Name: imaging calcium dynamics in subpopulations of mouse pancreatic islet cells
Uploaded: 2019-11-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells at JoVE.com

AH היה הנמען של סוכרת בבריטניה דוקטור Studentship, EV היה נתמך על ידי תוכנית ההדרכה אמון האוקסיon ברוך הבא, AIT התקיים מועצת המחקר הביו-רפואית של אוקספורד התמחות בתר-דוקטורט.

כל השיטות המתוארות כאן פותחו בהתאם לחוק בעלי חיים בבריטניה (הליכים מדעיים) (1986) וההנחיות האתיות של אוניברסיטת אוקספורד.
1. לבודד לבלב איים הלבלב
<ol><li>הכן את מדיום התרבות ואת פתרון הבידוד.<ol>
<li>הפוך את מדיום התרבות: RMPI1640 (ראה טבלת חומרים), שיושלם עם 10% סרום עגל עוברי, 100 ?...

<ol>
	<li>Elayat, A. A., el-Naggar, M. M., Tahir, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunocytochemical+and+morphometric+study+of+the+rat+pancreatic+islets.">An immunocytochemical and morphometric study of the rat pancreatic islets.</a> Journal of Anatomy. 186, 629 (1995).</li><li>Cabrera, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unique+cytoarchitecture+of+human+pancreatic+islets+has+implications+for+islet+cell+function.">The unique cytoarchitecture of human pancreatic islets has implications for islet cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (7), 2334-2339 (2006).</li><li>Brereton, M. F., Vergari, E., Zhang, Q., Clark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-,+delta-and+PP-cells:+are+they+the+architectural+cornerstones+of+islet+structure+and+co-ordination.">Alpha-, delta-and PP-cells: are they the architectural cornerstones of islet structure and co-ordination.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 63 (8), 575-591 (2015).</li><li>F&#230;rch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+is+accompanied+by+increased+fasting+glucagon+and+delayed+glucagon+suppression+in+individuals+with+normal+and+impaired+glucose+regulation.">Insulin resistance is accompanied by increased fasting glucagon and delayed glucagon suppression in individuals with normal and impaired glucose regulation.</a> Diabetes. 65 (11), 3473-3481 (2016).</li><li>Dabrowski, M., Tarasov, A., Ashcroft, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+architecture+of+the+ATP-binding+site+of+the+KATP+channel+subunit+Kir6+2.">Mapping the architecture of the ATP-binding site of the KATP channel subunit Kir6 2.</a> The Journal of Physiology. 557 (2), 347-354 (2004).</li><li>Liu, Y. J., Vieira, E., Gylfe, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+store-operated+mechanism+determines+the+activity+of+the+electrically+excitable+glucagon-secreting+pancreatic+alpha-cell.">A store-operated mechanism determines the activity of the electrically excitable glucagon-secreting pancreatic alpha-cell.</a> Cell Calcium. 35 (4), 357-365 (2004).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca+2++probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca 2+ probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137 (2001).</li><li>Nagai, T., Sawano, A., Park, E. S., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circularly+permuted+green+fluorescent+proteins+engineered+to+sense+Ca2.">Circularly permuted green fluorescent proteins engineered to sense Ca2.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 98 (6), 3197-3202 (2001).</li><li>Broussard, G. J., Liang, R., Tian, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+activity+in+neural+circuits+with+genetically+encoded+indicators.">Monitoring activity in neural circuits with genetically encoded indicators.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 7, 97 (2014).</li><li>Akerboom, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+GCaMP+calcium+indicator+for+neural+activity+imaging.">Optimization of a GCaMP calcium indicator for neural activity imaging.</a> Journal of Neuroscience. 32 (40), 13819-13840 (2012).</li><li>Rodriguez, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growing+and+glowing+toolbox+of+fluorescent+and+photoactive+proteins.">The growing and glowing toolbox of fluorescent and photoactive proteins.</a> Trends in Biochemical Sciences. 42 (2), 111-129 (2017).</li><li>Tarasov, A. I., Rutter, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in enzymology. 542, 289-311 (2014).</li><li>Tarasov, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency-dependent+mitochondrial+Ca(2+)+accumulation+regulates+ATP+synthesis+in+pancreatic+&#946;+cells.">Frequency-dependent mitochondrial Ca(2+) accumulation regulates ATP synthesis in pancreatic &#946; cells.</a> Pflugers Archiv: European Journal of Physiology. 465 (4), 543-554 (2013).</li><li>Smith, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Ca2++indicators+directly+inhibit+the+Na,+K-ATPase+and+disrupt+cellular+functions.">Fluorescent Ca2+ indicators directly inhibit the Na, K-ATPase and disrupt cellular functions.</a> Science Signal. 11 (515), 2039 (2018).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca2++indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators.</a> Science. 333 (6051), 1888-1891 (2011).</li><li>Dana, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+red+protein+calcium+indicators+for+imaging+neural+activity.">Sensitive red protein calcium indicators for imaging neural activity.</a> Elife. 5, 12727 (2016).</li><li>Theis, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarking+Spike+Rate+Inference+in+Population+Calcium+Imaging.">Benchmarking Spike Rate Inference in Population Calcium Imaging.</a> Neuron. 90 (3), 471-482 (2016).</li><li>Hamilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenaline+Stimulates+Glucagon+Secretion+by+Tpc2-Dependent+Ca(2+)+Mobilization+From+Acidic+Stores+in+Pancreatic+alpha-Cells.">Adrenaline Stimulates Glucagon Secretion by Tpc2-Dependent Ca(2+) Mobilization From Acidic Stores in Pancreatic alpha-Cells.</a> Diabetes. 67 (6), 1128-1139 (2018).</li><li>Adriaenssens, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic+profiling+of+pancreatic+alpha,+beta+and+delta+cell+populations+identifies+delta+cells+as+a+principal+target+for+ghrelin+in+mouse+islets.">Transcriptomic profiling of pancreatic alpha, beta and delta cell populations identifies delta cells as a principal target for ghrelin in mouse islets.</a> Diabetologia. 59 (10), 2156-2165 (2016).</li><li>DiGruccio, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+alpha,+beta+and+delta+cell+transcriptomes+reveal+that+ghrelin+selectively+activates+delta+cells+and+promotes+somatostatin+release+from+pancreatic+islets.">Comprehensive alpha, beta and delta cell transcriptomes reveal that ghrelin selectively activates delta cells and promotes somatostatin release from pancreatic islets.</a> Molecular Metabolism. 5 (7), 449-458 (2016).</li><li>Mourao, M., Satin, L., Schnell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+experimental+design+to+estimate+statistically+significant+periods+of+oscillations+in+time+course+data.">Optimal experimental design to estimate statistically significant periods of oscillations in time course data.</a> PloS One. 9 (4), 93826 (2014).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).</li><li>Cabrera, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+is+a+positive+autocrine+signal+for+glucagon+release.">Glutamate is a positive autocrine signal for glucagon release.</a> Cell Metabolism. 7 (6), 545-554 (2008).</li><li>Thevenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyramid+approach+to+subpixel+registration+based+on+intensity.">A pyramid approach to subpixel registration based on intensity.</a> IEEE Transactions on Image Processing. 7 (1), 27-41 (1998).</li><li>Tarasov, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+real-time+hormone+release+kinetics+via+high-content+3-D+imaging+of+compensatory+endocytosis.">Monitoring real-time hormone release kinetics via high-content 3-D imaging of compensatory endocytosis.</a> Lab on a Chip. 18 (18), 2838-2848 (2018).</li><li>Knudsen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+Glucagon+Secretion+by+Hyperglycemia-Induced+Sodium-Dependent+Reduction+of+ATP+Production.">Dysregulation of Glucagon Secretion by Hyperglycemia-Induced Sodium-Dependent Reduction of ATP Production.</a> Cell Metabolism. , (2018).</li><li>Adam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fumarate+hydratase+deletion+in+pancreatic+&#946;+cells+leads+to+progressive+diabetes.">Fumarate hydratase deletion in pancreatic &#946; cells leads to progressive diabetes.</a> Cell Reports. 20 (13), 3135-3148 (2017).</li><li>Wills, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistical+approaches+and+software+for+clustering+islet+cell+functional+heterogeneity.">Statistical approaches and software for clustering islet cell functional heterogeneity.</a> Islets. 8 (2), 48-56 (2016).</li><li>Berggren, P. O., Ostenson, C. G., Petersson, B., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+divergent+glucose+effects+on+calcium+metabolism+in+pancreatic+beta-+and+alpha+2-cells.">Evidence for divergent glucose effects on calcium metabolism in pancreatic beta- and alpha 2-cells.</a> Endocrinology. 105 (6), 1463-1468 (1979).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> The Journal of Biological Chemistry. 260 (6), 3440-3450 (1985).</li><li>Longo, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+cytosolic+free+Ca2+,+oxygen+consumption,+and+insulin+secretion+in+glucose-stimulated+rat+pancreatic+islets.">Oscillations in cytosolic free Ca2+, oxygen consumption, and insulin secretion in glucose-stimulated rat pancreatic islets.</a> The Journal of Biological Chemistry. 266 (14), 9314-9319 (1991).</li><li>Johansson, H., Gylfe, E., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+raises+cytoplasmic+calcium+in+pancreatic+alpha+2-cells+by+mobilizing+calcium+incorporated+in+response+to+glucose.">Cyclic AMP raises cytoplasmic calcium in pancreatic alpha 2-cells by mobilizing calcium incorporated in response to glucose.</a> Cell Calcium. 10 (4), 205-211 (1989).</li><li>Grapengiesser, E., Gylfe, E., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+types+of+cytoplasmic+Ca2++oscillations+in+stimulated+pancreatic+&#946;-cells.">Three types of cytoplasmic Ca2+ oscillations in stimulated pancreatic &#946;-cells.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 268 (1), 404-407 (1989).</li><li>Okamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cytosolic+Ca2++in+impaired+sensitivity+to+glucose+of+rat+pancreatic+islets+exposed+to+high+glucose+in+vitro.">Role of cytosolic Ca2+ in impaired sensitivity to glucose of rat pancreatic islets exposed to high glucose in vitro.</a> Diabetes. 41 (12), 1555-1561 (1992).</li><li>Gilon, P., Henquin, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+membrane+potential+changes+on+cytoplasmic+Ca2++concentration+in+an+electrically+excitable+cell,+the+insulin-secreting+pancreatic+B-cell.">Influence of membrane potential changes on cytoplasmic Ca2+ concentration in an electrically excitable cell, the insulin-secreting pancreatic B-cell.</a> The Journal of Biological Chemistry. 267 (29), 20713-20720 (1992).</li><li>Valdeolmillos, M., Nadal, A., Soria, B., Garcia-Sancho, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+digital+image+analysis+of+glucose-induced+[Ca2+]i+oscillations+in+mouse+pancreatic+islets+of+Langerhans.">Fluorescence digital image analysis of glucose-induced [Ca2+]i oscillations in mouse pancreatic islets of Langerhans.</a> Diabetes. 42 (8), 1210-1214 (1993).</li><li>Cheng, H., Lederer, W. J., Cannell, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sparks:+elementary+events+underlying+excitation-contraction+coupling+in+heart+muscle.">Calcium sparks: elementary events underlying excitation-contraction coupling in heart muscle.</a> Science. 262 (5134), 740-744 (1993).</li><li>Stout, A. L., Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evanescent+field+excitation+of+fluorescence+by+epi-illumination+microscopy.">Evanescent field excitation of fluorescence by epi-illumination microscopy.</a> Applied Optics. 28 (24), 5237-5242 (1989).</li><li>Stozer, A., Dolensek, J., Rupnik, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-stimulated+calcium+dynamics+in+islets+of+Langerhans+in+acute+mouse+pancreas+tissue+slices.">Glucose-stimulated calcium dynamics in islets of Langerhans in acute mouse pancreas tissue slices.</a> PloS One. 8 (1), 54638 (2013).</li><li>Tian, G., Sandler, S., Gylfe, E., Tengholm, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-+and+hormone-induced+cAMP+oscillations+in+alpha-+and+beta-cells+within+intact+pancreatic+islets.">Glucose- and hormone-induced cAMP oscillations in alpha- and beta-cells within intact pancreatic islets.</a> Diabetes. 60 (5), 1535-1543 (2011).</li><li>Benninger, R. K., Zhang, M., Head, W. S., Satin, L. S., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction+coupling+and+calcium+waves+in+the+pancreatic+islet.">Gap junction coupling and calcium waves in the pancreatic islet.</a> Biophysical Journal. 95 (11), 5048-5061 (2008).</li><li>van Gurp, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequential+intravital+imaging+reveals+in+vivo+dynamics+of+pancreatic+tissue+transplanted+under+the+kidney+capsule+in+mice.">Sequential intravital imaging reveals in vivo dynamics of pancreatic tissue transplanted under the kidney capsule in mice.</a> Diabetologia. 59 (11), 2387-2392 (2016).</li></ol>

ישנם שלושה שלבים בפרוטוקול הקריטיים להצלחה הכללית. הזרקה מוצלחת של האנזים Liberase לתוך צינור המרה קובע לא רק את ההצלחה הכמותית של הליך הבידוד, אלא גם משפיע על האיכות של איונים מבודדים. Pancreata מנופח עלול לגרום להעדר כמה תגובות מטבולית חשוב באיים מבודדים. שנית, טעינת הצבע/ביטוי החיישן מגדירה את ה...

מטרת השיטה היא תמונה בזמן אמת שינויים בריכוז סידן ציטוסולג ([Ca2 +]cyt) באוכלוסיות משנה משניות של תאים איון הלבלב. זה מאפשר לחשוף את המנגנונים המסדירים הפרשת הורמונים בתאים אלה, חשיפת פרטים על הצלב בין סוגי תאים שונים, פוטנציאל, החדרת ממד poptional לתוך התמונה הגדולה של איתות איון.
איונים מורכבים ממספר סוגי תאים. מלבד ידוע יותר הפרשה אינסולין β-תאים, יש לפחות שתי אוכלוסיות משנה כי הם גם קריטיים בוויסות הגלוקוז בדם3. α-תאים (העושים סביב 17% של תאים איון) להפריש גלוקגון כאשר הגלוקוז בדם מקבל נמוך מדי, אשר אותות עבור שחרור של גלוקוז לתוך הדם מהמחסנים בכבד. רמות גלוקגון מוגזמת (היפרגלולומיה) וליקויי שליטה של גלוקגון-שחרור מלווים (ומבחינה טכנית, יכול לתרום) מצב טרום סוכרת של רגישות לקויה לאינסולין4. δ-תאים (סביב 2%) להפריש סוסטטין בתגובה העלאת גלוקוז. זה הורמון פפטיד בכל מקום צפוי להיות נוכח ריכוזים גבוהים בקרבת α-ו-β-תאים בתוך איונים, אשר יש חזק Gאני קולטן מתווך השפעה על גלוקגון והפרשת אינסולין.
α-תאים ו-δ-תאים לשתף חלק גדול של מכונות חישת גלוקוז עם קרובי משפחה קרובים שלהם השושלת, β-תאים. כל שלושת התאים מצוידים ב-ATP תלויי K+ ערוצים, חיישנים מטבוליים מורכבים5 השולטים הפוטנציאל קרום הפלזמה של תאים אלה להתרגש. במקביל, הפרשת אינסולין, סומטוסטטין וגלוקגון מוסדר באופן שונה על ידי גלוקוז. הדמיה של Ca2 + דינמיקה בשני אוכלוסיות משנה קטין של תאים איון יכול אפוא לספק תובנה על הצלב בין הגלוקוז בדם ופלט הפרשה איון.
נסיונות מוקדמים של ניטור היכולת הδ של α-ו-תאים באמצעות תיקון-מלחציים אלקטרופיזיולוגיה ואחריו בקרוב הדמיה של Ca2 + ב יחיד α-ו-δ-תאים. הזהות של תאים בניסויים אלה אומתה באמצעות כתמים פוגיורי עם נוגדנים אנטי גלוקגון או אנטי סומטוסטטין. מאמצים אלה היו לעתים קרובות הקשו על ידי מציאת תאים איון להתנהג בצורה שונה מאוד בתוך איון וכתאים בודדים. למרות β-תאים עשוי להיראות התורמים העיקריים של ההסדר איון (בשל הרוב המכריע שלהם שבתוכו צימוד חשמלי חזק שלהם), הפער העיקרי היה, למרבה ההפתעה, נמצא α-תאים. בתוך איון שלם, תאים אלה הם כל הזמן ובהתמדה מופעל על גלוקוז נמוך, אשר נכון רק עבור כ 7% של מפוזרים אחד α-תאים6. דיווח על פעילות של α-ו-δ-תאים בתוך איונים שלמים הוא ולכן האמין לייצג הערכה קרובה יותר של בתנאים vivo.
באופן כללי, ישנן שתי דרכים לדווח על Ca2 + דינמיקה במיוחד מתוך α-תא או δ-תאים משנה: (i) המבטא Ca מקודד גנטית2 + חיישן באמצעות מקדם רקמות ספציפי או (ii) באמצעות מרכיבי סמן. הגישה לשעבר אלגנטי יותר מוסיף את היתרון הניכר של הדמיה האמיתי 3D ולכן לימוד של התפלגות התא בתוך איון. זה לא יכול להיות מיושם עם כל חומר איון האנושי שלם. הדאגה הפוטנציאלית נוספת היא ' לדאוג ' של היזם, במיוחד כאשר β-/α-תא בידול או α-תא התגובה לגלוקוז גבוה נמצא במקום. ניתן להשתמש בגישה האחרונה עם רקמה מבודדת טרייה, כולל דגימות אנושיות או איונים מתורבתים. הנתונים, עם זאת, נאסף אך ורק מן השכבה ההיקפית של תאים איון, כמו אספקת מולקולה לצבוע/סמן בשכבות עמוקות יותר מבלי לשנות את האדריכלות איון הוא מאתגר. יתרון בלתי צפוי של הגישה האחרונה הוא התאימות עם מצב דימות שטח רחב, אשר מאפשר לטפס את הניסויים להדמיה סימולטני של עשרות או מאות איונים (כלומר, אלפי עד עשרות אלפי תאים).
סידן הוא התמונה ב vivo באמצעות מקודד גנטית gcamp7 (או קרום הלב8) משפחה חיישנים, אשר הם משתנים של חלבון פלורסנט מוטציה ירוקה (gcamp) התמזגו הסידן מחייב חלבון קלמודולין ואת רצף היעד שלה, M13 קטע של רירן שרשרת האור קינאז7,9. Gcamps יש יחסי אות לרעש מעולה בטווח של nanomolar Ca2 + ריכוזי ו-2-פוטון גבוהה-חתך, מה שהופך אותם בחירה אידיאלית עבור vivo עבודה10,11. ההיבט המאתגר של שימוש בחיישנים רקומביננטי הוא המסירה שלהם לתוך התאים. הביטוי הטרוולוגי דורש שימוש בווקטור וקטור ויראלי רב שעות לשעבר vivo culturing, אשר לעתים קרובות מעלה חששות לגבי בידול פוטנציאלי או הידרדרות של פונקציות התא. למרות מודלים העכבר מראש מהונדסים לבטא GCaMP בעיה זו, הם מוסיפים אתגרים חדשים על ידי הגדלת זמן החפיפה באופן משמעותי והגבלת העבודה למודל לא אנושי. רגישות גבוהה מאוד שינויים של pH תאיים הוא עוד צד שלילית של חיישנים מבוססי חלבון12, אשר, עם זאת, פחות בעיה לחישה אותות מנדנוד, כגון Ca2 +.
היתרון של צבעים הניתנים למיפוי (כגון פלורסנט ירוק Fluo4) הוא שהם יכולים להיות נטענים לתוך רקמה מבודדת טרי בתוך כשעה. באופן כצפוי, צבעים הניתנת למיפוי כוללים יחס נמוך יותר של אות לרעש ו-(הרבה) פוטויציבות נמוכה יותר מאשר עמיתיהם הרקומביננטי. אנחנו לא יכולים לאשר13 דוחות של רעילות של צבעים הניתנים למיפוי14, עם זאת, העמסת צבע היא בעיה תכופה.
Red רקומביננטי Ca2 + חיישנים המבוססים על תמורה מעגלית התפתחו במהירות מאז 201115, וההתפתחויות האחרונות להציג תחרות חזקה gcamps16 לדימות רקמות, נתון עומק גבוה יותר של חדירה של אור אדום. צבעים מסחרית זמין אדום למיפוי ניתן להשתמש מהימן עבור הדמיה בודדת תא, אבל, ברמת הרקמה, לא יכול להתחרות היטב עם אנלוגיות ירוק.
יש לכאורה מעט מאוד בחירה של טכנולוגיית הדמיה לניסויים ברקמה שבה אור מחוץ לפוקוס הופך לבעיה קריטית. המערכת קונפוקלית מספק רזולוציה מקובלת תא יחיד על ידי ביטול של אור out-of-פוקוס עם כל מטרה על NA לעיל 0.3 (עבור המקרה של GCaMP6) או 0.8 (צבע למיפוי). במובן הטכני, מיקרוסקופ קונפוקלית וקד קונבנציונאלי ניתן להשתמש עבור הדמיה בו של [Ca2 +]cyt ממאות (gcamp) או עשרות איונים (צבע למיפוי). החלופה הריאלית היחידה למצב קונפוקלית וקד במקרה של ביטוי תלת-ממד של החיישן ברקמה היא אולי מיקרוסקופ גיליון קל.
הדברים הם מעט שונה עבור המקרה כאשר החיישן מתבטא בשכבת היקפית של תאים בתוך רקמת איון. עבור חיישנים רקומביננטי בהירים כי יש דפוס ביטוי תאיים בצורה מלאת חיים, באמצעות מצב הדמיה שטח רחב עם מטרה נמוכה-NA עשוי לספק איכות מספקת תגמול החוקר עם עלייה משמעותית בשדה של שטח התצוגה ומכאן ה תפוקה. מערכת רחבה מספקת את הרזולוציה המרחבית העניים יותר, כאשר האור היוצא מהמוקד אינו מבוטל; לכן, רקמת הדמיה עם high-NA (עומק נמוך של שדה) מטרות אינפורמטיבי פחות, כמו האות תא בודד הוא מזוהם בהרבה על ידי תאים שכנים. הזיהום הוא הרבה יותר קטן עבור נמוך-NA (עומק גבוה של השדה) יעדים.
עם זאת, קיימות משימות שעבורן תפוקה גבוהה ו/או קצב דגימה יהפכו ליתרון קריטי. α-ו-δ-תאים התערוכה טרוגניות משמעותי, אשר יוצר ביקוש לגדלים גבוהים לדגום כדי לחשוף את התרומה של אוכלוסיות תת. הדמיה שטח רחב הוא מהיר ורגיש יותר, עם הדמיה של שדה גדול בקנה מידה של מערכת תצוגה מאות (gcamp) או עשרות (Fluo4) של איונים באותו יחס אות לרעש כמו ניסויים קונפוקלית וקד על 10 או איון אחד, בהתאמה. הבדל זה בתפוקה הופך את יתרון המערכת לשטח רחב עבור הדמיה בעלת רזולוציה של תא בודד, שיכולה להיות קריטית במיוחד עבור אוכלוסיות משנה קטנות כגון δ-cell 1. באופן דומה, ניסיונות לשחזר את פעילות החשמל מ-Ca2 + הטבה17 יהנה מקצב הדגימה הגבוה יותר שסופק על-ידי מצב הדמיה של שדה רחב. באותו זמן, כמה "נישה" בעיות כמו הפעילות של הלבלב α-תאים על גירוי של β-cell שולט האוכלוסייה המשנה, לדרוש שימוש במערכת קונפוקלית וקד. גורם המשפיע על ההחלטה לקראת מצב של מוקד הוא נוכחות של אות מזהם ניכר מאוכלוסיית המשנה β cell.
למרות שימוש בנוגדן ספציפי הורמון מכתים כדי לאמת את זהותו של התאים לאחר ניסויים הדמיה היא עדיין אופציה, תת האוכלוסיות התא מינורי ניתן לזהות באמצעות תרכובות סמן פונקציונלי, כגון אדרנלין גרלין שהיו הראו סלקטיבי לעורר Ca2 + דינמיקה ב α-18 ו-δ-תאים19,20, בהתאמה.
הניתוח של נתוני הדמיה בזמן שואפת לספק מידע מעבר לפרמקולוגיה טריוויאלית, כגון טרוגניות, מתאם ואינטראקציה של אותות שונים. מקובל, נתוני הדמיה מנותח כעוצמה לעומת הזמן מנורמל הזריחה הראשונית (F/F0). תיקון בסיסי נדרש לעתים קרובות, בשל הלבנת האות fluorophore או זיהום על ידי שינויים באור פלואורסצנטית או pH (בדרך כלל נגרמת על ידי רמות millimolar של גלוקוז12). Ca2 + נתונים ניתן לנתח בדרכים שונות רבות, אבל שלוש מגמות עיקריות הן למדוד שינויים בתדר ספייק, שבר הרמה, או באזור תחת העקומה, מחושב לעומת זמן. מצאנו את יתרון הגישה האחרון, במיוחד ביישום מידע ממוקד ביותר שנדגמו. היתרון של מדד pAUC הוא הרגישות שלה לשני השינויים בתדר ובשרעת האותות, בעוד שחישוב התדר מחייב מספר משמעותי של תנודות במספר21, שקשה להשיג באמצעות הדמיה קונבנציונאלית. הגורם המגביל של ניתוח pAUC הוא הרגישות הגבוהה שלה לשינויים בסיסיים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:779px;" width="779">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:216px;">40x/1.3 objective</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:216px;">Axiovert 200 microscope</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">emission</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:216px;">Excitation</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-&#1040;ldrich</td>
			<td style="width:119px;">F7524-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fluo4</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">&#160; F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">GCaMP6f, in (human type 5) adenoviral vector</td>
			<td style="width:277px;">Vector Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">1910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hanks&#39; solution&#160;</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Liberase</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-&#1040;ldrich</td>
			<td style="width:119px;">5401020001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">penicillin/streptomycin</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RPMI medium</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">61870044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Zeiss LSM510-META confocal system</td>
			<td style="width:277px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging calcium dynamics in subpopulations of mouse pancreatic islet cells

הורמונים איון הלבלב להסדיר הומאוסטזיס דם הגלוקוז. שינויים בגלוקוז בדם לגרום לתנודות של סידן ציטומטוג בתאי איון הלבלב להפעיל הפרשה של שלושה הורמונים עיקריים: אינסולין (מ β-תאים), גלוקגון (α-תאים) ו סומטוסטטין (δ-תאים). β-תאים, אשר מהווים את רוב התאים של איון הם מצמידים חשמלית זה לזה, להגיב גירוי הגלוקוז כישות אחת בודדת. היכולת המδ של אוכלוסיות תת-משניות, α-תאים ותאי-תאים (ביצוע של כ -20% (30%) ו-4% (10%) של מכרסם הכולל1 (אדם2) מספרים תא איון, בהתאמה) הוא פחות צפוי ולכן הוא בעל עניין מיוחד.
חיישנים סידן מועברים לתוך שכבת היקפי של תאים בתוך איון מבודד. איון או קבוצה של איונים הוא לאחר מכן מקיבוע והתמונה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטית. בחירת מצב ההדמיה היא בין תפוקה גבוהה יותר (שדה רחב) ורזולוציה מרחבית טובה יותר (confocal). כרגיל, סריקת לייזר מיקרוסקופ קונפוקלית משמש לרקמת דימות, כפי שהוא מספק את ההפרדה הטובה ביותר של האות בין התאים הסמוכים. ניתן גם לעשות שימוש במערכת רחב-שדות, אם האות המזהם מהאוכלוסייה הדומיננטית של β-תאים ממוזער.
לאחר הדינמיקה סידן בתגובה גירויים ספציפיים נרשמו, הנתונים מבוטאים בצורה מספרית כמו עוצמת הקרינה לעומת זמן, מנורמל על הזריחה הראשונית מתוקן בסיסית, כדי להסיר את ההשפעות המקושרות הלבנת של . בסדר, שיהיה שינויים בתדר הדקר או באזור חלקי מתחת לעקומה (pAUC) מחושבים לעומת זמן, כדי לכמת את האפקטים הנצפים. pAUC הוא רגיש יותר וחזק למדי ואילו תדירות העלייה מספק מידע נוסף על המנגנון להגדיל את הסידן.
אוכלוסיות משניות של תאים משניים ניתן לזהות באמצעות תגובות פונקציונלי כדי לסמן תרכובות, כגון אדרנלין ghrelin, לגרום שינויים סידן ציטוסולג באוכלוסיות מסוימות של תאים איון.

האיים לטעון היטב עם הצבעים הניתנת למיפוי (איור 1א), אלא אם הרכב השומנים של הקרום הושפע (למשל, על ידי חשיפה כרונית לחומצות שומן). האדם אדנווירוס סוג 5 (Ad5) וקטור גם מטרות כל התאים איון (איור 1B). בעיות עלולות להתעורר כאשר יותר מחיישן רקומביננטי אח...

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells at JoVE.com

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור דימות וכימות הדינמיקה סידן באוכלוסיות תאים הטרוגנית, כגון תאים איון הלבלב. כתבים פלורסנט מועברים לתוך שכבת היקפי של תאים בתוך איון, אשר לאחר מכן מאויית והתמונה, ועל ניתוח לתאים של הדינמיקה של עוצמת הניאון מבוצעת.

הדמיה של סידן דינמיקה באוכלוסיות משנה של תאים הלבלב איון של העכבר

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

הפרוטוקול מאפשר תפקוד מבודד מהיר של תת-כפילויות קטנות של תאים בתוך איי הלבלב של לנגרהנס. היתרונות של טכניקה זו כוללים את הטבע בזמן אמת ואת הכוח הסטטיסטי הגבוה, ומכאן רבייה גבוהה, של הנתונים שנרכשו. כדי לשתק את האיים להדמיה, להרכיב תא הדמיה עבור מיקרוסקופ הפוך ולהמקם כיסוי זכוכית להחליק בתוך התא.ודא כי ממשק תא הזכוכית הוא אטום למים ולאשר כי להחליק את הכיסוי הוא בהישג יד של המטרה מיקרוסקופ. לאחר מכן, לחתוך 20 על ידי 20 ריבועים מילימטר של רשת עדין וגס ולהשתמש 45 עד 50 חתיכות מיקרומטר של סרט דביק עבה כדי ליצור שני קירות רווח על פיסת רשת עדין. לטבול את רשת גסה ומשקל בצלחת פטרי 35 מילימטר של פתרון הדמיה, ולה מניחים את רשת בסדר תחת מיקרוסקופ ניתוח.סובבו את רשת שינוי עדין עם קירות הרווח במהופך והמרחבים הפונים כלפי מעלה. ולהשתמש פיפטה p20 להעביר כמה איונים בין שני רווחים. באמצעות מלכודות של שענים, מניחים את רשת המים במהופך בתוך תא ההדמיה של המיקרוסקופ ההפוך, כך שהמשטחים פונים כלפי מטה כדי לשבת ישירות על החלקת כיסוי התא, לוכדים את איונים בין הרווחים ואת רשת באמצע החלקת הכיסוי.יש לדאוג כי רשת הוא hydrated היטב מבלי להכיל כמויות מוגזמות של פתרון אשר יעורר את התנועה ההפוכות של המדגם. לאחר מכן מניחים את רשת גסה ואת המשקל על גבי רשת בסדר בתא, ולהוסיף פתרון הדמיה לתא. לאחר שהאיונים משותקים, בחרו את מצב ההדמיה והמטרה במיקרוסקופ ההפוך והנחו את התא עם האיים על השלב מבוקר הטמפרטורה של המיקרוסקופ.לאחר הגדרת הזלוש, מקם את הזרימה נמוכה יותר מהזרימה בתוך התא והגדר את שטף הזרימה להיות גדול יותר שטף הזרימה. ודא כי הזרימה יש מגע מינימלי עם הפתרון, כך שהוא מסיר את הפתרון טיפות קטנות רציפות מרובות, הימנעות מרווחי זמן ארוכים של הסרת פתרון מתמשך. לאחר מכן, ליזום את חיסון עם פתרון הדמיה המכיל גלוקוז שלושה מילימולרים, ולבחור את נתיב האור ומסננים להדמיה פלואורופורים ירוקים.לאחר מכן הפעל הדמיה חיה כדי להגדיר את פרמטרי ההדמיה ולהתאים את התצוגה כדי ללכוד את איונים מעניינים. כדי למטב את יחס האות לרעש של התמונה, התאימו את עוצמת אור העירור, את זמן החשיפה ואת התאור, כדי להבטיח שההגדרות יאפשרו הדמיה ברורה של כל תא בתוך האיים בעוצמת האור המינימלית האפשרית ובחשיפה. לאחר מכן תמונה האיים ב 0.1 עד 5 הרץ, בדיקת איכות הנתונים שנרכשו כפי שהוא נתפס.כאשר ניתן לזהות את פעילות תא האלפא, השתמש בתרשים מקוון של דינמיקת האות בתוכנת הרכישה והוסף אדרנלין או גלוטמט לתסמת האמבטיה למשך שתיים עד חמש דקות. קפיצה מהירה בסידן ואחריו האטה או ביטול של תנודות תא אלפא יבחינו. לאחר מכן, להוסיף ghrelin, אשר דווח לאחרונה כדי להפעיל תאי דלתא באופן סלקטיבי.עלייה מהירה והפיכה בסידן תישמר בתת-תפוקה קטנה של תאי איון. לאחר מכן מוסיפים 10 מילימולר גלוקוז. תגובה מתנדת מתואמת בתת-התת-תפורת של תא הבטא תישמר.שימו לב גם לתגובות של תאים שהופעלו בעבר על ידי אדרנלין או גלוטמט וגרלין. לאחר שמירת התמונות, יבא את הנתונים לתוכנה מתאימה לניתוח נתונים ונרמל את נתוני עוצמת הפלואורסצנטיות הגולמית לערך הראשוני של פלואורסצנטיות. אם ערכת הנתונים של עוצמת הפלואורסצנטיות של התא לתא עדיין משמעותית, הגדר אזור בקרה עבור טווח הזמן שבמהלכו הוחל פתרון הבקרה.אם לאזור הבקרה יש אות ברור שאינו מתנד, הנח שעוצמת הפלואורסצנטיות חזרה לקו הבסיס לאחר כל יישום של פתרון הבקרה. כדי לתקן את נתוני איבוד הזמן עבור כל תא, פצל את הנתונים למקטעים המופרדים באמצעות הנקודות שבהן נוסף פתרון הבקרה והחל תיקון ליניארי על כל מקטע. אם טווח הבקרה כולל תנודות ברורות או שיש גורמים נוספים, השתמש באלגוריתם לזיהוי ספייק.כדי למדוד את התדירות של קוצים סידן ואת התגובה לתוספת של אגוניסטים ואנטגוניסטים, לפצל את ההקלטה למרווחי זמן שווים, לספור את הקוצים בתוך המרווח, ולנרמל את משך הזמן כדי לחשב את מסלול הזמן של התדר החלקי. לחלופין, הגדר את הסף ו לחשב את שבר הרמה עבור כל אחד מהמרווחים. השבר מציין את אחוז הזמן בתוך מרווח הזמן שהתא בילה במצב הנרגש.לחלופין, מחשב את האזור החלקי מתחת לעקומה עבור כל אחד מהמרווחים. אלא אם כן הרכב השומנים של הממברנה הושפע, איונים לטעון די טוב עם צבעים טרופיים. אדנווירוס אנושי מסוג 5 וקטור גם בהצלחה מטרות תאי איון.ניתן לזהות בקלות ספיגת סידן בתאי אלפא ברמות גלוקוז נמוכות, ויש מתאם גבוה בין הפעילות בגלוקוז נמוך לבין התגובה לאדרנלין וגלוטמט. Ghrelin מפעיל כמה תאים מגיבים אדרנלין בגלוקוז נמוך אבל אין השפעה על דינמיקת הסידן ברוב התאים המופעלים על ידי גלוקוז נמוך. כאשר מנתחים במונחים של תדירות חלקית, אדרנלין או תאים מגורה גרלין להציג עלייה משמעותית תחת תנאי הכל או כלום, אם כי השינויים הכוללים בין spiking בסיס אפקט האדרנלין הם עדינים.לעומת זאת, האזור החלקי מתחת לעקומה רגיש לשינויים שהנהגנה האדרנלין בכל התאים גם כאשר הפעילות הבסיסית גבוהה. ודא שכל רשתות שינוי נמצאים במגע עם פתרון הדמיה ולדאוג למקם את הרקמה בצפיפות סבירה, כדי למנוע בועות אוויר. ניתן להרחיב את השיטה כך שתכלול את הבינה המלאכותית להבחנה בין סוגי התאים.ניתן להחליף את סמנים תרופתיים על ידי טכנולוגיית זיהוי דפוס, ובכך לצמצם את זמן ההקלטה.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

הלבלב Murine איילט בידוד

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

בידוד האדם לבלב: אני חלק: העיכול אוסף של רקמת לבלב

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Measuring Near Plasma Membrane and Global Intracellular Calcium Dynamics in Astrocytes

מדידת הקרוב ממברנה פלזמה ו Global Dynamics סידן תאיים בתוך האסטרוציטים

The brain contains glial cells.  Astrocytes, a type of glial cell, have long been known to provide a passive supportive role to neurons. However, ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

הלבלב האנושי בידוד איילט: חלק ב: טיהור והתרבות של איי האדם

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

שיטה לבידוד עכבר הלבלב איילט וקביעת תאית cAMP

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

הכנת תאי לבלב acinar לצורך סידן ההדמיה, פגיעה בתא המדידות, וזיהום adenoviral

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

בידוד והתרבות של תאי לבלב הראשיים acinar עכבר

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

זמן לשגות הדמיה ברזולוציה גבוהה וניתוח אוטומטי של Dynamics microtubule In Living האדם טבורי וריד לתאי אנדותל

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...