Name: identification and dissection of diverse mouse adipose depots
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

O.A.M. مدعوم ة من قبل المعهد الوطني للصحة المنح DK062876 و DK092759; ويدعم برنامج تدريب العلماء الطبيين في جامعة ميشيغان (T32GM007863)، وبرنامج التدريب في تكوين الأعضاء بجامعة ميشيغان (T32HD007605)، وزمالة جامعة ميشيغان راكهام للجدارة، وزمالة تايلينول للرعاية المستقبلية.

يتم تنفيذ جميع الإجراءات الحيوانية بموافقة اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC) من جامعة ميشيغان.
1- القتل الرحيم
ملاحظة: لأغراض بروتوكول الفيديو هذا، يتم استخدام الفئران C57BL/6J البالغة من العمر 4 إلى 6 أشهر.
<ol><li>ضع الماوس في غرفة مرذاذ ال...

<ol>
	<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ+at+a+glance.">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li><li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat.">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+lineages:+tracing+back+the+origins+of+fat.">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li><li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I.">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li><li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots.">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li><li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+and+Beige+Fat:+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation.">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li><li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ.">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adipose+Tissue+Atlas:+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents.">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed.">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099 (2014).</li><li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+regulation,+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues.">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li><li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marrow+Adipose+Tissue:+Trimming+the+Fat.">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li><li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+white+adipose+tissue:+a+new+component+of+the+thermogenic+response.">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li><li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+Adipocytes:+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets?.">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li><li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot.">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li><li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+Fat:+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes.">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li><li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+and+the+immune+system.">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li><li>Kloppenburg, A. I. -. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis:+the+infrapatellar+fat+pad.">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li><li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization,+Identification,+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots.">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174 (2014).</li><li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li><li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers.">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ.">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li><li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue.">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues.">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808 (2015).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo.">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li><li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration.">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084 (2013).</li><li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+(IMAT)+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints.">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230 (2015).</li><li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance.">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li><li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones:+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue.">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128 (2016).</li></ol>

ومع تزايد الاعتراف بأهمية الخصائص الجزيئية والوظيفية المتنوعة للمجموعات المنفصلة من الخلايا الأديبية، من الأهمية بمكان أن يقوم المحققون في الميدان بتحديد المستودعات الدهنية واستئصالها بشكل موحد لإجراء مزيد من التحليلات. وحتى الآن، لا توجد سوى بروتوكولات قليلة للتوطين الموحد وعزل مجمو...

تلعب الأنسجة الدهنية أدوارًا حاسمة في التوازن في الجسم كله، بما في ذلك تخزين الطاقة وإطلاقها استجابة للاحتياجات المحلية والعالمية، والتنظيم الحراري، وإفراز الأديبوكينات لتنظيم توازن الطاقة، والتمثيل الغذائي، والاستجابات المناعية1 , 2.يتم توزيع Adipocytes في جميع أنحاء الجسم في مستودعات منفصلة، وفي بعض الحالات تخدم أدوارمتخصصة داخل البيئات الدقيقة 3،4،5. تاريخيا، تركزت دراسة الأنسجة الدهنية على الأنسجة الدهنية البيضاء (WAT)، ودورها في الحفاظ على التوازن الطاقة. يتم توزيع معظم الخلايا الأديبية في جميع أنحاء الجسم في مستودعات وات تحت الجلد والحشوية. خصائص هذه المستودعات مهمة للقابلية التفاضلية للأمراض الأيضية. وقد ارتبطت الخلايا الأديبية تحت الجلد، وتقع تحت الجلد، مع الآثار الأيضية واقية5. ترتبط الخلايا الأديبية الحشوية، التي تحيط بالأعضاء الحيوية والواردة داخل مستودعات الغدد التناسلية، المحيطة بالكلى، خلف المستقيم، الأورام، التامور، التامور، بالاضطرابات الأيضية، بما في ذلك مرض السكري من النوع 2 وأمراض القلب والأوعية الدموية2 . كما تمت دراسة الأنسجة الدهنية البني (BAT) على نطاق واسع. البني والبني مثل adipocytes التعبير عن فصل البروتين 1 (UCP1) ولعب أدوار هامة في توليد الحرارة التكيفية والجلوكوز التوازن6،7. وترد الخلايا الأديبية البنية الكلاسيكية في مستودع أفضل التقنيات المتاحة interscapular8. كما توجد مجموعات من الخلايا الأديبية البنية في مواقع أخرى، بما في ذلك المستودعات فوق الكلاف، والأشعة تحت الحمراء/تحت غطاء، وعنق الرحم، والفقرات، والمستودعات المحيطية بالأشعة فوق الحمراء8،و9.
بالإضافة إلى موقعها في مستودعات WAT الرئيسية وBAT، توجد الخلايا الأديبية في محاريب منفصلة في جميع أنحاء الجسم4، حيث يمكن أن تؤدي وظائف متخصصة داخل البيئات الدقيقة الخاصة بها. على سبيل المثال، نخاع العظام الأنسجة الدهنية (BMAT) بمثابة خزان الدهون، هو مصدر رئيسي من تعميم أديبونكتين، ويتفاعل بشكل وثيق مع osteoblasts، osteoclasts، والخلايا المكونة للدم10،11. تساهم الخلايا الأديبسية الجلدية في عمليات واسعة النطاق، بما في ذلك التئام الجروح، والاستجابة المناعية، والتنظيم الحراري، ونمو بصيلات الشعر12،13. وعلاوة على ذلك، قد تنتج الخلايا الأديبية الظهارية العديد من الأديبوكينات والكيماويات التي تمارس تأثيرات محلية ومنهجية على تطور وتطور مرض الشريان التاجي14. وقد ارتبط توسع WAT بين / العضل بشكل إيجابي مع زيادة الدهنية, مقاومة الأنسولين النظامية, وانخفاض القوة العضلية والتنقل15. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الخلايا الأديبية البوبليتية بمثابة خزان للدهون للتوسع اللمفاوي أثناء العدوى16. في حين أن الأدوار المحددة لمختلف المستودعات المفصلية غير معروفة عموما، ويعتقد الآن مستودع هوفا (الأشعة تحت الرضفة) داخل الركبة للمساهمة في الأمراض، بما في ذلك آلام الركبة الأمامية وهشاشة العظام17.
وفي حين أن الاختلافات الإقليمية في طابع ووظيفة الخلايا الأديبية قيد الدراسة المكثفة، فإن هذا المجال محدود حالياً بعدم وجود بروتوكول موحد لتحديد وتشريح مستودعات الماوس المتنوعة. وقد وصفت الأساليب المنشورة سابقا عادة عزل واحد أو اثنين من مستودعات محددة وتفتقر إلى مستوى التفاصيل المطلوبة للختان موحدة18،19. يوفر البروتوكول الموضح في هذه المخطوطة دليلاً شاملاً للمواقع التشريحية المحددة وخطوات العزل للعديد من مستودعات الماوس المختلفة. على الرغم من أن مستودعات WAT هي المحور الرئيسي لهذه المخطوطة، إلا أن استئصال أفضل التقنيات المتاحة بين التقنيات المتاحة هو أيضا ً وصف تفصيلي. يمكن استخدام الأنسجة الدهنية المقتطعة باستخدام هذا البروتوكول لمجموعة واسعة من نقاط النهاية التجريبية، بما في ذلك الدراسات الاستئصالية، وعلم الأنسجة، وتحليلات التعبير الجيني.
والهدف من هذه المخطوطة هو تزويد المحققين ببروتوكول مفصل لتحديد وعزل كل من مستودعات الماوس البارزة والأقل دراسة (الشكل 1). هذا المورد سوف يسهل التحقيق أكثر اكتمالا من الخصائص التنموية والجزيئية والوظيفية للخلايا الأديبية داخل منافذ متنوعة.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg"> الشكل 1: تصوير تخطيطي لمستودعات الماوس الدهنية التي تم تشريحها في هذا البروتوكول. تم تكييف هذه الصورة من Bagchi وآخرون. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-110-869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plates, untreated</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (dilute from 95%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps with curved tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89259-946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pan</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (sharp/blunt tip)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze sponges</td>
			<td>Vitality Medical</td>
			<td>2634</td>
			<td>Curity 4 x 4 inch gauze sponge, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handi-Pins for dissection</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors (straight)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470018-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>501017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100499-578</td>
			<td>Feather scalpel handle with blade, disposable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and dissection of diverse mouse adipose depots

الأنسجة الدهنية هي أعضاء معقدة مع مجموعة واسعة من الوظائف، بما في ذلك تخزين وتعبئة الطاقة استجابة للاحتياجات المحلية والعالمية، وفصل التمثيل الغذائي لتوليد الحرارة، وإفراز adipokines لتنظيم التوازن الجسم كله و الاستجابات المناعية. البحوث الناشئة هو تحديد الاختلافات الإقليمية الهامة في الملامح التنموية والجزيئية والوظيفية للخلايا الأديبية الموجودة في مستودعات منفصلة في جميع أنحاء الجسم. خصائص مختلفة من المستودعات ذات الصلة طبيا منذ الأمراض الأيضية غالبا ما تظهر آثار مستودع محددة. وسيوفر هذا البروتوكول للمحققين أطلسا تشريحيا مفصلا ودليلا تشريحيا لتحديد الأنسجة الدهنية المتنوعة واستئصالها. وسيسمح تشريح موحد للمستودعات الدهنية المنفصلة بإجراء مقارنات مفصلة لخصائصها الجزيئية والأيضية ومساهماتها في الحالات المرضية المحلية والمنهجية في ظل مختلف الظروف التغذوية والبيئية.

ويمكن تحقيق النجاح في تحديد وعزل مختلف مستودعات الماوس الدهنية باستخدام البروتوكول الموصوف أعلاه. وترد في الشكل 2المواقع التشريحية الإجمالية لمستودعات تحت الجلد (ألف وهاء - واو) والبني (باء) والحشوي (C وD وG-J) ومستودع البوبليتال (K).
<p class="jove_content" fo:keep-together.wi...

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

توجد الخلايا الأديبية في مستودعات منفصلة ولها أدوار متنوعة داخل بيئاتها الدقيقة الفريدة. ومع الكشف عن الاختلافات الإقليمية في طابع ووظيفة الخلايا الأديبية، فإن تحديد المستودعات وعزلها بشكل موحد أمر حاسم للنهوض بالميدان. هنا، نقدم بروتوكول مفصل للختان من مختلف مستودعات الماوس الدهنية.

تحديد وتشريح مستودعات الماوس المتنوعة

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

إنّ منهجية موحّدة لتحديد وتقريح المستودعات الدهنية في الجسم أمر بالغ الأهمية للتحقيق في الاختلافات في طابع ووظيفة الشّريبيّات داخل محاريب تشريحيّة منفصلة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها طريقة موثوقة ودقيقة لتحديد واستئصال كل من مستودعات القوارض الدهنية الشائعة والأقل درسًا. لتحديد وعزل BAT بين الكتفين، استخدم مقص القزحية لقطع أفقيا على طول الحافة السفلية من النسيج تحت الجلد الأمامي من الماوس القتل الرحيم بعد الحدود الطبيعية للمستودع.جعل اثنين من شقوق عمودية على طول الحواف الجانبية للمستودع بعد الحدود الطبيعية للأنسجة. استخدام ملقط بعناية الوجه حتى مستودع للكشف عن فراشة على شكل الأنسجة الدهنية البني مضمّن داخل الأنسجة الدهنية البيضاء. ثم تشريح بعناية BAT بعيدا عن وات المحيطة بها.تخزين الأنسجة الدهنية في حاويات مناسبة لتحليل المصب. لتحديد وعزل وات تحت الجلد الخلفي، ووضع الماوس في موقف supine وتأمين أطراف الحيوان. استخدام ملقط لرفع الجلد في قاعدة القص وجعل شق الجلد ملليمتر واحد.إدراج شفرة واحدة من مقص القزحية في قطع وجعل شق الجلد خط الوسط من أربعة إلى خمسة سنتيمترات ابتداء من قاعدة القص والصعود إلى قاعدة الذيل. بعد ذلك، قم بعمل شقين أفقيين سنتيمتر واحد في الجزء العلوي من الشق الرأسي الأولي الممتد أفقيًا من خط الوسط. استخدام ملقط لقشر بعناية مرة أخرى الجلد من تجويف البريتوني، واستخدام الساق لتحديد موقع وات تحت الجلد الخلفي الذي ينبغي أن تبقى مرتبطة مع الجلد.دبوس الجلد الممدودة ومزغ تماما مستودع وات الإربي الثلاثي من قاعدة ventrally الخلفية عبر الفخذ. لتحديد مستودع WAT الحشوي والعزلة ، استخدم ملقط لرفع جدار تجويف الصفاق الصفيق عند قاعدة القص وجعل شق ملليمتر واحد في الأنسجة الخيام. أدخل شفرة واحدة من مقص القزحية في القطع واصنع شق عمودي تنازلي من أعلى تجويف الصفاق إلى المستقيم.جعل اثنين من شقوق أفقية سنتيمتر واحد في الجزء العلوي والسفلي من شق عمودي تمتد أفقيا من خط الوسط واستخدام ملقط لقشر مرة أخرى الصفاق لفضح محتويات تجويف البطن. ثم قم بزوم البريتوني الممدودة على مقلاة التشريح لحصاد مستودعات WAT الموجودة داخل التجويف البريتوني. لتحديد وعزل gonadal WAT الحشوية، حدد موقع الغدد التناسلية واستخدام ملقط لرفع ما يصل إلى WAT gonadal المرتبطة، ثم استخدام مقص قزحية لإخراج بعناية وات من الغدد التناسلية.لمعالجة مستودع perirenal، تحديد موقع الكلى واستخدام ملقط لرفع الأنسجة الكلوية. سحب الكلى إلى خط الوسط لرؤية تقسيم واضح بين مستودعات perirenal وperperitoneal واستئصال وات المرتبطة مباشرة مع الكلى. ثم إزالة الغدد الكظرية الموجودة فوق الكلى من وات.لتحديد وات مرة أخرى، ورفع الكلى إلى خط الوسط مرة أخرى واستخدام مقص القزحية لتشريح بعناية وات من الصفاق الخلفي من الجدار البريتوني الخلفي. لعزل وات popliteal، وضع الرضفة ضد عموم تشريح مع الحرص على أن fossa البوبيتيال في الجزء الخلفي من الركبة تواجه التصاعدي. استخدم مقص القزحية لإزالة الجلد بعناية من قاعدة hindlimb إلى القدم.استخدام مقص القزحية لجعل قطع على الحدود السفلية من رؤساء الوسط واتية من العضلات gastrocnemius، واستخدام ملقط لرفع العضلات للكشف عن مستودع البوبليتال الثلاثي. ثم استخدام مقص القزحية لإخراج مستودع على طول حدود الأنسجة الطبيعية. هنا ، يتم عرض المواقع التشريحية الإجمالية للماوس تحت الجلد ، والبني ، والحشوي ، والمستودعات النقوش.الخصائص النسيجية للمستودعات تحت الجلد، والبني، والحشوية، والبوبية، والتشكيل، ونخاع الخاضعة للتنظيم، والعضوي، والمستودعات الدهنية infrapatellar يمكن تقييمها من قبل بروتوكولات تلطيخ الهماتوسلين وEosin القياسية. يمكن استخدام الأنسجة الدهنية المعزولة باستخدام هذا البروتوكول لمجموعة واسعة من نقاط النهاية التجريبية بما في ذلك التحليل النسيجي والدراسات الجزيئية وتحليل الجينات والتعبير البروتيني. ومما لا شك فيه أن توحيد نطاق الميدان لتحديد المستودعات الدهنية المتنوعة سيساعدنا على زيادة فهمنا لخصائصها الجزيئية والتمثيلية ومساهماتها المختلفة في كل من الولايات المرضية المحلية والمنهجية.

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

تشريح 6.5 أجنة الفئران DPC

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

تشريح التلفيف المسنن من الحصين ماوس الكبار

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

في الجسم الحي التصوير والعلاجات العلاجية في الفأر نموذج مثلي من سرطان المبيض

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

إعداد الخلايا الدهنية بروجينيتور من ماوس Epididymal الأنسجة الدهنية

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

تشريح فعال وثقافة الخلايا الظهارية صبغة الفأر الأولية

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

مؤشرات الحث والتقييم المتنوعة لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

عزل وتحديد الخلايا البطانية الوعائية من المستودعات الدهنية المتميزة للتطبيقات النهائية

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

عزل وتحديد الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الأنسجة الدهنية لفئران Sprague Dawley

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...