Name: modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland
Uploaded: 2019-06-07T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par national Institutes of Health (NIH) subvention R01 CA222560 et par department of Defense Breakthrough Award W81XWH-18-1-0037.

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux (IACUC) de Brigham and Women's Hospital.
1. Génération et entretien de souris floxed
<ol><li>Obtenir le knock-out conditionnel floxed (p. ex., Trp53tm1Brn [appelé Trp53L/L], Brca1tm1Aash [Brca1L/L]) ou les lignes de souris knock-in conditionnelles (p. ex., Gt(ROSA)26Sortm1 (Pi...

<ol>
	<li>Wagner, K. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre-mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Cre-mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).</li><li>Selbert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+BLG-Cre+mediated+gene+deletion+in+the+mammary+gland.">Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland.</a> Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).</li><li>Jonkers, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+tumor+suppressor+activity+of+BRCA2+and+p53+in+a+conditional+mouse+model+for+breast+cancer.">Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer.</a> Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).</li><li>van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RUNX1,+a+transcription+factor+mutated+in+breast+cancer,+controls+the+fate+of+ER-positive+mammary+luminal+cells.">RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells.</a> eLife. 3, e03881 (2014).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Long-Lived+Luminal+Subpopulation+Enriched+with+Alveolar+Progenitors+Serves+as+Cellular+Origin+of+Heterogeneous+Mammary+Tumors.">A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors.</a> Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+mutation+of+Brca1+in+mammary+epithelial+cells+results+in+blunted+ductal+morphogenesis+and+tumour+formation.">Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation.</a> Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ETV6-NTRK3+fusion+oncogene+initiates+breast+cancer+from+committed+mammary+progenitors+via+activation+of+AP1+complex.">ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex.</a> Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+loss+of+BRCA1+and+p53+in+mice+induces+mammary+tumors+with+features+of+human+BRCA1-mutated+basal-like+breast+cancer.">Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).</li><li>Molyneux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA1+basal-like+breast+cancers+originate+from+luminal+epithelial+progenitors+and+not+from+basal+stem+cells.">BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).</li><li>Koren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PIK3CA+induces+multipotency+and+multi-lineage+mammary+tumours.">PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours.</a> Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).</li><li>Van Keymeulen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+multipotency+by+oncogenic+PIK3CA+induces+breast+tumour+heterogeneity.">Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity.</a> Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).</li><li>Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+p53+loss+in+mouse+luminal+cells+causes+clonal+expansion+and+development+of+mammary+tumours.">Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours.</a> Nature Communications. 8, 14431 (2017).</li><li>Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Tracing+of+Mammary+Epithelial+Cells+Using+Cell-Type-Specific+Cre-Expressing+Adenoviruses.">Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses.</a> Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).</li><li>Sutherland, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+of+origin+of+small+cell+lung+cancer:+inactivation+of+Trp53+and+Rb1+in+distinct+cell+types+of+adult+mouse+lung.">Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung.</a> Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>The Cancer Genome Atlas Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumours.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumours.</a> Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).</li><li>Nik-Zainal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+life+history+of+21+breast+cancers.">The life history of 21 breast cancers.</a> Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).</li><li>Abba, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Molecular+Portrait+of+High-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ.">A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ.</a> Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).</li></ol>

Le succès de cette approche pour induire des tumeurs mammaires de différentes sous-populations de MECs repose non seulement sur le choix des promoteurs appropriés de type cellulaire -spécifique (pour conduire l'expression de Cre) mais également sur la procédure d'injection intraductale elle-même. L'idée derrière cette approche est que les virus Injectés Ad-Cre sont conservés dans l'arbre ductal, qui est une structure cachée avec lumen, et donc, seuls les MEC sont exposés aux virus et sont infectés par Ad-Cr...

L'objectif global de cette méthode est de développer une nouvelle approche de modélisation du cancer du sein basée sur une injection intraductale d'Ad-Cre dans la souris MG. L'approche génétique basée sur la recombinaison Cre/loxP a été largement utilisée pour modéliser le cancer du sein humain chez la souris. La première génération de modèles de souris à base de Cre/loxP sur le cancer du sein est générée par l'utilisation de souris transgéniques exprimant cre sous le contrôle de promoteurs spécifiques au MEC (p. ex., MMTV-Cre pour les MEC suspicieux et une partie des MEC basiques, Wap-Cre et Blg-Cre pour les progéniteurs luminal et les MEC alvéolaires, K14-Cre pour les cimeaux et une partie des MECs luminal1,2,3,4,5)6, 7 Annonces , 8 Annonces , 9. Cependant, bien que ces lignes transgéniques Cre permettent le contrôle spatial de l'expression de Cre (c.-à-d., dans différents sous-ensembles de MECs), elles ne permettent pas le contrôle temporel de l'expression de Cre et de la manipulation génétique Cre/loxP-négociée. La deuxième génération de modèles de souris à base de Cancer du sein à base de Cre/loxP utilise des approches inductibles d'activité/expression cre (p. ex., l'utilisation de la fusion des récepteurs Cre-estrogen [CreER], qui ne peut induire la recombinaison Cre/loxP qu'à l'administration du tamoxifène) et en conséquence, ces outils génétiques permettent à la fois des contrôles spatiaux et temporels de l'activation d'événements oncogènes dans les MEC (p. ex., K8-CreER- et K5-CreER-modèles basés)10,11,12 . Dans les deux générations de modèles de souris de cancer du sein, comme les promoteurs utilisés pour conduire l'expression Cre ou CreER (par exemple, Krt8, Krt5) peuvent également être actifs dans les cellules épithéliales d'autres organes (c.-à-d., ils sont de type cellulaire spécifique, mais pas spécifique à l'organe) ou ont une expression qui fuit dans les types de cellules autres que les cellules épithéliales (par exemple, MMTV, qui a une activité qui fuit dans les cellules hématopoïétiques de moelle osseuse), ces approches peuvent conduire au développement de cancers indésirables (s) dans d'autres organes.s). Si ces cancers inattendus causent la létalité chez les souris touchées, le but initial de la modélisation du cancer du sein chez ces souris peut être interdit (p. ex., les événements oncogènes entraînés par MMTV-Crepeuvent entraîner des tumeurs malignes hématopoïétiques et la mort prématurée des souris. , en raison de la fuite du promoteur MMTV dans les cellules hématopoïétiques)4.
Ici nous rapportons une approche de modélisation de cancer du sein chez les souris qui permet la manipulation de type cellulaire- et d'organe-spécifique des événements oncogènes d'une manière temporellement commandée. Cette approche est basée sur une injection intraductale d'Ad-Cre dans les MG de souris (et est, par conséquent, spécifique à l'organe). L'expression de cre peut être contrôlée en utilisant différents promoteurs spécifiques à la sous-population MEC intégrés dans le vecteur adénoviral (par exemple, Krt8 pour les MEC slumineux, Krt5 pour les MEC basiques, réalisant ainsi une spécificité de type cellulaire). L'induction du cancer chez les GM peut être contrôlée temporellement par une injection d'Ad-Cre chez des souris à différents âges, à partir de 3-4 semaines d'âge (pubertal) jusqu'au stade adulte.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-05</td>
			<td>point style 3 blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7mm Reflex Clip</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>RF7 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K5-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenovirus, Ad-K8-Cre</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core</td>
			<td>Ad5mK8-nlsCre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>HC800-1GAL</td>
			<td>Prepare to 70% in use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD31</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0311-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated CD45</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-0451-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>biotinylated TER119</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0126-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-AF-700</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>564237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD24-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0242-83</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-APC</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>17-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD29-PE</td>
			<td>eBiosciences</td>
			<td>12-0291-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair Remover Lotion</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>9 Oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7636-01</td>
			<td>0.025 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodophors</td>
			<td>Betadine</td>
			<td></td>
			<td>10% Povidone-iodine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 10019-360-40</td>
			<td>1-2.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loxicam</td>
			<td>Norbrook</td>
			<td>NDC 55529-040-10</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricant Eye Ointment</td>
			<td>Akorn</td>
			<td colspan="2">NDC 17478-062-35</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting scissors</td>
			<td>Pentair</td>
			<td>9M</td>
			<td>Watchmaker&#39;s Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-dissecting tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>M5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq 5X Master Mix</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0285L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer via an intraductal injection of cre-expressing adenovirus into the mouse mammary gland

Le cancer du sein est une maladie hétérogène, peut-être due à des interactions complexes entre différentes cellules d'origine et des événements oncogènes. Les modèles de souris jouent un rôle déterminant dans l'obtention d'un aperçu de ces processus complexes. Bien que de nombreux modèles de souris ont été développés pour étudier les contributions de divers événements oncogènes et les cellules d'origine à la tumorigénèse du sein, ces modèles ne sont souvent pas de type cellulaire ou d'organe spécifique ou ne peut pas induire l'initiation de la tumorigenesis mammaire dans un manière contrôlée temporellement. Ici nous décrivons un protocole pour produire un nouveau type de modèles de souris de cancer du sein basés sur l'injection intraductale de cre-exprimant l'adénovirus (Ad-Cre) dans les glandes mammaires de souris (MGs). En raison de l'injection directe d'Ad-Cre dans les conduits mammaires, cette approche est spécifique MG, sans aucune induction non désirée de cancer dans d'autres organes. La procédure d'injection intraductale peut être effectuée chez les souris à différents stades de leur développement MG (donc, il permet le contrôle temporel de l'induction du cancer, à partir de 3-4 semaines d'âge). La spécificité de type cellulaire peut être atteinte en utilisant différents promoteurs de type cellulaire spécifique pour conduire l'expression Cre dans le vecteur adénoviral. Nous montrons que les cellules épithéliales mammaires luminaires et basiques (MEC) peuvent être étroitement ciblées pour la manipulation génétique à base de Cre/loxP par une injection intraductale d'Ad-Cre sous le contrôle du promoteur De kératine 8 ou Kératine 5, respectivement. En incorporant un journaliste conditionnel DeC (par exemple, Cre/loxP-inductcible Rosa26-YFP journaliste), nous montrons que les MEC ciblés par Ad-Cre, et les cellules tumorales dérivées d'eux, peuvent être tracés en suivant les cellules reporter-positives après injection intraductale.

Les résultats de génotypage PCR représentatifs pour les allèles R26Y et Trp53L sont présentés à la figure 1.
Bien que, en principe, tous les 10 GM peuvent être soumis à la procédure d'injection intraductale, pratiquement, les deux quatrièmeS inguinalsont sont généralement sélectionnés pour l'injection, en raison de leur accessibilité plus facile et de pl...

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Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland Video (Video) | JoVE

Le but de ce protocole est de décrire une nouvelle approche de modélisation de cancer du sein basée sur l'injection intraductale de l'adénovirus Cre-exprimant dans les glandes mammaires de souris. Cette approche permet à la fois la manipulation de type cellulaire et d'organe d'événements oncogènes d'une manière contrôlée temporellement.

Modélisation du cancer du sein par injection intraductale d'adénovirus exprimant la cre dans la glande mammaire de souris

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Ce protocole aidera les chercheurs à générer un nouveau type de modèle de souris pour récapituler le développement du cancer du sein humain à partir de différents sous-ensembles de cellules épithéliales mammaires. Cette technique permet aux chercheurs de générer des modèles de souris atteintes du cancer du sein dans les tissus de stade de développement d’une manière spécifique au type cellulaire et sans avoir besoin d’une reproduction intensive de la souris. Pour commencer cette procédure, générer, maintenir et anesthésier les souris floxées telles que décrites dans le protocole de texte.Amenez la souris dans une zone séparée de l’endroit où la chirurgie doit être effectuée. Après avoir confirmé l’anesthésie en effectuant une pincée d’orteil, injectez Meloxicam comme analgésie sous-cutanée à une dose de cinq milligrammes par kilogramme pour se préparer à l’intervention chirurgicale. Exposer le site chirurgical mamelon en appliquant plusieurs gouttes de crème d’épilation.Retirer la crème excessive et les cheveux lâches à l’aide de serviettes en papier souple. Le rasage n’est pas recommandé pour éviter les dommages aux mamelons. Désinfecter le site chirurgical avec des iodophors d’abord suivi de 70% d’alcool et se terminer par une application finale d’iodophors gommage.Faites ceci dans un mouvement circulaire du centre de la zone de travail vers la périphérie utilisant une éponge de gaze ou un applicateur coton-incliné. Répétez le cycle trois à quatre fois. Utilisez des techniques aseptiques tout au long de l’intervention chirurgicale.Faire un site d’incision sur la peau à une longueur d’environ un centimètre entre les deux quatrièmes glandes mammaires inguinales. Séparez soigneusement le rabat cutané du péritoine pariétal afin de visualiser l’arbre ductal mammaire. Tenez soigneusement le mamelon avec les forceps des horlogers pour enlever le mamelon extérieur sans couper la peau à proximité à l’aide d’un ciseaux de microdissection.Chargez environ trois à cinq microlitres du mélange d’injection de Cre-adénovirus dans une seringue Hamilton de 25 microlitres avec une aiguille de moyeu métallique de calibre 33 fixée. Estimer le volume du mélange d’injection dans la seringue en fonction du colorant bleu inclus dans le mélange. Maintenez doucement le bord du rabat cutané à l’huile fine et incurvée et injectez lentement le mélange d’injection d’adénovirus Cre dans le mamelon tout en surveillant la propagation du colorant bleu dans l’arbre ductal mammaire.Maintenir le taux d’injection le plus lentement possible afin d’éviter les dommages au lumen ductal. Une injection intraductrice réussie est indiquée par des fluides injectés se propageant dans tout l’arbre ductal sans fuite dans le compartiment stroma. Retirez doucement l’aiguille du mamelon pour éviter toute fuite du liquide injecté.Examiner le côté distal de la glande mammaire ou la zone environnante du mamelon injecté. Le colorant diffusant dans le stroma voisin comme montré ici indique une injection mammaire de garniture de graisse plutôt qu’une injection intraductal réussie. Fermez les plaies chirurgicales dans la peau avec des pinces à plaies.Retirez la souris de l’anesthésie et placez-la sur un coussin chauffant à l’intérieur d’une cage propre pour la récupération. Surveiller le développement de la tumeur mammaire tel que décrit dans le protocole de texte. Les souris femelles les plus jeunes pour lesquelles l’injection intraductrice peut être effectuée avec succès sont celles à environ trois semaines d’âge.Bien que pour la plupart des expériences mammaires d’induction de tumeur, les jeunes souris femelles adultes soient employées. L’injection intraductrice avec un plus grand volume du mélange d’injection peut être effectuée chez les souris femelles au début à la mi-gestation pour cibler les cellules alvéolaires. Pour cibler différentes sous-populations de cellules épithéliales mammaires pour l’induction mammaire de tumeur, cre-adénovirus sous le contrôle de différents promoteurs spécifiques de cellules épithéliales mammaires ont été utilisés pour l’injection.Par exemple, le cré-adénovirus sous le contrôle du promoteur de la kératine 8 a été utilisé pour cibler les cellules épithéliales mammaires luminaires. Le cré-adénovirus sous le contrôle du promoteur de kératine 5 a ciblé la lignée basale menant au marquage génétique des cellules épithéliales mammaires basales seulement. Pour une femelle P53 floxed homozygous souris avec un journaliste ROSA26-YFP, l’injection intraductrice de kératine 8 Cre-adénovirus a conduit au développement de tumeurs mammaires plusieurs mois après l’injection.En raison de l’inclusion du journaliste conditionnel de R26-Y, les cellules épithéliales de tumeur ont été typiquement marquées par YFP et pourraient être détectées par cytométrie de flux. Les cellules peuvent être enrichies par le tri du flux des cellules positives YFP pour une analyse plus approfondie. Les choses les plus importantes à retenir lors de la tentative de cette procédure sont d’utiliser un petit volume d’injection, injecter lentement, et aussi retirer l’aiguille lentement.Après cette procédure, on peut surveiller la progression des cellules épithéliales mammaires positives ciblées de YFP aux étapes pré-malignes et cancéreuses par cytométrie d’écoulement ou coloration de co-immunofluorescence de la glande injectée. Cette technique ouvrira la voie aux chercheurs pour étudier les cellules d’origine du cancer du sein, comment elles réagissent aux différents événements autogéniques et comment elles progressent vers les cellules cancéreuses. L’adénovirus et l’aiguille à injection sont potentiellement dangereux.Par conséquent, il faut toujours porter des gants et utiliser des aiguilles et des seringues de sécurité lors de l’injection intraductrice.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis Video (Video) | JoVE

Intra-iliaque Artère injection pour la modélisation efficace et sélective des métastases osseuses Microscopique

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Recherche

Recherche en cancérologie

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures Video (Video) | JoVE

Utilisant la génomique fonctionnelle de dépistage pour identifier les cibles de médicaments potentiellement nouveaux dans Cancer Cell Cultures Spheroid

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis Video (Video) | JoVE

Intracarotidienne Cancer Cell Injection pour produire des modèles de souris de Brain Métastase

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification Video (Video) | JoVE

Section des pansements mammaires complets pour l&#39;identification des lésions

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells Video (Video) | JoVE

Ostéosarcome utilisant le Syndrome de Li-Fraumeni cellules souches de pluripotentes induites Patient dérivé de modélisation

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad Video (Video) | JoVE

Orthotopique l’Injection de cellules cancéreuses du sein dans les coussinets adipeux mammaire de souris

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad Video (Video) | JoVE

Transplantation de cellules épithéliales mammaires de rat dans le tampon blanc interscapulaire de graisse

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

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Modélisation des métastases cérébrales par injection intracrânienne et imagerie par résonance magnétique

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System Video (Video) | JoVE

Modélisation du cancer du sein dans le tissu mammaire humain à l’aide d’un système microphysiologique

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells Video (Video) | JoVE

Modélisation des métastases cérébrales par injection veineuse de cellules inflammatoires du cancer du sein

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...