Name: identification and dissection of diverse mouse adipose depots
Uploaded: 2019-07-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

O.A.M. NıH hibe tarafından desteklenen DK062876 ve DK092759; D.P.B. University of Michigan tıp bilimcisi eğitim programı (T32GM007863), Michigan Üniversitesi Eğitim programı organogenesis (T32HD007605), Michigan Üniversitesi Rackham Merit Bursu ve Tylenol gelecekteki bakım bursu tarafından desteklenmektedir.

Tüm hayvan prosedürleri Michigan Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıAYUC) onayı ile gerçekleştirilir.
1. ötenizasyon
Not: Bu video protokolünün amacı için 4 ila 6 aylık C57BL/6J fareler kullanılır.
<ol><li>Fareyi bir izofluran Buharlaştırıcı odasına yerleştirin ve Isoflurane akış hızını% 5 veya daha büyük olarak ayarlayın. Solunum durduktan sonra bir dakika kadar Isoflurane pozlama devam edin...

<ol>
	<li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ+at+a+glance.">The adipose organ at a glance.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).</li><li>Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+talk+about+when+we+talk+about+fat.">What we talk about when we talk about fat.</a> Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocyte+lineages:+tracing+back+the+origins+of+fat.">Adipocyte lineages: tracing back the origins of fat.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1842 (3), 340-351 (2014).</li><li>Bagchi, D. P., Forss, I., Mandrup, S., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Niche+Determines+Adipocyte+Character+I.">SnapShot: Niche Determines Adipocyte Character I.</a> Cell Metabolism. 27 (1), 264-264 (2018).</li><li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+metabolic+implications+of+regional+differences+among+fat+depots.">Mechanisms and metabolic implications of regional differences among fat depots.</a> Cell Metabolism. 17 (5), 644-656 (2013).</li><li>Kajimura, S., Spiegelman, B. M., Seale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brown+and+Beige+Fat:+Physiological+Roles+beyond+Heat+Generation.">Brown and Beige Fat: Physiological Roles beyond Heat Generation.</a> Cell Metabolism. 22 (4), 546-559 (2015).</li><li>Frontini, A., Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+development+of+brown+adipocytes+in+the+murine+and+human+adipose+organ.">Distribution and development of brown adipocytes in the murine and human adipose organ.</a> Cell Metabolism. 11 (4), 253-256 (2010).</li><li>Zhang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adipose+Tissue+Atlas:+An+Image-Guided+Identification+of+Human-like+BAT+and+Beige+Depots+in+Rodents.">An Adipose Tissue Atlas: An Image-Guided Identification of Human-like BAT and Beige Depots in Rodents.</a> Cell Metabolism. 27, 252-262 (2018).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipocytes+arise+from+multiple+lineages+that+are+heterogeneously+and+dynamically+distributed.">Adipocytes arise from multiple lineages that are heterogeneously and dynamically distributed.</a> Nature Communications. 5, 4099 (2014).</li><li>Li, Z., Hardij, J., Bagchi, D. P., Scheller, E. L., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+regulation,+metabolism+and+function+of+bone+marrow+adipose+tissues.">Development, regulation, metabolism and function of bone marrow adipose tissues.</a> Bone. 110, 134-140 (2018).</li><li>Scheller, E. L., Cawthorn, W. P., Burr, A. A., Horowitz, M. C., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marrow+Adipose+Tissue:+Trimming+the+Fat.">Marrow Adipose Tissue: Trimming the Fat.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (6), 392-403 (2016).</li><li>Alexander, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+white+adipose+tissue:+a+new+component+of+the+thermogenic+response.">Dermal white adipose tissue: a new component of the thermogenic response.</a> The Journal of Lipid Research. 56 (11), 2061-2069 (2015).</li><li>Kruglikov, I. L., Scherer, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+Adipocytes:+From+Irrelevance+to+Metabolic+Targets?.">Dermal Adipocytes: From Irrelevance to Metabolic Targets?.</a> Trends in Endocrinology &amp; Metabolism. 27 (1), 1-10 (2016).</li><li>Iacobellis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+systemic+effects+of+the+multifaceted+epicardial+adipose+tissue+depot.">Local and systemic effects of the multifaceted epicardial adipose tissue depot.</a> Nature Reviews Endocrinology. 11 (6), 363-371 (2015).</li><li>Addison, O., Marcus, R. L., LaStayo, P. C., Ryan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+Fat:+A+Review+of+the+Consequences+and+Causes.">Intermuscular Fat: A Review of the Consequences and Causes.</a> International Journal of Endocrinology. 2014, 1-11 (2014).</li><li>Pond, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+tissue+and+the+immune+system.">Adipose tissue and the immune system.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 17-30 (2005).</li><li>Kloppenburg, A. I. -. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+player+in+knee+osteoarthritis:+the+infrapatellar+fat+pad.">An emerging player in knee osteoarthritis: the infrapatellar fat pad.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 15 (225), 1-9 (2013).</li><li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization,+Identification,+and+Excision+of+Murine+Adipose+Depots.">Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52174 (2014).</li><li>Casteilla, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods in Molecular Biology. 155, 1-22 (2008).</li><li>de Jong, J. M., Larsson, O., Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stringent+validation+of+mouse+adipose+tissue+identity+markers.">A stringent validation of mouse adipose tissue identity markers.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (12), E1085-E1105 (2015).</li><li>Cinti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adipose+organ.">The adipose organ.</a> Prostaglandins, Leukotrienes, and Essential Fatty Acids. 73 (1), 9-15 (2005).</li><li>Parlee, S. D., Lentz, S. I., Mori, H., MacDougald, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+size+and+number+of+adipocytes+in+adipose+tissue.">Quantifying size and number of adipocytes in adipose tissue.</a> Methods in Enzymology. 537, 93-122 (2014).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Region-specific+variation+in+the+properties+of+skeletal+adipocytes+reveals+regulated+and+constitutive+marrow+adipose+tissues.">Region-specific variation in the properties of skeletal adipocytes reveals regulated and constitutive marrow adipose tissues.</a> Nature Communications. 6, 7808 (2015).</li><li>Scheller, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+osmium+tetroxide+staining+with+microcomputerized+tomography+to+visualize+and+quantify+bone+marrow+adipose+tissue+in+vivo.">Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo.</a> Methods in Enzymology. 537, 123-139 (2014).</li><li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration.">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), e71084 (2013).</li><li>Pagano, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Regeneration+with+Intermuscular+Adipose+Tissue+(IMAT)+Accumulation+Is+Modulated+by+Mechanical+Constraints.">Muscle Regeneration with Intermuscular Adipose Tissue (IMAT) Accumulation Is Modulated by Mechanical Constraints.</a> PLoS One. 10 (12), e0144230 (2015).</li><li>Khan, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermuscular+and+perimuscular+fat+expansion+in+obesity+correlates+with+skeletal+muscle+T+cell+and+macrophage+infiltration+and+insulin+resistance.">Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance.</a> International Journal of Obesity. 39 (11), 1607-1618 (2015).</li><li>Sulston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Circulating+Adiponectin+in+Response+to+Thiazolidinediones:+Investigating+the+Role+of+Bone+Marrow+Adipose+Tissue.">Increased Circulating Adiponectin in Response to Thiazolidinediones: Investigating the Role of Bone Marrow Adipose Tissue.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 128 (2016).</li></ol>

Ayrık adilosit kümelerinin farklı moleküler ve fonksiyonel özelliklerinin önemi giderek artmakta olup, alan içindeki müfettişlerin daha fazla analiz için yağ depolarını eşit şekilde tanımlamasına ve öteleklerine önem vermektedir. Bugüne kadar, standart yerelleştirme ve çeşitli fare yağ depoları yalıtım için birkaç protokol var. Önceden yayımlanan Yöntemler öncelikle bir veya iki depoları odaklı ve farklı müfettişlerin tarafından Tekdüzen kimlik ve eksizyon için gerekli detayları<...

Adipoz dokularında, yerel ve küresel ihtiyaçlar, termoregülasyon ve adipokinlerin salgılanması, enerji dengesini, metabolizmayı ve bağışıklık yanıtlarını düzenlemek için enerji depolama ve serbest bırakılması da dahil olmak üzere tüm vücut homeostasis 'te kritik roller oynar1 , 2. adipocytes ayrı depoları içinde vücut boyunca dağıtılır, ve bazı durumlarda kendi mikroortamlar içinde özel roller hizmet3,4,5. Tarihsel olarak, yağ dokusu çalışma beyaz yağ dokusu (WAT) üzerinde odaklı ve enerji homeostaz bakımını rolü. En adipositler subkutan ve visseral Wat depoları vücut boyunca dağıtılır. Bu depoların özellikleri metabolik hastalıkların diferansiyel duyarlılık için önemlidir. Derinin altında bulunan subkütan adipositler, koruyucu metabolik etkilere sahip5. Hayati organları çevreleyen ve gonadal, perirenal, retroperitoneal, omental ve perikardial depoları içinde yer alan Visceral adilositler, genellikle tip 2 diyabet ve kardiyovasküler hastalık dahil olmak üzere metabolik bozukluklara bağlıdır2 . Kahverengi adipoz dokular (BAT) da kapsamlı olarak incelenmiştir. Kahverengi ve kahverengi benzeri adiposit unoupling protein 1 (UCP1) ve adaptif termogenesis ve glikoz homeostazı6,7önemli roller oynayın. Klasik kahverengi adipanositler interensüler BAT Depot8' de yer alır. Kahverengi adilositlerin kümeleri de diğer yerlerde bulunur, supraclaviküler dahil, infra/subsörüler, servikal, paravertebral ve periaort depoları8,9.
Büyük WAT ve BAT depoları kendi konumuna ek olarak, adipanositler vücut boyunca ayrık niş var4, onlar kendi mikroortamlar içinde özel fonksiyonlar gerçekleştirebilir nerede. Örneğin, kemik iliği yağ dokusu (BMAT) bir lipid rezervuar olarak hizmet vermektedir, adiponektin dolaşan önemli bir kaynağıdır, ve yakından osteoblastlar ile etkileşimde, osteocsürer, ve hematopoetik hücreler10,11. Dermal adipositler, yara iyileşmesi, bağışıklık tepkisi, termoregülasyon ve saç folikül büyümesi dahil olmak üzere yaygın süreçlere katkıda bulunur12,13. Ayrıca, epikardiyal adiposit çeşitli adipokinler ve koroner arter hastalığının gelişimi ve ilerlemesi üzerinde yerel ve sistemik etkileri sağlayan kemokinler üretebilir14. İnter/intramusküler WAT genişleme artmış adiposity ile olumlu korelasyon, sistemik insülin direnci, ve azalma kas gücü ve hareketlilik15. Buna ek olarak, popliteal adipositler enfeksiyon sırasında lenfatik genişleme için bir lipid rezervuar olarak hizmet16. Farklı eklem depolarının belirli rolleri genellikle bilinmiyor iken, diz içinde Hoffa depo (infrapatellar) şimdi patolojilere katkıda düşünülen, anterior diz ağrısı ve osteoartrit dahil olmak üzere17.
Adiposit karakter ve fonksiyonunda bölgesel farklılıklar yoğun bir çalışma altında olmakla beraber, alan şu anda farklı fare depolarının tanımlanması ve diseksiyonu için standartlaştırılmış bir protokol eksikliği ile sınırlıdır. Daha önce yayımlanan yöntemler genellikle bir veya iki özel depoların izolasyonunu tarif etmiş ve üniforma eksizyonu18,19için gerekli ayrıntı düzeyini eksikliği. Bu yazıda açıklanan protokol, birçok farklı fare yağ depolarının spesifik anatomik konumları ve izolasyon adımları için kapsamlı bir kılavuz sağlar. WAT depoları Bu makalenin birincil odağı olmasına rağmen, interskulüler BAT eksizyonu da ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Bu protokol kullanılarak eksiz yağ dokularında, eksplant çalışmaları, Histoloji ve gen ifadesi analizleri dahil olmak üzere çok çeşitli deneysel uç noktalar için kullanılabilir.
Bu makalenin amacı, müfettişlerin hem belirgin hem de daha az çalışılan fare yağ depoları (Şekil 1) açıkça ve kesin bir şekilde tanımlamak ve izole etmek için ayrıntılı bir protokol sunmasıdır. Bu kaynak, çeşitli niş içindeki adilositlerin gelişimsel, moleküler ve fonksiyonel özelliklerinin daha eksiksiz bir şekilde incelenmesi konusunda kolaylaştıracaktır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig1.jpg"> Resim 1: Bu protokolde fare yağ depolarının şematik gösterimi. Bu görüntü Bagchi et al., 20184. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59499/59499fig1large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-110-869</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plates, untreated</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS3738</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (dilute from 95%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>04-355-226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps with curved tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89259-946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pan</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors (sharp/blunt tip)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze sponges</td>
			<td>Vitality Medical</td>
			<td>2634</td>
			<td>Curity 4 x 4 inch gauze sponge, 12 ply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handi-Pins for dissection</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>629132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors (straight)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>470018-890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>501017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>100499-578</td>
			<td>Feather scalpel handle with blade, disposable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and dissection of diverse mouse adipose depots

Adipoz dokular, yerel ve küresel ihtiyaçlara yanıt olarak enerji depolama ve seferberlik, ısı üretmek için metabolizmanın tıkanması ve tüm vücut homeostazisini düzenleyen adipokinlerin salgılanması da dahil olmak üzere geniş bir dizi fonksiyon ile karmaşık organlardır. bağışıklık yanıtı. Gelişmekte olan araştırmalar, vücut boyunca ayrık depoların içinde yer alan adipanositlerin gelişimsel, moleküler ve fonksiyonel profillerinde önemli bölgesel farklılıkları tespit etmektir. Metabolik hastalıkların genellikle depoya özgü efektleri göstermesiyle depoların farklı özellikleri tıbbi olarak ilgilidir. Bu protokol, çeşitli fare adipoz dokularının yeniden üretilebilen ve doğru tanımlanması ve eksizyonu için ayrıntılı bir anatomik Atlas ve diseksiyon Kılavuzu ile müfettişlere yardımcı olacaktır. Ayrık yağ depolarının standartlaştırılmış diseksiyonu, çeşitli beslenme ve çevresel koşullarda moleküler ve metabolik özelliklerinin ve yerel ve sistemik patolojik durumlara katkılarının ayrıntılı karşılaştırmalarına izin verecektir.

Yukarıda açıklanan protokol kullanılarak çeşitli fare yağ depolarının başarılı bir şekilde tanımlanması ve yalıtılması sağlanabilir. Şekil 2' de subkutan (A, E-F), kahverengi (B), visseral (C, D, G-J) ve popliteal (K) depotların brüt anatomik konumları gösterilir.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59499/59499fig2.jpg"> Şekil 2: fare yağ d...

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots at JoVE.com

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipositler ayrı depolarında var ve benzersiz mikro ortamlarında çeşitli rolleri vardır. Adiposit karakteri ve fonksiyonunda bölgesel farklılıklar ortaya çıktığı için, depoların standartlaştırılmış tanımlaması ve yalıtımı alanın ilerlemesi için çok önemlidir. Burada, çeşitli fare yağ depolarının eksizyonu için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Çeşitli fare Adipose depoları tanımlama ve diseksiyon

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...

Vücuttaki yağ depolarının tanımlanması ve dindikleştirilmesi için standart laştırılmış bir metodoloji, ayrık anatomik nişlerdeki adipositlerin karakter ve işlevindeki farklılıkların araştırılması için önemlidir. Bu tekniğin en büyük avantajı, hem yaygın hem de daha az çalışılan kemirgen yağ depolarını tanımlamak ve çıkarmak için güvenilir ve doğru bir yöntem olmasıdır. Interscapular BAT'in tanımlanması ve izolasyonu için, deponun doğal sınırını takip eden ötanazi edilmiş bir farenin ön deri altı dokusunun alt kenarı boyunca yatay olarak kesmek için iris makas kullanın.Dokunun doğal sınırlarını takip deponun lateral kenarları boyunca iki dikey kesiler olun. Beyaz yağ dokusu nun içine gömülü kelebek şeklindeki interscapular kahverengi yağ dokusunu ortaya çıkarmak için depoyu dikkatlice çevirmek için terlikleri kullanın. Daha sonra BAT'i çevredeki WAT'tan dikkatlice inceleyin.Yağ dokularını akış analizi için uygun kaplarda saklayın. Posterior subkutan WAT'ın tanımlanması ve izole edilmesi için fareyi supine pozisyonuna yerleştirin ve hayvanın uzuvlarını sabitle. Göğüs kafesinin tabanındaki deriyi kaldırmak ve bir milimetrelik deri kesisi yapmak için forseps kullanın.Kesiğe iris makasından bir bıçak yerleştirin ve göğüs kafesinin tabanından başlayıp kuyruğun tabanına doğru yükselen 4-5 santimetrelik orta hat deri kesisini yapın. Daha sonra, ilk dikey kesi nin üst kısmında orta hattan yanal olarak uzanan iki bir santimetrelik yatay kesiler yapın. Dikkatle periton boşluğundan deri geri soymak için forceps kullanın, deri ile ilişkili kalması gereken posterior deri altı WAT bulmak için bacak kullanın.Uzatılmış deriyi sabitle ve kasık boyunca arka bacak ventrally tabanından üçgen inguinal WAT depo tamamen çıkarmak. Visseral WAT depo tanımlama ve izolasyon için, sternum tabanında ince periton boşluğu duvar yukarı kaldırmak ve çadırlı dokuda bir milimetrelik kesi yapmak için forseps kullanın. Kesiğe iris makasından bir bıçak yerleştirin ve periton boşluğunun üstünden rektuma doğru 4-5 santimetre azalan dikey bir kesi yapın.Dikey kesinin üst ve alt kısmında orta hattan yanal olarak uzanan iki santimetrelik yatay kesiler yapın ve karın boşluğu içeriğini ortaya çıkarmak için periton geri soymak için perseps kullanın. Sonra periton boşluğu içinde bulunan WAT depoları hasat için diseksiyon tavasına uzanmış periton pin. Kimlik ve visseral gonadal WAT izolasyon için, gonadlar bulmak ve ilişkili gonadal WAT kaldırmak için forseps kullanın, sonra dikkatle gonadlardan WAT çıkarmak için iris makas kullanın.Perirenal depoyu çıkarmak için, böbreği bulun ve böbrek dokusunu kaldırmak için forseps kullanın. Perirenal ve retroperitoneal depolar arasında net bir bölünme görmek ve doğrudan böbrekler ile ilişkili WAT çıkarmak için orta hatta böbrek çekin. Sonra WAT böbrekler üzerinde bulunan adrenal bezleri kaldırın.Retroperitoneal WAT tanımlama ve izolasyon için, tekrar orta hatta böbrek asansör ve dikkatle posterior periton duvarından retroperitoneal WAT incelemek için iris makas kullanın. Popliteal WAT izole etmek için, diz arkasında popliteal fossa yukarı bakan dikkat alarak diseksiyonu pan karşı patella yerleştirin. Dikkatle ayak için arka bacak tabanından deri kaldırmak için iris makası kullanın.Gastroknemius kas medial ve lateral kafaları alt sınırında bir kesim yapmak için iris makas kullanın, üçgen popliteal depo ortaya çıkarmak için kas kaldırmak için forseps kullanın. Sonra doğal doku sınırları boyunca depo çıkarmak için iris makas kullanın. Burada fare nin subkutan, kahverengi, visseral ve popliteal depolarının brüt anatomik konumları gösterilmiştir.Deri altı, kahverengi, visseral, popliteal, kurucu ve düzenlenmiş ilik yağ, kas içi ve infrapatellar yağ depolarının histolojik özellikleri standart Hematoksilin ve Eozin boyama protokolleri ile değerlendirilebilir. Bu protokol kullanılarak izole edilen yağ dokuları histolojik analiz, moleküler çalışmalar, gen ve protein ekspresyonu analizi de dahil olmak üzere çok çeşitli deneysel uç noktalar için kullanılabilir. Çeşitli yağ depolarının tanımlanmasının alan çapında standardizasyonu, hiç şüphesiz moleküler ve metabolik özelliklerini ve bunların hem yerel hem de sistematik patolojik durumlara ayırımsal katkılarını daha iyi anlamamıza yardımcı olacaktır.

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

6.5 DPC Fare Embriyolar diseksiyonu

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

Yetişkin Mouse Hipokampal dentat girus diseksiyonu

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Fare Epidididimal Yağ Dokularından Yağ Progenitör Hücrelerinin Hazırlanması

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Birincil Fare Retina Pigment Epitel Hücrelerinin Verimli Diseksiyonu ve Kültürü

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Induction and Diverse Assessment Indicators of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitin İndüksiyonu ve Çeşitli Değerlendirme Göstergeleri

Multiple sclerosis (MS) is a typical autoimmune disease of the central nervous system (CNS) characterized by inflammatory infiltration, demyelination, and ...

Isolation and Identification of Vascular Endothelial Cells from Distinct Adipose Depots for Downstream Applications

Vasküler Endotel Hücrelerinin Aşağı Akış Uygulamaları için Farklı Yağ Depolarından İzolasyonu ve Tanımlanması

Vascular endothelial cells lining the wall of the vascular system play important roles in a variety of physiological processes, including vascular tone ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

Sprague Dawley Sıçanlarının Yağ Dokusundan Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Tanımlanması

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...