Name: identification and dissection of diverse mouse adipose depots
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

O.A.M. støttes af NIH Grants DK062876 og DK092759; D.P.B. understøttes af University of Michigan Medical Scientist træningsprogram (T32GM007863), University of Michigan træningsprogram i Organogengenesis (T32HD007605), University of Michigan Rackham Merit Fellowship, og Tylenol Future Care Fellowship.

Alle dyr procedurer udføres med godkendelse af den institutionelle Animal Care og brug Udvalget (IACUC) af University of Michigan.
1. euthanization
Bemærk: I forbindelse med denne video protokol anvendes 4 til 6 måneder gamle C57BL/6J-mus.
<ol><li>Placer musen i en isofluran vaporizer kammer og justere isofluran strømningshastigheden til 5% eller højere. Fortsæt isoflurans eksponering indtil et minut efter vejrtrækningsstop. Fjern derefter ...

<ol>
	<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ+at+a+glance.">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li><li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat.">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+lineages:+tracing+back+the+origins+of+fat.">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li><li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I.">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li><li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots.">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li><li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+and+Beige+Fat:+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation.">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li><li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ.">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adipose+Tissue+Atlas:+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents.">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed.">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099 (2014).</li><li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+regulation,+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues.">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li><li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marrow+Adipose+Tissue:+Trimming+the+Fat.">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li><li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+white+adipose+tissue:+a+new+component+of+the+thermogenic+response.">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li><li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+Adipocytes:+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets?.">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li><li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot.">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li><li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+Fat:+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes.">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li><li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+and+the+immune+system.">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li><li>Kloppenburg, A. I. -. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis:+the+infrapatellar+fat+pad.">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li><li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization,+Identification,+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots.">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174 (2014).</li><li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li><li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers.">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ.">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li><li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue.">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues.">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808 (2015).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo.">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li><li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration.">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084 (2013).</li><li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+(IMAT)+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints.">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230 (2015).</li><li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance.">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li><li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones:+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue.">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128 (2016).</li></ol>

Da betydningen af de forskellige molekylære og funktionelle karakteristika af diskrete fedtcellerne klynger i stigende grad anerkendes, er det afgørende, at undersøgere inden for området ensartet identificerer og punktafgiftspligtige depoter til yderligere analyser. Til dato findes der kun få protokoller for standardiseret lokalisering og isolering af den brede vifte af mus fedtvæv depoter. Tidligere offentliggjorte metoder er primært fokuseret på en eller to depoter og mangler de nødvendige detaljer for ensarte...

Fedtvæv spiller kritiske roller i hele kroppen homøostase, herunder opbevaring og frigivelse af energi som reaktion på lokale og globale behov, termoregulering, og sekretion af adipokines til at regulere energibalancen, metabolisme og immunrespons1 , 2. adipocytter distribueres i hele kroppen i diskrete depoter, og i nogle tilfælde tjene specialiserede roller inden for deres mikromiljøer3,4,5. Historisk set har studiet af fedtvæv centreret på hvidt fedtvæv (WAT), og dets rolle i at opretholde energi homøostase. De fleste adipocytter distribueres i hele kroppen i subkutane og visceral WAT depoter. Egenskaberne ved disse depoter er vigtige for differentialfølsomhed over for metaboliske sygdomme. Subkutane adipocytter, placeret under huden, har været forbundet med beskyttende metaboliske effekter5. Visceral adipocytter, som omgiver de vitale organer og er indeholdt i gonadal, perirenal, retroperitoneal, omental og perikardiale depoter, er almindeligvis knyttet til metaboliske lidelser, herunder type 2 diabetes og hjerte-kar-sygdom2 . Brunt fedtvæv (BAT) er også blevet undersøgt udførligt. Brune og brune-lignende adipocytter udtrykker afkoblings protein 1 (UCP1) og spiller vigtige roller i adaptiv termogenese og glucosehomøostase6,7. Klassiske brune adipocytter er indeholdt i den interscapular BAT Depot8. Klynger af brune adipocytter findes også andre steder, herunder supraclavicular, infrarød/Subscapular, cervikal, paravertebrale og periaorta depoter8,9.
Ud over deres placering i større WAT og BAT depoter, adipocytter findes i diskrete nicher i hele kroppen4, hvor de kan udføre specialiserede funktioner inden for deres respektive mikromiljøer. For eksempel, knoglemarvs fedtvæv (BMAT) fungerer som en lipid reservoir, er en vigtig kilde til cirkulerende adiponectin, og tæt interagerer med osteoblaster, osteoklaster, og hæmatopoietiske celler10,11. Dermal adipocytter bidrage til udbredte processer, herunder sårheling, immunrespons, thermoregulation, og hårsækken vækst12,13. Yderligere, epicardial adipocytter kan producere flere adipokines og chemokiner, der udøver lokale og systemiske virkninger på udviklingen og progression af koronararteriesygdom14. Udvidelse af Inter/intramuskulær WAT er blevet positivt korreleret med øget adiposity, systemisk insulinresistens, og nedsat muskelstyrke og mobilitet15. Desuden, popliteale adipocytter tjene som en lipid reservoir for lymfe ekspansion under infektion16. Mens de specifikke roller af forskellige artikulære depoter er generelt ukendte, Hoffa depot (infrapatellar) i knæet menes nu at bidrage til patologier, herunder forreste knæsmerter og slidgigt17.
Der henviser til, at regionale forskelle i fedtcellerne karakter og funktion er under intens undersøgelse, feltet er i øjeblikket begrænset af manglen på en standardiseret protokol for identifikation og dissektion af forskellige muse depoter. Tidligere offentliggjorte metoder har typisk beskrevet isoleringen af en eller to specifikke depoter og mangler det detaljeringsniveau, der kræves for ensartet excision18,19. Den protokol, der er beskrevet i dette manuskript, giver en omfattende guide til de specifikke anatomiske steder og isolations trin af mange forskellige muse-fedtvæv depoter. Selvom Wat depoter er det primære fokus i dette manuskript, er excision af interscapular bat også beskrevet i detaljer. Fedtvæv, der er fjernet ved hjælp af denne protokol, kan anvendes til en lang række eksperimentelle endepunkter, herunder forklarende undersøgelser, histologi og analyse af genekspression.
Formålet med dette manuskript er at give investigatorerne en detaljeret protokol til klart og præcist at identificere og isolere både fremtrædende og mindre studerede mus fedtvæv depoter (figur 1). Denne ressource vil fremme en mere fuldstændig undersøgelse af de udviklingsmæssige, molekylære og funktionelle egenskaber af adipocytter inden for forskellige nicher.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg"> Figur 1: skematisk skildring af musen fedtvæv depoter dissekeret i denne protokol. Dette billede er blevet tilpasset fra bagchi et al., 20184. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">Venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-110-869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plates, untreated</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (dilute from 95%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps with curved tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89259-946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pan</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (sharp/blunt tip)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze sponges</td>
			<td>Vitality Medical</td>
			<td>2634</td>
			<td>Curity 4 x 4 inch gauze sponge, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handi-Pins for dissection</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors (straight)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470018-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>501017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100499-578</td>
			<td>Feather scalpel handle with blade, disposable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and dissection of diverse mouse adipose depots

Fedtvæv er komplekse organer med en bred vifte af funktioner, herunder opbevaring og mobilisering af energi som reaktion på lokale og globale behov, frakobling af metabolisme til at generere varme, og sekretion af adipokines til at regulere hele kroppen homøostase og immunrespons. Ny forskning identificerer vigtige regionale forskelle i de udviklingsmæssige, molekylære og funktionelle profiler af adipocytter placeret i diskrete depoter i hele kroppen. Forskellige egenskaber ved depoterne er medicinsk relevante, da metaboliske sygdomme ofte udviser Depot specifikke virkninger. Denne protokol vil give investigatorerne en detaljeret anatomisk Atlas og dissektion guide til reproducerbar og præcis identifikation og excision af forskellige mus fedtvæv. Standardiseret dissektion af diskrete fedtvæv depoter vil give detaljerede sammenligninger af deres molekylære og metaboliske egenskaber og bidrag til lokale og systemiske patologiske tilstande under forskellige ernæringsmæssige og miljømæssige forhold.

Vellykket identifikation og isolering af forskellige mus fedtvæv depoter kan opnås ved hjælp af den protokol, der er beskrevet ovenfor. De grove anatomiske placeringer af subkutane (A, E-F), brun (B), visceral (C, D, G-J) og popliteale (K) depoter er vist i figur 2.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig2.jpg"> Figur 2: grove anatomiske placeringer af...

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipocytter findes i diskrete depoter og har forskellige roller inden for deres unikke mikromiljøer. Som regionale forskelle i fedtcellerne karakter og funktion er afdækket, standardiseret identifikation og isolering af depoter er afgørende for fremskridt i marken. Heri præsenterer vi en detaljeret protokol for excision af forskellige mus fedtvæv depoter.

Identifikation og dissektion af diverse mus Adipose depoter

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

En standardiseret metode til at identificere og dissekere fedtdepoter i hele kroppen er afgørende for undersøgelsen af forskelle i adipocytters karakter og funktion inden for diskrete anatomiske nicher. Den største fordel ved denne teknik er, at det er en pålidelig og præcis metode til at identificere og ekscisere både almindelige og mindre undersøgte gnavere fedt depoter. Til identifikation og isolering af interscapular BAT anvendes irissaks til at skære vandret langs den nederste kant af det forreste subkutane væv af en aflivet mus efter depotets naturlige kant.Lav to lodrette snit langs depotets laterale kanter efter vævets naturlige kanter. Brug kraftforrædel til omhyggeligt at vende op i depotet for at afsløre sommerfugleformede interscapular brunt fedtvæv indlejret i det hvide fedtvæv. Derefter disseker bat væk fra den omgivende WAT.Opbevar fedtvæv i passende beholdere til downstream-analyse. Til identifikation og isolering af bageste subkutane WAT skal musen placeres i liggende position og fastgøre dyrets lemmer. Brug snævn til at løfte huden i bunden af brystbenet og gøre en en millimeter hud snit.Sæt en klinge af iris saks i snittet og gøre en fire til fem centimeter midterlinjen hud snit begynder ved bunden af brystbenet og stigende til bunden af halen. Dernæst skal du foretage to en centimeter vandrette snit øverst i det indledende lodrette snit, der strækker sig sidefra fra midterlinjen. Brug de virforladne til omhyggeligt at skrælle tilbage huden fra bughulen, skal du bruge benet til at finde den bageste subkutane WAT, som bør forblive forbundet med huden.Pin den udstrakte hud og helt punktafgifter den trekantede inguinal WAT depot fra bunden af hindlimb ventrally over lysken. For visceral WAT depot identifikation og isolering, bruge kraftbefæstelse til at løfte op den tynde bughulen væg i bunden af brystbenet og foretage en en millimeter snit i teltvæv. Sæt en klinge af iris saks i snittet og gøre en fire til fem centimeter faldende lodret snit fra toppen af bughulen til endetarmen.Lav to en centimeter vandrette snit i toppen og bunden af det lodrette snit strækker sig sidesomt fra midterlinjen og bruge de vicesser til at skrælle tilbage bughinden for at afsløre bughulen indhold. Derefter pin den udstrakte peritoneum til dissektion pan at høste WAT depoter indeholdt i bughulen. For identifikation og isolering af visceral gonadal WAT, finde gonads og bruge kraftbuner til at løfte op den tilhørende gonadal WAT, derefter bruge iris saks til omhyggeligt punktafgifter WAT fra gonads.At punktafgifter den perirenale depot, finde nyrerne og bruge snævle til at løfte op nyrevæv. Træk nyrerne til midterlinjen for at se en klar opdeling mellem de perirenale og retroperitoneale depoter og punktafgifter WAT direkte forbundet med nyrerne. Fjern derefter binyrerne placeret over nyrerne fra WAT.For retroperitoneal WAT identifikation og isolering, løft nyrerne til midterlinjen igen og bruge iris saks til omhyggeligt dissekere retroperitoneal WAT fra den bageste bugvæggen. For at isolere popliteal WAT, placere patella mod dissektion pan og pasning af, at popliteal fossa på bagsiden af knæet vender opad. Brug iris saks til omhyggeligt at fjerne huden fra bunden af baglæken til foden.Brug iris saks til at foretage et snit på ringere grænsen af den mediale og laterale hoveder af gastrocnemius muskel, bruge scef til at løfte musklen til at afsløre den trekantede popliteal depot. Brug derefter iris saks til punktafgifter depotet langs de naturlige væv grænser. Her vises de grove anatomiske placeringer af museubkutane, brune, viscerale og popliteale depoter.De histologiske egenskaber ved de subkutane, brune, viscerale, popliteale, konstituerende og regulerede marvs-adipose-, intramuskulære og infrapatellare fedtdepoter kan vurderes ved hjælp af standard Hematoxylin- og Eosin-farvningsprotokoller. Fedtvævet, der er isoleret ved hjælp af denne protokol, kan anvendes til en lang række eksperimentelle endepunkter, herunder histologisk analyse, molekylære undersøgelser og analyse af genet og proteinudtryk. Felt-dækkende standardisering af identifikationen af forskellige fedtdepoter vil uden tvivl hjælpe os med at fremme vores forståelse af deres molekylære og metaboliske egenskaber og deres differentierede bidrag til både lokale og systematiske patologiske tilstande.

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Forberedelse af Adipose Stamfader celler fra Mouse Epididymal fedtvæv

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Effektiv dissektion og kultur af primære mus Retinal Pigment Epitel celler

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Induktion og forskellige vurderingsindikatorer for eksperimentel autoimmun encephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

Isolering og identifikation af vaskulære endotelceller fra forskellige fedtdepoter til downstream-applikationer

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

Isolering og identifikation af mesenkymale stamceller afledt af fedtvæv fra Sprague Dawley rotter

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...