Name: identification and dissection of diverse mouse adipose depots
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

O.A.M. wordt ondersteund door NIH grants DK062876 en DK092759; D.P.B. wordt ondersteund door de University of Michigan Medical Scientist Training Program (T32GM007863), het opleidingsprogramma van de Universiteit van Michigan in organogenese (T32HD007605), University of Michigan Rackham Merit Fellowship en Tylenol Future Care Fellowship.

Alle dier procedures worden uitgevoerd met de goedkeuring van het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité (IACUC) van de Universiteit van Michigan.
1. euthanisatie
Opmerking: Voor het doel van dit video protocol worden 4 tot 6 maanden oude C57BL/6J muizen gebruikt.
<ol><li>Plaats de muis in een Isofluraan vaporizer kamer en stel de Isofluraan stroom in op 5% of meer. Ga door met de blootstelling aan Isofluraan tot een minuut na het ademhalen...

<ol>
	<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ+at+a+glance.">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li><li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat.">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+lineages:+tracing+back+the+origins+of+fat.">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li><li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I.">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li><li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots.">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li><li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+and+Beige+Fat:+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation.">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li><li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ.">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adipose+Tissue+Atlas:+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents.">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed.">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099 (2014).</li><li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+regulation,+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues.">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li><li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marrow+Adipose+Tissue:+Trimming+the+Fat.">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li><li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+white+adipose+tissue:+a+new+component+of+the+thermogenic+response.">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li><li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+Adipocytes:+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets?.">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li><li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot.">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li><li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+Fat:+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes.">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li><li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+and+the+immune+system.">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li><li>Kloppenburg, A. I. -. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis:+the+infrapatellar+fat+pad.">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li><li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization,+Identification,+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots.">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174 (2014).</li><li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li><li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers.">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ.">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li><li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue.">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues.">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808 (2015).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo.">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li><li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration.">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084 (2013).</li><li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+(IMAT)+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints.">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230 (2015).</li><li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance.">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li><li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones:+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue.">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128 (2016).</li></ol>

Aangezien het belang van de diverse moleculaire en functionele kenmerken van afzonderlijke adipocyten clusters steeds meer wordt erkend, is het van cruciaal belang dat onderzoekers binnen het veld uniforme depots voor verdere analyses identificeren en accijnzen. Tot op heden bestaan er weinig protocollen voor gestandaardiseerde lokalisatie en isolatie van het brede scala aan muis vetweefdepots. Eerder gepubliceerde methoden zijn voornamelijk gericht op een of twee depots en missen de details die nodig zijn voor uniforme ...

Adipeus weefsels spelen kritieke rollen in whole-body homeostase, met inbegrip van opslag en vrijlating van energie in reactie op lokale en mondiale behoeften, thermoregulatie, en afscheiding van zijn om de energiebalans te reguleren, metabolisme en immuunresponsen1 , 2. adipocytes worden verspreid door het hele lichaam in discrete depots, en in sommige gevallen dienen gespecialiseerde rollen binnen hun micro-omgevingen3,4,5. Historisch, de studie van vetweefsel heeft gecentreerd op witte vetweefsel (WAT), en haar rol in het handhaven van energie homeostase. De meeste adipocytes worden verspreid door het hele lichaam in subcutane en viscerale WAT depots. De kenmerken van deze depots zijn belangrijk voor de differentiële gevoeligheid voor metabole ziekten. Subcutane adipocyten, gelegen onder de huid, zijn in verband gebracht met beschermende metabole effecten5. Viscerale adipocytes, die de vitale organen omringen en zijn opgenomen in de gonadale, perirenal, retroperitoneale, omental en pericardiale depots, zijn vaak gekoppeld aan metabole stoornissen, waaronder type 2 diabetes en cardiovasculaire aandoening2 . Bruine vetweefsel (BAT) zijn ook uitgebreid bestudeerd. Bruin en bruin-achtige adipocytes Express ontkoppeling eiwit 1 (UCP1) en spelen belangrijke rollen in adaptieve thermogenese en glucose homeostase6,7. Klassieke bruine adipocytes zijn opgenomen in de interscapular BAT depot8. Clusters van bruin adipocytes zijn ook gevonden op andere locaties, met inbegrip van supraclavicular, infra/subscapulaire, cervicale, paravertebrale en periaorta depots8,9.
In aanvulling op hun locatie in grote WAT en BAT depots, adipocytes bestaan in discrete niches door het hele lichaam4, waar ze gespecialiseerde functies kunnen uitvoeren binnen hun respectieve micro-omgevingen. Bijvoorbeeld, beenmerg vetweefsel (BMAT) fungeert als een lipide reservoir, is een belangrijke bron van circulerende adiponectine, en nauw samenwerkt met osteoblasten, osteoclasten, en hematopoietische cellen10,11. Dermale adipocyten dragen bij aan wijdverbreide processen, waaronder wondgenezing, immuunrespons, thermoregulatie en haarfollikel groei12,13. Verder, epicarbel adipocytes kan produceren verschillende zijn en chemokines die lokale en systemische effecten op de ontwikkeling en de progressie van coronaire hartziekte uitoefenen14. Uitbreiding van Inter/intramusculaire WAT is positief gecorreleerd met verhoogde adipositeit, systemische insulineresistentie, en verminderde spierkracht en mobiliteit15. Daarnaast dienen popliteale adipocytes als een lipide reservoir voor lymfatische expansie tijdens infectie16. Hoewel de specifieke rollen van verschillende articulaire depots over het algemeen onbekend zijn, wordt het Hoffa depot (infrapatellar) binnen de knie nu verondersteld om bij te dragen aan pathologieën, waaronder anterieure kniepijn en osteoartritis17.
Terwijl regionale verschillen in het adipocyten karakter en de functie intensief worden bestudeerd, wordt het veld momenteel beperkt door het ontbreken van een gestandaardiseerd protocol voor de identificatie en de dissectie van diverse muis depots. Eerder gepubliceerde methoden hebben meestal de isolatie van een of twee specifieke depots beschreven en missen het detailniveau dat nodig is voor uniforme excisie18,19. Het protocol dat in dit manuscript wordt beschreven, biedt een uitgebreide handleiding voor de specifieke anatomische locaties en isolatie stappen van veel verschillende muis vetweefdepots. Hoewel WAT depots de primaire focus van dit manuscript zijn, wordt de excisie van interscapular BAT ook gedetailleerd beschreven. Vetweefsel dat met dit protocol wordt uitgesneden, kan worden gebruikt voor een breed scala aan experimentele eindpunten, waaronder explant studies, histologie en genexpressie analyses.
Het doel van dit manuscript is om onderzoekers een gedetailleerd protocol te bieden om zowel prominente als minder bestudeerde depots voor muizen te identificeren en te isoleren (Figuur 1). Deze bron zal een vollediger onderzoek van de ontwikkelings-, moleculaire en functionele kenmerken van adipocytes in diverse niches vergemakkelijken.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg"> Figuur 1: schematische weergave van de depots van muis vetweefsels ontleed in dit protocol. Deze afbeelding is aangepast van Bagchi et al., 20184. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-110-869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plates, untreated</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (dilute from 95%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps with curved tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89259-946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pan</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (sharp/blunt tip)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze sponges</td>
			<td>Vitality Medical</td>
			<td>2634</td>
			<td>Curity 4 x 4 inch gauze sponge, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handi-Pins for dissection</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors (straight)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470018-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>501017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100499-578</td>
			<td>Feather scalpel handle with blade, disposable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and dissection of diverse mouse adipose depots

Adipeus weefsels zijn complexe organen met een breed scala van functies, met inbegrip van opslag en mobilisatie van energie in reactie op lokale en mondiale behoeften, ontkoppeling van metabolisme om warmte te genereren, en de afscheiding van zijn om te reguleren van het hele lichaam homeostase en immuunresponsen. Opkomende onderzoek is het identificeren van belangrijke regionale verschillen in de ontwikkelings-, moleculaire, en functionele profielen van adipocytes gelegen in discrete depots door het hele lichaam. Verschillende eigenschappen van de depots zijn medisch relevant, omdat stofwisselingsziekten vaak depot-specifieke effecten aantonen. Dit protocol zal onderzoekers voorzien van een gedetailleerde anatomische Atlas en dissectie gids voor de reproduceerbare en nauwkeurige identificatie en excisie van diverse muizen vetweefsels. Gestandaardiseerde dissectie van discrete vetweefdepots zal gedetailleerde vergelijkingen van hun moleculaire en metabole kenmerken en bijdragen aan lokale en systemische pathologische toestanden onder verschillende voedings-en milieuomstandigheden mogelijk maken.

Succesvolle identificatie en isolatie van verschillende muis vetweefdepots kan worden bereikt met behulp van het hierboven beschreven protocol. De bruto anatomische locaties van subcutane (A, E-F), bruin (B), viscerale (C, D, G-J) en popliteale (K) depots worden weergegeven in Figuur 2.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig2.jpg"> Figuur 2: bruto anatom...

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipocytes bestaan in discrete depots en hebben verschillende rollen binnen hun unieke micro-omgevingen. Aangezien regionale verschillen in het adipocyten karakter en de functie worden blootgelegd, is gestandaardiseerde identificatie en isolatie van depots cruciaal voor de vooruitgang van het veld. Hierin presenteren we een gedetailleerd protocol voor de excisie van verschillende muis vetweefdepots.

Identificatie en dissectie van diverse muis Vetweefdepots

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

Een gestandaardiseerde methodologie voor het identificeren en ontleden van vetdepots door het hele lichaam is van cruciaal belang voor het onderzoek naar verschillen in het karakter en de functie van adipocyten binnen discrete anatomische niches. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een betrouwbare en nauwkeurige methode is voor het identificeren en uitsnijden van zowel gemeenschappelijke als minder bestudeerde vetdepots van knaagdieren. Voor de identificatie en isolatie van interscapulaire BBT, gebruik irisschaar horizontaal te snijden langs de onderkant van het voorste onderhuidse weefsel van een geëuthanaseerde muis na de natuurlijke rand van het depot.Maak twee verticale insnijdingen langs de zijdelingse randen van het depot volgens de natuurlijke randen van het weefsel. Gebruik tangen om het depot voorzichtig om te draaien om het vlindervormige interscapulaire bruine vetweefsel dat in het witte vetweefsel is ingebed, te onthullen. Ontleden vervolgens zorgvuldig de BAT weg van de omringende WAT.Bewaar vetweefsels in geschikte containers voor downstream-analyse. Voor de identificatie en isolatie van achterste onderhuidse WAT, plaats de muis in de supine positie en zet het dier ledematen. Gebruik tangen om de huid aan de basis van het borstbeen op te tillen en een huidincisie van een millimeter te maken.Steek een mes van de irisschaar in de snede en maak een vier tot vijf centimeter midline huid incisie vanaf de basis van het borstbeen en oplopend tot de basis van de staart. Maak vervolgens twee horizontale insnijdingen van één centimeter aan de bovenkant van de eerste verticale incisie die zich zijdelings uitstrekt vanaf de middellijn. Gebruik de tangen om de huid voorzichtig af te pellen uit de buikholte, gebruik het been om de achterste onderhuidse WAT te lokaliseren die geassocieerd moet blijven met de huid.Speld de uitgestrekte huid en volledig accijns het driehoekige inguinale WAT-depot van de basis van de achterpoot ventrally over de lies. Voor viscerale WAT-depotidentificatie en isolatie gebruikt u tangen om de dunne buikholtewand aan de basis van het borstbeen op te tillen en een incisie van één millimeter in het intentuur in het in tentweefsel te maken. Steek een mes van de irisschaar in de snede en maak een vier tot vijf centimeter dalende verticale incisie vanaf de bovenkant van de buikholte naar het rectum.Maak twee horizontale insnijdingen van één centimeter aan de boven- en onderkant van de verticale incisie die zich zijdelings uitstrekt van de middellijn en gebruik de tangen om het buikvlies terug te pellen om de buikholteinhoud bloot te stellen. Dan pin het uitgestrekte peritoneum aan de dissectie pan om de WAT depots in de buikholte te oogsten. Voor de identificatie en isolatie van viscerale gonadale WAT, zoek de gonads en gebruik tangen op te heffen van de bijbehorende gonadale WAT, gebruik dan iris schaar om zorgvuldig accijnzen de WAT van de bieken.Om het perirenaldepot uit te roeien, de nier te lokaliseren en tangen te gebruiken om het nierweefsel op te heffen. Trek de nier naar de middellijn om een duidelijke scheiding tussen de perirenal en retroperitoneale depots te zien en de WAT direct geassocieerd met de nieren te zien. Verwijder vervolgens de bijnieren boven de nieren van de WAT.Voor retroperitoneale WAT identificatie en isolatie, til de nier naar de middellijn weer en gebruik iris schaar om zorgvuldig ontleden de retroperitoneale WAT van de achterste buikvlieswand. Om de popliteal WAT te isoleren, plaats de patella tegen de dissectie pan zorgen dat de popliteal fossa aan de achterkant van de knie naar boven wordt gericht. Gebruik de irisschaar om de huid voorzichtig te verwijderen van de basis van de achterpoot tot aan de voet.Gebruik de irisschaar om een snede te maken aan de inferieure rand van de mediale en laterale hoofden van de gastrocnemiusspier, gebruik de tangen om de spier op te tillen om het driehoekige poplitealdepot te onthullen. Gebruik vervolgens een irisschaar om het depot langs de natuurlijke weefselgrenzen te vereende. Hier worden de bruto anatomische locaties van onderhuidse, bruine, viscerale en popliteale depots getoond.De histologische kenmerken van de onderhuidse, bruine, viscerale, popliteale, constitutieve en gereguleerde mergpenen, intramusculaire en infrapatellar vetdepots kunnen worden geëvalueerd door standaard Hematoxylin en Eosin kleuring protocollen. De vetweefsels geïsoleerd met behulp van dit protocol kan worden gebruikt voor een breed scala van experimentele eindpunten, waaronder histologische analyse, moleculaire studies, en gen-en eiwitexpressie analyse. Field-wide standaardisatie van de identificatie van diverse vetdepots zal ons ongetwijfeld helpen ons begrip van hun moleculaire en metabolische kenmerken en hun differentiële bijdragen aan zowel lokale als systematische pathologische toestanden te bevorderen.

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Dissectie van 6,5 dpc muizenembryo&#39;s

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

Dissectie van de hippocampus dentate gyrus van de volwassen muis

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo beeldvorming en therapeutische behandelingen in een orthotope Muis Model van eierstokkanker

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Voorbereiding van adipose voorlopercellen van muis epididymale vetweefsels

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Efficiënte dissectie en cultuur van primaire muis retinale pigment epitheelcellen

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Inductie- en diverse beoordelingsindicatoren van experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

Isolatie en identificatie van vasculaire endotheelcellen uit verschillende vetdepots voor downstreamtoepassingen

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

Isolatie en identificatie van mesenchymale stamcellen afgeleid van vetweefsel van Sprague Dawley-ratten

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...