Name: identification and dissection of diverse mouse adipose depots
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

O.A.M. er støttet av NIH tilskudd DK062876 og DK092759; D.P.B. er støttet av University of Michigan medisinsk forsker opplæringsprogram (T32GM007863), University of Michigan Training program i organogenesen (T32HD007605), University of Michigan Rackham Merit Fellowship, og Tylenol Future Care Fellowship.

Alle dyr prosedyrer er utført med godkjennelse av den institusjonelle Animal Care og use Committee (IACUC) ved University of Michigan.
1. euthanization
Merk: For hensikten med denne video protokollen, er 4 til 6 måneder gamle C57BL/6J mus brukt.
<ol><li>Plasser musen i en isoflurane fordamper kammer og justere isoflurane strømningshastighet til 5% eller høyere. Fortsett å isoflurane eksponeringen til ett minutt etter at pusten er stoppet. Der...

<ol>
	<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ+at+a+glance.">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li><li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat.">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+lineages:+tracing+back+the+origins+of+fat.">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li><li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I.">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li><li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots.">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li><li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+and+Beige+Fat:+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation.">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li><li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ.">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adipose+Tissue+Atlas:+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents.">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed.">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099 (2014).</li><li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+regulation,+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues.">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li><li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marrow+Adipose+Tissue:+Trimming+the+Fat.">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li><li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+white+adipose+tissue:+a+new+component+of+the+thermogenic+response.">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li><li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+Adipocytes:+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets?.">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li><li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot.">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li><li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+Fat:+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes.">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li><li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+and+the+immune+system.">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li><li>Kloppenburg, A. I. -. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis:+the+infrapatellar+fat+pad.">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li><li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization,+Identification,+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots.">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174 (2014).</li><li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li><li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers.">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ.">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li><li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue.">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues.">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808 (2015).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo.">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li><li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration.">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084 (2013).</li><li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+(IMAT)+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints.">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230 (2015).</li><li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance.">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li><li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones:+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue.">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128 (2016).</li></ol>

Ettersom viktigheten av de mangfoldige molekylære og funksjonelle egenskapene til diskrete adipocyte klynger blir stadig mer anerkjent, er det avgjørende at undersøkere i felten kan identifisere og toll lagre for videre analyser. Til dags dato finnes det få protokoller for standardisert lokalisering og isolering av det brede spekteret av mus fettlagre. Tidligere publiserte metoder er fokusert primært på en eller to depot og mangler de nødvendige detaljene for ensartet identifisering og fjerning av ulike etterforsk...

Fettvev spille kritiske roller i hele kroppen homeostase, inkludert lagring og frigjøring av energi som svar på lokale og globale behov, termoregulering, og sekresjon av adipokines å regulere energibalansen, metabolisme og immunresponser1 , 2. adipocytter er fordelt over hele kroppen i diskrete lagre, og i noen tilfeller tjene spesialiserte roller innenfor sine microenvironments3,4,5. Historisk har studiet av fettvev sentrert på hvitt fettvev (WAT), og dens rolle i å opprettholde energi homeostase. De fleste adipocytter er fordelt over hele kroppen i subkutan og visceral WAT lagre. Egenskapene til disse lagre er viktig for differensial mottakelighet for metabolske sykdommer. Subkutan adipocytter, som ligger under huden, har vært forbundet med beskyttende metabolske effekter5. Visceral adipocytter, som omgir vitale organer og finnes i gonadal, perirenal, retroperitoneal, omental og perikard lagre, er vanligvis knyttet til metabolske forstyrrelser, inkludert type 2 diabetes og kardiovaskulær sykdom2 . Brunt fettvev (BAT) har også blitt studert grundig. Brun og brun-lignende adipocytter uttrykke frakobling protein 1 (UCP1) og spille viktige roller i adaptive termotilblivelsen og glukose homeostase6,7. Klassiske brune adipocytter finnes i interscapular BAT Depot8. Klynger av brune adipocytter er også funnet i andre steder, inkludert supraklavikulære, infra/subscapular, cervical, paravertebral og periaortic Depot8,9.
I tillegg til deres plassering i store WAT og BAT Depot, adipocytter finnes i diskrete nisjer i hele kroppen4, hvor de kan utføre spesialiserte funksjoner innenfor sine respektive microenvironments. For eksempel, benmarg fettvev (BMAT) fungerer som et lipid reservoar, er en viktig kilde til sirkulerende adiponectin, og tett samhandler med osteoblaster, osteoklaster, og blodkreft cellene10,11. Dermal adipocytter bidrar til omfattende prosesser, inkludert sår helbredelse, immunrespons, termoregulering og hårsekken vekst12,13. Videre kan epicardial adipocytter produsere flere adipokines og chemokiner som utøver lokale og systemiske effekter på utvikling og progresjon av koronar arteriesykdom14. Utvidelse av Inter/intramuskulær WAT har blitt positivt korrelert med økt adiposity, systemisk insulinresistens, og redusert muskelstyrke og mobilitet15. I tillegg popliteal adipocytter tjene som et lipid reservoar for lymfatisk ekspansjon under infeksjon16. Mens de spesifikke rollene til ulike ledd lagre er generelt ukjent, er Hoffa Depot (infrapatellar) i kneet nå antatt å bidra til patologi, inkludert fremre kne smerter og slitasjegikt17.
Mens regionale forskjeller i adipocyte karakter og funksjon er under intens studie, er feltet for tiden begrenset av mangelen på en standardisert protokoll for identifisering og Disseksjon av ulike mus lagre. Tidligere publiserte metoder har vanligvis beskrevet isolering av ett eller to bestemte lagre og mangler det nivået av detaljer som kreves for ensartet forbrukeravgift18,19. Protokollen som er beskrevet i dette manuskriptet gir en omfattende guide for de spesifikke anatomiske steder og isolasjons trinn av mange forskjellige mus fettlagre. Selv om WAT Depot er Hovedfokuset i dette manuskriptet, er det fjerning av interscapular BAT også beskrevet i detalj. Fettvev excised bruker denne protokollen kan brukes til en rekke eksperimentelle endepunkter, inkludert explant studier, histologi, og genuttrykk analyser.
Målet med dette manuskriptet er å gi undersøkere en detaljert protokoll for å tydelig og presist identifisere og isolere både fremtredende og mindre studert mus fettlagre (figur 1). Denne ressursen vil lette en mer fullstendig undersøkelse av de utviklingsmessige, molekylære og funksjonelle egenskapene til adipocytter innen ulike nisjer.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg"> Figur 1: skjematisk fremstilling av muse fettlagre dissekert i denne protokollen. Dette bildet er tilpasset fra bagchi et al., 20184. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-110-869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plates, untreated</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (dilute from 95%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps with curved tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89259-946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pan</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (sharp/blunt tip)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze sponges</td>
			<td>Vitality Medical</td>
			<td>2634</td>
			<td>Curity 4 x 4 inch gauze sponge, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handi-Pins for dissection</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors (straight)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470018-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>501017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100499-578</td>
			<td>Feather scalpel handle with blade, disposable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and dissection of diverse mouse adipose depots

Fettvev er komplekse organer med et bredt spekter av funksjoner, inkludert lagring og mobilisering av energi som svar på lokale og globale behov, frakobling av metabolisme for å generere varme, og sekresjon av adipokines å regulere hele kroppen homeostase og immunresponser. Emerging forskning er å identifisere viktige regionale forskjeller i utviklingen, molekylær, og funksjonelle profiler av adipocytter ligger i diskrete lagre i hele kroppen. Ulike egenskaper av Depot er medisinsk relevant siden metabolske sykdommer ofte demonstrere Depot-spesifikke effekter. Denne protokollen vil gi etterforskere en detaljert anatomisk Atlas og disseksjon guide for reproduserbar og nøyaktig identifisering og fjerning av ulike mus fettvev. Standardisert Disseksjon av diskrete fettlagre vil tillate detaljerte sammenligninger av deres molekylære og metabolske egenskaper og bidrag til lokale og systemiske patologisk tilstander under ulike ernæringsmessige og miljømessige forhold.

Vellykket identifisering og isolering av ulike mus fettlagre kan oppnås ved hjelp av protokollen beskrevet ovenfor. Den grove anatomiske plasseringen av subkutan (A, E-F), brunt (B), visceral (C, D, G-J), og popliteal (K) lagre er vist i figur 2.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig2.jpg"> Figur 2: brutto anatomiske steder av mus fettlagre. B...

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipocytter finnes i diskrete lagre og har ulike roller innenfor deres unike microenvironments. Som regionale forskjeller i adipocyte karakter og funksjon er avdekket, standardisert identifisering og isolering av lagre er avgjørende for fremme av feltet. Heri, presenterer vi en detaljert protokoll for fjerning av ulike mus fett Depot.

Identifisering og Disseksjon av diverse mus fettlagre

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

En standardisert metodikk for å identifisere og dissekere fettdepoter i hele kroppen er avgjørende for undersøkelse av forskjeller i karakter og funksjon av adipocytter innenfor diskrete anatomiske nisjer. Den største fordelen med denne teknikken er at det er en pålitelig og nøyaktig metode for å identifisere og eksponere både vanlige og mindre studerte gnagerdiponeringsdepoter. For identifisering og isolering av interscapular BAT, bruk iris saks til å kutte horisontalt langs den nedre kanten av fremre subkutan vev av en eutanisert mus etter den naturlige grensen til depotet.Lag to vertikale snitt langs sidekantene av depotet etter vevets naturlige grenser. Bruk tang til å forsiktig vende opp depotet for å avsløre det sommerfuglformede interscapular brune fettvevet innebygd i det hvite fettvevet. Deretter dissekerer BAT forsiktig bort fra det omkringliggende WAT.Oppbevar fettvev i egnede beholdere for nedstrøms analyse. For identifisering og isolering av bakre subkutan WAT, plasser musen i liggende stilling og fest dyrets lemmer. Bruk tang for å løfte opp huden ved foten av brystbenet og gjøre en millimeter hud snitt.Sett inn ett blad av iris saks i kuttet og gjør en fire til fem centimeter midtlinjet hud snitt som begynner ved bunnen av brystbenet og stigende til bunnen av halen. Deretter gjør to en centimeter horisontale snitt på toppen av det første vertikale snittet som strekker seg sidelengs fra midtlinjen. Bruk tangen til å forsiktig skrelle tilbake huden fra bukhinnen, bruk benet til å finne den bakre subkutane WAT som skal forbli forbundet med huden.Pin den utstrakte huden og helt avgiftsdirektoratet trekantet inguinal WAT depot fra bunnen av bakkulb ventrally over lysken. For visceral WAT depot identifikasjon og isolasjon, bruk tang for å løfte opp den tynne bukhinnehulen veggen ved foten av brystbenet og gjøre en en millimeter snitt i teltvevet. Sett inn ett blad av iris saks i kuttet og gjør en fire til fem centimeter synkende vertikalt snitt fra toppen av bukhinnen til endetarmen.Lag to en centimeter horisontale snitt på toppen og bunnen av det vertikale snittet som strekker seg sidelengs fra midtlinjen og bruker tangene til å skrelle tilbake bukhinnen for å avsløre bukhulens innhold. Fest deretter det utstrakte bukhinnen til disseksjonspannen for å høste WAT-depotene som finnes i bukhulen. For identifisering og isolering av visceral gonadal WAT, finn gonadene og bruk tang til å løfte opp den tilknyttede gonadal WAT, og bruk deretter irissaks til å forsiktig avgiftsdirektoratet WAT fra gonadene.For å avgiftsdirektoratet perirenal depot, finn nyrene og bruk tang for å løfte opp nyrevevet. Trekk nyrene til midtlinjen for å se en klar deling mellom perirenal og retroperitoneale depoter og avgiftsdirektoratet WAT direkte forbundet med nyrene. Fjern deretter binyrene som ligger over nyrene fra WAT.For retroperitoneal WAT identifikasjon og isolasjon, løft nyrene til midtlinjen igjen og bruk iris saks for å nøye dissekere retroperitoneal WAT fra bakre peritoneal veggen. For å isolere popliteal WAT, plasser patella mot disseksjonspannen, og ta vare på at popliteal fossa på baksiden av kneet vender oppover. Bruk iris saks for å forsiktig fjerne huden fra bunnen av baklimb til foten.Bruk iris saks for å gjøre et kutt på den underlegne grensen av mediale og laterale hoder av gastrocnemius muskelen, bruk tang til å løfte opp muskelen for å avsløre trekantet popliteal depot. Bruk deretter irissaks til å avgiftsdirektoratet depotet langs de naturlige vevsgrensene. Her vises de grove anatomiske plasseringene av mus subkutane, brune, viscerale og popliteale depoter.De histologiske egenskapene til subkutane, brune, viscerale, popliteal, konstitutive og regulerte margdipose, intramuskulære og infrapatellar fettdepoter kan evalueres av standard Hematoxylin og Eosin farging protokoller. Fettvevet isolert ved hjelp av denne protokollen kan brukes til et bredt spekter av eksperimentelle endepunkter, inkludert histologisk analyse, molekylære studier og gen- og proteinuttrykksanalyse. Standardisering av identifisering av ulike fettdepoter vil utvilsomt hjelpe oss med å fremme vår forståelse av deres molekylære og metabolske egenskaper og deres differensialbidrag til både lokale og systematiske patologiske tilstander.

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Fremstilling av fett stamceller fra mus epididymal fettvev

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Effektiv disseksjon og kultur av primære mus retinal pigment epitelceller

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Induksjon og ulike vurderingsindikatorer for eksperimentell autoimmun encefalopati

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

Isolering og identifisering av vaskulære endotelceller fra distinkte fettdepoter for nedstrømsapplikasjoner

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

Isolering og identifisering av mesenkymale stamceller avledet fra fettvev av Sprague Dawley-rotter

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...