Name: identification and dissection of diverse mouse adipose depots
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

O.A.M. NIH अनुदान DK062876 और DK092759 द्वारा समर्थित है; D.P.B. मिशिगन चिकित्सा वैज्ञानिक प्रशिक्षण कार्यक्रम के विश्वविद्यालय (T32GM007863), Organogenesis में मिशिगन प्रशिक्षण कार्यक्रम के विश्वविद्यालय (T32HD007605), मिशिगन Rackham मेरिट फैलोशिप विश्वविद्यालय, और Tylenol भविष्य की देखभाल फैलोशिप द्वारा समर्थित है.

सभी पशु प्रक्रियाओं मिशिगन विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) के अनुमोदन के साथ प्रदर्शन कर रहे हैं.
1. यूथेनाइजेशन
नोट: इस वीडियो प्रोटोकॉल के प्रयोजन क?...

<ol>
	<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ+at+a+glance.">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li><li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat.">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+lineages:+tracing+back+the+origins+of+fat.">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li><li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I.">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li><li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots.">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li><li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+and+Beige+Fat:+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation.">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li><li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ.">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adipose+Tissue+Atlas:+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents.">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed.">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099 (2014).</li><li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+regulation,+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues.">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li><li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marrow+Adipose+Tissue:+Trimming+the+Fat.">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li><li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+white+adipose+tissue:+a+new+component+of+the+thermogenic+response.">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li><li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+Adipocytes:+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets?.">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li><li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot.">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li><li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+Fat:+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes.">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li><li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+and+the+immune+system.">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li><li>Kloppenburg, A. I. -. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis:+the+infrapatellar+fat+pad.">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li><li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization,+Identification,+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots.">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174 (2014).</li><li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li><li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers.">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ.">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li><li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue.">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues.">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808 (2015).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo.">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li><li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration.">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084 (2013).</li><li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+(IMAT)+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints.">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230 (2015).</li><li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance.">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li><li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones:+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue.">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128 (2016).</li></ol>

के रूप में असतत adipocyte समूहों के विविध आणविक और कार्यात्मक विशेषताओं के महत्व को तेजी से मान्यता प्राप्त है, यह महत्वपूर्ण है कि क्षेत्र के भीतर जांचकर्ताओं समान रूप से पहचान और आगे विश्लेषण के लिए उत्पा?...

वसा ऊतक पूरे शरीर homeostasis में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, भंडारण और स्थानीय और वैश्विक जरूरतों के जवाब में ऊर्जा की रिहाई सहित, thermoregulation, और adipokines के स्राव ऊर्जा संतुलन को विनियमित करने के लिए, चयापचय और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं1 , 2. आदिकोशिकाओं को पूरे शरीर में असतत डिपो में वितरित किया जाता है और कुछ मामलों में वे अपने सूक्ष्म वातावरण3,4,5में विशिष्ट भूमिका निभाते हैं . ऐतिहासिक रूप से, वसा ऊतक का अध्ययन सफेद वसा ऊतक (वैट) पर केंद्रित है, और ऊर्जा homeostasis को बनाए रखने में अपनी भूमिका. अधिकांश एडिपोसाइट्स को पूरे शरीर में त्वचीय और अंतरंग वाट डिपो में वितरित किया जाता है। इन डिपो की विशेषताओं चयापचय रोगों के लिए अंतर संवेदनशीलता के लिए महत्वपूर्ण हैं. त्वचा के नीचे स्थित उपत्वचा एडिपोसाइट्स, सुरक्षात्मक चयापचय प्रभाव5के साथ जुड़े रहे हैं। Visceral adipocytes, जो महत्वपूर्ण अंगों के चारों ओर और gonadal के भीतर निहित हैं, perirenal, retroperitoneal, omental और pericardial डिपो, आमतौर पर चयापचय विकारों से जुड़े हुए हैं, प्रकार सहित 2 मधुमेह और हृदय रोग2 . ब्राउन वसा ऊतकों (बैट) भी बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है. भूरे और भूरे रंग की तरह एडियोसाइट्स अयुग्मक प्रोटीन 1 (यूसीपी 1) कोव्यक्त करते हैं और अनुकूली तापजनन और ग्लूकोज होमियोस्टेसिस 6,7में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। क्लासिकल ब्राउन एडिपोसाइट्स इंटरस्कैपलर बैट डिपो8में समाहित होते हैं . भूरे रंग के एडिपोसाइट्स के गुच्छ अन्य स्थानों में भी पाए जाते हैं, जिनमें सुप्राक्लेव्युलर, इन्फ्रा/
प्रमुख वाट और बैट डिपो में उनके स्थान के अलावा, adipocytes शरीर4भर में असतत niches में मौजूद हैं, जहां वे अपने संबंधित microenvironments के भीतर विशेष कार्य कर सकते हैं. उदाहरण के लिए, अस्थि मज्जा वसा ऊतक (BMAT) एक लिपिड जलाशय के रूप में कार्य करता है, adiponectin घूम का एक प्रमुख स्रोत है, और बारीकी से ऑस्टियोब्लास्ट्स, ऑस्टियोक्लेस्ट, और hematopoietic कोशिकाओं के साथ सूचना का आदान प्रदान10,11. Dermal adipocytes घाव भरने, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, थर्मोनियमन, और बाल कूप विकास12,13सहित व्यापक प्रक्रियाओं के लिए योगदान करते हैं। इसके अलावा, एपिकार्डियल एडिपोसाइट्स कई एडिपोकिन और कीमोकिन का उत्पादन कर सकते हैं जो कोरोनरी धमनी रोग14के विकास और प्रगति पर स्थानीय और प्रणालीगत प्रभाव डालते हैं। अंतर/इंट्रामस्क्युलर वॉट का विस्तार वृद्धि हुई adiposity, प्रणालीगत इंसुलिन प्रतिरोध, और मांसपेशियों की शक्ति और गतिशीलता15में कमी के साथ सकारात्मक सहसंबद्ध किया गया है। इसके अलावा, popliteal adipocytes संक्रमण16के दौरान लसीका विस्तार के लिए एक लिपिड जलाशय के रूप में सेवा करते हैं. जबकि विभिन्न संधिक डिपो की विशिष्ट भूमिकाआम तौर पर अज्ञात है, घुटने के भीतर हॉफा डिपो (इन्फ्रापेटलर) अब पूर्वकाल घुटने के दर्द और पुराने ऑस्टियोआर्थराइटिस17सहित रोगों में योगदान करने के लिए सोचा है।
जबकि adipocyte चरित्र और समारोह में क्षेत्रीय मतभेद गहन अध्ययन के तहत कर रहे हैं, क्षेत्र वर्तमान में पहचान और विविध माउस डिपो के विच्छेदन के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल की कमी से सीमित है. पहले प्रकाशित विधियों में आम तौर पर एक या दो विशिष्ट डिपोों के पृथक्करण का वर्णन किया जाता था और एक समान उच्छेदन18,19के लिए आवश्यक विस्तार के स्तर की कमी होती थी . इस पांडुलिपि में वर्णित प्रोटोकॉल विशिष्ट परमाणु स्थानों और कई अलग अलग माउस वसा डिपो के अलगाव कदम के लिए एक व्यापक गाइड प्रदान करता है. हालांकि वाट डिपो इस पांडुलिपि का प्राथमिक ध्यान केंद्रित कर रहे हैं, interscapular बैट के चीरा भी विस्तार से वर्णित है. इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके उत्पादित वसा ऊतकों का उपयोग विभिन्न प्रकार के प्रयोगात्मक एंडपॉइंट के लिए किया जा सकता है, जिसमें एक्सप्लांट अध्ययन, ऊतक विज्ञान, और जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण शामिल हैं।
इस पांडुलिपि का लक्ष्य जांचकर्ताओं को एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करना है ताकि प्रमुख और कम अध्ययन वाले माउस वसा डिपो (चित्र1) दोनों की स्पष्ट रूप से और ठीक से पहचान और अलग-अलग किया जा सके। इस संसाधन के विकास की एक और अधिक पूरी जांच की सुविधा होगी, आणविक, और विविध niches के भीतर apocytes के कार्यात्मक विशेषताओं.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg"> चित्र 1: माउस वसा डिपो का योजनाबद्ध चित्रण इस प्रोटोकॉल में विच्छेदित है। इस छवि को बागची एट अल से अनुकूलित किया गया है, 20184. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-110-869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plates, untreated</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (dilute from 95%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps with curved tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89259-946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pan</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (sharp/blunt tip)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze sponges</td>
			<td>Vitality Medical</td>
			<td>2634</td>
			<td>Curity 4 x 4 inch gauze sponge, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handi-Pins for dissection</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors (straight)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470018-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>501017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100499-578</td>
			<td>Feather scalpel handle with blade, disposable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and dissection of diverse mouse adipose depots

एडिपोज ऊतक कार्यों की एक विस्तृत सरणी के साथ जटिल अंग हैं, जिसमें स्थानीय और वैश्विक जरूरतों के जवाब में ऊर्जा का भंडारण और जुटाना, गर्मी उत्पन्न करने के लिए चयापचय का असहयोग, और पूरे शरीर के homeostasis को विनियमित करने के लिए एडिपोकिन्स का स्राव शामिल है और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं. उभरते अनुसंधान पूरे शरीर में असतत डिपो में स्थित adipocytes के विकास, आणविक, और कार्यात्मक प्रोफाइल में महत्वपूर्ण क्षेत्रीय मतभेदों की पहचान है. डिपो के विभिन्न गुण चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक हैं क्योंकि चयापचय रोग अक्सर डिपो-विशिष्ट प्रभावप्रदर्शित करते हैं। इस प्रोटोकॉल के साथ जांचकर्ताओं एक विस्तृत शारीरिक एटलस और विच्छेदन गाइड reproduible और सटीक पहचान और विविध माउस वसा ऊतकों के चीरा के लिए प्रदान करेगा. असतत वसा डिपो के मानकीकृत विच्छेदन उनके आणविक और चयापचय विशेषताओं और विभिन्न पोषण और पर्यावरणीय स्थितियों के तहत स्थानीय और प्रणालीगत रोगग्रस्त राज्यों के लिए योगदान की विस्तृत तुलना की अनुमति देगा.

विभिन्न माउस वसा डिपो की सफल पहचान और अलगाव ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग कर प्राप्त किया जा सकता है। अधत्वकात् (ए, ई-एफ), ब्राउन (बी), अंतरंग (सी, डी, जी-जे) के सकल शारीरिक स्थानों और पॉपलाइटल (के...

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Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

एडिपोसाइट्स असतत डिपो में मौजूद हैं और उनके अद्वितीय microenvironments के भीतर विविध भूमिका है. के रूप में adipocyte चरित्र और समारोह में क्षेत्रीय मतभेद का पर्दाफाश कर रहे हैं, मानकीकृत पहचान और डिपो के अलगाव क्षेत्र की प्रगति के लिए महत्वपूर्ण है. इसमें, हम विभिन्न माउस वसा डिपो के चीरा के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।

पहचान और विविध माउस एपोज़ डिपो के विच्छेदन

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

पूरे शरीर में एडिपोस डिपो की पहचान करने और विच्छेदन करने के लिए एक मानकीकृत पद्धति असतत शारीरिक निकस के भीतर एडिपोसाइट्स के चरित्र और कार्य में अंतर की जांच के लिए महत्वपूर्ण है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह आम और कम अध्ययन किए गए कृंतक आदिपोज डिपो दोनों की पहचान करने और उत्तेजित करने के लिए एक विश्वसनीय और सटीक तरीका है। इंटरकैप्युलर बैट की पहचान और अलगाव के लिए, डिपो की प्राकृतिक सीमा के बाद एक इच्छामृत्यु माउस के पूर्वकाल चमड़े के नीचे के किनारे के साथ क्षैतिज रूप से कटौती करने के लिए आईरिस कैंची का उपयोग करें।ऊतक की प्राकृतिक सीमाओं के बाद डिपो के पार्श्व किनारों के साथ दो ऊर्ध्वाधर चीरों बनाओ। सफेद आदिपोस ऊतक के भीतर एम्बेडेड तितली के आकार के अंतरकप्तान भूरे रंग के वसा ऊतक को प्रकट करने के लिए डिपो को सावधानीपूर्वक फ्लिप करने के लिए संदंश का उपयोग करें। फिर ध्यान से बल्ले को आसपास के वाट से दूर विच्छेदन करें।डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए उपयुक्त कंटेनरों में एडीपोज ऊतकों को स्टोर करें। पीछे के चमड़े के नीचे वाट की पहचान और अलगाव के लिए, माउस को रीढ़ की स्थिति में रखें और जानवर के अंगों को सुरक्षित करें। उरोस्थि के आधार पर त्वचा को उठाने और एक मिलीमीटर त्वचा चीरा बनाने के लिए संदंश का उपयोग करें।कट में आईरिस कैंची का एक ब्लेड डालें और स्टर्नम के आधार पर शुरू होने वाले चार से पांच सेंटीमीटर मिडलाइन त्वचा चीरा बनाएं और पूंछ के आधार पर आरोही करें। इसके बाद, प्रारंभिक ऊर्ध्वाधर चीरा के शीर्ष पर दो एक सेंटीमीटर क्षैतिज चीरों को मिडलाइन से बाद में विस्तारित करें। पेरिटोनियल गुहा से त्वचा को ध्यान से छीलने के लिए संदंश का उपयोग करें, पीछे के चमड़े के नीचे वाट का पता लगाने के लिए पैर का उपयोग करें जो त्वचा से जुड़ा रहना चाहिए।फैलाया हुआ त्वचा पिन और पूरी तरह से कमर भर में हिंडलिब वेंट्रिल के आधार से त्रिकोणीय इंजिनियल वाट डिपो आबकारी। आंत वाट डिपो पहचान और अलगाव के लिए, उरोस्थि के आधार पर पतली पेरिटोनियल गुहा दीवार को उठाने और टैलेंटेड ऊतक में एक मिलीमीटर चीरा बनाने के लिए संदंश का उपयोग करें। कट में आईरिस कैंची का एक ब्लेड डालें और पेरिटोनियल गुहा के ऊपर से मलाशय तक चार से पांच सेंटीमीटर उतरते ऊर्ध्वाधर चीरा बनाएं।ऊर्ध्वाधर चीरा के ऊपर और नीचे दो एक सेंटीमीटर क्षैतिज चीरों को मिडलाइन से बाद में विस्तारित करें और पेट की गुहा सामग्री को बेनकाब करने के लिए पेरिटोनम को वापस छीलने के लिए संदंश का उपयोग करें। फिर पेरिटोनियल गुहा के भीतर निहित वाट डिपो की कटाई के लिए विच्छेदन पैन में फैलाया हुआ पेरिटोनम पिन करें। आंत गोनाडल वाट की पहचान और अलगाव के लिए, संबंधित गोनाडल वाट को उठाने के लिए गोनाड का पता लगाएं और संदंश का उपयोग करें, फिर गोनाड से वाट को सावधानीपूर्वक उत्पादित करने के लिए आईरिस कैंची का उपयोग करें।पेरिरेनल डिपो को उत्पादित करने के लिए, गुर्दे का पता लगाएं और गुर्दे के ऊतकों को उठाने के लिए संदंश का उपयोग करें। पेरिरल और रेट्रोपेरिटोनियल डिपो के बीच एक स्पष्ट विभाजन देखने के लिए गुर्दे को मिडलाइन पर खींचें और सीधे गुर्दे से जुड़े वाट को उत्पादित करें। इसके बाद वाट से गुर्दे के ऊपर स्थित अधिवृक्क ग्रंथियों को हटा दें।रेट्रोपेरिटोनियल वाट पहचान और अलगाव के लिए, गुर्दे को फिर से मिडलाइन पर उठाएं और पीछे के पेरिटोनियल दीवार से रेट्रोपेरिटोनियल वाट को ध्यान से विच्छेदन करने के लिए आईरिस कैंची का उपयोग करें। पॉपलाइटल वाट को अलग करने के लिए, विच्छेदन पैन के खिलाफ पटेला रखें ध्यान रखें कि घुटने के पीछे पॉपलाइटल फोसा ऊपर की ओर सामना कर रहा है। हिंडलिब के बेस से लेकर पैर तक त्वचा को सावधानी से निकालने के लिए आईरिस कैंची का इस्तेमाल करें।गैस्ट्रोकनेमियस मांसपेशी के मध्यवर्ती और पार्श्व सिर की अवर सीमा पर कटौती करने के लिए आईरिस कैंची का उपयोग करें, त्रिकोणीय पॉपलाइटल डिपो को प्रकट करने के लिए मांसपेशियों को उठाने के लिए संदंश का उपयोग करें। फिर प्राकृतिक ऊतक सीमाओं के साथ डिपो आबकारी करने के लिए आईरिस कैंची का उपयोग करें। यहां, माउस चमड़े के नीचे, भूरे, आंत, और पॉपलाइटल डिपो के सकल शारीरिक स्थानों को दिखाया गया है।चमड़े के नीचे, भूरे, आंत, पॉपलाइटल, संविलियन, और विनियमित मज्जा आदिपोज, इंट्रामस्क्युलर, और इन्फ्रापेटलर एडिपोस डिपो की हिस्टोटोलॉजिकल विशेषताओं का मूल्यांकन मानक हेमटॉक्सीलिन और ईओसिन स्टेनिंग प्रोटोकॉल द्वारा किया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके अलग किए गए एडीपोज ऊतकों का उपयोग विभिन्न प्रकार के प्रयोगात्मक अंत बिंदुओं के लिए किया जा सकता है जिनमें हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण, आणविक अध्ययन और जीन और प्रोटीन अभिव्यक्ति विश्लेषण शामिल हैं। विविध आदिपोज डिपो की पहचान के क्षेत्र-व्यापी मानकीकरण से निस्संदेह हमें उनकी आणविक और मेटाबोलिक विशेषताओं और स्थानीय और व्यवस्थित दोनों राज्यों में उनके अंतर योगदान के बारे में हमारी समझ को आगे बढ़ाने में मदद मिलेगी ।

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

6.5 डीपीसी माउस भ्रूण के विच्छेदन

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

वयस्क माउस से hippocampal दांतेदार गाइरस के विच्छेदन

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Vivo इमेजिंग और डिम्बग्रंथि के कैंसर के एक Orthotopic माउस मॉडल में चिकित्सीय उपचार में

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

माउस एपिडिडिमल एडिपोस ऊतकों से आदिपोज प्रोजेनिटर कोशिकाओं की तैयारी

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

प्राथमिक माउस रेटिना वर्णक एपिथेलियल कोशिकाओं की कुशल विच्छेदन और संस्कृति

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

प्रायोगिक ऑटोम्यून्यून एन्सेफलोमाइलाइटिस के प्रेरण और विविध मूल्यांकन संकेतक

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए अलग-अलग वसा डिपो से संवहनी एंडोथेलियल कोशिकाओं का अलगाव और पहचान

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

"स्प्राग डॉवले चूहों के वसा ऊतक से प्राप्त मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं का अलगाव और पहचान"

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...