Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door National Institutes of Health (NIH) Grant R01 CA222560 en door Department of Defense baanbrekende Award W81XWH-18-1-0037.

Alle hier beschreven methoden zijn goedgekeurd door het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité (IACUC) van Brigham en het vrouwen ziekenhuis.
1. opwekking en onderhoud van floxed muizen
<ol><li>Borstkanker-relevante floxed voorwaardelijke Knockout verkrijgen (bijv. Trp53tm1Brn [aangeduid als Trp53L/l], Brca1tm1Aash [Brca1l/l]) of voorwaardelijke muis lijnen (bijv. Gt (Rosa) 26SorTm1 (PIK3CA * H1...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

Het succes van deze aanpak voor het induceren van borsttumoren van verschillende subpopulaties van MECs berust niet alleen op het kiezen van geschikte Cell-Type-specifieke promoters (om CRE-expressie te stimuleren), maar ook op de intraductale injectieprocedure zelf. Het idee achter deze aanpak is dat de geïnjecteerde AD-CRE virussen worden bewaard in de ductale boom, die een verborgen structuur met lumen, en daarom, alleen MECs worden blootgesteld aan de virussen en zijn geïnfecteerd door AD-CRE. Vanwege de geringe lu...

Het algemene doel van deze methode is het ontwikkelen van een nieuwe borstkanker Modeling aanpak op basis van een intraductale injectie van AD-CRE in de muis MG. De CRE/loxP recombinatie-gebaseerde genetische benadering is op grote schaal gebruikt voor het modelleren van menselijke borstkanker bij muizen. De eerste generatie van CRE/loxP-gebaseerde borstkanker Muismodellen worden gegenereerd door het gebruik van CRE-uitdrukken transgene muizen onder controle van MEC-specifieke promoters (bijv. Mmtv-CRE voor Luminale MECS en een deel van de basale Mecs, WAP-CRE en Blg-CRE voor Luminale voor ouders en alveolaire Luminale Mecs, K14-CRE voor basaal en een deel van luminal MECS1,2,3,4,5)6, 7 , 8 , 9. Hoewel deze CRE-transgene lijnen ruimtelijke controle van CRE-expressie mogelijk maken (d.w.z. in verschillende deelverzamelingen van MECS), staan zij de temporele controle van CRE-expressie en CRE/loxp-gemedieerde genetische manipulatie echter niet toe. De tweede generatie van CRE/loxp-gebaseerde borstkanker Muismodellen maken gebruik van induceerbare cytochromen CRE activiteit/expressie benaderingen (bijvoorbeeld, gebruik van CRE-oestrogeen receptor fusie [creer], die kan alleen induceren CRE/loxp recombinatie bij toediening van Tamoxifen), en Als gevolg hiervan maken deze genetische hulpmiddelen zowel ruimtelijke als temporele controles mogelijk van de activering van oncogene gebeurtenissen in MECS (bijv. K8-creer-en K5-creer-gebaseerde modellen) 10,11,12 . In beide generaties borstkanker muizen modellen, als promotors gebruikt om CRE of CreER uitdrukking (bijvoorbeeld, Krt8, Krt5) ook actief in epitheelcellen van andere organen (dat wil zeggen, ze zijn cel-type-specifieke maar niet orgaan-specifieke) of een ledende uitdrukking hebben in andere celtypen dan epitheelcellen (bijv. Mmtv, die ledende activiteit heeft in beenmerg hematopoietische cellen), kunnen deze benaderingen leiden tot de ontwikkeling van ongewenste kanker (s) in ander orgaan (en). Als deze onverwachte kankers veroorzaken letaliteit in de aangetaste muizen, het oorspronkelijke doel van het modelleren van borstkanker in deze muizen kan worden verboden (bv, Mmtv-CRE-driven oncogene gebeurtenissen kunnen leiden tot hematopoietische maligniteiten en vroegtijdige dood van de muizen , als gevolg van lektigheid van de promotor Mmtv in hematopoietische cellen)4.
Hier rapporteren we een borstkanker modellerings benadering bij muizen die zowel celtype-als orgaan-specifieke manipulatie van oncogene gebeurtenissen op een temporeel gecontroleerde manier mogelijk maakt. Deze aanpak is gebaseerd op een intraductale injectie van AD-CRE in MGs voor muizen (en is dus orgaan-specifiek). CRE-expressie kan worden bestuurd door gebruik te maken van verschillende MEC subpopulation-specifieke promoters die zijn ingebed in de adenovirale vector (bijv. Krt8 voor Luminale Mecs, Krt5 voor basale Mecs, waardoor de specificiteit van het celtype wordt bereikt). Kanker inductie in MGs kan tijdelijk worden gecontroleerd door een injectie van AD-CRE in muizen op verschillende leeftijden, beginnend vanaf 3-4 weken leeftijd (puberale) tot het volwassen stadium.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

Borstkanker is een heterogene ziekte, mogelijk als gevolg van complexe interacties tussen verschillende cellen van oorsprong en oncogene gebeurtenissen. Muismodellen zijn instrumentaal in het verkrijgen van inzicht in deze complexe processen. Hoewel er veel Muismodellen zijn ontwikkeld om bijdragen te bestuderen van verschillende oncogene voorvallen en cellen van oorsprong aan borst tumorigenese, zijn deze modellen vaak geen celtype of orgaan specifiek of kunnen ze de initiatie van borsttumor vorming niet induceren in een op een tijdelijk gecontroleerde manier. Hier beschrijven we een protocol voor het genereren van een nieuw type borstkanker Muismodellen op basis van de intraductale injectie van CRE-uitdrukken van adenovirus (AD-CRE) in muis borstklieren (MGs). Als gevolg van de directe injectie van AD-CRE in de melk kanalen, deze aanpak is MG specifiek, zonder ongewenste kanker inductie in andere organen. De intraductale injectieprocedure kan worden uitgevoerd bij muizen in verschillende stadia van hun ontwikkeling van MG (dus, het maakt temporele controle van de inductie van kanker, vanaf ~ 3-4 weken leeftijd). De specificiteit van het celtype kan worden bereikt door verschillende cel-type-specifieke promoters te gebruiken om CRE-expressie in de adenovirale vector te stimuleren. We tonen aan dat luminal en basale borst cellen epitheel (MECs) nauw kunnen worden gericht op CRE/loxP-gebaseerde genetische manipulatie via een intraductale injectie van AD-CRE onder de controle van de keratine 8 of Keratin 5 promotor, respectievelijk. Door het opnemen van een voorwaardelijke CRE Reporter (bv, CRE/loxP-inducible Rosa26-YFP Reporter), laten we zien dat MECS gericht door AD-CRE, en tumorcellen afgeleid van hen, kan worden getraceerd door het volgen van de reporter-positieve cellen na intraductale injectie.

Representatieve PCR-genotype resultaten voor de R26Y en Trp53L allelen worden weergegeven in Figuur 1.
Hoewel, in principe, alle 10 MGs kunnen worden onderworpen aan de intraductale injectieprocedure, praktisch, de twee vierde inguinale MGs zijn meestal geselecteerd voor injectie, als gevolg van hun gemakkelijkere toegankelijkheid en grotere MG maten (<strong class="xfi...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

Het doel van dit protocol is om een nieuwe borstkanker modellerings aanpak te beschrijven op basis van de intraductale injectie van CRE-uitdrukken van adenovirus in muizen borstklieren. Deze aanpak maakt zowel cel-type-en orgaan-specifieke manipulatie van oncogene gebeurtenissen op een tijdelijk gecontroleerde manier mogelijk.

Het modelleren van borstkanker via een Intraductale injectie van CRE-uitdrukken van adenovirus in de muis borstklier

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Dit protocol zal onderzoekers helpen bij het genereren van een nieuw type muismodel om de ontwikkeling van menselijke borstkanker te recapituleren uit verschillende subsets van borstepitheelcellen. Deze techniek stelt onderzoekers in staat om borstkanker muis modellen te genereren in ontwikkelingsfase weefsel op een cel type specifieke manier en zonder een uitgebreide muis fokken. Om deze procedure te starten, genereren, onderhouden en verdoven floxed muizen zoals beschreven in het tekstprotocol.Breng de muis naar een gebied dat gescheiden is van waar de operatie moet worden uitgevoerd. Na het bevestigen van anesthesie door het uitvoeren van een teen snufje, injecteren Meloxicam als analgesia onderhuids bij een dosis van vijf milligram per kilogram voor te bereiden op de chirurgische ingreep. Bloot de tepel chirurgische site door het toepassen van een aantal druppels ontharing crème.Verwijder overmatige crème en los haar met zachte papieren handdoeken. Scheren wordt niet aanbevolen om schade aan de tepels te voorkomen. Desinfecteer de chirurgische plaats met iodophors eerst gevolgd door 70% alcohol en eindig met een definitieve toepassing van scrub iodophors.Doe dit in een cirkelvormige beweging vanuit het midden van het werkgebied naar de periferie met behulp van een gaasspons of een met katoen getipte applicator. Herhaal de cyclus drie tot vier keer. Gebruik aseptische technieken tijdens de chirurgische ingreep.Maak een incisieplaats op de huid met een lengte van ongeveer een centimeter tussen de twee vierde inguinale borstklieren. Scheid de huidflap voorzichtig van het pariëtale buikvlies om de borstkanaalboom visueel te maken. Houd de tepel voorzichtig vast met de tangen om de buitentepel te verwijderen zonder een nabijgelegen huid te snijden met behulp van een microdissection schaar.Laad ongeveer drie tot vijf microliters van Cre-adenovirus injectiemengsel in een 25 microliter Hamilton spuit met een 33 meter metalen hub naald aangebracht. Schat het volume van het injectiemengsel in de spuit op basis van de blauwe kleurstof in het mengsel. Houd voorzichtig de rand van de huidflap met een fijn gebogen pincet vast en injecteer het Cre-adenovirus injectiemengsel langzaam in de tepel terwijl u de verspreiding van blauwe kleurstof in de borstkanaalboom bewaakt.Houd de injectiesnelheid zo langzaam mogelijk om schade aan het kanaallumen te voorkomen. Een succesvolle intraductale injectie wordt aangegeven door geïnjecteerde vloeistoffen verspreiden over de gehele kanaalboom zonder te lekken in het stroma compartiment. Haal de naald voorzichtig uit de tepel om lekkage van de geïnjecteerde vloeistof te voorkomen.Bestudeer de distale kant van de borstklier of het omliggende gebied van de geïnjecteerde tepel. Kleurstof verspreiden in de nabijgelegen stroma zoals hier getoond duidt op een borst vet pad injectie in plaats van een succesvolle intraductale injectie. Sluit de chirurgische wonden in de huid met wondklemmen.Verwijder de muis uit de verdoving en plaats deze op een verwarmingskussen in een schone kooi voor herstel. Monitor de ontwikkeling van de borsttumor zoals beschreven in het tekstprotocol. De jongste vrouwelijke muizen waarvoor intraductale injectie met succes kan worden uitgevoerd zijn die op ongeveer drie weken oud.Hoewel voor de meeste borsttumor inductie experimenten, jong volwassen vrouwelijke muizen worden gebruikt. Intraductale injectie met een groter volume van het injectiemengsel kan worden uitgevoerd bij vrouwelijke muizen tijdens de vroege tot middenzwaarden om alveolaire cellen te targeten. Om verschillende borstepitheelcel subpopulaties voor borsttumor inductie richten, Cre-adenovirussen onder de controle van verschillende borst epitheelcel subset specifieke promotors werden gebruikt voor injectie.Bijvoorbeeld Cre-adenovirus onder de controle van keratine 8 promotor werd gebruikt om luminale borstpitheelcellen richten. Cre-adenovirus onder de controle van keratine 5 promotor gericht op de basale afstamming leidt tot genetische markering van alleen basale borstepstelcellen. Voor een vrouwelijke P53 floxed homozygoot muizen met een ROSA26-YFP verslaggever, de intraductale injectie van keratine 8 Cre-adenovirus leidde tot de ontwikkeling van borsttumoren enkele maanden na de injectie.Als gevolg van de opname van de voorwaardelijke R26-Y verslaggever, tumor epitheelcellen werden meestal gekenmerkt door YFP en kan worden gedetecteerd door de stroom cytometrie. De cellen kunnen worden verrijkt door de stroomsoring van YFP-positieve cellen voor verdere analyse. De belangrijkste dingen om te onthouden bij het proberen van deze procedure zijn om een klein injectievolume te gebruiken, langzaam te injecteren en ook de naald langzaam terug te trekken.Na deze procedure kan men de progressie van de beoogde YFP-positieve borstepitheelcellen naar pre-kwaadaardige en kankerstadia door stromingscytometrie of co-immunofluorescentievlekken van de geïnjecteerde klier controleren. Deze techniek zal de weg vrijmaken voor onderzoekers om cellen van oorsprong van borstkanker te bestuderen, hoe ze reageren op verschillende autogene gebeurtenissen en hoe ze zich ontwikkelen tot kankercellen. Zowel adenovirus als de naald voor injectie zijn potentieel gevaarlijk.Daarom moet men altijd handschoenen dragen en veiligheidsnaalden en spuiten gebruiken bij het uitvoeren van intraductale injectie.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis Video (Video) | JoVE

Intra-iliaca Injectie voor Efficiënte en Selectieve Modellering van Microscopisch botmetastase

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures Video (Video) | JoVE

Gebruik makend van Functional Genomics Screening om potentieel nieuwe drug targets in Cancer Cell Sferoïde Cultures Identificeer

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis Video (Video) | JoVE

Intracarotid Cancer Cell Injection aan muismodellen van Brain metastase Produce

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification Video (Video) | JoVE

Sectie Mammary Gland Whole Mounts voor Lesion Identificatie

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells Video (Video) | JoVE

Modelleren van osteosarcoom met behulp van Li-Fraumeni syndroom geïnduceerde pluripotente stamcellen patiënt-afgeleide cellen

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

Orthotopic injectie van borstkankercellen in de borstklier vet Pad muizen

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad Video (Video) | JoVE

Rat Mammary Epitheliale Celtransplantatie in de Interscapular White Fat Pad

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging Video (Video) | JoVE

Modellering van hersenmetastasen door middel van intracraniale injectie en magnetische resonantie beeldvorming

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System Video (Video) | JoVE

Borstkanker modelleren in menselijk borstweefsel met behulp van een microfysiologisch systeem

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video (Video) | JoVE

Modellering van hersenmetastase via staartaderinjectie van inflammatoire borstkankercellen

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...