Name: identification and dissection of diverse mouse adipose depots
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

O.A.M. stöds av NIH Grants DK062876 och DK092759; D.P.B. stöds av University of Michigan medicinsk vetenskapsman Training program (T32GM007863), University of Michigan utbildningsprogram i organogenes (T32HD007605), University of Michigan Rackham merit Fellowship, och Tylenol Future Care Fellowship.

Alla djurförsök utförs med godkännande av den institutionella djuromsorg och användning kommittén (IACUC) vid University of Michigan.
1. euthanization
Anmärkning: Vid tillämpningen av detta video protokoll används 4 till 6 månader gamla C57BL/6J möss.
<ol><li>Placera musen i en isofluran spridare kammare och justera isofluran flödet till 5% eller högre. Fortsätt exponeringen för isofluran till en minut efter att andningen har stanna...

<ol>
	<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ+at+a+glance.">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li><li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat.">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+lineages:+tracing+back+the+origins+of+fat.">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li><li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I.">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li><li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots.">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li><li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+and+Beige+Fat:+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation.">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li><li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ.">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adipose+Tissue+Atlas:+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents.">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed.">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099 (2014).</li><li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+regulation,+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues.">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li><li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marrow+Adipose+Tissue:+Trimming+the+Fat.">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li><li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+white+adipose+tissue:+a+new+component+of+the+thermogenic+response.">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li><li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+Adipocytes:+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets?.">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li><li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot.">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li><li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+Fat:+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes.">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li><li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+and+the+immune+system.">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li><li>Kloppenburg, A. I. -. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis:+the+infrapatellar+fat+pad.">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li><li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization,+Identification,+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots.">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174 (2014).</li><li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li><li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers.">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ.">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li><li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue.">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues.">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808 (2015).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo.">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li><li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration.">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084 (2013).</li><li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+(IMAT)+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints.">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230 (2015).</li><li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance.">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li><li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones:+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue.">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128 (2016).</li></ol>

Eftersom betydelsen av de olika molekylära och funktionella egenskaperna hos diskreta fettceller-kluster blir alltmer erkänd, är det viktigt att utredarna inom området enhetligt identifierar och accis fettdepåer för ytterligare analyser. Hittills finns få protokoll för standardiserad lokalisering och isolering av det breda utbudet av mus fettdepåer. Tidigare publicerade metoder är främst inriktade på en eller två depåer och saknar de detaljer som behövs för enhetlig identifiering och excision av olika utr...

Adipose vävnader spelar kritiska roller i hela kroppen homeostas, inklusive lagring och frisättning av energi som svar på lokala och globala behov, termoreglering, och utsöndring av adipokines att reglera energibalansen, metabolism och immunsvar1 , 2. adipocyter fördelas i hela kroppen i diskreta depåer, och i vissa fall tjäna specialiserade roller inom deras mikromiljöer3,4,5. Historiskt har studiet av fettvävnad centrerad på vit fettvävnad (WAT), och dess roll i att upprätthålla energi homeostas. De flesta adipocyter fördelas i hela kroppen i subkutan och visceral WAT depåer. Egenskaperna hos dessa depåer är viktiga för differentiell känslighet för metabola sjukdomar. Subkutan adipocyter, ligger under huden, har förknippats med skyddande metabola effekter5. Visceral adipocyter, som omger vitala organ och ingår i gonadal, perirenal, retroperitoneal, omental och perikardiell depåer, är ofta kopplade till metabola sjukdomar, inklusive typ 2 diabetes och hjärt-kärlsjukdom2 . Bruna fettvävnader (BAT) har också studerats utförligt. Brun och brun-liknande adipocyter Express unkoppling protein 1 (UCP1) och spela viktiga roller i adaptiv thermogenesis och glukos homeostas6,7. Klassiska bruna adipocyter ingår i interscapular BAT Depot8. Kluster av bruna adipocyter finns också på andra platser, inklusive supraclavicular, infra/subscapular, cervikal, paravertebral och periaortic depåer8,9.
Förutom deras placering i stora WAT och BAT depåer, adipocyter finns i diskreta nischer i hela kroppen4, där de kan utföra specialiserade funktioner inom sina respektive mikromiljöer. Till exempel, benmärg fettvävnad (BMAT) fungerar som en lipid reservoar, är en viktig källa till cirkulerande adiponectin, och nära interagerar med osteoblaster, osteoklaster, och hematopoietiska celler10,11. Dermal adipocyter bidra till utbredda processer, inklusive sårläkning, immunsvar, termoreglering, och hårfollikeltillväxt12,13. Ytterligare, epikardiell adipocyter kan producera flera adipokines och chemokines som utövar lokala och systemiska effekter på utveckling och progression av kranskärlssjukdom14. Expansion av Inter/intramuskulär WAT har varit positivt korrelerad med ökad Adiposity, systemisk insulinresistens, och minskad muskelstyrka och rörlighet15. Dessutom, popliteal adipocyter fungera som en lipid reservoar för lymfatiska expansion under infektion16. Medan de specifika rollerna för olika led depåer är i allmänhet okända, Hoffa Depot (infrapatellar) i knäet är nu tänkt att bidra till patologier, inklusive främre knäsmärta och artros17.
Medan regionala skillnader i fettceller-tecken och-funktion är under intensiv undersökning begränsas området för närvarande av avsaknaden av ett standardiserat protokoll för identifiering och dissektion av olika mus depåer. Tidigare publicerade metoder har typiskt beskrivit isoleringen av en eller två specifika depåer och saknar den detaljnivå som krävs för enhetlig excision18,19. Det protokoll som beskrivs i detta manuskript ger en omfattande guide för de specifika anatomiska platser och isolerings steg av många olika mus fettdepåer. Även om WAT depåer är den primära fokus för detta manuskript, excision av interscapular BAT beskrivs också i detalj. Fettvävnad som exciseras med detta protokoll kan användas för en mängd olika experimentella endpoints, inklusive explantstudier, histologi och gen uttrycks analyser.
Målet med detta manuskript är att förse utredarna med ett detaljerat protokoll för att tydligt och precist identifiera och isolera både framstående och mindre studerade mus-fett-depåer (figur 1). Denna resurs kommer att underlätta en mer fullständig utredning av de utvecklingsmässiga, molekylära och funktionella egenskaperna hos adipocyter inom olika nischer.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg"> Figur 1: Schematisk avbildning av mus fettdepåer dissekeras i detta protokoll. Denna bild har anpassats från Bagchi et al., 20184. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-110-869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plates, untreated</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (dilute from 95%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps with curved tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89259-946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pan</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (sharp/blunt tip)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze sponges</td>
			<td>Vitality Medical</td>
			<td>2634</td>
			<td>Curity 4 x 4 inch gauze sponge, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handi-Pins for dissection</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors (straight)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470018-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>501017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100499-578</td>
			<td>Feather scalpel handle with blade, disposable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and dissection of diverse mouse adipose depots

Fettvävnader är komplexa organ med ett brett spektrum av funktioner, inklusive lagring och mobilisering av energi som svar på lokala och globala behov, unkoppling av metabolism för att generera värme, och utsöndring av adipokines att reglera hela kroppen homeostas och immunsvar. Framväxande forskning identifierar viktiga regionala skillnader i utvecklingsmässiga, molekylära och funktionella profiler av adipocyter ligger i diskreta depåer i hela kroppen. Olika egenskaper hos depåerna är medicinskt relevanta eftersom metabola sjukdomar ofta visar Depot-specifika effekter. Detta protokoll kommer att ge utredare med en detaljerad anatomisk Atlas och dissektion guide för reproducerbara och korrekt identifiering och excision av olika mus fettvävnader. Standardiserad dissektion av diskreta fettdepåer kommer att möjliggöra detaljerade jämförelser av deras molekylära och metabola egenskaper och bidrag till lokala och systemiska patologiska tillstånd under olika närings-och miljöförhållanden.

Framgångsrik identifiering och isolering av olika mus fettdepåer kan uppnås med hjälp av protokollet som beskrivs ovan. De anatomiska brutto lägena för subkutan (A, E-F), brun (B), visceral (C, D, G-J) och popliteal (K) depåer visas i figur 2.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig2.jpg"> Figur 2: anatomiska brutto positioner av mus fettdepåer.</...

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipocyter finns i diskreta depåer och har olika roller inom sina unika mikromiljöer. Eftersom regionala skillnader i fettceller karaktär och funktion är avslöjade, standardiserad identifiering och isolering av depåer är avgörande för avancemang av området. Häri presenterar vi ett detaljerat protokoll för excision av olika mus fettdepåer.

Identifiering och dissektion av olika mus adipose depåer

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

En standardiserad metodik för att identifiera och dissekera fettdepåer i hela kroppen är avgörande för undersökningen av skillnader i adipocyternas karaktär och funktion inom diskreta anatomiska nischer. Den största fördelen med denna teknik är att det är en tillförlitlig och korrekt metod för att identifiera och excisera både vanliga och mindre studerade gnagaraiposedepåer. För identifiering och isolering av interscapular BAT, använd iris sax för att skära horisontellt längs den nedre kanten av den främre subkutan vävnaden av en avlivad mus efter den naturliga gränsen av depån.Gör två vertikala snitt längs depåkanterna i depån efter vävnadens naturliga gränser. Använd tövråkar för att försiktigt knäppa upp depån för att avslöja den fjärilsformade interscapular brun fettvävnad inbäddade i den vita fettvävnaden. Sedan försiktigt dissekera BAT bort från den omgivande WAT.Förvara fettvävnader i lämpliga behållare för analys nedströms. För identifiering och isolering av bakre subkutan WAT, placera musen i ryggläge och säkra djurets lemmar. Använd forceps för att lyfta upp huden vid basen av bröstbenet och göra en en millimeter hud snitt.Sätt in ett blad av iris saxen i snittet och gör en fyra till fem centimeter mittlinjen hud snitt början vid basen av bröstbenet och stigande till basen av svansen. Därefter gör två en centimeter horisontella snitt i toppen av den ursprungliga vertikala snitt sträcker sig i ett lateralt från mittlinjen. Använd tövövorna för att noggrant skala tillbaka huden från peritoneal hålighet, använd benet för att lokalisera den bakre subkutan WAT som bör förbli förknippade med huden.Pin utsträckt huden och helt punktskatt den triangulära inguinal WAT depot från basen av bakkvisten ventrally över ljumsken. För visceral WAT depot identifiering och isolering, använd tuppar för att lyfta upp den tunna bukhålan väggen vid basen av bröstbenet och göra en en millimeter snitt i den tältade vävnaden. Sätt in ett blad av iris saxen i snittet och gör en fyra till fem centimeter fallande vertikala snitt från toppen av peritoneal hålighet till ändtarmen.Gör två en centimeter horisontella snitt i toppen och botten av den vertikala snitt sträcker sig i ett lateralt från mittlinjen och använda tången att skala tillbaka bukhinnan för att exponera bukhålan innehållet. Sedan stift utsträckta bukhinnan till dissekering pan för att skörda WAT depåer som finns i bukhinnan hålighet. För identifiering och isolering av visceral gonadal WAT, lokalisera gonads och använda tuppar för att lyfta upp tillhörande gonadal WAT, sedan använda iris sax för att noggrant punktskatt wat från gonads.Till punktskatt perirenal depå, lokalisera njure och använda forceps för att lyfta upp njurvävnaden. Dra njuren till mittlinjen för att se en tydlig uppdelning mellan perirenal och retroperitoneal depåer och punktskatt wat direkt i samband med njurarna. Ta sedan bort binjurarna som ligger ovanför njurarna från WAT.För retroperitoneal WAT identifiering och isolering, lyfta njuren till mittlinjen igen och använda iris sax att noggrant dissekera retroperitoneal WAT från den bakre peritoneal väggen. För att isolera popliteal WAT, placera patella mot dissekering pan ta hand om att popliteal fossa på baksidan av knäet är vänd uppåt. Använd iris saxen för att försiktigt ta bort huden från basen av bakb till foten.Använd iris sax för att göra ett snitt vid sämre gränsen av mediala och laterala huvuden av gastrocnemius muskeln, använd tången för att lyfta upp muskeln för att avslöja den triangulära popliteal depå. Använd sedan iris sax för att punktskatt depån längs den naturliga vävnaden gränser. Här visas de grova anatomiska platserna för mus underhuds- , brun, visceral och popliteal depåer.De histologiska egenskaperna hos de subkutana, bruna, viscerala, popliteal, som utgör och regleras märgadipose, intramuskulära och infrapatellar adipose depåer kan utvärderas genom standard Protokoll Hematoxylin och Eosin färgning. De fettvävnader som isoleras med hjälp av detta protokoll kan användas för en mängd olika experimentella effektmått inklusive histologisk analys, molekylära studier och gen- och proteinuttrycksanalys. Fältomfattande standardisering av identifiering av olika fetter depåer kommer utan tvekan att hjälpa oss att ytterligare vår förståelse av deras molekylära och metaboliska egenskaper och deras differentiella bidrag till både lokala och systematiska patologiska stater.

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Dissekering av 6,5 DPC musembryon

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

Dissekering av hippocampus dentate gyrus från vuxen mus

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging och terapeutiska behandlingar i en Orthotopic musmodell av äggstockscancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Beredning av fett stamceller från mus epididymal fettvävnader

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Effektiv dissekering och kultur av primära mus retinal pigment epitelceller

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Induktion och olika bedömningsindikatorer för experimentell autoimmun encefalomyelit

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

Isolering och identifiering av vaskulära endotelceller från distinkta fettdepåer för nedströmsapplikationer

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

Isolering och identifiering av mesenkymala stamceller härrörande från fettvävnad från Sprague Dawley-råttor

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...