas ondersteboven in de beeldkamer van de omgekeerde microscoop, zodat de afstandhouders naar beneden staan om direct te zitten op de kamer deksel slip, het vangen van de eilandjes tussen de afstandhouders en het gaas in het midden van de cover slip.Zorg ervoor dat het gaas goed gehydrateerd is zonder overmatige hoeveelheden oplossing te bevatten die de zijdelingse beweging van het monster zouden veroorzaken. Plaats vervolgens het grove gaas en het gewicht bovenop het fijne gaas in de kamer en voeg de beeldoplossing toe aan de kamer. Zodra de eilandjes zijn geïmmobiliseerd, selecteert u de beeldmodus en doelstelling op de omgekeerde microscoop en plaatst u de kamer met de eilandjes op het temperatuurgestuurde stadium van de microscoop.Na het instellen van de perfusie, plaats de instroom lager dan de uitstroom in de kamer en stel de uitstroom te zijn groter dan de instroomflux. Zorg ervoor dat de uitstroom minimaal contact heeft met de oplossing, zodat de oplossing in meerdere opeenvolgende kleine druppeltjes wordt verwijderd, waardoor lange intervallen van continue oplossingsverwijdering worden vermeden. Start vervolgens de perfusie met beeldvormingsoplossing met drie millimolarglucose en selecteer het lichtpad en de filters voor beeldvorming groene fluoroforen.Voer vervolgens live beeldvorming uit om de beeldvormingsparameters in te stellen en de weergave aan te passen om de bezienswaardigheden van belang vast te leggen. Als u de signaal-ruisverhouding van het beeld wilt optimaliseren, past u de intensiteit van het excitatielicht, de belichtingstijd en de binning aan, zodat de instellingen een duidelijke visualisatie van elke cel in de eilandjes mogelijk maken bij de minimale mogelijke lichtintensiteit en belichting. Beeld vervolgens de eilandjes op 0,1 tot 5 hertz, het controleren van de kwaliteit van de verkregen gegevens als het wordt vastgelegd.Wanneer de alfacelactiviteit detecteerbaar is, gebruikt u een online grafiek van de signaaldynamiek binnen de acquisitiesoftware mogelijk en voeg adrenaline of glutamaat gedurende twee tot vijf minuten toe aan de badoplossing. Een snelle sprong in calcium gevolgd door een vertraging of annulering van de alfacel oscillaties zal worden waargenomen. Voeg vervolgens ghreline toe, waarvan onlangs is gemeld dat ze deltacellen selectief activeren.Een snelle omkeerbare toename van calcium zal worden waargenomen in een kleine subpopulatie van eilandjecellen. Voeg vervolgens 10 millimolar glucose toe. Een gecoördineerde oscillatory reactie in de bètacel subpopulatie zal worden waargenomen.Let ook op de reacties van cellen die eerder werden geactiveerd door adrenaline of glutamaat en ghreline. Na het opslaan van de beelden importeert u de gegevens in een geschikt softwareprogramma voor gegevensanalyse en normaliseert u de gegevens over de ruwe fluorescentieintensiteit tot de initiële waarde van fluorescentie. Als de gegevensset van cel-cel-celvariabiliteitsfluorescentie nog steeds aanzienlijk is, definieert u een controlegebied voor het tijdsbereik waarin de controleoplossing is toegepast.Als het controlegebied een duidelijk niet-oscorcillatoriesignaal heeft, gaat u ervan uit dat de fluorescentieintensiteit na elke toepassing van de besturingsoplossing is teruggekeerd naar de uitgangswaarde. Als u de time lapse-gegevens voor elke cel wilt corrigeren, splitst u de gegevens op in segmenten die zijn gescheiden door de punten waarop de besturingsoplossing is toegevoegd en past u lineaire correctie toe op elk segment. Als het controlebereik duidelijke trillingen heeft of er extra factoren aanwezig zijn, gebruikt u een algoritme voor piekdetectie.Om de frequentie van calciumpieken en de reactie op de toevoeging van agonisten en antagonisten te meten, splitst u de opname in gelijke tijdsintervallen, telt u de pieken binnen het interval en normaliseert u de intervalduur om de tijdstuur van de gedeeltelijke frequentie te berekenen. U ook de drempel instellen en de plateaufractie voor elk van de intervallen berekenen. De fractie geeft het tijdspercentage aan binnen het interval dat de cel in de opgewonden status heeft doorgebracht.Of bereken het gedeeltelijke gebied onder de curve voor elk van de intervallen. Tenzij de lipidesamenstelling van het membraan is aangetast, worden eilandjes redelijk goed belast met tropische kleurstoffen. De menselijke adenovirus type 5 vector richt zich ook met succes op eilandjecellen.Calcium spiking in alfacellen kan gemakkelijk worden gedetecteerd bij lage glucoseniveaus, en er is een hoge cel-per-cel correlatie tussen de activiteit bij lage glucose en de reactie op adrenaline en glutamaat. Ghreline activeert een aantal adrenaline responsieve cellen bij lage glucose, maar heeft geen effect op de calciumdynamiek in de meeste cellen die worden geactiveerd door lage glucose. Wanneer geanalyseerd in termen van gedeeltelijke frequentie, adrenaline of ghreline-gestimuleerd cellen vertonen een aanzienlijke toename onder de alles-of-niets voorwaarden, hoewel de algemene veranderingen tussen basale stekelen en de adrenaline-effect zijn subtiel.In tegenstelling, het gedeeltelijke gebied onder de curve is gevoelig voor de veranderingen geïntroduceerd door adrenaline in alle cellen, zelfs wanneer de basale activiteit hoog is. Zorg ervoor dat alle mazen in contact zijn met de beeldvormingsoplossing en zorg ervoor dat het weefsel redelijk dicht wordt positioneren om luchtbellen te voorkomen. De methode kan worden uitgebreid met de kunstmatige intelligentie voor het differentiëren tussen de celtypen.De farmacologische markers kunnen worden vervangen door de patroonherkenningstechnologie, waardoor de opnametijd wordt verkort.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murine eilandjes van Langerhans Isolatie

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

Human eilandjes van Langerhans Isolatie: Deel I: Spijsvertering en verzameling van alvleesklierweefsel

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Measuring Near Plasma Membrane and Global Intracellular Calcium Dynamics in Astrocytes

Het meten van de buurt plasmamembraan en Global intracellulair calcium Dynamics in Astrocyten

The brain contains glial cells.  Astrocytes, a type of glial cell, have long been known to provide a passive supportive role to neurons. However, ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

Human eilandjes van Langerhans Isolatie: Deel II: Zuivering en cultuur van de mens Eilandjes

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo beeldvorming en therapeutische behandelingen in een orthotope Muis Model van eierstokkanker

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

Een methode voor muis eilandjes van Langerhans Isolatie en intracellulaire cAMP Bepaling

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

Bereiding van acinaire cellen ten behoeve van Calcium Imaging, Cell Injury Metingen en adenovirale infectie

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolatie en Cultuur van de Muis Primaire Pancreatic Acinaire Cells

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Hoge-resolutie time-lapse beeldvorming en geautomatiseerde analyse van de dynamiek van microtubuli in Living humane navelstreng endotheelcellen

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...