Name: imaging calcium dynamics in subpopulations of mouse pancreatic islet cells
Uploaded: 2019-11-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells at JoVE.com

AH Diabetes UK Doktora Öğrenciliği'ne katıldı, EV OXION-Wellcome Trust Eğitim Programı tarafından desteklendi, AIT Oxford Biyomedikal Araştırma Konseyi doktora sonrası burs düzenledi.

Burada açıklanan tüm yöntemler Birleşik Krallık Hayvanlar (Bilimsel Prosedürler) Yasası (1986) ve Oxford Üniversitesi etik kurallarına uygun olarak geliştirilmiştir.
1. Fare pankreas adacıkları izole
<ol><li>Kültür ortamını ve izolasyon çözümlerini hazırlayın.<ol>
<li>Kültür ortamını oluşturan: RMPI1640 (Bkz. Malzeme Tablosu),fetal buzağı serumunun %10'u, 100 ünite/mL penisilin, 100 μg/mL streptomisin ile desteklenmiştir. Orta yığma iki ade...

<ol>
	<li>Elayat, A. A., el-Naggar, M. M., Tahir, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunocytochemical+and+morphometric+study+of+the+rat+pancreatic+islets.">An immunocytochemical and morphometric study of the rat pancreatic islets.</a> Journal of Anatomy. 186, 629 (1995).</li><li>Cabrera, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unique+cytoarchitecture+of+human+pancreatic+islets+has+implications+for+islet+cell+function.">The unique cytoarchitecture of human pancreatic islets has implications for islet cell function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (7), 2334-2339 (2006).</li><li>Brereton, M. F., Vergari, E., Zhang, Q., Clark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-,+delta-and+PP-cells:+are+they+the+architectural+cornerstones+of+islet+structure+and+co-ordination.">Alpha-, delta-and PP-cells: are they the architectural cornerstones of islet structure and co-ordination.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 63 (8), 575-591 (2015).</li><li>F&#230;rch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+is+accompanied+by+increased+fasting+glucagon+and+delayed+glucagon+suppression+in+individuals+with+normal+and+impaired+glucose+regulation.">Insulin resistance is accompanied by increased fasting glucagon and delayed glucagon suppression in individuals with normal and impaired glucose regulation.</a> Diabetes. 65 (11), 3473-3481 (2016).</li><li>Dabrowski, M., Tarasov, A., Ashcroft, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+architecture+of+the+ATP-binding+site+of+the+KATP+channel+subunit+Kir6+2.">Mapping the architecture of the ATP-binding site of the KATP channel subunit Kir6 2.</a> The Journal of Physiology. 557 (2), 347-354 (2004).</li><li>Liu, Y. J., Vieira, E., Gylfe, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+store-operated+mechanism+determines+the+activity+of+the+electrically+excitable+glucagon-secreting+pancreatic+alpha-cell.">A store-operated mechanism determines the activity of the electrically excitable glucagon-secreting pancreatic alpha-cell.</a> Cell Calcium. 35 (4), 357-365 (2004).</li><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+signal-to-noise+Ca+2++probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein.">A high signal-to-noise Ca 2+ probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 19 (2), 137 (2001).</li><li>Nagai, T., Sawano, A., Park, E. S., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circularly+permuted+green+fluorescent+proteins+engineered+to+sense+Ca2.">Circularly permuted green fluorescent proteins engineered to sense Ca2.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 98 (6), 3197-3202 (2001).</li><li>Broussard, G. J., Liang, R., Tian, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+activity+in+neural+circuits+with+genetically+encoded+indicators.">Monitoring activity in neural circuits with genetically encoded indicators.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 7, 97 (2014).</li><li>Akerboom, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+GCaMP+calcium+indicator+for+neural+activity+imaging.">Optimization of a GCaMP calcium indicator for neural activity imaging.</a> Journal of Neuroscience. 32 (40), 13819-13840 (2012).</li><li>Rodriguez, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+growing+and+glowing+toolbox+of+fluorescent+and+photoactive+proteins.">The growing and glowing toolbox of fluorescent and photoactive proteins.</a> Trends in Biochemical Sciences. 42 (2), 111-129 (2017).</li><li>Tarasov, A. I., Rutter, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in enzymology. 542, 289-311 (2014).</li><li>Tarasov, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency-dependent+mitochondrial+Ca(2+)+accumulation+regulates+ATP+synthesis+in+pancreatic+&#946;+cells.">Frequency-dependent mitochondrial Ca(2+) accumulation regulates ATP synthesis in pancreatic &#946; cells.</a> Pflugers Archiv: European Journal of Physiology. 465 (4), 543-554 (2013).</li><li>Smith, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Ca2++indicators+directly+inhibit+the+Na,+K-ATPase+and+disrupt+cellular+functions.">Fluorescent Ca2+ indicators directly inhibit the Na, K-ATPase and disrupt cellular functions.</a> Science Signal. 11 (515), 2039 (2018).</li><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca2++indicators.">An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators.</a> Science. 333 (6051), 1888-1891 (2011).</li><li>Dana, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+red+protein+calcium+indicators+for+imaging+neural+activity.">Sensitive red protein calcium indicators for imaging neural activity.</a> Elife. 5, 12727 (2016).</li><li>Theis, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarking+Spike+Rate+Inference+in+Population+Calcium+Imaging.">Benchmarking Spike Rate Inference in Population Calcium Imaging.</a> Neuron. 90 (3), 471-482 (2016).</li><li>Hamilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adrenaline+Stimulates+Glucagon+Secretion+by+Tpc2-Dependent+Ca(2+)+Mobilization+From+Acidic+Stores+in+Pancreatic+alpha-Cells.">Adrenaline Stimulates Glucagon Secretion by Tpc2-Dependent Ca(2+) Mobilization From Acidic Stores in Pancreatic alpha-Cells.</a> Diabetes. 67 (6), 1128-1139 (2018).</li><li>Adriaenssens, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic+profiling+of+pancreatic+alpha,+beta+and+delta+cell+populations+identifies+delta+cells+as+a+principal+target+for+ghrelin+in+mouse+islets.">Transcriptomic profiling of pancreatic alpha, beta and delta cell populations identifies delta cells as a principal target for ghrelin in mouse islets.</a> Diabetologia. 59 (10), 2156-2165 (2016).</li><li>DiGruccio, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+alpha,+beta+and+delta+cell+transcriptomes+reveal+that+ghrelin+selectively+activates+delta+cells+and+promotes+somatostatin+release+from+pancreatic+islets.">Comprehensive alpha, beta and delta cell transcriptomes reveal that ghrelin selectively activates delta cells and promotes somatostatin release from pancreatic islets.</a> Molecular Metabolism. 5 (7), 449-458 (2016).</li><li>Mourao, M., Satin, L., Schnell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+experimental+design+to+estimate+statistically+significant+periods+of+oscillations+in+time+course+data.">Optimal experimental design to estimate statistically significant periods of oscillations in time course data.</a> PloS One. 9 (4), 93826 (2014).</li><li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+murine+islet+isolation+and+subcapsular+kidney+transplantation.">A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).</li><li>Cabrera, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+is+a+positive+autocrine+signal+for+glucagon+release.">Glutamate is a positive autocrine signal for glucagon release.</a> Cell Metabolism. 7 (6), 545-554 (2008).</li><li>Thevenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyramid+approach+to+subpixel+registration+based+on+intensity.">A pyramid approach to subpixel registration based on intensity.</a> IEEE Transactions on Image Processing. 7 (1), 27-41 (1998).</li><li>Tarasov, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+real-time+hormone+release+kinetics+via+high-content+3-D+imaging+of+compensatory+endocytosis.">Monitoring real-time hormone release kinetics via high-content 3-D imaging of compensatory endocytosis.</a> Lab on a Chip. 18 (18), 2838-2848 (2018).</li><li>Knudsen, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulation+of+Glucagon+Secretion+by+Hyperglycemia-Induced+Sodium-Dependent+Reduction+of+ATP+Production.">Dysregulation of Glucagon Secretion by Hyperglycemia-Induced Sodium-Dependent Reduction of ATP Production.</a> Cell Metabolism. , (2018).</li><li>Adam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fumarate+hydratase+deletion+in+pancreatic+&#946;+cells+leads+to+progressive+diabetes.">Fumarate hydratase deletion in pancreatic &#946; cells leads to progressive diabetes.</a> Cell Reports. 20 (13), 3135-3148 (2017).</li><li>Wills, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistical+approaches+and+software+for+clustering+islet+cell+functional+heterogeneity.">Statistical approaches and software for clustering islet cell functional heterogeneity.</a> Islets. 8 (2), 48-56 (2016).</li><li>Berggren, P. O., Ostenson, C. G., Petersson, B., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+divergent+glucose+effects+on+calcium+metabolism+in+pancreatic+beta-+and+alpha+2-cells.">Evidence for divergent glucose effects on calcium metabolism in pancreatic beta- and alpha 2-cells.</a> Endocrinology. 105 (6), 1463-1468 (1979).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+generation+of+Ca2++indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties.">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> The Journal of Biological Chemistry. 260 (6), 3440-3450 (1985).</li><li>Longo, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+in+cytosolic+free+Ca2+,+oxygen+consumption,+and+insulin+secretion+in+glucose-stimulated+rat+pancreatic+islets.">Oscillations in cytosolic free Ca2+, oxygen consumption, and insulin secretion in glucose-stimulated rat pancreatic islets.</a> The Journal of Biological Chemistry. 266 (14), 9314-9319 (1991).</li><li>Johansson, H., Gylfe, E., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+raises+cytoplasmic+calcium+in+pancreatic+alpha+2-cells+by+mobilizing+calcium+incorporated+in+response+to+glucose.">Cyclic AMP raises cytoplasmic calcium in pancreatic alpha 2-cells by mobilizing calcium incorporated in response to glucose.</a> Cell Calcium. 10 (4), 205-211 (1989).</li><li>Grapengiesser, E., Gylfe, E., Hellman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+types+of+cytoplasmic+Ca2++oscillations+in+stimulated+pancreatic+&#946;-cells.">Three types of cytoplasmic Ca2+ oscillations in stimulated pancreatic &#946;-cells.</a> Archives of Biochemistry and Biophysics. 268 (1), 404-407 (1989).</li><li>Okamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cytosolic+Ca2++in+impaired+sensitivity+to+glucose+of+rat+pancreatic+islets+exposed+to+high+glucose+in+vitro.">Role of cytosolic Ca2+ in impaired sensitivity to glucose of rat pancreatic islets exposed to high glucose in vitro.</a> Diabetes. 41 (12), 1555-1561 (1992).</li><li>Gilon, P., Henquin, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+membrane+potential+changes+on+cytoplasmic+Ca2++concentration+in+an+electrically+excitable+cell,+the+insulin-secreting+pancreatic+B-cell.">Influence of membrane potential changes on cytoplasmic Ca2+ concentration in an electrically excitable cell, the insulin-secreting pancreatic B-cell.</a> The Journal of Biological Chemistry. 267 (29), 20713-20720 (1992).</li><li>Valdeolmillos, M., Nadal, A., Soria, B., Garcia-Sancho, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+digital+image+analysis+of+glucose-induced+[Ca2+]i+oscillations+in+mouse+pancreatic+islets+of+Langerhans.">Fluorescence digital image analysis of glucose-induced [Ca2+]i oscillations in mouse pancreatic islets of Langerhans.</a> Diabetes. 42 (8), 1210-1214 (1993).</li><li>Cheng, H., Lederer, W. J., Cannell, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sparks:+elementary+events+underlying+excitation-contraction+coupling+in+heart+muscle.">Calcium sparks: elementary events underlying excitation-contraction coupling in heart muscle.</a> Science. 262 (5134), 740-744 (1993).</li><li>Stout, A. L., Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evanescent+field+excitation+of+fluorescence+by+epi-illumination+microscopy.">Evanescent field excitation of fluorescence by epi-illumination microscopy.</a> Applied Optics. 28 (24), 5237-5242 (1989).</li><li>Stozer, A., Dolensek, J., Rupnik, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-stimulated+calcium+dynamics+in+islets+of+Langerhans+in+acute+mouse+pancreas+tissue+slices.">Glucose-stimulated calcium dynamics in islets of Langerhans in acute mouse pancreas tissue slices.</a> PloS One. 8 (1), 54638 (2013).</li><li>Tian, G., Sandler, S., Gylfe, E., Tengholm, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-+and+hormone-induced+cAMP+oscillations+in+alpha-+and+beta-cells+within+intact+pancreatic+islets.">Glucose- and hormone-induced cAMP oscillations in alpha- and beta-cells within intact pancreatic islets.</a> Diabetes. 60 (5), 1535-1543 (2011).</li><li>Benninger, R. K., Zhang, M., Head, W. S., Satin, L. S., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gap+junction+coupling+and+calcium+waves+in+the+pancreatic+islet.">Gap junction coupling and calcium waves in the pancreatic islet.</a> Biophysical Journal. 95 (11), 5048-5061 (2008).</li><li>van Gurp, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequential+intravital+imaging+reveals+in+vivo+dynamics+of+pancreatic+tissue+transplanted+under+the+kidney+capsule+in+mice.">Sequential intravital imaging reveals in vivo dynamics of pancreatic tissue transplanted under the kidney capsule in mice.</a> Diabetologia. 59 (11), 2387-2392 (2016).</li></ol>

Protokolün genel başarı için kritik olan üç aşaması vardır. Liberase enziminin safra kanalına başarılı bir şekilde enjekte edilmesi sadece izolasyon işleminin kantitatif başarısını değil, aynı zamanda izole adacıkların kalitesini de etkiler. Uninflated pankreata izole adacıklarda bazı önemli metabolik yanıtların eksikliğine neden olabilir. İkinci olarak, boyanın/sensörün ifadesinin yüklenmesi, zaman atlamalı kaydın sinyal-gürültü oranını tanımlar. Sinyaller aşırı yüklü adac?...

Yöntemin amacı pankreas adacık hücrelerinin küçük alt popülasyonlarında sitosolik kalsiyum konsantrasyonundaki gerçek zamanlı değişiklikleri ([Ca2+]sit)görüntülemektir. Bu, bu hücrelerde hormon salgısını yöneten mekanizmaların ortaya çıkarılmasını, farklı hücre tipleri arasındaki çapraz konuşmanın ayrıntılarının ortaya çıkarılmasını ve potansiyel olarak adacık sinyalinin daha büyük resmine bir popülasyon boyutu getirilmesine olanak sağlar.
Adacıklar çeşitli hücre tiplerinden oluşur. Daha iyi bilinen insülin salgılayan β-hücrelerin yanı sıra, kan şekeri nin düzenlenmesinde de kritik olan en az iki alt popülasyon vardır3. α-Hücreler (adacık hücrelerinin yaklaşık% 17'sini oluşturan) kan şekeri çok düşük aldığında glukagon salgılar, karaciğerdepolarından kan dolaşımına glikoz salınımı sinyalleri. Aşırı glukagon düzeyleri (hiperglukagomi) ve glukagon salınımı eşlik bozulmuş kontrolü (ve, teknik olarak, katkıda bulunabilir) bozulmuş insülin duyarlılığı prediyabetik durum4. δ-Hücreler (%2 civarı) glikoz yüksekliğine yanıt olarak somatostatin salgılar. Bu her yerde bulunan peptit hormonu, hem glukagon hem de insülin salgılanması üzerinde güçlü birG i reseptör aracılı zayıflatıcı etkiye sahip adacıklar içinde α ve β-hücrelerin çevresinde yüksek konsantrasyonlarda mevcut olması muhtemeldir.
α-Hücreler ve δ-hücreler glikoz algılama makinelerinin büyük bir kısmını yakın soy akrabaları, β-hücreleri ile paylaşırlar. Her üç hücre tipi de ATP'ye duyarlı K+ kanalları ile donatılmıştır, bu heyecanlı hücrelerin plazma membran potansiyelini kontrol eden ayrıntılı metabolik sensörler5. Aynı zamanda, insülin salgıları, somatostatin ve glukagon glikoz tarafından farklı düzenlenir. Bu nedenle adacık hücrelerinin iki küçük alt popülasyonundaki Ca2+ dinamiğinin görüntülenmesi, kan şekeri ve adacık salgı çıkışı arasındaki çapraz konuşma hakkında bir fikir verebilir.
Yama-kıskaç elektrofizyolojisi kullanılarak α ve δ-hücrelerinin uyarılabilirliğini izleme ye yönelik ilk girişimler, kısa bir süre sonra tek α- ve δ-hücrelerde Ca2+ görüntülemesi ile takip edildi. Bu deneylerdeki hücrelerin kimliği anti-glukagon veya anti-somatostatin antikorları ile posteriori boyama yoluyla doğrulandı. Bu çabalar, adacık hücrelerinin adacık içinde ve tek hücre olarak çok farklı davrandığının bulunmasıyla sık sık engellenmiştir. Β-hücreler adacık düzenlemesinin ana bağışçıları gibi görünse de (güçlü elektriksel bağlantılarının altında yatan ezici çoğunluk nedeniyle), ana tutarsızlık şaşırtıcı bir şekilde α-hücrelerde bulunmasıydı. Bozulmamış adacık içinde, bu hücreler sürekli ve sürekli düşük glikoz, sadece tek dağılmış α-hücrelerin yaklaşık% 7 için geçerlidir aktive6. Bu nedenle, bozulmamış adacıklar içindeki α ve δ-hücrelerinin aktivitesinin raporlanması, in vivo koşulların daha yakın bir yakını olduğuna inanılmaktadır.
Genel olarak, ca2+ dinamiklerini özellikle α-hücre veya δ-hücre alt popülasyonlarından bildirmenin iki yolu vardır: (i) dokuya özgü bir promotör veya (ii) marker bileşikleri kullanarak genetik olarak kodlanmış bir Ca2+ sensörünü ifade etmek. Daha zarif eski yaklaşım gerçek 3D görüntüleme önemli avantajı ekler ve dolayısıyla adacık içinde hücre dağılımı nın incelenmesi. Ancak bozulmamış insan adacık malzemesi için uygulanamaz. Bir diğer potansiyel endişe, özellikle β-/α-hücre transdifferentiasyonu veya yüksek glikoza α-hücre yanıtı yerinde olduğunda, organizatörün 'sızıntı'sidir. İkinci yaklaşım insan örnekleri veya kültürlü adacıklar da dahil olmak üzere taze izole doku ile kullanılabilir. Ancak veriler sadece adacık hücrelerinin çevresel katmanından toplanır, çünkü boya/marker molekülünün adacık mimarisini değiştirmeden daha derin katmanlarda teslim edilmesi zordur. İkinci yaklaşımın beklenmeyen bir avantajı, deneylerin onlarca veya yüzlerce adacık (yani binlerce ila on binlerce hücre) eşzamanlı olarak görüntülenmesiiçin ölçeklenmesine olanak tanıyan geniş alan görüntüleme moduyla uyumluluktır.
Kalsiyum, genetik olarak kodlanmış GCaMP7 (veya pericam8)aile sensörleri kullanılarak, kalsiyum bağlayıcı protein calmodulin ve hedef dizisi, miyozin ışık zinciri kimyaz7M13parçası na bağlı dairesel olarak permuted yeşil floresan protein (GFP) varyantları olan canlı olarak görüntülenmiştir 7 ,9. GCaMPs nanomolar Ca2 + konsantrasyonları ve yüksek 2-foton kesit aralığında mükemmel sinyal-gürültü oranları var, hangi onları in vivo iş için ideal bir seçim yapar10,11. Rekombinant sensörler kullanmanın zor yönü hücrelere ulaştırılmasıdır. Heterolog ifade, sık sık hücre fonksiyonlarının potansiyel de-farklılaşması veya bozulması ile ilgili endişeleri yükseltir bir viral vektör ve çok saatlik ex vivo culturing kullanarak gerektirir. GCaMP'nin bu sorunu gidermek üzere önceden tasarlanmış fare modelleri bu sorunu gidermesine rağmen, müşteri adayı süresini önemli ölçüde artırarak ve çalışmayı insan olmayan bir modelle sınırlandırarak yeni zorluklar eklerler. Hücre içi pH değişikliklerine karşı çok yüksek duyarlılık protein bazlı sensörlerin başka bir olumsuztarafıdır 12, ancak, ca2gibi salınım sinyalleri algılama için bir sorun daha az.
Trappable boyalar avantajı (yeşil floresan Fluo4 gibi) onlar yaklaşık bir saat içinde taze izole doku içine yüklenebilir olmasıdır. Tahmin edilebileceği gibi, bısılabilir boyalar, rekombinant karşılıklarına göre daha düşük sinyal-gürültü oranlarına ve (çok) daha düşük fotostabiliteye sahiptir. Biz tuzak boyalar14toksisite13 raporları teyit edemez, ancak, boya aşırı yükleme sık sık bir sorundur.
Dairesel permütasyona dayalı kırmızı rekombinant Ca2+ sensörleri 201115'tenberi hızla gelişmektedir ve en son gelişmeler, kırmızı ışığın daha yüksek penetrasyon derinliği göz önüne alındığında, doku görüntülemesi için16 GCaMPs için güçlü bir rekabet sunar. Ticari olarak mevcut kırmızı trappable boyalar tek hücreli görüntüleme için güvenilir bir şekilde kullanılabilir ancak doku düzeyinde, yeşil analogları ile iyi rekabet edemez.
Odak dışı ışığın kritik bir sorun haline geldiği doku deneyleri için görüntüleme teknolojisinin çok az bir seçenek olduğu ortaya çıkmaktadır. Konfokal sistem, 0,3 (GCaMP6 durumunda) veya 0,8 (trappable boya) üzerinde NA herhangi bir hedef ile odak dışı ışık iptali ile kabul edilebilir tek hücreçözünürlüğü sağlar. Teknik anlamda, geleneksel bir konfokal mikroskop yüzlerce [Ca2 +]cyt eşzamanlı görüntüleme için kullanılabilir (GCaMP) veya adacıklar onlarca (trappable boya). Dokuda sensörün 3Boyutlu ekspresyonu durumunda konfokal modiçin tek gerçekçi alternatif belki de Hafif sac mikroskopidir.
Sensör adacık dokusu içindeki hücrelerin periferik tabakasında ifade edildiğinde durum için işler biraz farklıdır. Canlı hücre içi ifade deseni olan parlak rekombinant sensörler için, düşük NA hedefine sahip geniş alan görüntüleme modu kullanmak yeterli kaliteyi sağlayabilir ve araştırmacıyı görüş alanında önemli bir artışla ödüllendirebilir ve dolayısıyla Verim. Geniş alan lı bir sistem, odak dışı ışık iptal edilmedikçe daha zayıf uzamsal çözünürlük sağlar; bu nedenle, yüksek NA (alan derinliği düşük) hedefleri ile görüntüleme doku daha az bilgilendirici, tek hücreli sinyal büyük ölçüde komşu hücreler tarafından kontamine olduğu gibi. Kontaminasyon düşük NA (yüksek alan derinliği) hedefleri için çok daha küçüktür.
Ancak, yüksek iş ve/veya örnekleme oranının kritik bir avantaj haline geldiği görevler vardır. α- ve δ-hücreler önemli heterojenlik sergilerler, bu da alt popülasyonların katkısını ortaya çıkarmak için yüksek örneklem boyutlarına talep oluşturur. Geniş alan görüntüleme, sırasıyla on veya tek bir adacık üzerinde konfokal deneylerle aynı sinyal-gürültü oranıyla yüzlerce (GCaMP) veya onlarca (Fluo4) adacıkları görüntüleme, endüstriyel ölçekli geniş görüş alanı sistemi ile hızlı ve daha duyarlıdır. Elde edilen bu fark, geniş alan sistemini tek hücreçözünürlüğü ile popülasyonsal görüntüleme için avantajlı hale getirir ve bu da δ-hücre gibi küçük alt popülasyonlar için özellikle kritik olabilir. Aynı şekilde, Ca2+ spiking17'den gelen elektriksel aktiviteyi yeniden yapılandırma girişimleri, geniş alan görüntüleme modunun sağladığı daha yüksek örnekleme hızından yararlanacaktır. Aynı zamanda, hakim β-hücre alt popülasyonunun uyarılması üzerine pankreas α-hücrelerinin aktivitesi gibi çeşitli "niş" sorunlar, bir konfokal sistem kullanımını gerektirir. Konfokal mod doğru karar etkileyen bir faktör β-hücre alt popülasyonundan önemli kirletici sinyal varlığıdır.
Görüntüleme deneylerinden sonra hücrelerin kimliğini doğrulamak için hormona özgü antikor boyama kullanımı hala bir seçenek olmasına rağmen, küçük hücre alt popülasyonları α-18 ve δ-hücreleri19,20, sırasıyla Ca2 + dinamikleri seçici uyarmak için gösterilmiştir adrenalin ve ghrelin gibi fonksiyonel marker bileşikleri kullanılarak tespit edilebilir.
Zaman atlamalı görüntüleme verilerinin analizi, popülasyonal heterojenite, korelasyon ve farklı sinyallerin etkileşimi gibi önemsiz farmakolojinin ötesinde bilgi sağlamayı amaçlamaktadır. Geleneksel olarak, görüntüleme verileri zamana göre yoğunluk olarak analiz edilir ve ilk floresansa normalleşir (F/F0). Florofor sinyalinin beyazlatma veya otofloresan veya pH'daki değişikliklerle kontaminasyon nedeniyle (genellikle milimolar glikoz düzeyleri tarafından indüklenen12)bazal düzeltmeye sık lıkla ihtiyaç vardır. Ca2+ verileri birçok farklı şekilde analiz edilebilir, ancak üç ana eğilim, zamana göre hesaplanan başak frekansı, plato fraksiyonu veya eğrinin altındaki alandaki değişiklikleri ölçmektir. İkinci yaklaşımı, özellikle de yoğun olarak örneklenmiş konfokal verilere uygulamada avantajlı bulduk. pAUC ölçümünün avantajı sinyal frekansı ve genlikteki her iki değişikliğe karşı hassasiyetidir, oysa frekansı hesaplamak önemli sayıda salınım gerektirir21, geleneksel görüntüleme kullanarak elde edilmesi zor. pAUC analizinin sınırlayıcı faktörü temel değişikliklere karşı yüksek duyarlılığıdır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:779px;" width="779">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:216px;">40x/1.3 objective</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:216px;">Axiovert 200 microscope</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">emission</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:216px;">Excitation</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-&#1040;ldrich</td>
			<td style="width:119px;">F7524-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fluo4</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">&#160; F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">GCaMP6f, in (human type 5) adenoviral vector</td>
			<td style="width:277px;">Vector Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">1910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hanks&#39; solution&#160;</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Liberase</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-&#1040;ldrich</td>
			<td style="width:119px;">5401020001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">penicillin/streptomycin</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RPMI medium</td>
			<td style="width:277px;">ThermoFisher (GibCo, Life Technologies)</td>
			<td style="width:119px;">61870044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Zeiss LSM510-META confocal system</td>
			<td style="width:277px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging calcium dynamics in subpopulations of mouse pancreatic islet cells

Pankreas adacık hormonları kan şekeri homeostazı düzenler. Kan şekerindeki değişiklikler, pankreas adacık hücrelerinde sitosolik kalsiyum salınımlarına neden olur ve bu da üç ana hormonun salgısını tetikler: insülin (β-hücrelerden), glukagon (α-hücrelerden) ve somatostatin (δ-hücreler). β-Adacık hücrelerinin çoğunluğunu oluşturan ve elektriksel olarak birbiriyle birleşen hücreler, glikoz uyarıcısına tek bir varlık olarak yanıt verir. Küçük alt popülasyonların, α-hücrelerin ve δ-hücrelerinin uyarılabilirliği (%20 civarında (%30) ve %4 (%10) toplam kemirgen1 (insan2) adacık hücre numaraları, sırasıyla) daha az tahmin edilebilir ve bu nedenle özel ilgi olduğunu.
Kalsiyum sensörleri izole izalet içindeki hücrelerin periferik tabakasına teslim edilir. Adacık veya bir grup adacık daha sonra hareketsiz hale getirilir ve floresan mikroskobu kullanılarak görüntülenir. Görüntüleme modunun seçimi daha yüksek iş ortası (geniş alan) ve daha iyi uzamsal çözünürlük (konfokal) arasındadır. Geleneksel olarak, lazer tarama konfokal mikroskopisi görüntüleme dokusu için kullanılır, bu komşu hücreler arasında sinyal in en iyi ayrımı nı sağlar gibi. Β-hücrelerin hakim popülasyonundan gelen kirletici sinyal en aza indirgenmişse, geniş alan sistemi de kullanılabilir.
Belirli uyaranlara yanıt olarak kalsiyum dinamiği kaydedildikten sonra, veriler floresan şiddeti vs zaman olarak sayısal olarak ifade edilir, ilk floresan normalleştirilmiş ve taban çizgisi düzeltilmiş, beyazlatma ile bağlantılı etkileri kaldırmak için florofor. Eğrinin altındaki ani frekanstaki veya kısmi alandaki değişiklikler (pAUC) gözlenen etkileri ölçmek için zamana göre hesaplanır. pAUC daha duyarlı ve oldukça sağlam ise spiking frekans kalsiyum artış mekanizması hakkında daha fazla bilgi sağlar.
Küçük hücre alt popülasyonları, adacık hücrelerinin belirli popülasyonlarında sitosolik kalsiyumda değişikliklere neden olan adrenalin ve ghrelin gibi marker bileşiklerine verilen fonksiyonel yanıtlar kullanılarak tanımlanabilir.

Adacıklar trappable boyalar ile oldukça iyi yük(Şekil 1A), membran lipid bileşimi etkilenmedikçe (örneğin, yağ asitlerine kronik maruz kalma ile). İnsan adenovirüs tip 5 (Ad5) vektörü de tüm adacık hücrelerini hedefler (Şekil 1B). Aynı hücrede birden fazla rekombinant sensör ifade edildiğinde sorunlar ortaya çıkabilir. Ayrıca, adacıklar genellikle çok iyi olağanüstü istikrar ve çözüm erişim sağl...

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells at JoVE.com

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Burada, pankreas adacık hücreleri gibi heterojen hücre popülasyonlarında kalsiyum dinamiğinin görüntülenmesi ve ölçülmesi için bir protokol saklıyız. Floresan muhabirler adacık içindeki hücrelerin periferik tabakasına teslim edilir, daha sonra hareketsiz hale getirilir ve görüntülenir ve floresan yoğunluğunun dinamiğinin hücre başına analizi yapılır.

Fare Pankreas Adacık Hücrelerinin Alt Popülasyonlarında Görüntüleme Kalsiyum Dinamiği

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

Protokol Langerhans pankreas adacıkları içinde hücrelerin küçük alt popülasyonları hızlı izole fonksiyonu sağlar. Bu tekniğin avantajları gerçek zamanlı doğa ve yüksek istatistiksel güç ve dolayısıyla yüksek tekrarlanabilirlik, elde edilen verilerin içerir. Görüntüleme için adacıkları hareketsiz hale getirmek için, ters bir mikroskop için bir görüntüleme odası monte edin ve odanın içine cam bir kapak fişi yerleştirin.Cam hazne arabiriminin su geçirmez olduğundan emin olun ve kapak fişinin mikroskop hedefinin ulaşabileceği bir yerde olduğunu doğrulayın. Sonra, ince ve kaba örgü 20 milimetre kareler tarafından 20 kesilmiş ve ince örgü bir parça üzerinde iki spacer duvarlar oluşturmak için kalın yapışkan bant 45 ila 50 mikrometre adet kullanın. Kaba örgü ve bir ağırlığı 35 milimetrelik Petri çanak görüntüleme solüsyonuna batırın ve ince kafesi bir kesme mikroskobunun altına yerleştirin.Boşluk duvarları ters ve spacers yukarı bakacak şekilde ince örgü açın. Ve iki spacers arasında birkaç adacık aktarmak için bir p20 pipet kullanın. Saatçilerin pişmelerini kullanarak, kafesi ters mikroskobun görüntüleme odasına baş aşağı yerleştirin, böylece spacer'lar aşağı doğru oda örtüsüne otursun, boşluklar ile kapak fişinin ortasındaki kafes arasındaki adacıkları sıkıştırın.Kafesin, numunenin yanal hareketini kışkırtacak aşırı miktarda çözelti içermeden iyice sulu olduğuna dikkat edin. Daha sonra kaba örgü ve ağırlığı odadaki ince kafesin üzerine yerleştirin ve odaya görüntüleme solüsyonu ekleyin. Adacıklar hareketsiz hale geldikten sonra, ters mikroskobun görüntüleme modunu ve hedefini seçin ve adacıklarla birlikte hazneyi mikroskobunun Sıcaklık kontrollü aşamasına yerleştirin.Perfüzyonu ayarladıktan sonra, giriş akışını oda içindeki çıkış akışından daha düşük konumlandırın ve çıkış akışını giriş akışından daha büyük olacak şekilde ayarlayın. Uzun aralıklarla sürekli çözüm çıkarmadan kaçınarak, çözeltiyi birden fazla sıralı küçük damlacıkta kaldırarak çözümle en az temasa sahip olduğundan emin olun. Daha sonra, üç milimolar glikoz içeren görüntüleme solüsyonu ile perfüzyon başlatın ve yeşil floroforlar görüntüleme için ışık yolu ve filtreler seçin.Ardından, görüntüleme parametrelerini ayarlamak ve ilgi çekici adacıkları yakalamak için görünümü ayarlamak için canlı görüntüleme çalıştırın. Görüntünün sinyal-gürültü oranını optimize etmek için uyarma ışık yoğunluğunu, pozlama süresini ve binning'i ayarlayarak ayarların adacıkiçindeki her hücrenin mümkün olan en az ışık yoğunluğu ve pozlamada ayrı bir görselleştirilmesine olanak sağlamasını sağlar. Daha sonra adacıkları 0,1 ila beş hertz olarak görüntüleyin ve elde edilen verilerin kalitesini kontrol edin.Alfa hücre aktivitesi tespit edildiğinde, mümkün olduğunca satın alma yazılımı içinde sinyal dinamikleri bir online grafik kullanın ve iki ila beş dakika boyunca banyo çözeltisi içine adrenalin veya glutamat ekleyin. Kalsiyumda hızlı bir sıçrama ve ardından alfa hücre salınımlarının yavaşlaması veya iptali gözlenecek. Daha sonra, son zamanlarda seçici delta hücreleri etkinleştirmek için bildirilmiştir ghrelin ekleyin.Adacık hücrelerinin küçük bir alt popülasyonunda kalsiyumda hızlı bir geri dönüşümlü artış gözlenecektir. Sonra 10 milimolar glikoz ekleyin. Beta hücre alt popülasyonunda eşgüdümlü bir salınım yanıtı gözlenecektir.Daha önce adrenalin veya glutamat ve ghrelin tarafından aktive edildi hücrelerin yanıtları da not. Görüntüleri kaydettikten sonra, verileri uygun bir veri analizi yazılımı programına aktarın ve ham floresan yoğunluğu verilerini floresanilk değerine göre normalleştirin. Hücreden hücreye değişkenlik yoğunluğu veri kümesi hala önemliyse, kontrol çözeltisinin uygulandığı süre aralığı için bir kontrol bölgesi tanımlayın.Kontrol bölgesinin salınımsız net bir sinyali varsa, kontrol çözeltisinin her uygulamasından sonra floresan yoğunluğunun taban çizgisine geri döndüğünü varsayalım. Her hücre için zaman atlamalı verileri düzeltmek için, verileri denetim çözümlü eklenen noktalara göre ayrılmış bölümlere bölün ve her segmente doğrusal düzeltme uygulayın. Kontrol aralığında net salınımlar varsa veya ek etkenler varsa, bir ani algılama algoritması kullanın.Kalsiyum ani lerinin sıklığını ve agonistlerin ve antagonistlerin eklenmesine verilen yanıtı ölçmek için, kaydı eşit zaman aralıklarına bölün, aralıktaki ani artışları sayın ve kısmi frekansın zaman seyrini hesaplamak için aralık süresine normalleştirin. Alternatif olarak, eşiği ayarlayın ve aralıkların her biri için plato fraksiyonu hesaplayın. Kesir, hücrenin heyecanlı durumda geçirdiği aralık taki zaman yüzdesini gösterir.Veya aralıkların her biri için eğrinin altındaki kısmi alanı hesapla. Membranın lipid bileşimi etkilenmedikçe, adacıklar tropikal boyalarla oldukça iyi yüklenirler. İnsan adenovirüs tip 5 vektörü de adacık hücrelerini başarıyla hedefler.Alfa hücrelerinde kalsiyum spiking kolayca düşük glikoz düzeylerinde tespit edilebilir, ve düşük glikoz aktivitesi ve adrenalin ve glutamat yanıtı arasında yüksek hücre-hücre korelasyon var. Ghrelin düşük glikoz bazı adrenalin duyarlı hücreleri aktive ancak düşük glikoz tarafından aktive hücrelerin çoğunda kalsiyum dinamikleri üzerinde hiçbir etkisi yoktur. Kısmi frekans açısından analiz edildiğinde, adrenalin veya ghrelin uyarılmış hücreler all-or-nothing koşulları altında önemli bir artış görüntüler, bazal spiking ve adrenalin etkisi arasındaki genel değişiklikler ince olmasına rağmen.Buna karşılık, eğrinin altındaki kısmi alan bazal aktivite yüksek olsa bile tüm hücrelerde adrenalin tarafından tanıtılan değişikliklere duyarlıdır. Tüm meshes görüntüleme çözümü ile temas halinde olduğundan emin olun ve hava kabarcıkları önlemek için makul yoğun doku konumlandırmak için dikkat edin. Yöntem hücre türleri arasında ayırt etmek için yapay zeka içerecek şekilde genişletilebilir.Farmakolojik belirteçler desen tanıma teknolojisi ile değiştirilebilir, böylece kayıt süresini kısaltılabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murin Pankreas Adacık İzolasyonu

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

İnsan Pankreas Adacık İzolasyonu: Bölüm I: Sindirim ve Pankreas Doku Koleksiyon

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Measuring Near Plasma Membrane and Global Intracellular Calcium Dynamics in Astrocytes

Astrositler Plazma Membran ve Küresel Hücre içi kalsiyum Dynamics civarında Ölçüm

The brain contains glial cells.  Astrocytes, a type of glial cell, have long been known to provide a passive supportive role to neurons. However, ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

İnsan Pankreas Adacık İzolasyonu: Bölüm II: İnsan Islets saflaştırılması ve Kültür

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

Fare Pankreas Adacık İzolasyonu ve hücre içi cAMP Belirlenmesi için Bir Yöntem

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

Kalsiyum Görüntüleme amacı, Hücre Yaralanma Ölçümler ve Adenoviral Enfeksiyon için Pankreas Asiner Hücreleri hazırlanması

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Fare Primer Pankreas Asiner Hücreleri İzolasyon ve Kültür

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Yüksek çözünürlüklü Time-lapse Görüntüleme ve Yaşayan İnsan Umbilikal Ven Endotelyal Hücrelerinde Mikrotubul Dinamiği Otomatik Analizi

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...