Name: identification and dissection of diverse mouse adipose depots
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

O.A.M. נתמכת על-ידי מענקי NIH DK062876 וDK092759; D.P.B. נתמך על ידי מדען רפואי אוניברסיטת מישיגן תוכנית הדרכה (T32GM007863), אוניברסיטת מישיגן תוכנית הדרכה באורגאוגנזה (T32HD007605), אוניברסיטת מישיגן מלגת רקהם ההצטיינות, ו טיילנול טיפול בעתיד.

כל הליכים בעלי חיים מבוצעים עם אישור של הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים (IACUC) של אוניברסיטת מישיגן.
1. המתת חסד
הערה: לצורך פרוטוקול וידאו זה, משתמשים בעכבר C57BL/6J בן 4 עד 6 חודשים.
<ol><li>הניחו את העכבר בתא מאדה, והתאימו את קצב הזרימה של isofלאנה ל-5% או יותר. . ...

<ol>
	<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ+at+a+glance.">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li><li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat.">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+lineages:+tracing+back+the+origins+of+fat.">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li><li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I.">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li><li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots.">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li><li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+and+Beige+Fat:+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation.">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li><li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ.">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adipose+Tissue+Atlas:+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents.">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed.">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099 (2014).</li><li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+regulation,+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues.">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li><li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marrow+Adipose+Tissue:+Trimming+the+Fat.">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li><li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+white+adipose+tissue:+a+new+component+of+the+thermogenic+response.">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li><li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+Adipocytes:+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets?.">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li><li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot.">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li><li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+Fat:+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes.">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li><li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+and+the+immune+system.">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li><li>Kloppenburg, A. I. -. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis:+the+infrapatellar+fat+pad.">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li><li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization,+Identification,+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots.">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174 (2014).</li><li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li><li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers.">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ.">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li><li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue.">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues.">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808 (2015).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo.">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li><li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration.">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084 (2013).</li><li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+(IMAT)+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints.">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230 (2015).</li><li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance.">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li><li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones:+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue.">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128 (2016).</li></ol>

כחשיבותו של המאפיינים המולקולריים והפונקציונליים המגוונים של אשכולות אדיפוציטים בדידים מזוהים יותר ויותר, הדבר חיוני שחוקרים בתוך השדה יזהו ומחסני כלים לניתוח נוסף. עד כה, קיימים פרוטוקולים מעטים ללוקליזציה ובידוד סטנדרטיים של מגוון רחב של מחסני עכבר. שיטות שפורסמו בעבר מתמקדות בעיקר ע...

הרקמות של אדיפוז משחקות תפקידים קריטיים בהומאוסטזיס הגוף המלא, כולל אחסון ושחרור של אנרגיה בתגובה לצרכים מקומיים וגלובליים, הומיאותרמיות והפרשת adipokines כדי להסדיר את איזון האנרגיה, מטבוליזם ותגובות החיסון1 , 2. adipocytes מופץ ברחבי הגוף במחסנים דיסקרטית, ובמקרים מסוימים לשרת תפקידים מיוחדים בתוך מיקרוסביבות שלהם3,4,5. מבחינה היסטורית, מחקר הרקמה האדיפוז התרכז ברקמת השומן הלבנה (WAT), ותפקידה בשמירה על הומאוסטזיס האנרגיה. האדיפוציטים ביותר מופצים בכל הגוף בתוך מחסני תת עורית וואט הקרביים. המאפיינים של מחסני אלה חשובים עבור הרגישות הדיפרנציאלית למחלות מטבולית. Adipocytes תת עורית, ממוקם מתחת לעור, היו קשורים עם הגנה השפעות מטבולית5. Adipocytes הקרביים, אשר מקיפים את האיברים החיוניים וכלולים בתוך הגונאדאל, perirenal, הצפק, מחסני מלנטל ו קרום הלב, מקושרים בדרך כלל להפרעות מטבולית, כולל סוכרת סוג 2 מחלות לב וכלי דם2 . בנוסף, למדו באופן נרחב רקמות שומן בצבע חום (BAT). חלבון בצבע חום וחום (adipocytes express) (UCP1) ולשחק תפקידים חשובים ב תרמוגנזה מסתגלת ו גלוקוז הומאוסטזיס6,7. Adipocytes חום קלאסי הם כלולים ב מחסן בת הגלימה8. אשכולות של adipocytes חום נמצאים גם במקומות אחרים, כולל supraclavicular, אינפרא-אדום השכמה, צוואר הרחם, פאראחוליה ו מחסני האבי העורקים8,9.
בנוסף המיקום שלהם בוואט וואט הגדולות והעטלף, adipocytes להתקיים נישות דיסקרטית ברחבי הגוף4, שם הם עשויים לבצע פונקציות מיוחדות בתוך מיקרוסביבות המתאימות שלהם. לדוגמה, מח עצם (BMAT) משמש כמאגר שומנים בדם, הוא מקור מרכזי של במחזור adiponectin, ואינטראקציה מקרוב עם אוסטאופתית, אוסטאוקיים, ותאים המטודטיים10,11. Adipocytes העורי תורמים תהליכים נרחבים, כולל ריפוי הפצע, תגובה חיסונית, הומיאותרמיות, ו זקיק השיער צמיחה12,13. עוד, adipocytes האפיציטים עשוי לייצר מספר adipokines ו נוגדנים להפעיל אפקטים מקומיים מערכתית על פיתוח והתקדמות של מחלת עורק כלילית14. התרחבות הוואט הבין-פנימי מתואם באופן חיובי לעמידות מוגברת, לתנגודת אינסולין מערכתית ולירידה בחוזק השרירים ובניידות15. בנוסף, עדיפוציטים popliteal לשמש מאגר השומנים להרחבת הלימפה במהלך זיהום16. בעוד התפקידים הספציפיים של מחסני שונות שונים הם בדרך כלל לא ידוע, מחסן הופה (התשתיות) בתוך הברך נחשב כיום לתרום לפתווגיות, כולל כאב בברך קדמי, אוסטיאוארתריטיס17.
בעוד הבדלים אזוריים באופי adipocyte ותפקוד נמצאים תחת מחקר אינטנסיבי, השדה מוגבל כרגע על ידי חוסר פרוטוקול מתוקננת לזיהוי וניתוח של מחסני עכבר מגוונים. שיטות שפורסמו בעבר תיארו בדרך כלל את הבידוד של אחד או שניים מחסני מסוים וחוסר רמת הפירוט הנדרש עבור כריתה אחידה18,19. הפרוטוקול המתואר בכתב יד זה מספק מדריך מקיף עבור המיקומים האנטומיים הספציפיים וצעדי הבידוד של הרבה מחסני עכברים שונים. למרות שהמחסנים בוואט הם המוקד העיקרי של כתב היד הזה, כריתה של עטלף הגלימה מתוארת אף היא בפרוטרוט. ניתן להשתמש ברקמות אדיפוז באמצעות פרוטוקול זה למגוון רחב של נקודות קצה נסיוניות, לרבות לימודי החולוגיה, היסטולוגיה וניתוחי ביטויים גנטיים.
מטרת כתב היד היא לספק לחוקרים פרוטוקול מפורט באופן ברור ומדויק, לזהות ולבודד בצורה בולטת וברורה פחות של מחסני עכברים (איור 1). משאב זה יקל על חקירה מלאה יותר של המאפיינים התפתחותיים, מולקולריים ופונקציונלי של adipocytes בתוך נישות מגוונות.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg"> איור 1: תיאור סכמטי של מחסני העכבר בפרוטוקול זה. תמונה זו הותאמה מ Bagchi et al., 20184. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-110-869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plates, untreated</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (dilute from 95%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps with curved tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89259-946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pan</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (sharp/blunt tip)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze sponges</td>
			<td>Vitality Medical</td>
			<td>2634</td>
			<td>Curity 4 x 4 inch gauze sponge, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handi-Pins for dissection</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors (straight)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470018-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>501017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100499-578</td>
			<td>Feather scalpel handle with blade, disposable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and dissection of diverse mouse adipose depots

רקמות אדיפוז הן איברים מורכבים עם מגוון רחב של פונקציות, כולל אחסון והגיוס של אנרגיה בתגובה לצרכים מקומיים וגלובליים, ללא צימוד של חילוף החומרים כדי ליצור חום, הפרשה של adipokines כדי לווסת את כל הגוף הומאוסטזיס ו תגובות החיסון. מחקר המתעוררים מזהה הבדלים אזוריים חשובים בפרופילים התפתחותיים, מולקולריים פונקציונלי של adipocytes ממוקם במחסנים דיסקרטית ברחבי הגוף. תכונות שונות של המחסנים הם רלוונטיים מבחינה רפואית מאז מחלות מטבולית לעתים קרובות להפגין אפקטים ספציפיים דיפו. פרוטוקול זה יספק לחוקרים אטלס אנטומי מפורט ומדריך לחיתוך לזיהוי ולניתוח מדויק ולכריתה של רקמות מגוונות של שומן העכבר. ניתוח מתוקננת של מחסני אדיפוז נפרדים יאפשר השוואות מפורטות של מאפיינים מולקולריים ומטבוליים שלהם ותרומות למצבים מקומיים ומערכתית הפתולוגיים בתנאים תזונתיים וסביבתיים שונים.

ניתן להשיג זיהוי מוצלח ובידוד של מחסני שימוש שונים בעכבר באמצעות הפרוטוקול המתואר לעיל. המיקומים האנטומיים הגולמי של תת עורית (A, E-F), חום (ב), הקרביים (C, D, G-J), ו popliteal (K) מחסני מוצגים באיור 2.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/...

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

אדיפוציטים קיימות במחסנים נפרדים ויש להם תפקידים מגוונים בתוך המיקרו-סביבות הייחודיות שלהם. כמו הבדלים אזוריים אופי ותפקוד הפונקציה נחשפים, זיהוי סטנדרטית בידוד של מחסני חיוני לקידום השדה. בזאת, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לגבי כריתה של מחסני שומן בעכבר.

זיהוי וניתוח של מחסני עכבר מגוונים

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

מתודולוגיה סטנדרטית לזיהוי ניתוח מחסני שומן בכל הגוף היא קריטית לחקירת הבדלים באופיים ותפקודם של אדיפוזיטים בתוך נישות אנטומיות דיסקרטיות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שזו שיטה אמינה ומדויקת לזיהוי וגירוש מחסנים נפוצים ופחות נחקרים של שומן מכרסמים. לזיהוי ובידוד של BAT בין-שרירי, השתמש במספריים איריס לחתוך אופקית לאורך הקצה התחתון של הרקמה התת עורית לפני של עכבר המתת דם בעקבות הגבול הטבעי של המחסן.בצע שני חתכים אנכיים לאורך הקצוות הצדדיים של המחסן בעקבות הגבולות הטבעיים של הרקמה. השתמש במקלפים כדי להפוך בזהירות את המחסן כדי לחשוף את רקמת השומן הבין-שרירית בצורת פרפר המוטמעת ברקמת השומן הלבנה. ואז בזהירות לנתח את BAT מן WAT שמסביב.לאחסן רקמות שומן במיכלים המתאימים לניתוח במורד הזרם. לזיהוי ובידוד של WAT תת עורי אחורי, מניחים את העכבר בתקורת השופים ומאבטחים את גפי החיה. השתמש במדפים כדי להרים את העור בבסיס עצם החזה ולעשות חתך עור מילימטר אחד.הכנס להב אחד של מספרי הקשתית לתוך החתך ולעשות חתך בעור קו האמצע ארבעה עד חמישה סנטימטרים החל בבסיס עצם החזה ועולה לבסיס הזנב. לאחר מכן, בצע שני חתכים אופקיים של סנטימטר אחד בחלק העליון של החתך האנכי הראשוני המשתרע באופן משני מהקיים. השתמש במקלפים כדי לקלף בזהירות את העור מן החלל צפי, להשתמש ברגל כדי לאתר את WAT תת עורי האחורי אשר צריך להישאר קשור עם העור.הצמד את העור המושט לחלוטין excise את מחסן WAT מפשעתי משולש מבסיס הישנבת ventrally על פני המפשעה. לזיהוי ובידוד של מחסן WAT הקרביים, השתמש במלקחיים כדי להרים את קיר חלל הציציוני הדק בבסיס עצם החזה ולעשות חתך של מילימטר אחד ברקמת האוהל. הכנס להב אחד של מספרי הקשתית לתוך החתך ולעשות חתך אנכי יורד ארבעה עד חמישה סנטימטרים מהחלק העליון של חלל הצפק לפי הטבעת.בצע שני חתכים אופקיים של סנטימטר אחד בחלק העליון והתחתון של החתך האנכי המשתרע באופן משני מקו האמצע ולהשתמש במטליות כדי לקלף בחזרה את צפק כדי לחשוף את תכולת חלל הבטן. לאחר מכן הצמד את הצביטה המושטת למחבת הניתוח כדי לקצור את מחסני WAT הכלולים בחלל הצפי. לזיהוי ובידוד של WAT gonadal הקרביים, לאתר את הקניונים ולהשתמש מלקחים כדי להרים את WAT gonadal הקשורים, ולאחר מכן להשתמש מספריים איריס כדי בזהירות excise WAT מן הקניונים.כדי להפוך את המחסן perirenal, לאתר את הכליה ולהשתמש מלקחיים כדי להרים את רקמת הכליה. משוך את הכליה אל קו האמצע כדי לראות חלוקה ברורה בין המחסנים perirenal ו retroperitoneal ובלות WAT הקשורים ישירות עם הכליות. לאחר מכן להסיר את בלוטות יותרת הכליה הממוקם מעל הכליות מן WAT.לזיהוי ובידוד של WAT רטרופריטוניאלי, הרימו שוב את הכליה עד קו האמצע ולהשתמש במספריים של הקשתית כדי לנתח בזהירות את ה- WAT הרטרופריטוניאלי מהקיר הקרדיוני האחורי. כדי לבודד את WAT popliteal, מניחים את פתלה נגד מחבת הניתוח דואג כי פוסה popliteal בחלק האחורי של הברך פונה כלפי מעלה. השתמש במספריים הקשתית כדי להסיר בזהירות את העור מבסיס hindlimb לרגל.השתמש מספריים איריס לעשות חתך בגבול נחות של ראשי המדיאלית והצלבי של שריר gastrocnemius, להשתמש במלקחים כדי להרים את השריר כדי לחשוף את המחסן פופוליטלי משולש. לאחר מכן השתמש מספריים איריס כדי למלמל את המחסן לאורך גבולות הרקמה הטבעית. כאן מוצגים המיקומים האנטומיים הגולמיים של מחסני עכבר תת עוריים, חומים, קרביים ופופליטיים.המאפיינים ההיסטולוגיים של מחסני הדם התת עוריים, החומים, הקרביים, הפופליטיים, המכוננים והוסדרים, המחסנים התוך שריריים והבלתי-פתילים יכולים להיות מוערכים על ידי פרוטוקולי הכתמת המטוקסילין ואאוסין סטנדרטיים. רקמות השומן המבודדות באמצעות פרוטוקול זה יכולות לשמש למגוון רחב של נקודות קצה ניסיוניות כולל ניתוח היסטולוגי, מחקרים מולקולריים וניתוח ביטויי גנים וחלבונים. סטנדרטיזציה שדה רחב של זיהוי מחסני שומן מגוונים ללא ספק יעזור לנו לקדם את ההבנה שלנו של המאפיינים המולקולריים והמטבוליים שלהם ואת תרומתם דיפרנציאלית הן מצבים פתולוגיים מקומיים ושיטתיים.

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Dissection של 6.5 עוברים DPC עכבר

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

Dissection של gyrus משוננת בהיפוקמפוס מתוך עכבר למבוגרים

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

הכנת תאי אדיפוס אבות מרקמות שומן אפידימליות עכבר

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

ניתוח יעיל ותרבות של תאי אפיתל פיגמנט רשתית העכבר הראשי

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

אינדוקציה ומדדי הערכה מגוונים של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

בידוד וזיהוי של תאי אנדותל וסקולריים ממחסני שומן נפרדים ליישומים במורד הזרם

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

בידוד וזיהוי תאי גזע מזנכימליים שמקורם ברקמת שומן של חולדות Sprague Dawley

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...